preparation and characterisation of linear dextrins and their use as substrates in in vitro studies...
TRANSCRIPT
���������� � ���������� ���� �� ����� ����� � ����� � �� �� ����� � � ����� ���� �� ����� ������� �����
��� ��� ����� ������ �������� �� �� ��� ��� ����� ��� ��� ��� � ���
����������� �� ������� ������ ���������� ������������ �������� ���� �� !"#� $% "! ! �������� ���������������� ����� ������ ������ ���������� ������������ �������� ���� �� !&!� $% "! ! �������� �����
������� !" #��� $%%%& ���� � $! '������� $%%%& ������� $" (������� $%%%
��������
) ������� ����� ����� � ���� *��� � ���������� ����* ��������� *����� ���� *��� ������ �� �������� �������� �� ������+
������ ��������� ��������� �����, -�� ��������� ����� ����� *� ������ � �� ������ ����� �+����� � � ���������� �� �� *����
����� ��� �����+��������� ����� �������, .�� ��������� �������������� /.�01 �� ��� �����+�� � ��� ����� ������� � ���������
*����� � �������� *��� � ���� ������� �� � ����� �� �������� ���� /�1 2%34%, ������ � *��� �+����� � ���� � �+������� � ����� ��
5$6� ���� ��� ���� ��� ����� *��� � ������� �����, -�� � ����� ����� *��� � � � � �� ����� � � ��� �� ����� ������� �����
7 ���� ������, -�� ����� ������ *��� ������� � ���� � �� ���)0+��( �������� �*� ��8�� ��������� �� ���� *��� � �
���� "" � !%� �� ���������, .�0 ���� � �� ��� ��� ������ ������ ��������� ���� � ���� *��� � ������� ������ �� ���� �� ���
������� �� �����, ��*����� ������ � �� �+/"�41+������ �� � ������ � ������� ����� ��� ������ ���� ��*�� ��*�� ��������� *�����
� ��*�� �� � ���� ��� ��8����� �� ��� ����� � ���� ���� ����� ��� 4% ����� � ��� �� ��� � � �� ��� ������� �����, � $%%$
)� ����� 9����� ��, ��� ����� �� ����,
'������: ����� ����� & .�� ��������� ��������������& ������ ����� ������� �����
� ���� ������
9����� � � ��8�� ������ ����������� � ���� , 7�
�� � � �� �*� ���� �� ����� � ������� � ����������
*���� � � ������ ������ ������������� ����� � ��
����� � �� ��� ���� �������� *��� �+/"�;1+ � �+/"�41+
������ � ����� � *���� � ����� � �� ����� �����
����� � ���� ������� �+/"�;1+������ ,
9����� ������� �� �� ������ � ������������ �� �+
����� �� *���� � �� �� ��� ����� �� �� ���� ��� �
���� �������� �� �����, ��������� ������ � ��*�����
��� �� ���������� ������ � ���� ��� ��� �� �+
����� �� ������ � �����+�� � ��� ����� ������� ����
�� � � ����� �� ����� ����� �+���� ���� /0��� �
<���� � =����� > ���� "554& �� ���� =���� > .���*����
"5?5& 9��8� ���@�� )��� � > =8�@��� "5?51, -�� �����+
�� � ��� �� ��� � ��������� ��� ������ /0��� � �������
<��� � ��� > <���� � "55%& �� ��� �� ��,� "5?5& 9��8� ���@�
�� ��,� "5?51 *���� ���� �� �� � ��� �� ������ � �� �+
����� � ��� ��� ����� �� ��� � ���� � ������ ��
(<9A /)��� � > 0����� � "5?;1, -�� ����� � ���� �
��� ��� ������� ��� ����� � � ����� ������ /B� >
9����� "5C?1 *���� � ������ ����� �� �������� ����
/�1 �� "% � ������� �� �� ��D���� ��� ��� �������� �� �
����� ����� /.���� > =����� "5?C1, ��*����� ����
������� � ��* � �� ����� � ��� �� ��+��� ����� � �
��� ��� ��� �� ����� ���� /.���� > =����� "5?C1, -��
������� � �� ��� �����+�� � ��� �� ��� �� ������� ��
��� ������� �� ;%3C% ����� � ��� � ��������� �����
�� ����� � ������ ���� ������� �������� ����� /#��
>������ "5?;& �� ��� �� ��,� "5?5& 9��8� ���@� �� ��,� "5?51,
9����� � ���� � � �� � ����� �� ����� ������
����� ���� � � ������� ����� � ��������
����� /9����� "5551, E�� ��� �� ��� � ����� �����
����� � ������ � � ����� ���� � ����� ���� � ��� ��
��� ����� ��� ���, -�� ������� ����� � *���� ���
�� �� ���� ��� ��� �������� �� �+"�4+������ � ������
�� �� ���� ��� �*� ��� � , ������ ����� �������
����� 7 /9=)71 ����� �� ��� =� ������� �� ��� ���+
�� ��� ��� � � = �� <���� � 9���� /"5521 �� � �
���� ��� �D���� � �������� ���������� ��� � *����
��� = � ���������� ���� ������ � ����� ���� , -��
������� ������� �� ��� ����� �� ��� ������� �� ��
� ����+��������� ���� ��� ��� /=���� ��� 9���� >
B����� "5C4& F�� G+'��� �� =���*� ������� '��� �
0���������� ������� ;C /$%%$1 2!32?
%";;+?4"CH%$HI + �� ���� ������ � $%%$ )� ����� 9����� ��, ��� ����� �� ����,
�77: 9%";;+?4"C/%"1%%"4$+J
***,�� �����,���H������H�������
� 0���� ���� ������, E��: �;4+"?+4C$552,
$%���� �������( ���,��� �K���, ��, � /�, ��� �1,
> ������+<G����� "55?1� �������� ����+��������� ��� +
��� �� ���� ���� �� �� ������ ���� ��� �� ��� � ��� �
��������� ,
E�� ���� �� ��� ����� �� ������� ����� � �����
������ � ����� ��������� ����� ��� � ���� ������
��� ������� � ��������� � �� � �����+������ � ���
���� ������� ��� ������� / =���� � ���� � "5C?&
L�� ��� "54$& ����� B���� > =������ "52!& -�����
.�� > ���� � "55!1, -���� ���� ���������� ���
������� �������������� /���)01 � � ���D����� � �
����� �� ���� � �� ��� �� ����� ����� ������ , �
� ����� �� ������ ����� � �� ���������� ���� ��
� �, ��*����� � *���+���������� � ����� �� ����� *���
� ����* ��������� *����� ���� *��� �� ��������,
-�� ����� � �� ��� ��� *� �� ������� � ���������� �
����� ����� � �� � � ��� � � �� ����� � � ��� ��
����� ������� ����� �����,
� ��������� �� ����� �
)�#� *�������
��������� ����+����� � ����� ����� /'����� ��1 *�
������ ���� '������ 9����� � 0������� 0������
=����*����� �9�, � �+���������� ����� �� �����+
���� ����+����� � ����� ����� ������ �� 0��� ����
F�������� =������ *� � � � ��� ���� � , -�����+
����� �������� ����������� �+����� � /)0 !,$,","1 �
����������� ����� ���������� �� � /)0 !,$,",!1 *���
������ ���� <�������� =���� B�����*� 7����, 7 ����+
�� � /)0 !,$,",4?� 25 %%% �H�� ������1 *� ������ �
���� ���� ������ =���������� ����������� � A�������
#��� � �+����� � /)0 !,$,",$� ??% �H�� ������1 ����
9���� 0�������� 9� ���� � <A� �9�, ������ �������
����� 7 /"%! �(� ����1 *� ����+����� � � $� ���
� ����M� �� ����� ��M��� �������������� � ��+
������� �������������� � � ����� �� L�� ����
/"55C1, ������� ���� *��� ���� 9����� -�����
#���,
)�)� ���������� ������ ��������
��������� ����� /������, 2%% ��1 *� � ��� � �
"2 �� �� %," < ������� ������ �� 2,% � ������ *���
;% �� �+����� � /!%% �H��1 ��� " � � � ������ *����
����, ����� ������� 2%% �� �� ���������� �� �� �����
�� ";% �H�� � ��� ������� ������� *� �� � ��� �����
*� ������� �������� �� 4%�0, E������ ��� ����� *�
���������� *� �� �*��� *��� ��� ������� ������� �*���
*��� ������ � ��� ��� �������� �� ;%�0,
)�+� �%���������
�+������� � *� �������� �� � ����� 2 �� �� ���
����� � $%% �� (<9A � � ������ *���� ����, -��
����� *� ��� ����� *��� " �� �� %," < ���� ��������
�� ;,? � " �� �� �+����� � /$$ ??% �H��1 *� ��,
-�� �������� /�� $2�01 *� ����� ����� 2 � �� ������
��� ����� ��� 2 ��, -�� ����� *� ����� ":" *��� *����
����� �� �8����� � � =����� �+$ ����� /"�4 � 5% ��1
,� �������� �� ��� - .��/������� ������� 0 1)!!)2 "+3"&2;
20 25 30 35 40 45 50 55
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4102050100200500
Fraction n mber
Abs
orba
nce
E��, ", .�0 ������ ���M�� �� � ������� ����� ����� ����� �� /+�+1 � ����� /+�+1 ������ � �� � ������ �, ��������� ����� ����� �� ������ � �� �+
����� � � ���������� �� � � �� � ��* /+�+1, (� ����� ������ ����� ����� ���������� *��� ������� ��� ��* � ��� ����� ��� ,
����� *��� *����, 0���������� � �������� �������
/$ ��1 *��� ������ �� ��� �����3 �������� ��� �����
/(���� � .���� � �������� ����� > 9����� "5241, -�� �+
������� � ����� *� ��������� � ��� ��������� �� �����+
������ *��� � � �;,
)�0� .������������ ������
.�� ��������� �������������� /.�01 � � 9������ �
0�+4= ����� ����� *��� %,$2 < LA� *� ������ �
������� �� � ����� /E����� �� 9�������� ��� ��
)��� � > � ��� "55?1, -�� �������� ����� �� �������+
���� � ��� �������� ������� *��� ��� ��� �� ���
�����3 �������� ��� ����� /(���� �� ��,� "5241, ����
���������� ��� ������� �������������� *��� ��� �
������������ ������� /���)0+��(1 � � 0�������
��+"%% ����� *� � � � � ����� �� L���� ��� �
> � �� /"55?1, -�� ����� ��� ���)0 *��� ������
� ���� � "2% �< '�A� �� � ��� ������� �����
�������� ������� � ����� ����*,
)�"� ����� � ���� ������ /�������� ��4��� 5
9����� ��� ���� � �� ���)0 �� .�0 *��� �������
�� � ����� ����� ����� /43? ��1 � "%% �� �� $ <
LA�, " �� �� *���� � $%% �� �� %,2 < -�� ������ ��
C,4 *� ��� ��� �� *� �8� �� �� C,4 *��� �0� �
��� ����� *� ����� *��� *���� �� $ ��, -� 5%% �� �� ���
������ *� �� "%% �� �� � " �< ������ �� �����
������� ����� 7 �� "%% �� �� *���� /������ �����1,
-�� ����� *��� ������� ��� "4 � �� ���� �����������
� ��� ������� *� ��� �������� �� ������ � � ������
*���� ���� ��� 2 ��, " < ������� ������ �� !,4 /�"2% ��1
� 2 �� �� � ������ � /$52 �1 *��� �� � ��� �����
*��� ������� �� !?�0 ��� 2 �, ����� �� �8����� ��� ���+
����� ������� *� ����� �� ������ ��� 2 �� � ��� ��
�� ��� ����� *� �8� �� �� �� � "% � �� < '�A�,
� ������� �� ���������
+�#� ���������� ��� ��������������� ������ ��������
-�� ������ ��������� ������������ ��������� ���������
����� ������ *� ������ � *��� �+����� � � �����+
����� �� � ������� �+����� �+�� � ��� ������� , �����
$H! �� ��� ������� �������� *� ������ � ���� ���
����� ��������,
0�������������� � �������� ����� *��� � � ��
������� ��������� ��� � �������� � ������� �� ���
����� , .�0 ������ ���M�� �� ��������� �����
/'����� ��1 ����� �� � ����� ������ � *��� �+����� �
� ���������� �� � ��� ��* � E��, ", -�� ���������
����� ����� �������� � ���� ��������� *����� � �����+
��� *���� ��� ������ ���M�� �� ��� ����� ������� � ����
*��� � ������� � ��� ���� �� � 2%34% �� � � �����
���������� *��� ������� ���� , -�� *� � ��� *���
,� �������� �� ��� - .��/������� ������� 0 1)!!)2 "+3"& 22
0 10 20 30 40 50 60 70 80
0
5
10
15
20
25
30
35
40
A
B
6
10
20
30 4050
6
10
20
3040 50
Retention time (min)
Det
ecto
rre
spon
se(m
V)
E��, $, ���� ���������� ��� ������� �������������� �� ����� ����� ������� ���� '����� � /�1 � 0��� ��� ����� /=1, (� ����� ��� ������
����� ��� ���� ,
�� ��� ������� ���� ����� ���� /#�� �� ��,� "5?;& �� ���
�� ��,� "5?5& 9��8� ���@� �� ��,� "5?51, ����� �������� *���
� ������ � ��� ������ ���M�� � �� ����� �������
���� ��� ����� ������ ������ �� � ������ ��������,
� ��������� ����� ������ ���� 0��� ��� *� �� � ���+
��������� ��� �� � ���� � �� .�0 ����� ������
������ ���M�� /�� ��*1,
B��� ���)0� ������� ���� �� �� (� C$ ���� �� ���+
���� /E��, $�1, -�� ��8����� �� ��� ���� �� ���� *���
����� ��� ����� ����� � �� ��� ��� ���� ����� ��
������ ���� ���� �� � �� ������, -�� � � ��� *���
������� ���� � �����+�� � ��� ����� /.����� 0�����
(�������������� ���>.���*���� "5521,-�� �������
���� *��� ���� � *��� �� ����� ������ ���� ��� ����
��� ����� *��� �����, E����������� �������� �� ���
����� � �� ����� ��� ������ ������ /�� ��*1, �
�� ������� ������ �� ��� ����� � ���� �� � � �����
C%� � ��M��� �� .�0, -�� � ���� *��� �� �������
��� ������� ���� ��� ��� � ��������������� ������
��� *��� ���� �� ���� � ��� ������������,
� ������� � �� ����� ������ ���� '����� � � ���
0��� ��� ����� ������� � ����� �������� � ���� �����
���M�� /E��, $� � =1, ����� ����� ������ ����
'����� � ������ � ������ ��������� �� ���� ������
��� �$$ ����� � ��� *����� ����� ����� ������
���� ��� 0��� ��� ����� ������ � ���������� ������
����� �� ���� *��� � � �� $$32%,
�+����� � ������ � �������� �+/"�;1+������ �
����� � � ����������� ������� ����� ����� � �
�+����� ����� , ����� ��� ��� *��� �+����� �� 5$6 ��
��� ����� �� ��� ������ � �� ��� �����, -��
����� ������� ������� ��� � ������ ���� ��� ����� �
���� *��� � ������� �����,
+�)� ������ � ���� ������ /�������� ��4��� 5
-�� ����� ����� *��� � � � �� ����� ��� ���� �
��� ��� �� ����� �� ����� ������� ����� 7 ����
������, -�� �� ����� � *��� �M� *��� ������ �� � �����+
�� � *��� � ������������� ����* ���� ����� � �����+
���, -�� ���� ���� �� ���� �� ������� � ������ �����
D������� � ���� �� �� � ��������� *����� ���� �������
��� ���� � �� ���)0 ��� �� *��� ���� ��� � � � � �����
����� � �� ,
0��� ����� � �������� *��� ������� �� ���)0�
����� � ������� �� ��* ��� ��������� �� ������� ����
�� ����� ���� �������� *��� ������ ����� �������
����� 7 /E��, !1, 7 ��� ������ ����� /E��, !=1� �������
*������ ������ ���� *��� ���� �� �� � � C% *���
�� ���� *���� ���� �������� ���� ����� ��� C%
����� � ��� *��� ������ � ��� ���� ���� , E�� ���
����� ������� *��� 9=)7� ���� �� ��� ���� ���������
*����� �������� �� � ������� /E��, !�1, -*� �* ����+
����� *��� ������� �� ����& �� *��� � ���� �������
���� � "" � � ��� *��� � ������� ���� �
!%, � ������ ������ �� ���� � �������� � ��* � �
,� �������� �� ��� - .��/������� ������� 0 1)!!)2 "+3"&24
0 10 20 30 40 50 60 70 800
50
100
150
B
A
Retention time (min)
Det
ecto
rre
spon
se(m
V)
E��, !, 0����������� �� ����� ����� ������� *��� /�1 �� *������ /=1 9=)7 � ������� *��� � ������ � ����� �� ���� � �� ���)0,
��� �� ����� ������� ����� 7 ���� ����� /-���� ��
��,� "55!1,
����� ����� ������� *��� 9=)7 *��� �� � ���� � �
� 9������ � 0�+4= ����� ������ � ����� �������� *���
� ������ � /E��, ;1, =����� ��������� ��� ����� ��*�
������� ���M��*��� � ������������� � ��� ;%32%,�����
��������� ��� ���� ������� ����� �� � !%, -�� ����
*� *��� �M� � ��� ���� ��������� *����� ���� *���� ���
��8����� �� ���� ����� � 4% *��� �� ��, �� ��� ���
����� ��� ��������� �� ���� ���� *� ����� � � �*
���� ������ ��� � ��� ������� �� ����� �� ��� �����,
-�� ��*� ������ � ���� ����� � 4% ���� � �� �����
��� ��� ������� �����, E����������� ��� ��������� *�����
� �������� ��� ��� ������ ����� /*������ �������
����� ��1 � ��� ������ ����� ����� �� ��������
�� � ������ � ��� ������, -�� ���� �� ��������� � ���
��� ��� �� ���� �� ������ 9=)7 ���� ����+��������� ������
��� ����+���������, ��*����� ����+��������� ��� ���
���� �� ������ � �� �� � ��� ������� � �������
���� /=���� �� �� ��,� "5C4& ���� �� ��,� "52!&F�� G+'��� �
�� ��,� "55?1,
7 ��� ������ ����� ����� ���� ��� ������� �� ���+
����� ������ � �� ��������� �����, -�� � � �� ��� �
����� ����� � � ����� �� ����� � � ����� ����
�� ��� ����� �� � ������� ����� �� ��� ��� �����,
����������
=���� ��� (,� 9����� ), ),� > B����� B, #, /"5C41, A ��� ������ � ��
����� � ������� �� ������ N+�����, $������ 6�����
������������ 7)� !%C3!"$,
=����� 0, (,� > ���� � #, /"5C?1, <������� ���� �� /" � ;1+/+�+������
/" � ;1+/+�+�����+4+����� �� ��� ���� � ���� �������� 8�� ���� �,
����� , .��/������� 9�������� 7#� !$"3!!;,
0��� � �,� ������� F, <,� <��� � <, #,� ���� 9, .,� > <���� � F, #, /"55%1,
�� � ��� �����: � J+��� ��������� ��� ��� ��� ������ �� ��������
������ � � ����� � ��� � �����, 6����� .������ ������� #)�
$%!3$%4,
0��� � �,� <���� � F, #,� =������ �, �,� > ���� 9, ., /"5541, ��� ���+
�������� ���� � �� � ��� ����� � ����� � � ����, 6�����
.����� ������� )+� $423$C2,
(���� � <,� .���� � L, �,� �������� #, L,� ����� � �, �,� > 9����� E,
/"5241, 0����������� ����� ��� ���������� �� ���� � ������
�� ���� , ���������� .��������� )&� !2%3!24,
)��� �� �,',�>0����� � #,�, /"5?;1, 9�����M������ ��� ������ ���+
��� �� ����� �+ ����� ���� �������� �� �� +��D�� �������������� ��
�� ������ ���� � ������ ������� , �������� #!:� 5!C35;$,
E����� �� �,� 9�������� #,� ��� �� �,� )��� �� �, +0,� > � ��� �,
/"55?1, -�� �O���� �� ����� � � ���������� ���������� ��� �
������� ���� � ������������ ��������� �� ������� ������ ,.��/%
������� �������� +"� ""53"!;,
.����� <, #,� > =����� �, F, /"5?C1, 0�� ����� ���� �� �����+����� ��+
������ � ���� �� ��� ��� ������ ���� �� �����: <����� ����+
����� ��D������� ��� ��� �������� �� ����� ������ , .��/�������
9�������� #7#� $5"3!%%,
.����� <, #,� 0����� (,� (����� �, �,� ������� �, �,� �� ���� �, �,� >
.���*���� �, /"5521, <�������� ���� � �������� � �����+�� � ���
��������� �����, .��/������� �������� )&� $!3!",
#��� #, +�,� > ������ #, E, /"5?;1, 9�������� ���� �� ����� � F+
�������� � ��������� ����� � �� ����� �� ����� ����� � � �
� �* ����� ��� �������� ���������� , .��/������� 9��������
#+)� "%23""?,
L�� ����� #, /"55C1, 9����� ������� ����� � ����� ��/�����
� ���/������ ��������, (������� ��� � � 9*�� � ����� ��� ��
������������ 9����� ,
,� �������� �� ��� - .��/������� ������� 0 1)!!)2 "+3"& 2C
30 35 40 45 50 55 60 65
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4102050100200500
Fraction n mber
Abs
orba
nce
E��, ;, .�0 ������ ���M�� �� ��� ������ ����� �� �������� �� ������ ����� ������� ����� 7 /9=)71 *��� ����� ����� , 0����� ����� *������
9=)7 �� /+�+1� 9=)7+������ ������ /+�+1 � ����� /+�+1 �������� *��� � ������ �, (� ����� ������ ����� ����� ���������� *��� �������
���� ��� ��* � ��� ����� ��� ,
L���� L,� ��� �� �,� > � ��� �, /"55?1, N���������� ���� � ��
���������� ��� ���� �� ��� �� ����+���������� ���+�������
�������������� *��� ��� � ������������ �������, 6����� .��%
��������� �� &!!� "553$%4,
L�� ��� 0, �, /"54$1, � ����� ��� ��� ������������ � ������� �� �����+
�� *��� ����, ���������� ������������ 0� "C3$!,
<����� 0,� > 9����� �, <, /"5521, 9����� ��� ���� � , ����� .���� � 5C"3
5?2,
����� 9,� B����� B, #,� > =������ #, <, /"52!1, -�� ������ ���� � �
�������� �� �����, ���� JF777, -�� ������ ����+����� ��� N+
����� �����, 6����� .������� ������ ";$$3";$C,
�� ���� �, �,� =����� 0, 9,� > .���*���� �, /"5?51, 0��������� ���� ��
�� � ��� ����� ���� *���� � �����, 6����� .����� ������� :� "3
"2,
9��8� ���@�� <,� )��� �� �, +0,� > =8�@���� 7, /"5?51, 0��������� ���� ��
�� � ��� ����� ���� ��������� *���� �����, �����- ��;�<�� 0#� ";C3
"2",
9����� �, <, /"5551, <���� �����, .������ ������ �� ����� ������ )�
$$!3$$5,
-����� P,� .��� �, +�,� > ���� � #, /"55!1, =������ �� ����� � �� ���
������� � ������ �� ����� �� ����, .��/������� 9��������
)0!� $2!3$4!,
F�� G+'��� �� �,� =���*� �,� ������� '��� �� -,� > ������+
<G����� =, /"55?1, ��� ��������� �/" � ;1+����� � �� �����
��� ������ �����+������� ����� 7, ����� �������� ## � ?453
?C2,
B�� �, +0, �,� > 9����� �, /"5C?1, -�� �����+������� ��������� ��������
�� ��� ������ =+����� �, .��/������� 9�������� 7#� C3$2,
,� �������� �� ��� - .��/������� ������� 0 1)!!)2 "+3"&2?