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Ampliação e adequação de um laboratório multi-usuários destinado ao preparo,
estocagem e processamento de biomassa
Grupo de pesquisa proponente: Docentes do Departamento de Biotecnologia - Escola de
Engenharia de Lorena
1. Introdução
A presente proposta atende à chamada da pró-reitoria de pesquisa da Universidade de
São Paulo, no contexto do edital INFRA-PESQUISA 2012-2013.
A proposta em questão tem origem no Departamento de Biotecnologia da Escola de
Engenharia de Lorena e foi estruturada de acordo com as diretrizes sugeridas pela Pró-reitoria
de Pesquisa, dentro do item A, modalidade até R$ 600 mil reais.
2. Objetivo
A proposta apresentada visa ampliar e adequar um laboratório multi-úsuários
destinado ao preparo, estocagem e processamento de biomassa lignocelulósica a fim de
atender a demanda de diversos grupos de pesquisa do Departamento de Biotecnologia que
atuam na área de conversão de biomassa.
3. Programa de pesquisa
O Departamento de Biotecnologia da Escola de Engenharia de Lorena atua na área de
conversão de biomassa desde sua fundação quando foi determinante no desenvolvimento
científico e tecnológico do programa nacional do álcool combustível, o "Pro-Álcool". Desde
então, os docentes deste departamento têm atuado numa área coesa de pesquisa que envolve
os processos de conversão da biomassa. A qualidade das atividades desenvolvidas no
departamento na área de conversão de biomassa é reconhecida nacional e internacionalmente
em temas que abordam o pré-tratamento e fracionamento dos componentes da biomassa, os
processos de biotratamento e conversão enzimática destes componentes, os estudos sobre a
recalcitrância da parede celular lignificada e a conversão dos componentes da biomassa por
processos fermentativos, incluindo a produção de etanol de segunda geração e outros
compostos de elevado interesse econômico.
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Os docentes do Departamento de Biotecnologia são participantes e coordenam o
"Programa de Pós-graduação em Biotecnologia Industrial - conceito 5 CAPES", integram o
"Núcleo de Apoio à Pesquisa em Bioenergia e Sustentabilidade" da Universidade de São
Paulo, o "Instituto Nacional de Ciência e Biotecnologia do Bioetanol", o recém criado
"Programa de Pós-graduação em Bioenergia" conjunto das três universidades paulistas, além
de participarem ativamente do programa Bioen-FAPESP com a execução de 02 projetos
temáticos e vários auxílios individuais à pesquisa apoiados pela FAPESP e outras agências de
fomento à pesquisa.
A grande atividade de pesquisa na área de conversão de biomassa já realizada pelos
docentes do Departamento de Biotecnologia pode ser aferida a partir dos projetos de pesquisa
vigentes, conforme listado a seguir, bem como pela lista de publicações apresentada no anexo
I que contempla somente a produção científica do Departamento na área de conversão de
biomassa.
Projetos Temáticos – BIOEN/FAPESP
a. Topochemistry, porosity and chemical composition determining succesfull
enzymaticsacharification of sugar cane bagasse. Coordenador: Adriane Maria Ferreira
Milagres – Pesquisadores: André Ferraz e Walter de Carvalho. Vigência: 06/2009 a
05/2013. FAPESP/CNPq-PRONEX, processo 2008/56256-5. Auxilio: R$ 553.735,40;
US$ 238.568,34.
b. Etanol - pesquisa e desenvolvimento visando ao aproveitamento integrado do bagaco de
cana-de-açúcar para a produção biotecnológica do etanol lignocelulósico. Coordenador:
Prof. Sílvio Silvério da Silva – Pesquisadores: Maria das Graças de Almeida Felipe.
Vigência: 11/2009 a 10/2013. FAPESP–FAPEMIG, processo 2008/57926-4. Auxilio:
R$ 290.521,41, US$ 69.203,86, 02 bolsas de PD, 05 bolsas de IC, 01 bolsa de TT3.
Auxílios Regulares
c. Avaliação de estratégias (químicas e biológicas) para contornar a toxicidade do
hidrolisado hemicelulósico de palha de arroz em processos fermentativos.
Coordenadora: Profa. Inês Conceição Roberto. Vigência: 01/04/11 a 31/03/13.
FAPESP, processo 2010/52673-0. Auxílio: R$ 76.780,24, US$ 33.574,52.
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d. Análise micro-espectrofotométrica aplicada ao estudo da recalcitrância em materiais
lignocelulósicos. Coordenador: André Luis Ferraz. Vigência: 01/07/2012-30/07/2013.
FAPESP, processo 2011/50535-2. Auxílio: R$ 95.007,38, US$ 82.128,51
e. Aproveitamento da Fração Hemicelulósica do Bagaço de Malte para a Produção de
Etanol. Coordenador: Inês Conceição Roberto. Vigência: 14/12/2011-14/11/2013.
CNPq (Edital Universal), processo: 474846/2011-3. Auxílio: R$ 45.009,82.
f. Estabelecimento de condições de cultivo de leveduras isoladas da antartica visando a
produção de proteases. Coordenador: Maria das Graças de Almeida Felipe. Vigência:
01/03/2012-28/02/2014. FAPESP, processo 2011/51796-4. Auxílio: R$ 107.655,81;
US$ 25.245,51.
g. Estratégias de melhoria da bioprodução descontínua de xilitol a partir de hidrolisado
hemicelulósico de bagaço de cana através do estudo enzimático e cinético do processo.
Coordenador: Rita de Cássia Brambilla Rodrigues. Vigência: 01/07/2011-30/06/3013.
FAPESP, processo 2011/08754-9. Auxílio: R$ 82.674,82; US$ 104.101,54.
Cooperação Científica
h. Production of fermentable sugars starting from sugarcane pulp after pre-treatment with
diluted sulfuric acid and enzymatic hydrolysis of lignocellulose. Parte integrante do
projeto "INCT do Bioetanol". Coordenador no Departamento de Biotecnologia/EEL:
Adriane Maria Ferreira Milagres; Coordenador INCT do Bioetanol: Marcos Silveira
Buckeridge (Instituto de Biociências-USP/SP). Vigência: 01/03/2009 a 28/02/2014.
CNPq-MCT, processo 610030/2009-4.
i. From biomass to liquid fuels: Ab initio molecular dynamics investigation of glucose to
5-Hydroxymethylfurfurl Conversion. Coordenador no Departamento de Biotecnologia:
Silvio Silvério da Silva. Coordenador Xianghong Qian - University of Arkansas, EUA.
Vigência: 01/06/2009-31/05/2014. NATIONAL SCIENCE FOUNDATION/EUA.
Parte expressiva da pesquisa realizada no Departamento de Biotecnologia emprega a
biomassa lignocelulósica como matéria prima. Em todos os casos, a biomassa é obtida in
natura junto ao setor agro-industrial e preparada para os trabalhos de pesquisa em
desenvolvimento. A biomassa lignocelulósica apresenta baixa densidade (entre 100 e 400
kg/m3) e grande heterogeneidade, além de ser um material higroscópico. Estas características
fazem com que o material de partida para as pesquisas sejam demandados em grande
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quantidade (usualmente 30 a 300 kg), o que requer uma área apropriada para recebimento do
material, lavagem e secagem a baixa temperatura. A secagem a baixa temperatura é crucial
nos processos de conversão da biomassa, pois a secagem a temperaturas elevadas (superiores
a 60 oC) causam o colapso do complexo celular nos materiais lignocelulósicos, além de causar
um fenômeno denominado de hornificação, que envolve a re-organização das cadeias
celulósicas em sistemas mais compactos (Himmel et al., 2007). Considerando que o material é
higroscópico e de origem vegetal, ele não pode ser armazenado úmido, pois prontamente é
atacado por micro-organismos. A operação unitária demandada é a desidratação a baixa
temperatura, tipicamente empregada na desidratação de frutas ou outros alimentos. Esta etapa
se realiza, idealmente, através do emprego de estufas de desidratação que operam à baixa
temperatura (não superior a 45 oC) e com ventilação forçada. Após o recebimento e secagem
do material lignocelulósico, existe a demanda por uma área adequada para estocagem onde os
níveis de umidade sejam baixos e a ventilação permanente, evitando assim o re-acúmulo de
água no material.
Seguindo as etapas de recebimento, lavagem, secagem e estocagem do material, tem
início o processamento, que é diversificado em função dos diferentes projetos de pesquisa
desenvolvidos. A título de exemplo, estão listados a seguir rotinas experimentais
tradicionalmente empregadas em alguns projetos de pesquisa participantes da proposta.
3.1 Hidrólise ácida para preparação de hidrolisados ricos em açúcares oriundos da
hemicelulose: Há um conjunto de rotinas empregadas no processamento da biomassa para
gerar hidrolisados hemicelulósicos que são empregados em etapas subsequentes de conversão
a produtos elaborados por via fermentativa (Chandel et al., 2012). Uma linha de pesquisa de
grande relevância do Departamento de Biotecnologia envolve a conversão de pentoses
presente nestes hidrolisados a produtos como o etanol (etanol de segunda geração), o xilitol, o
2,3-butanodiol e a proteína microbiana (Mussato et al., 2010). A sequência de operações
unitárias tipicamente empregada nesta etapa de preparação dos hidrolisados envolve:
a) Otimização de variáveis que afetam a eficiência de hidrólise e a formação de
sub-produtos tóxicos: Realizada em reatores de pequeno porte, como o reator Regmed de 4
vasos pressurizados solicitado na presente proposta;
b) Ampliação de escala da reação empregando as condições pré-otimizadas:
Realizada em reatores de maior porte, usualmente aquecidos por camisa elétrica externa ou à
vapor. Os reatores neste caso são de porte variável entre 10 e 100 L carregados, usualmente
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na proporção de massa de material lignocelulósico/massa de licor de reação igual a 1:10. A
demanda por grandes volumes de reação e, concequentemente de hidrolisados, é decorrente
da etapa subsequente de fermentação dos hidrolisados que requer concentração de acúcares da
ordem de 80-150 g/L, embora os hidrolisados sejam gerados com concentração inicial de
açúcares da ordem de 20-30 g/L;
c) Recuperação dos hidrolisados por extração centrífuga: Realizada para separar
sólidos e líquidos resultantes da etapa de hidrólise ácida. Demanda extração centrífuga de
porte da ordem de 100 L, visto que o material oriundo da ampliação de escala do item "b" não
é passível de tratamento em escala de bacada, requerendo centrífugas específicas que retém a
fração sólida e deixam passar a fração líquida;
d) Concentração dos hidrolisados por evaporação sob pressão reduzida: Realizada
a fim de elevar a concentração de pentoses tipicamente da ordem de 20-30 g/L para 80 a 150
g/L a fim de viabilizar as etapas subsequentes de fermentação;
e) Tratamento dos hidrolizados para minimização do teor de produtos inibidores
do metabolismo microbiano: Realizado através do tratamento com óxido de cálcio
(overliming) seguido de filtração ou a partir do emprego de resinas de troca iônica e/ou carvão
ativo.
3.2 Auto-hidrólise por tratamento em reator de explosão a vapor: Estes processos são
similares aos descritos anteriormente para o processo de hidrólise ácida, porém são realizados
em reator específico, dotado de geração de vapor por meio de uma caldeira elétrica e vaso
pressurizado habilitado para operar com descompressão súbita. O diferencial neste tipo de
processo é que o ácido acético liberado a partir dos grupos acetila da hemicelulose é
empregado como catalisador. As etapas subsequentes são similares às descritas anteriormente
(Rocha et al., 2012).
3.3 Pré-tratamento quimio-termomecânico de materias destinados à sacarificação
enzimática: Estes processos são empregados para aumentar a acessibilidade de enzimas
hidrolíticas aos polissacarídeos presentes na biomassa vegetal (Mendes et al., 2011). A etapa
de pré-tratamento pode ser um processo de hidrólise ácida ou auto-hidrólise conforme
descrito anteriormente, ou ainda pré-tratamentos alcalinos empregando licores sulfito alcalino,
amônia ou hidróxido de sódio em processos similares aos empregados pelo setor de celulose e
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papel (Ferraz et al., 2008). Nestes casos, o material pré-tratado é processado através das
seguintes operações unitárias:
a) Otimização de variáveis de reação para maximização da etapa subsequente de
hidrólise enzimática da fração sólida: Realizada em reatores de pequeno porte, como o
reator Regmed de 4 vasos pressurizados solicitado na presente proposta;
b) Ampliação de escala da reação empregando as condições pré-otimizadas:
Realizada em reatores de maior porte, usualmente aquecidos por camisa elétrica externa ou à
vapor. Os reatores neste caso são de porte variável entre 10 e 100 L carregados, usualmente
na proporção de massa de material lignocelulósico/massa de licor de reação igual a 1:10. No
caso do emprego de madeira como substrato, esta relação tipicamente pode ser alterada até o
nível de carga da ordem de 1:4 (Franco et al., 2012);
c) Recuperação dos sólidos por filtração em colunas com recirculação de líquidos:
Realizada para separar sólidos e líquidos resultantes da etapa de pré-tratamento anterior.
Neste caso os sólidos oriundos da etapa de pré-tratamento alcalino apresentam teor de
material particulado de pequena dimensão (menor do que 0,2 mm, denominados de finos) e
requerem um sistema especial de filtração que permita maximizar a eficiência da retenção de
sólidos. Isso é feito empregando recirculação da fração líquida (contendo o material
particulado - finos) em colunas com mallha de retenção de 200 mesh. Esta operação unitária
permite que a fibra retida inicialmente na malha de 200 mesh atue como material filtrante e
retenha a fração de finos durante o processo de recirculação;
d) Secagem do material pretratado por ventilação forçada e baixa temperatura:
Realizada a fim de baixar os níveis de umidade do material obtido na etapa "c", permitindo a
estocagem sem o risco de contaminação com micro-organismos do ar;
e) Hidrólise enzimática dos sólidos com alta consistência: Realizada com reatores
de dupla hélice que permitem trabalhar com carga de sólidos da ordem de 30%, maximizando
a concentração da fração resultante da hidrólise enzimática.
3.4 Deslignificação de materiais lignocelulósicos para recuperação de lignina e celulose
purificadas: Estes processos são realizados a fim de gerar ligninas experimentais empregadas
no estudo da produção de materiais compósitos à base de lignina, bem como substratos
celulósicos de elevada pureza (Maziero et al., 2012). Os substratos celulósicos de elevada
pureza são empregados em etapas de conversão de derivados de celulose, como o acetato de
celulose e também são materiais adequados para a geração de açúcares monoméricos por
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meio da hidrólise enzimática (Nakanishi et al., 2011). A sequência de operações unitárias
tipicamente empregada nesta etapa de preparação dos hidrolisados envolve:
a) Recuperação da celulose por extração centrífuga: Realizada para recuperar a
celulose oriunda do processo de deslignificação. Após a deslignificação alcalina a fração
sólida correspondente à celulose purificada demanda separação do licor rico em lignina que se
apresenta na forma solúvel. Esta operação é realizada usualmente por extração centrífuga,
conforme já descrito anteriormente no processo de preparação de hidrolisados;
b) Recuperação da lignina por precipitação ácida e filtração em filtro prensa:
Realizada para recuperar a lignina oriunda dos processos de deslignificação que se apresenta
na forma solúvel em um licor alcalino. A etapa envolve a precipitação pela acidificação,
seguida da recuperação dos sólidos, que precipitam na forma de um gel. Em função da forma
de gel do sólido obtido, se realiza a recuperação com o emprego de filtro prensa habilitado
para retenção de até 1 kg de sólidos.
4. Justificativa para a demanda de um laboratório multiusuário adequadamente
equipado para o preparo, estocagem e processamento de biomassa
A pesquisa desenvolvida no Departamento na área de conversão de biomassa demanda
uma área adequada para receber, estocar e processar biomassa lignocelulósica que é a matéria
prima para inúmeros dos projetos de pesquisa em desenvolvimento. Atualmente, o
Departamento conta com uma área restrita para estas atividades, basicamente compreendida
por um galpão de 36 m2 que abriga uma caldeira geradora de vapor para os processos de
termoconversão de biomassa e alguns equipamentos periféricos destinados à recuperação de
hidrolisados ácidos obtidos na etapa de pré-tratamento. O presente projeto visa ampliar a atual
área e dotar o Departamento com um laboratório, efetivamente multiusuários, que permita
integrar as etapas de:
a) recebimento de matéria prima oriunda do setor agro-industrial;
b) preparo da biomassa por processos de lavagem, desfibramento e desidratação à baixa
temperatura (sob ventilação forçada);
c) estocagem de material em condições de baixa umidade e circulação forcada de ar;
d) processamento do material em reatores piloto;
e) recuperação preparativa e quantitativa das frações sólidas e líquidas;
f) concentração de hidrolisados ricos em açúcares de hemicelulose;
g) hidrólise enzimática em reatores com alto teor de sólidos.
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A infra-estrutura em questão dará apoio às atividades de pesquisa desenvolvidas por 9
docentes lotados no Departamento de Biotecnologia que atuam em diversos temas
relacionados com a conversão de biomassa. A área será administrado na forma de laboratório
multi-usuários coordenado pela chefia de Departamento, sendo que o controle de operação
ficará sob responsabilidade de um técnico do Departamento que dará apoio aos inúmeros
alunos de pós-graduação e graduação que desenvolverão parte expressiva de seus projetos de
pesquisa com a infra-estrutura pretendida.
Toda a atividade de pesquisa decorrente da atuação do Departamento de Biotecnologia
tem sido realizada com a infra-estrutura atualmente disponível e muitas das operações
unitárias de processamento descritas anteriormente são realizadas em laboratórios isolados em
instalações adaptadas e não otimizadas, ou na instalação atualmente disponível para abrigar a
caldeira geradora de vapor utilizada no Departamento. O contexto do atual projeto de infra-
estrutura é exatamente o de gerar uma área comum e adequadamente equipada para
maximizar eficiência de processos e de pessoal, minimizar custos de operação e não menos
importante, melhorar as condições de segurança durante a realização dos processos descritos.
Parte expressiva dos equipamentos demandados para a área em questão já estão disponíveis
em vários dos atuais laboratórios do Departamento de Biotecnologia e serão transferidos para
o laboratório multiusuários objeto desta proposta.
5. Referências citadas
Chandel AK, Antunes FAF, Arruda PV, Milessi TSS, Silva SS, Felipe MGA. Dilute acid
hydrolysis of agro-residues for the depolymerization of hemicellulose: state-of-the-art.
In: D-Xylitol-fermentative production, application and commercialization (Silva SS,
Chandel AK, Eds), Springer, NY, 2012, pp. 39-62.
Ferraz, André; Guerra, Anderson; Mendonça, R.; Masarin, Ferando; Vicentin, Marcos Paulo;
Aguiar, André; Pavan, Paulo Cesar. Technological advances and mechanistic basis for
fungal biopulping. Enzyme and Microbial Technology, v. 43, p. 178-185, 2008.
Franco, Heriberto; Ferraz, Andre; Milagres, Adriane M. F.; et al. Alkaline
sulfite/anthraquinone pretreatment followed by disk refining of Pinus radiata and
Pinus caribaea wood chips for biochemical ethanol production. Journal of Chemical
Technology and Biotechnology, v. 87: 651-657, 2012.
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Himmel ME, Ding S-H, Johnson DK, Adney WS, Nimlos MR, Brady JW, Foust TD:
Biomass recalcitrance: engineering plants and enzymes for biofuels production.
Science 2007, 315:804-807.
Maziero, Priscila; de Oliveira Neto, Mario; Machado, Douglas; et al. Structural features of
lignin obtained at different alkaline oxidation conditions from sugarcane bagasse.
Industrial Crops and Products, v.35: 61-69, 2012.
Mendes, F. M.; Siqueira, G.; Carvalho, W.; Ferraz, A. L.; Milagres, A. M. F. Enzymatic
hydrolysis of chemithermomechanically pretreated sugarcane bagasse and samples
with reduced initial lignin content. Biotechnology Progress, v. 27, p. 395-401, 2011.
Mussatto, Solange I.; Dragone, Giuliano; Guimarães, Pedro M.R.; Silva, João Paulo A.;
Carneiro, Lívia M.; Roberto, Inês C.; Vicente, António; Domingues, Lucília; Teixeira,
José A.. Technological trends, global market, and challenges of bio-ethanol
production. Biotechnology Advances , v. 28, p. 817-830, 2010
Nakanishi, Simone Coelho; Goncalves, Adilson Roberto; Rocha, George; et al. Obtaining
polymeric composite membranes from lignocellulosic components of sugarcane
bagasse for use in wastewater treatment. Desalination and Water Treatment, v. 27: 66-
71, 2011.
Rocha, George J. M.; Martin, Carlos; da Silva, Vinicius F. N.; et al. Mass balance of pilot-
scale pretreatment of sugarcane bagasse by steam explosion followed by alkaline
delignification. Bioresource Technology, v. 111: 447-452, 2012.
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ANEXO I
Seleção de publicações em periódicos relacionadas ao tema conversão de biomassa com participação de docentes do Departamento de Biotecnologia da Escola de Engenharia de
Lorena (Período 2008-2012)
2012Aguiar, Andre; Ferraz, Andre. Effect of aqueous extracts from Ceriporiopsis subvermispora-
biotreated wood on the decolorization of Azure B by Fenton-like reactions. International Biodeterioration & Biodegradation, v. 74: 61-66, 2012.
Aguiar, Andre; Ferraz, Andre. Effects of exogenous calcium or oxalic acid on Pinus taeda treatment with the white-rot fungus Ceriporiopsis subvermispora. International Biodeterioration & Biodegradation, v. 72: 88-93, 2012.
Aguiar, Andre; Ferraz, Andre. Use of additives in the wood biodegradation by the fungus Ceriporiopsis subvermispora: effect in the manganese peroxidase-dependent lipid peroxidation. Quimica Nova, v. 35: 1107-1111, 2012.
Boniolo, Fabrizio Siqueira; Rodrigues, Raphael Cardoso; Ramalho Prata, Arnaldo Marcio; et al. Oxygen supply in Bacillus thuringiensis fermentations: bringing new insights on their impact on sporulation and delta-endotoxin production. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 94: 625-636, 2012.
Brienzo, M.; Monte, J. R.; Milagres, A. M. F. Induction of cellulase and hemicellulase activities of Thermoascus aurantiacus by xylan hydrolyzed products. World Journal of Microbiology & Biotechnology, v.28: 113-119, 2012.
Cadete, Raquel M.; Melo, Monaliza A.; Dussan, Kelly J.; et al. Diversity and Physiological Characterization of D-Xylose-Fermenting Yeasts Isolated from the Brazilian Amazonian Forest. Plos One, v. 7/8, 2012. DOI: 10.1371/journal.pone.0043135
Chandel, Anuj K.; Chandrasekhar, G.; Silva, Messias Borges; et al. The realm of cellulases in biorefinery development. Critical Reviews in Biotechnology, v.32: 187-202, 2012.
Chandel, Anuj K.; da Silva, Silvio S.; Carvalho, Walter; et al. Sugarcane bagasse and leaves: foreseeable biomass of biofuel and bio-products. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, v.87: 11-20, 2012.
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