MIKROBIOLOGI LAUT (M10A205) 3 (2-1)

LIA YULIA BUDIARTI ARIVINPEMBIAKAN MIKROBA

MEDIA PEMBIAKAN BAKTERIProses isolasi bakteri dari sampel/bahan-bahan pemeriksaan ke dalam laboratorium membutuhkan media biakan yang sesuai.

Tujuan pemilihan dan penentuan media adalah untuk menjamin ketersedian nutrien yang diperlukan oleh bakteri untuk aktivitas perkembangbiakan dan pertumbuhannya.

PERSIAPAN PEMBIAKAN BAKTERISterilisasi merupakan proses mematikan semua mikroorganisme yang hidup.Dalam proses pembiakan bakteri, sterilisasi mutlak diperlukan untuk menghindari kontaminasi bakteri non-target atau mikroorganisme lain (jamur atau virus)

Secara Umum meliputi :1. Sterilisasi Media2. Sterilisasi Alat

STERILISASITERIMA KASIH2. Biakan Murni (Pure Culture)Biakan yang sudah terdiri dari satu spesies bakteri saja, yang didapatkan dari pemurnian Biakan Campuran (Mixed Culture)

Mixed CulturePrimary CultureSub-cultureMACAM-MACAM MEDIUM PERBENIHANBerdasar sifat kuman terhadap hospes :Medium hidupMedium matiMedium Mati 1. KonsistensiPadat : Petri, TabungSemisolid : GerakCair : Reaksi Biokimia, Uji kepekaan2. Fisiobiologik Medium persemaianMedium diperkayaMedium selektifMedium diferensial1. MEDIA DEFERENSIALDigunakan untuk membedakan berbagai kelompok bakteri berdasarkan sifat tertentu terhadap mediaContoh : Media Agar Darah (Sifat Lisis Eritrosit bakteri)

2. MEDIA SELEKTIFSelektif dalam komposisi nutrien, digunakan untuk menumbuhkan bakteri tertentu dan menghambat bakteri lain (Isolasi Bakteri)Contoh : Media TCBS untuk Vibrio harveyi

BERDASARKAN KARAKTERISTIK FUNGSINYA3. MEDIA SELEKTIF DAN DEFERENSIALBersifat selektif terhadap bakteri tertentu dan mampu memberikan respon tertentu terhadap pertumbuhan bakteri tertentu.Biasanya digunakan dalam kegiatan identifikasi bakteri.

4. MEDIA DIPERKAYA (Enrichment Medium)Diperkaya dengan kandungan nutrien tertentu dalam rangka mengoptimasi pertumbuhan bakteri tertentu.Selain nutrien, bisa juga ditambahkan :1) Bahan Penghambat Bakteri lain2) Indikator Selektivitas

1. MEDIA CAIR= Media Broth (kaldu)Media Pembiakan bakteri dalam bentuk cair (kaldu)

BERDASARKAN BENTUKNYA

Broth Medium2. MEDIA PADAT= Media AgarMedia Pembiakan bakteri dalam bentuk padat (kental) dengan penambahan bahan pemadat berupa gelatin atau agar.

Serbuk AgarPlate Agar MediumBAHAN-BAHAN YANG DITAMBAHKAN DALAM MEDIA PEMBIAKAN BAKTERINutrisiBENTUK BAHANNitrogenNH4Cl, NaNO3 (Anorganik), Pepton (Organik)KarbonGula (laktosa, sukrosa, maltosa), Pati dan GlikogenVitamin dan Faktor PertumbuhanThiamine, Riboflavin, Biotin, Beta alanine, Purin dan PirimidinGaram MineralSulfur (NH4SO4), Posphat (K2HPO4),Kalium, Magnesium, Mangaan, Ferum, dan Calsium

AirAqua Destilata (Aquades)BACK TO MENUPerbenihan pada HEWAN PERCOBAAN

Gunanya :1.Pembuktian Postulat Koch2.Idenstifikasi kuman3.Penetuan derajad virulensi4.Mendapatkan kultur murni5.Pembiakan bagi m.o. yg sulit tumbuh pada media lab.6.Membuat imun serum

Macam Hewan Percobaan :KelinciMarmutTikus putih kecilTikus putih besarMonyetKuda1. Sterilisasi Media Meliputi :

2. Sterilisasi AlatSterilisasi Kering menggunakan oven pada temperatur 160-170 0C selama 2-3 jam.

TyndallisasiMendidihkan medium dengan uap selama beberapa menit, kemudian didiamkan selama 1 hari, kemudian didihkan lagi hingga 3 kali ulangan.

AutoclavingMenggunakan Autoclave (Tangki Sterilisasi), selama 15-20 menit pada suhu 121 0C, tekanan 1 atm/ cm2 (15 lb/ inchi2).

FiltrasiMenggunakan saringan porselain atau tanah diatom dengan pore tertentu.

AutoclaveSecara umum Teknik Penanaman (Inokulasi) Bakteri dapat dilakukan dengan metode :Biakan Agar Lempeng (Plate Agar Culture)Biakan Agar Miring Biakan Tusukan Biakan Adukan (Pour Plate Culture)

TEKNIK INOKULASI BAKTERIMenggunakan lempeng agar untuk membiakan bakteri melalui metode gores, oles atau spray

1BIAKAN AGAR LEMPENG (PLATE AGAR CULTURE)

Metode GoresMetode Oles/ SprayPlate Agar CultureMenggunakan medium agar yang diletakkan miring pada tabung biakan

2BIAKAN AGAR MIRING

Biakan Agar MiringDiperoleh dengan cara menusukkan ujung kawat yang membawa bakteri lurus ke dalam medium melalui tengah-tengah medium.

Bakteri aerob akan tumbuh di dekat permukaan medium.

3BIAKAN TUSUKANBiakan TusukanBakteri AerobMeletakkan biakan bakteri di tengah cawan petri kemudian dituangkan gelatin atau agar yang belum memadat.

4BIAKAN ADUKAN (POUR PLATE CULTURE)

Pour Plate CulturePENGENCERANPertama kali diperkenalkan oleh Lister (1865)Dengan cara melakukan pengenceran berseri koloni awal (campuran)10 -110 -210 -3MIXED CULTUREPENUANGANPertama kali diperkenalkan oleh Robert Koch (1843-1905)Menggunakan metode Biakan AdukanPENGGESEKANMenggunakan Metode Agar Lempeng dengan Teknik Gores