practica 1.pruebas cruzadas. inmunologia. mesa 4

8/12/2019 Practica 1.Pruebas Cruzadas. Inmunologia. Mesa 4

1/12

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DEOAXACA

Facultad de Ciencias Qumicas

Laboratorio de Inmunologa

Titular: QB. Antonio Girn

REPORTE DE PRCTICA N. 1Pruebas Cruzadas

MESA # 4

Alumnos:Cruz Hernndez Diego Sait

Patricio Jimnez Vctor EduardoRos Ros William de Jess

Ruiz RosBrbaraZrate Ramos Rosa Andrea

6toSemestre Grupo: A

Ciclo Escolar: 20142014Marzo de 2014, Oaxaca; Oaxaca


2/12

INTRODUCCIN .

Las pruebas cruzadas son procedimientos relativamente sencillos pero de

gran cuidado, que tienen como propsito garantizar la compatibilidad serolgica (in

vitro) entre la muestra de sangre del receptor y la unidad de sangre que se le

pretende transfundir.

La validez de las pruebas cruzadas radica en la correlacin que existe entre

las pruebas de compatibilidad realizadas in-vitroy la sobrevida de los hemates en

la circulacin del paciente.

Como mencionamos, el objetivo de las pruebas de compatibilidad es prevenir

la transfusin de sangre incompatible (definimos como compatibilidad de

transfusin como la falta de reaccin inmune entre antgenos (Ag) y anticuerpos

(Ac) de donante y receptor, donde la compatibilidad no garantiza identidad entre

ambos, solamente indica que, en ese momento, no habr disminucin de

rendimiento transfusional por causa inmune)

Desde este punto de vista las pruebas cruzadas deben garantizar:

La compatibilidad de ABO y Rh entre el receptor y la unidad que se

pretende transfundir.

Que el suero del receptor no existan anticuerpos de importancia clnica

contra los antgenos eritrocitarios del donante.

Que en el plasma de la unidad de sangre no existan anticuerpos deimportancia clnica contra los antgenos eritrocitarios del receptor.

Entre las medidas de seguridad transfusional estn aquellas encaminadas a

evitar la reaccin hemoltica aguda, es decir, las que aseguran la compatibilidad

entre donante-receptor.

OBJETIVOS .

Realizar pruebas cruzadas de compatibilidad sangunea para:

Garantizar que los eritrocitos a transfundir son ABO compatibles con el

receptor.

Detectar anticuerpos en el suero del receptor que estn dirigidos contra

antgenos presentes en los eritrocitos del donante.


3/12

FUNDAMENTO .

Las pruebas de compatibilidad sangunea se efectan rutinariamente en

solucin salina al 0.85 %, en este medio los anticuerpos que aglutinan son

principalmente de la clase IgM.

Las pruebas cruzadas son dos y reciben este nombre porque se hace

reaccionar en tubo:

El plasma o suero del receptor con los glbulos rojos del donador (prueba

mayor).

El suero o plasma del donador con los glbulos rojos del receptor (prueba

menor)

Estas pruebas sirven para asegurar que todos los glbulos rojos transfundidosson compatibles con los anticuerpos que contiene el plasma del paciente. As

como tambin, para evitar estimular la produccin de nuevos anticuerpos contra

los glbulos rojos en el receptor especialmente anti-Rh D.

Las pruebas cruzadas se dividen en:

a) PRUEBA MAYOR:

Consiste en poner a reaccionar el suero del receptor con los eritrocitos

del donador. En la prueba mayor se verifica los anticuerpos del paciente

(plasma o suero) que se encuentran en gran volumen, contra los glbulos

rojos del receptor.

b) PRUEBA MENOR:

Consiste en poner a reaccionar el suero del donador con los eritrocitos

del receptor. Esta prueba se realiza cuando se va a transfundir plasma.

El empleo de albmina bovina facilita la deteccin de anticuerpos de la clase

IgG. Ya que stos muy frecuentemente se ven impedidos en su efecto aglutinante

por el potencial Z.

Estas pruebas son requerimiento fundamental, porque es la mejor manera de

detectar anticuerpos que puedan daar las clulas rojas transfundidas y causaruna reaccin hemoltica transfusional.


4/12

PROCEDIMIENTO .

A. Equipo, Material y Reactivos Necesarios

Reactivos

Los reactivos debern de ser de grado analtico

Solucin salina isotnica 0.9%

Solucin de albumina bovina al 22%

Materiales

4 tubos de ensaye de 13x100

Pipetas Pasteur desechables

Parafilm

Tubos Vacutainer con y sin EDTA

Ajugas para venopuncion

Torundas de alcohol

Torniquete

Material Bio lgico

Suero de donador y receptor.

Suspensin de eritrocitos al 5% de donador y receptor

Aparatos e instrum entos

Centrfuga.

Bao mara a 37 C

B. Desarrollo de la Practica

Preparacin de las Muestras Biolgic as

1. Extraccin de una muestra de sangre venosa.a) Realizar la extraccin de una muestra de sangre

total por puncin venosa en un tubo con EDTA yuno sin anticoagulante. Ambas muestras debernobtenerse tanto para el donador como para elreceptor.

b) Esperar 15 minutos para que la muestra sin aditivo coagule

completamente.

c) Centrifugar la muestra sinanticoagulante para obtener el suerodurante 5 minutos a 2500 r.p.m.


5/12

d) Concluido el proceso de centrifugacin verificar que elgel separador se encuentre entre las dos fases de la sangretotal y que el suero sea transparente y no presente hemlisis.

2. Preparacin de la suspensin de eritrocitos.a) De la sangre total con EDTA bien mezclada colocar 10 gotas en un tubo de

ensaye, agregar solucin salina isotnica hasta partes del tubo deensaye, colocar parafilm en la boca del tubo, mezclar suavemente porinversin.

b) Centrifugar durante 3 minutos a 1500 rpm.c) Transcurrido el tiempo de centrifugacin decantar con cuidado el

sobrenadante y desecharlo.d) Volver a adicionar solucin salina isotnica como en el inciso a y repetir el

mismo procedimiento que en b y c de manera que se deben realizar un totalde 3 lavados.

e) Una vez que se tenga el paquete de eritrocitos lavados, resuspenderlo ensolucin salina isotnica para obtener una concentracin aproximada del5%.

Procedimiento.

Fase I. Salina rpida.1. En un tubo marcado como PM (Prueba Mayor), colocar dos gotas de la

suspensin de eritrocitos del donador y dos gotas del suero del receptor.Mezclar suavemente.

2 Gotas de

suero del

Receptor

2 Gotas de

Suspensin

eritrocitaria

del Donador


6/12

2. En un segundo tubo, marcado como pm (prueba menor), colocar dos gotasde la suspensin de eritrocitos del receptor y dos gotas del suero deldonador. Mezclar suavemente.

3. Centrifugar ambos tubos a 1000 rpm durante 60segundos.

4. Observar el sobrenadante de ambos tubos en buscade hemlisis. Resuspender suavemente el, botn delos eritrocitos en busca de aglutinacin. Anotar losresultados.

Fase II. Albmina.

5. En caso de no observar aglutinacin en los tubos de lafase I, agregar a ambos tubos dos gotas de la solucin dealbmina bovina al 22%. Mezclar suavemente.

6. Incubar a 37 C durante 15 minutos.

2 Gotas de

Suspensin

eritrocitaria

del Receptor

2 Gotas de

suero delDonador


7/12

7. Transcurrido el periodo de incubacin centrifugar ambos tubos a 1000 rpmdurante 60 segundos.

8. Resuspender suavemente el botn de eritrocitos y buscar la presencia deaglutinacin. Anotar sus resultados.

RESULTADOS .

Dentro del desarrollo de la prctica usamos dos grupos sanguneos diferentespertenecientes al sistema AB0, y se realizaron las pruebas de forma siguiente:

Prueba Salina Rpida. 00Donador (Vctor): Grupo 0Receptor (Sal): Grupo 0

PaqueteEritrocitario.

Donador.Grupo 0

Suero.Receptor.Grupo 0

Suero.Donador.Grupo 0


Receptor.Grupo 0

En la Prueba Mayor (PM)entre grupos 00 no hay

aglutinacin. Los anticuerpos

y los antgenos son

compatibles y por tanto laaglutinacin no se

resentara.

En la prueba menor (pm)

entre los grupos 00 no sepresento aglutinacin.

Sucede el mismo caso que

con la PM, sin embargo se

realizaran a la PM y la pm la

rueba de albumina.


8/12

Prueba Salina Rpida. A0Donador (Vctor): Grupo 0Receptor (Alan): Grupo A

Paquete

Eritrocitario.Donador.Grupo 0

Suero.Receptor.Grupo A

Suero.Donador.Grupo 0


Receptor.Grupo A

En la prueba menor (pm) entrelos grupos 0A se presentoaglutinacin. Esto se debe aque los antgenos presentes en

los eritrocitos del grupo A

interacciona con los anticuerpos

presentes en el suero del grupo

0, puesto que el grupo 0 posee

anticuerpos Anti-A y Anti-B,

provocando as la aglutinacin enlos eritrocitos.

En la Prueba Mayor (PM) entre

grupos A0 no hay aglutinacin.Los eritrocitos del grupo 0 no

presentan antgenos que

interacten con los anticuerpos

del suero del grupo A y por tanto

no hay aglutinacin.


9/12

Prueba. Albmina. Grupos 00A los tubos de PM y pm de los grupos 00, donde no hubo aglutinacin se realizo

la prueba de Albumina.

PM No hubo aglutinacin Al no presentar

aglutinacin significa quela sangre del receptor y eldonador sonCOMPATIBLES.

pm No hubo aglutinacin

DISCUSIN .

Las determinaciones de grupos sanguneos son pruebas de alta demanda encualquier laboratorio clnico, sea para el simple conocimiento del tipo de sangre opara un propsito determinado, sin que este siga algoritmos adecuados de controlde calidad. Estos casos, sin aprobarlos, pueden pasar desapercibidos las simplestcnicas usadas.

En banco de sangre esto no debe pasar por alto. En la prctica se hananalizado las posibilidades de las diferentes reacciones antgeno-anticuerpo quese pueden presentar sangre, cuando se encuentran en contacto fluido sanguneo(tanto plasma como sangre) de diferentes individuos; se ha establecido queincluso individuos con sangre que en un principio parecen similares, pueden noser compatibles y por tanto generar problemas de salud importantes. Por talmotivo se debe hacer nfasis en el control de calidad de los laboratorios mediantela aplicacin de tcnicas cruzadas (pruebas cruzadas) para evitar reacciones nodeseables.

Las pruebas cruzadas deben ser obligatorias, realizando toda la metodologacorrespondiente. Un resultado negativo en una reaccin entre individuos de dostipos de sangres diferentes no se puede considerar como una compatibilidadsegura. Factores como el potencial Z, la variabilidad de grupos antignicospresentes en la membrana, el desequilibrio entre la concentracin Ag-Ac(postzona y persona) generan resultados ambiguos.

Se aaden 2 gotas de

albumina a cada tubo, se

llevan a bao mara a 37C por

15 min, y se centrifugan a

1000 rpm por 1 min.


10/12

Las reacciones inmunolgicas entre antgenos y anticuerpos no son simplesaglutinaciones como los que se analizan en las practicas, dentro del organismo,estas desencadenas patologas graves y es por eso la importancia de estas.

CONCLUSION .

La respuesta inmune generada por el organismo frente a un antgeno se

fundamenta en reacciones de los anticuerpos contra estos antgenos. La

presencia de antgenos sobre la membrana de los eritrocitos permite obtener una

visin clara de estas respuestas, cuando existe una interaccin de estos eritrocitos

con anticuerpos xenbioticos o viceversa.

Las reacciones antgeno-anticuerpo se pueden determinar mediantes pruebas

bsicas y tpicas de laboratorio, como lo son las pruebas de grupo sanguneo

comunes. Estas pruebas nos permiten cuantificar de manera cualitativarespuestas inmunolgicas sobre antgenos del sistema ABO, observando

reacciones de aglutinacin o de hemlisis. El anlisis de estas reacciones

aglutinantes y/o de hemlisis ilustran las una interaccin entre un antgeno y un

anticuerpo, lo que est determinado por una respuestas inmune. Cuando no se

observan estas caractersticas, podemos imaginar en un principio que no existe tal

respuesta inmune. Hablando en trminos de una transfusin de sangre, estas

reacciones se pueden traducir en compatibilidad o no compatibilidad de sangre

entre donadores y receptores.

En las prcticas de transfusin es importante no cometer errores en la

determinacin de estas reacciones, as como en su apreciacin.

Es por eso de la importancia de realizar pruebas cruzadas, en donde, a sabiendas

de las diferentes interacciones que nos resultaran sin compatibilidad y por tanto

una aglutinacin y/o hemlisis, debemos tener la absoluta certeza de una

compatibilidad. Dos individuos con la mismo tipo de sangre no pueden estar

descartados de una incompatibilidad. La membrana del eritrocito presenta una

variedad de antgenos que pueden afectar la reaccin antgeno-anticuerpo, o

antgenos que no son potencialmente inmunogenos; pueden existir factores como

el potencial Z, que alteran en cierto grado la reaccin. Por tal motivo las pruebas

cruzadas son tcnicas obligatorias para el control de calidad de un laboratorio de

transfusin.


11/12

CUESTIONARIO .

1. Menciona al menos cuatro sistemas de clasificacin de grupos sanguneos.

Sistema ABO.

Sistema Rh.

Sistema MNS.

Sistema Lutheran.

Sistema Diego.

Sistema Duffy.

2. Explica el concepto de potencial Z aplicado a las membranas de los eritrocitos.

La superficie de los glbulos rojos tiene carga elctrica negativa debido a las

molculas de cido silico de la membrana. Cuando los hemates estn en

suspensin en soluciones que contienen iones libres, los cationes son atrados por

las cargas negativas de la superficie del glbulo rojo, de modo que se forma una

nube inica positiva alrededor de los glbulos rojos que, por estar constituida por

cargas elctricas del mismo signo, crear una repulsin entre los eritrocitos. Estarepulsin se conoce con el nombre de potencial Zeta.

3. Cmo est constituida una inmunoglobulina?

Una molcula de inmunoglobulina (Ig) o tambin llamada anticuerpo es una

glicoprotena que se produce por los linfocitos B o sus clulas derivadas, las clulas

plasmticas; tiene una estructura nuclear simtrica compuesta de dos cadenas

ligeras idnticas y dos cadenas pesadas idnticas; dichas cadenas contienen una

serie de unidades repetidas, homologas, de aproximadamente 110 aminocidos de

longitud, que se pliegan en una estructura globular llamada dominio de Ig.

Un dominio de Ig tiene dos capas de lmina plegadas en , ambas se mantiene

unidas mediante un enlace disulfuro y hlices adyacentes a cada lamina se

conectan mediante asas cortas. Las cadenas pesadas y ligeras constan de regiones

amino terminales variables (V) que participan en el reconocimiento del antgeno y de


12/12

regiones carboxilo terminales constantes (C); las regiones C de las regiones

pasadas median las funciones efectoras.

BIBLIOGRAFA .

Abbas, Abul K. Inmunologa Celular y Molecular. 7 Edicion, Editorial

ELSEVIER, Barcelona, Espaa, 2012.

Murphy Kennet, Travers Paul, Walport Mark. Inmunobiologia de Janeway.7 Edicion, Editorial McGraw-Hill. Espaa

Roit. Inmunologa, Fundamentos. 10 Edicion, Editorial Medica

Panamericana, Barcelona, Espaa. Kuby. Inmunologa. 6 Edicion. Editorial McGraw-Hill, Impreso en Mxico,

2007.

practica 1.pruebas cruzadas. inmunologia. mesa 4

Documents