UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS

E.A..P. BIOLOGIA EN ACUICULTURA

PRCTICA N 03

OBSERVACIN DE VULOS Y ESPERMATOZOIDES DE PECES

Alumno:

Jorge Vergaray CapristanoI. INTRODUCCIN:En el estudio de la Biologa Reproductiva de los peces es sumamente importante el conocimiento del desarrollo gonadal de stos. Para ello se recurren a diferentes mtodos y tcnicas para determinar las escalas de madurez sexual. Generalmente se realizan escalas de madurez sexual empricas, basadas en la observacin del color, tamao y textura de las gnadas tanto de hembras como de machos. Sin embargo, cuando existen evidencias de cierta falta de consistencia de una escala de madurez sexual emprica, es necesario recurrir a los estudios histolgicos con la finalidad de definir los estados de madurez sexual y conocer detalladamente el ciclo reproductivo de los peces.

En base a las observaciones histolgicas, se puede obtener una serie de elementos que nos permiten descartar incluso la ms leve aproximacin entre uno y otro estado de madurez, con lo que se obtendra un conocimiento preciso de lo que sucede con el desarrollo gonadal de determinada especie.

Para realizar escalas de madurez sexual basadas en cortes histolgicos se deben observar las caractersticas de los vulos y espermatozoides a fin de poder determinar si nos encontramos ante organismos inmaduros, maduros o desovados.

Observaciones en fresco de los gametos, permite visualizar la vitalidad de estos

El espermatozoide cuenta con tres partes bien diferenciadas: cabeza, cuello y cola envueltas por una membrana ondulada. A diferencia de los espermatozoides de mamferos, los espermatozoides de los peces no cuentan con acrosoma.

Los vulos generalmente son esfricos, y provistos de un corin externo muy denso, con un pequeo agujero en el polo animal denominado micropilo. Se puede observar en su interior grnulos de vitelo, pequeos o grandes dependiendo del estado de madurez en que se encuentre el vulo.II. Objetivos:

Observar las caractersticas de vulos y espermatozoides en peces. Realizar escalas de madurez histolgicas en base a las observaciones realizadas.

III. Resultados:

Organo prueba: se utilizo 3 gnadas hembras, de las especies Anisotremus scapularis Chita, Sarda orientalis Bonito , Cheilodactylus variegatus Pintadilla y una gonada de macho de la especie Sarda orientalis Bonito los cuales fueron pesados, medidos y enumerados posteriormente.

1. Gonada hembra de Isacia conceptionis Cabinza2. Gonada Hembra de Cheilodactylus variegatus Pintadilla3. Gonada hembra de Anisotremus scapularis Chita4. Gonada Macho de Sarda orientalis BonitoPosteriormente se realizo un frotis gonadal de cada una de las muestras y se procedio a observarlas en microscopio para su anlisis.a) Frotis Gonadal hembra de Anisotremus scapularis Chita (40X Resolucin).

1. Con verde se indica la presencia de grnulos de vitelo agrupados en la parte central del ovocito. Con azul se indica el corion no muy definido.2. Con azul se indica la vescula de vitelo en el ovocito. b) Frotis gonadal hembra de Isacia conceptionis Cabinza (40x Resolucin)

Se observa un ovocito parcialmente vitelogenado, 1) indica la presencia del colema o zona pelucida; 2) citoplasma con grnulos de vitelo; 3) ncleo c) Frotis Gonadal hembra de Isacia conceptionis Cabinza (40X resolucin)

1. Con rojo se indica la presencia de Ovocitos no maduros lo cual indica esta en vitelognesis la gnada.2. Con rojo se indica la posicin del ncleo Excntrico y la presencia del corion y epitelio folicular.d) Frotis Gonadal hembra de Cheilodactylus variegatus Pintadilla (40X resolucion)

1. S1. se indica con verde la presencia de grnulos de vitelo grandes, ocupando un 70 % del total del ovocito.Cuadro N 1. Escala de madures Histolgica para las especies estudiadas.FaseEstadoDescripcinEspecie

IIOvocito Pre vitelogenadopresencia de pequeos grnulos de viteloChita

IIOvocito Parcialmente Vitelogenadopresenta grnulos de vitelo distribuidos espacialmente por todo el citoplasmaPintadilla

IIIOvocito Hidratado InicialPresencia de Ncleo Excntrico a la parte externa del Ovocito, muy cerca al Corion. Cabinza

VOvocito Hidratado FinalOvocito con vitelo FusionadoChita

IV. Discusin:

Segn FAO (1974) sostiene que las determinaciones de los sexos y de las fases de madurez sexual tienen su aplicacin primordial en proporcionar conocimientos fundamentales de la biologa de la reproduccin de una poblacin. A su vez tambin manifiesta que la informacin obtenida de estos anlisis puede emplearse para establecer la edad y talla a que los peces alcanzan la madurez sexual, el momento y lugar de la reproduccin y la duracin del ciclo desde el comienzo del desarrollo del ovario hasta la puesta de los huevos.Los reproductores parciales son aquellos en los que la reproduccin tarda mucho tiempo y se pueden encontrar simultneamente en los ovarios huevos en maduracin en fases muy diferentes de desarrollo, antes y durante el desove. (FAO, 1974). Tambin, este mismo autor sostiene que la fijacin de una escala de madurez para los reproductores parciales es ms difcil porque hay una gama de fases de desarrollo en una gnada en todo momento y la diferenciacin lograda ser menos precisa.

La etapa de Alvolos corticales, es el estado que se caracteriza por la aparicin de vesculas o alveolos en el citoplasma. Con la preparacin convencional de H&E estas estructuras se observan como esferas huecas. Las vesculas aumentan de tamao y nmero hasta formar varias filas en la periferia del citoplasma, dando origen a los alveolos corticales. Estas vesculas liberan su contenido en el espacio perivitelino dentro de las membranas del huevo durante la fertilizacin. No constituyen vitelo en sentido estricto, ya que su funcin no ser la de alimentar al embrin y por tanto el trmino equivalente de vesculas de vitelo que aparece a veces en la bibliografa es confuso e incorrecto, debiendo ser reemplazado por el trmino alveolos corticales. La aparicin de estas estructuras significa que ese ovocito ha comenzado el proceso de maduracin y el pez ha entrado en la fase adulta. El corion (zona radiata, membrana vitelina, zona pelcida) aparece normalmente en este estado y algunos autores utilizan la presencia de ambas estructuras (alveolos corticales y crion) para definir este estado. Sin embargo el momento en el que el crion aparece vara segn las especies. La aparicin de estas estructuras significa que ese ovocito ha comenzado el proceso de maduracin y por tanto, en condiciones normales, continuar el desarrollo dentro de ese ciclo reproductivo (Wallace y Selman 1981)

Guraya, 1986, menciona que para Ovocitos previtelognicos la medida del Ovocito es de 41 mm promedio, el ncleo esta en posicin central, varios nuclolos adheridos a la superficie interna de la membrana nuclear, citoplasma de aspecto granular con una leve reaccin PAS positiva. En contraste con el autor en Anisotremus scapularis Chita se pudo observar la reciente formacin de vitelo, que daba la apariencia de un ncleo en el centro del Ovocito. Mientras tanto las paredes de este no estaban muy bien definidas.Durante vitelognesis, esta etapa se caracteriza por la aparicin de esferas o glbulos llenos de vitelo. Al principio los grnulos son de pequeo tamao y se hacen mayores al avanzar este estado. Las esferas de vitelo pueden mantener su integridad a lo largo de toda la fase de crecimiento del ovocito, fusionndose al final formando una masa fluida continua, que le da a los ovocitos su tpico aspecto transparente. Lo normal es que esto no ocurra hasta el final de la fase de crecimiento del ovocito. Aunque en la mayora de los telesteos estudiados los alvolos corticales aparecen antes de la fase de acumulacin de vitelo, existen excepciones (ej. Dicentrarchus labrax), en que se forman despus. A menudo este estado se subdivide por conveniencia en fases sucesivas vitelogensis primaria, secundaria y terciaria, aunque esta terminologa no es muy consistente. A medida que se desarrolla, las clulas de la pared folicular se multiplican y se estratifican, distinguindose una capa continua (la granulosa) y las distintas capas exteriores de la cubierta del folculo (la teca). Por tanto los ovocitos vitelognicos estn rodeados de dos capas de clulas principales: una exterior (la teca) y otra interior (la granulosa), que estn separadas por una membrana basal. La teca contiene fibroblastos, fibras de colgeno, capilares y en algunas especies, clulas especializadas secretoras de esteroides. (Wallace y Selman 1981)Guraya, 1986 menciona que para ovocitos en vitelo gnesis el incremento de tamao citoplasmtico se da por acumulacin de vitelo. El ncleo se desplaza hacia la periferia de la clula y su contorno se torna irregular, gran cantidad de nucleolos en el borde interno de la carioteca. Una activa extrusin nucleolar hacia el citoplasma reflejara el transporte de RNA, para ser usado en la elaboracin del vitelo.Cuando se examino Ovocito de Cheilodactylus variegatus Pintadilla se pudo apreciar todo lo que mencio el autor Guraya, con excepcin de la presencia de nuclolos en el borde de la carioteca.Maduracin. Cuando el ovocito ha completado su desarrollo, la estimulacin hormonal desencadena la maduracin del ovocito, tras la cual este ser liberado en el lmen del ovario. El inicio de este estado est marcado por la migracin del ncleo hacia la periferia del citoplasma y la fusin de su membrana. Se produce entonces la primera divisin meitica, por la cual una de las clulas haploides se quedara con la prctica totalidad del material citoplasmtico, mientras que la otra, denominado primer cuerpo polar, degenerar. Las fotografas de esta estructura son raras en la bibliografa sobre peces. La liberacin del segundo cuerpo polar, tras la segunda divisin meitica, ocurre tras la ovulacin. En algunas especies durante el proceso de maduracin la coalescencia de los glbulos de vitelo ocurre simultneamente a la migracin de ncleo. En muchas especies de telesteos al final de la maduracin se produce el fenmeno conocido como hidratacin, que consiste en la incorporacin rpida de agua, produciendo un nuevo incremento en el tamao del Ovocito. Este proceso es muy marcado en las especies de peces marinos que producen huevos flotantes. Sirve por un lado para facilitar la expulsin de los Ovocito por el aumento de la presin interna del ovario, y por otro lado para favorecer la flotabilidad de los huevos en el agua de mar. El inicio de la hidratacin es indicativo de la puesta inminente en un plazo de horas (Fulton, 1898).

Al final de la maduracin se produce la ovulacin, sta ocurre con la ruptura del folculo que contena el Ovocito, que es liberado as en el lmen del ovario. Los folculos post ovulatorios que resultan de este proceso se identifican fcilmente cuando son recientes, pero degeneran ms o menos rpidamente dependiendo de la temperatura (del orden de horas a 20 C al orden de meses a 0C). Los folculos post ovulatorios antiguos no se distinguen fcilmente de los ovocitos en atresia (degeneracin). Hay que sealar que la ovulacin y las puestas son dos procesos totalmente separados, controlados por distintos mecanismos. Es por este motivo que en ausencia de observaciones directas es muy difcil conocer exactamente el nmero de huevos realmente puestos (fecundidad real) y generalmente solo podemos llegar a conocer el nmero de huevos que van a ser ovulados (fecundidad potencial) (Wallace y Selman 1981).

Esto pudo ser corroborado mediante la observacin del frotis gonadal en Isacia conceptionis Cabinza, ya se determino la migracin del ncleo hacia el exterior de el Ovocito. V. Referencias Bibliogrficas:

POHL-BRANSCHEID, M. and W. HOLTZ. 1990. Control of spawning activity in male and female rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) by repeated foreshortened seasonal light cycles. Aquaculture, 86: 93-104.ESTAY, F., N. DIAZ y J. MELLA. 1990. Ciclo reproductivo gonadal de una poblacin de trucha arco iris, (Oncorhynchus mykiss), de la zona central de Chile. Medio Ambiente, 11(1): 15-23. ZHANG, H., G.A. GALL and S.S. HUNG. 1990. Effect of sire diet and week of spawning on volume of eggs retained by artificialIy spawned rainbow trout. Aquaculture, 87: 23- 33.

Guraya, S. 1986. The cell and molecular biology of fish oogenesis. Monographs indevelopmental biology 18:1-233.Wallace R.A. & Selman K. 1981. Cellular and dinamic aspects of oocyte growth

in teleosts. American Zoologist, 21: 325-343.

http://www.fao.org/docrep/003/F0752S/F0752S05.HTMVI. CUESTIONARIO:

Cmo puede diferenciar ovocitos de un pez en estado Virgen con los ovocitos de un pez en estado de reposo?

Reposo: Todos los ovocitos presentan crecimiento primario (Unos pocos huevos en estado de resorcin) y estn distribuidos en forma no compacta. El tamao de la gnada es pequea y de color transparente o gris rosceo. En cuanto la vasculirazion es mnima y la consistencia es flcida Virgen: No se observa la presencia de ovocitos. El tamao es pequeo y color gris transparente. Y la consistencia de esta es firme.A qu cree Ud. Se debe la ausencia de acrosoma en los espermatozoides de los peces?

Los espermatozoides de los peces no poseen acrosoma, ya que este entra a travs

de un orificio de la ova del llamado micrpilo.2

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