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Citometria de fluxo
Práticas de biomedicina II
prof: Archangelo Padreca Fernandes
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Introdução
• Através de pesquisas em laboratório, antígenos são colocados estrategicamente em corpos de certos seres vivos para a
criação de anticorpos para serem analisados.
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Fluorocromos
• São substâncias químicas que se ligam a anticorpos presentes na membrana plasmática que emitem luz após um determinado estímulo (e refletem).
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Fluorocromos
• São específicos (para cada anticorpo).
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O que é?
• O citômetro de fluxo é um aparelho utilizado para a análise de emissão de fluorescência da célula (por meio de anticorpos).
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Citômetro de fluxo
• Mede as propriedades de dispersão de luz pelas células e a emissão de luz de anticorpos monoclonais (criados e clonados em laboratório).
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Metodologia
• As células uma vez em suspensão líquida são interceptadas por um feixe de luz (laser).
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1. Ângulos de dispersão
• Um número de detectores são apontados ao local onde passa o feixe de luz capaz de detectar a estrutura e tamanho da célula.
• FSC – ângulo de dispersão frontal (detecta o tamanho celular).
• SSC –ângulo de dispersão lateral (detecta a composição celular).
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FSC x SSC
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2. Luz e coloração
Cada partícula que passa pelo feixe de luz dispersa uma luz diferente, diferenciando os tipos celulares.
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Importante saber
• As células são contadas a partir de detectores FSC e SSC.
• As células são separadas a partir da atração de placas por diferença de polaridade.
• A técnica possui inúmeras vantagens.
• Importante para o estudo do câncer.
• Grande numero de células analisadas com rapidez.
• Mede parâmetros em células individuais.
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Gráfico
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Gráficos
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Metodologia
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Aplicações
Fenotipagem de leucócitos, de células tumorais, análise de DNA, diagnostico e classificação de leucemias, de linfomas, contagem de reticulócitos...
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