Penentuan Jumlah Tannin White dan Red Rind

Delima (Punica granatum L.) dengan Metode Colorimetric

Menggunakan Reagen 1, 10 Phenanthroline

Abstrak

Penentuan total tanin putih dan merah kulit delima (Punica granatum L.) telah dilakukan oleh kolorimetri

Metode menggunakan reagen 1,10 fenantrolin. Metode ini didasarkan pada pengurangan besi (III) menjadi besi (II) oleh tanin pada suhu

800C selama 20 menit. Kemudian dibentuk dari besi (II) direaksikan dengan 1,10 fenantrolin membentuk warna kompleks merah oranye yang bisa

diukur dengan spektrofotometer terlihat pada panjang gelombang serapan maksimum 508 nm. Batas deteksi (LOD) dan

batas kuantitasi (LOQ) yang diperoleh 0,34 ig / mL dan 1,14 Ig / mL, masing-masing. Hasil ini ditemukan linier dengan R

nilai 0,9984; akurasi recovery persen adalah 84,69 ± 0,85% dan koefisien varian (KV) adalah 1,003% untuk kulit putih

delima sementara pemulihan kulit merah delima persen adalah 84,38 ± 0,45% dan koefisien varian (KV) adalah 0,53%. Itu

Total tanin dari kulit putih delima adalah 18,28 ± 0,072% b / b dan kulit buah delima merah 17,33 ± 0,081% b / b

1. Perkenalan

Malaria Delima telah digunakan di berbagai daerah dan sistem medis tradisional sebagai obat karena

senyawa yang sangat besar dengan banyak kegiatan dan tanpa toksisitas. Tannin adalah salah satu senyawa aktif

metabolit sekunder yang dikenal untuk melindungi terhadap lapisan mukosa usus dari stimulasi isi usus dan

dapat memicu beracun. Tanin tersebar luas di bagian tumbuhan seperti kulit kayu, daun, buah dan akar. pembangunan

obat herbal terstandar membutuhkan satu standardisasi produk mengandung senyawa kimia yang digunakan sebagai penanda. Oleh karena itu, metode analisis isi tanaman obat yang diperlukan, satu di analisis

tannin1 assay. Penentuan jumlah total tanin dilakukan dengan menggunakan reagen kolorimetri 1.10 phenanthroline dan

larutan besi (III), karena memiliki nilai sensitivitas yang lebih baik, reaksi yang terjadi dengan berjalan cepat dan

khusus sehingga pengukuran dapat secara efektif dan efisien 2.3.

2. Eksperimen

2.1. Bahan

Putih dan kulit buah delima merah, air suling, Iron (III) larutan, asam tanat, kaolin, dapar asetat

solusi pH 4,4, asam Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) solusi, 1,10 solusi phenantrolin, larutan gelatin,

klorida natrium.

2.2. metode

2.2.1. Pembuatan larutan sampel

Sebuah sampel kulit delima (0,05 g) direbus dengan 80 ml air suling selama 1 jam. Campuran didinginkan,

filtared dan filtrat dibuat hingga 100 ml dengan air suling dalam labu dikalibrasi.

2.2.2. Penentuan

grafik kalibrasi. standar larutan asam tanat yang dipipet secara terpisah ke dalam serangkaian 25 termos ml dikalibrasi

sehingga konsentrasi asam tanat dalam solusi akhir berkisar 1-6 mg ml-1. Untuk masing-masing termos ini adalah

ditambahkan 2,5 ml dari besi (III) larutan dan campuran dipanaskan pada air mandi pada 80 ° C selama 20 menit. Kemudian,

campuran yang mengandung 2,5 ml buffer asetat, 5.0 ml 1, solusi phenanthroline l0 dan 0,50 ml larutan EDTA

ditambahkan ke masing-masing labu. Setelah termos telah didinginkan sampai suhu kamar, solusi dibuat sampai

mark dengan air suling. Absorbansi solusi diukur terhadap kosong reagen di 508 nm. Itu

grafik kalibrasi dibuat dengan memplot absorbansi terhadap konsentrasi acid1 tannic

Sampel dan determinations.1.0 kosong ml larutan sampel diperlakukan seperti dijelaskan di atas. Contoh

kosong diperoleh sebagai berikut. Sebuah volume 10 ml larutan sampel dipipet ke dalam gelas 100 ml mengandung

5.0 ml larutan gelatin. Untuk campuran ditambahkan 10,0 ml larutan natrium klorida asam diikuti dengan 2,0 g

kaolin dan keseluruhan terguncang selama beberapa menit. Endapan diizinkan untuk menetap dan campuran itu

tersaring. Kemudian, 10,0 ml filtrat, 6,0 ml air suling, 3.0 ml larutan gelatin dan 6,0 ml natrium asam

solusi klorida dipipet ke dalam gelas 100 ml diikuti dengan penambahan 2,0 g kaolin. Setelah gemetar untuk

beberapa menit, campuran disaring dan 1,25-2,5 ml filtrat diperlakukan seperti yang dijelaskan di bawah Kalibrasi

grafik. Prosedur untuk menentukan gelatin kosong adalah sama dengan yang untuk kosong sampel kecuali bahwa

air suling digunakan sebagai pengganti larutan sampel. Perbedaan serapan antara kosong sampel dan

gelatin kosong memberi sampel kosong bersih. Perbedaan serapan antara sampel dan sampel bersih kosong

adalah karena tanin dalam sampel dan konsentrasi mereka disimpulkan dari grafik kalibrasi.

3. Hasil dan Pembahasan

Penentuan tingkat tannin telah dilakukan dengan metode kolorimetri dengan menggunakan reagen 1,10

phenantrolin dan larutan besi (III). Metode utama berdasarkan pada pengurangan besi (III) menjadi besi (II)

karena tannin. Dengan penambahan reagen 1,10-phenantrolin harus dibentuk besi kompleks (II) yang berwarna merah

jeruk.

Air itu digunakan sebagai pelarut untuk ekstraksi sampel karena sifat tanin yang mudah larut dalam

air. Ekstraksi dilakukan dengan pemanasan selama 1 jam pada suhu 80oC. Dengan kondisi ini diharapkan bahwa tannin dapat diekstraksi dengan sempurna sehingga diperoleh tingkat tannin secara maksimal. Percobaan pertama adalah untuk mengoptimalkan

berat simplisia mulai dari 250 mg, 100 mg dan 50 mg. Hal itu dilakukan karena semakin simplisia yang digunakan

penyerapan diperoleh lebih tinggi. 50 mg Kemudian kulit berat delima putih dan merah yang digunakan adalah 50 mg. Itu

Ekstrak ditambahkan larutan FeCl3 dan itu pengurangan reaksi besi (III) menjadi besi (II). pengurangan ke

Reaksi dapat dijalankan dengan sempurna oleh pemanasan ekstrak selama sekitar 20 menit. Kemudian besi (II) dibentuk dan bereaksi dengan

reagen 1,10 fenantrolin. Setelah pemanasan kemudian ditambahkan buffer asetat pH 4,4, 1.10-Na fenantrolin dan EDTA.

Fungsi buffer asetat pH 4,4 adalah untuk menstabilkan pH ke atmosfer asam sementara Na-EDTA berfungsi sebagai

pengompleks logam lain yang terkandung dalam larutan sehingga reaksi pembentukan besi (II) dengan 1,10

fenantrolin tidak mengganggu dengan adanya logam lainnya. Selain pengukuran sampel, sampel

Pengukuran dilakukan tanpa untuk melihat tannin senyawa lain yang masuk senyawa diukur lainnya

dari itu yang tannin dapat bereaksi dengan besi (III) klorida sehingga terlibat dalam proses reduksi besi (III)

besi (II), dimana pengukuran sampel tanpa menambahkan gelatin solusi tannin 0,3% sebelum mengekstrak adalah

bereaksi dengan besi (III) klorida 0, 01M. Suatu larutan gelatin digunakan untuk mengikat tannin tersebut. Tannin terikat oleh

gelatin, ketika bereaksi dengan besi (II) klorida. Suatu larutan gelatin ditambahkan dua kali dengan maksud untuk tannin yang

benar-benar terikat sempurna oleh gelatin sehingga, ketika pengukuran belum ada senyawa tannin. Untuk

memastikan tannin yang filtrat tetes terikat pada akhirnya, larutan gelatin saat itu belum terjadi endapan; tanin

sudah benar terikat. Hasil pengukuran penyerapan sini dalam bentuk penyerapan selain tannin yang

yaitu polifenolat karena tannin termasuk polifenolat senyawa. Jadi, penyerapan total tanin yang diperoleh adalah

sampel penyerapan berkurang sampel penyerapan Blanko. Dari tingkat materi yang diperoleh asing total tannin ke

kulit dari putih delima adalah 18,28% ± 0.072 (hasil lihat tabel 3.1) dan kulit merah delima adalah 17,33% ±

0081 (tabel 2).

Panjang gelombang serapan maksimum adalah 508 nm. Persamaan linier dari kurva kalibrasi y = 0,225x +

0364 untuk r = 0,9984. Persamaan ini digunakan untuk menentukan konsentrasi tanin yang akan dicari. Sebagai tambahan,

nilai linearitas juga ditentukan. Batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) 4. Itu

nilai LOD yang diperoleh adalah 0,34μg / mL dan LOQ adalah 1,14μg / mL. Penentuan batas deteksi dan batas

kuantisasi dapat dihitung dari kurva kalibrasi dengan menghitung nilai Sy / x = √Σ (y-y) 2 / n-2, Dimana nilai LOD =

3SY / / b x dan LOQ = sy / 10 / b x dengan sy / x = dengan cara baku residual dan b = miring garis (tabel 3.3).

4. Kesimpulan

Dalam pengukuran kurva kalibrasi persamaan garis yang diperoleh y = 0,225 x + 0,364 dengan r = batas 0.9984.The

deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) yang diperoleh 0,34 ig / mL dan 1,142ìg / mL, masing-masing.

Akurasi pemulihan persen 84,69 ± 0,85% dan koefisien varian (KV) adalah 1.003% untuk kulit putih

delima sementara kulit merah pemulihan delima persen 84,38 ± 0,45% dan koefisien varian (KV)

adalah 0,53%. Total tannin dari kulit putih delima adalah 18,28 ± 0.072% b / b dan merah kulit delima adalah

17,33 ± 0.081% b / b. Metode yang diusulkan dapat digunakan untuk penentuan kuantitatif dari jumlah tannin putih dan merah

kulit delima (Punica granatum L.).

IV. PEMBAHASAN

Percobaan reaksi antara senyawa karbonil dengan karbanion bertujuan memahami salah

satu aspek penting dalam sintesis organik. Aspek penting dalam sintesis organik yang khusus

dalam percobaan ini adalah kereaktifan karbanion.

Senyawa karbonil merupakan senyawa yang memiliki gugus fungsi yang sangat penting

dalam kimia organik, yaitu gugus karbonil. Gugus ini dimiliki oleh golongan senyawa aldehid,

keton, asam karboksilat, ester, dan turunan lainnya.

(Hart, 1990)

Senyawa karbonil mendidih pada temperatur yang lebih tinggi daripada senyawa

hidrokarbon, tetapi lebih rendah daripada senyawa alkohol dalam berat molekul yang dapat

dibandingkan karena polar molekul senyawa karbonil cenderung untuk berasosiasi bagian positif

dari suatu molekul tertarik ke bagian negatif dari molekul lain seperti alkohol.

Senyawa karbonil dengan berat molekul rendah dapat membentuk ikatan hidrogen

dengan senyawa hidroksil.

(Hart,1990)

Karbanion merupakan ion organik bermuatan negatif, terutama jika muatan itu berada

pada salah satu atom karbonnya.

(Hendayana,2002)

Pada percobaan senyawa karbonil yang digunakan adalah senyawa benzaldehida

sedangkan senyawa yang membentuk karbanion adalah dari senyawa asam malonat. Dalam hal

ini benzaldehida digunakan untuk senyawa karbonil ini karena benzaldehida sp2 dan

dihubungkan kesebuah atom oksigen dengan ikatan rangkap dua (sebuah ikatan sigma dan

sebuah ikatan phi). Asam malonat dapat digunakan sebagai karbanion karena asam malonat

memiliki gugus karbonil yang berposisi ß terhadap gugus asetat yang menyebabkan atom

hidrogen yang berikatan atom karbon alfa bersifat sangat asidik sehingga mudah diserang oleh

senyawa yang mempunyai pasangan elektron bebas, seperti piridina. Akibatnya, hidrogen alfa

lepas dalam bentuk H+ yang langsung terikat dengan piridina melalui pasangan elektron bebas

piridina. Sehingga, asam malonat memiliki atom karbon bermuatan negatif yang selanjutnya

disebut karbanion.

Reaksi lengkap yang terjadi secara keseluruhan adalah :

(Fessenden, 1982)

Sedangkan urutan reaksinya adalah sebagai berikut :

1. Reaksi pembentukan karbanion:

(Fessenden, 1982)

Benzaldehid sebagai senyawa karbonil dapat bereaksi dengan karbanion dari asam

malonat yang telah terbentuk melalui reaksi kondendasi Knoevenagel. Molekul benzaldehidehida

dengan karbanion bergabung menjadi molekul yang lebih besar. Benzaldehida dapat bereaksi

dengan cara resonansi elektron dalam ikatan rangkapnya dalam gugus karbonil. Elektron-

elektron pada ikatan rangkap tertarik oleh elektron bebas atom oksigen yang juga lebih

elektronegatif dari atom C. Elektron yang tertarik dari atom C menyebabkan atom C lebih

bermuatan positif sehingga makin mudah pula berikatan dengan karbanion yang telah terbentuk.

2. Reaksi kondensasi

Reaksi kondensasi merupakan reaksi antara dua molekul atau lebih yang bergabung

menjadi satu molekul yang lebih besar dengan atau tanpa hilangnya suatu molekul kecil seperti

air.

Reaksi kondensasi yang terjadi adalah reaksi kondensasi Knovenagel karena senyawa

yang bereaksi adalah senyawa aldehid yang tidak mempunyai hidrogen alfa dan dengan senyawa

yang mempunyai sebuah hidrogen alfa terhadap 2 gugus karbonil. Pemanasan campuran

dilakukan selama 1 jam dengan tujuan untuk mereaksikan senyawa asam malonat, piridin,

benzaldehida, dan piperidin karena dalam reaksi karbonil dengan karbanion memerlukan

tambahan energi untuk melakukan reaksi. Proses pendidihan dilakukan 10 menit kembali setelah

pendiaman sebentar tujuannya adalah untuk melepaskan CO2 (proses dekarboksilasi) untuk

proses pembentukan asam sianmat. Penurun suhu dilakukan untuk menghentikan reaksi-reaksi

dan menurunkan kelarutan senyawa produk yang dihasilkan yaitu asam sinamat sedangkan

penambahan HCl adalah untuk menetralisasi sifat campuran yang bersifat basa akibat adanya

piridin dan piperidin yang telah ada dalam campuran. Piridin berfungsi sebagai basa lemah yang

mengkatalisis reaksi pembentukan karbanion. Piridin digunakan karena merupakan basa lemah,

apabila digunakan basa kuat maka tidak akan dihasilkan produk yang diinginkan. Jika digunakan

basa kuat maka karbanion yang terbentuk bukan pada posisi atom C alfa, tetapi atom C pada

posisi gugus karboksilat.

Reaksi Kondensasi Knovenagel yang terjadi adalah :

(Fessenden, 1982)

3. Reaksi dehidrasi

Selanjutnya, reaksi yang terjadi adalah reaksi dehidrasi yang merupakan proses

penghilangan H2O untuk mengadakan ikatan rangkap antara atom C. Reaksi ini dikatalisis oleh

HCl karena H+ dari HCl dapat mempercepat pelepasan H2O. Selain itu HCl juga untuk

menetralkan basa yang telah ada pada reaksi sebelumnya, yaitu piridin maupun piperidin

sehingga dalam pelepasan H2O dapat terjadi dalam suasana netral.

Reaksi Dehidrasi yang terjadi :

(Fessenden, 1982)

4. Reaksi dekarboksilasi

Kemudian reaksi Dekarboksilasi, adalah reaksi pelepasan CO2. Reaksi ini terjadi karena

stabilisasi resonansi antara gugus karboksilat pada produk antara. Hal itu karena adanya ikatan

rangkap pada senyawa antara.

Reaksi dekarboksilasi yang terjadi adalah :

(Fessenden, 1982)

Penambahan air es bertujuan untuk proses rekristalisasi dengan menurunkan kelarutan

produk asam sinamat. Penurunan suhu dalam suhu ruangan terlebih dahulu dilakukan dengan

tujuan agar proses pembentukan kristal asam sinamat dapat berlangsung dengan baik. Jika

penurunan suhu langsung dengan pemberian air es, maka akan mengakibatkan laju pembentukan

kristal lebih cepat daripada pembentukan inti kristal sehingga kristal yang terbentuk akan

banyak. Sedangkan penambahan campuran air-etanol untuk melarutkan berbagai macam zat

pengotor yang bersifat polar agar terlepas dari kristal. Menggunakan campuran air-etanol karena

asam sinamat larut dalam pelarut etanol sedangkan dalam air tidak larut sempurna sementara air

dan etanol dapat saling bercampur, sehingga campuran air-etanol merupakan pelarut yang baik

untuk proses kristalisasi asam sinamat. Pemurnian asam sinamat ini menggunakan prinsip yaitu

zat yang akan dimurnikan larut sempurna dalam pelarut A dan tidak larut dalam pelarut B tetapi

pelarut A dan B saling bercampur.

Rendemen produk nyata yang diperoleh adalah 2,0473 gram. Persentase rendemennya

adalah 72,806% . Dari persentase rendemen yang diperoleh , produk hasil reaksi masih belum

murni dari pengotor, kemungkinan pengotor- pengotornya berasal dari reagen yang masih belum

sempurna bereaksi, misalnya piridin, HCl, benzaldehida, maupun asam malonat. Pada percobaan

ini dilakukan pengukuran titik leleh sebesar 127 C, sedangkan pada literatur titik lelehnya⁰

sebesar 133 C. Hal ini terjadi kemungkinan karena masih terdapat pengotor di dalam kristal yang⁰

menyebbkan titik leleh produk lebih kecil dibandingkan dengan titik leleh dari literatur.

PERHITUNGAN HASIL PERCOBAAN

Diketahui:

m asam malonat = 3 g BM asam malonat = 104 g/mol

m benzaldehida = 2 g BM benzaldehida = 106 g/mol

m asam sinamat 1 = 1,557 g BM asam sinamat = 148 g/mol

m asam sinamat 2 = 1,7087 g

Ditanya: rendemen asam sinamat (%)?

Dijawab:

2 g

Mol benzaldehida =

106 g/mol

= 0,019 mol

3 g

Mol asam malonat =

104 g/mol

= 0,029 mol

Reaksi Keseluruhan:

M: 0188 mol 0,0288 mol ------- - -

R: 0,0188 mol 0,0188 mol 0,0188 mol 0,0188 mol 0,0188 mol

S: ----mol 0,01 mol 0,0188 mol 0,0188 mol 0,0188 mol

m asam sinamat = mol x BM

= 0,0188 mol x 148 g/mol

= 2,78 g

maka,

Masa Nyata

Rendemen asam sinamat 1 = x 100%

Masa Teoritis

1,557 g

=

2,78 g

= 56%

Masa Nyata

Rendemen asam sinamat 2 = x 100%

Masa Teoritis

1,7087 g

=

2,78 g

= 61,5%

Titik leleh asam sinamat 1 = 139°C

Titik leleh asam sinamat 2 = 120°C

LAMPIRAN D

JAWABAN SOAL DARI BUKU PANDUAN PRAKTIKUM

1. Sebutkanlah sifat-sifat fisik dari semua reagen yang digunakan dalam percobaan ini berdasarkan literature?

a.Asam malonatSifat fisik

Berupa Kristal berbentuk triklin tak berwarna

Mengurai pada 1400C

Titik leleh: 135,60C

Densitas: 1,619 g/cm3

(Daintith, 1994)b.PiridinSifat fisik

Berupa cairan tak berwarna

Titik leleh: -41,60C

Titik didih: 115,20C

Densitas: 0,9 g/cm3

(Basri, 2005)c.Piperidin (Daintith, 1994)Sifat fisik

Titik didih 1060C

Titik beku -9 ºC.

d.Benzaldehid (Mulyono, 2001)Sifat fisik

Berupa zat cair berwarna kuning

Titik leleh -260C

Titik didih 178,10C

Densitas 1,04 g/cm3

e.Asam kloridaSifat fisik :

Titik didih = 85,05 C⁰ Titik leleh = 144,22 C⁰ Densitas 1,268

Berupa cairan yang tidak berwarna.

(Budaveri,1996)f.AquadesSifat fisik :

Titik didih = 100 C⁰ Titik Leleh = 0 C⁰ Densitas = 1,32 g/cm3

Berupa zat cair yang tidak berwarna

(Basri,2005)

g.EtanolSifat fisik :

Titik didih = 70,5 C⁰ Berupa zat cair yang tidak berwarna

(Daintith,1994)

h.Asam Sinamat

Sifat fisik :

Titik leleh = 68 C (cis), 133 C (trans)⁰ ⁰ Titik didih = 125 C (cis), 300 C (trans)⁰ ⁰ Densitas = 1.384 (cis), 1,345 (trans)

Bentuk monoklin warna putih

(Pudjaatmaka,1990)

2. Buatlah reaksi kondensasi lainnya dengan sumber karbonil dan karbanion yangberbeda dari yang telah digunakan dalam percobaan ini?

a. Kondensasi Ester

Serangan pada gugus karbonil

Terlepasnya ROH

b. Kondensasi Aldol Silang

Produk :

Sumber Karbonil : Sumber Karbanion :

Tahap Reaksi :Pembentukan karbokation

Pembentukan Karbonil

Reaksi Kondensasi