Microbiologa de Agua:Coliformes, coliformes

fecales y Escherichia coli

Laboratorio Microbiologa Aplicada

Spring 2007

Microbiologa de AguaQu es un coliforme?

Escherichia coli

Citrobacter freundaii

Klebsiella pneumoniae

Enterobacter aerogenes

Grupo de especies de varios gneros

Microbiologa de AguaQu es un coliforme?

Caractersticas en comnGram-negativosBacilos no formadores de esporasAlgunos son mtilesAnaerbos fermentativosFermentadores de lactosa produciendo gas y cido luego de 48 hrs a 32 o 35oC

Coliformes

Pueden estar presentes en:heces fecales de animales de sangre calientepjarostierra

Coliformes fecales

Incluye E. coli y algunos Klebsiella y Enterobacter spp.

Temperaturas de incubacin: 44.5 o 45oC por 24 hrs.

Tipos de E. coli

Cuatro tipos de E. colienterovirulentos(EEC)

E. colienterotoxignico(ETEC)E. colienteropatognico(EPEC)E. colienterohemorrgico(EHEC)E. coli enteroinvasivo(EIEC)

E. coli enterotoxignico (ETEC)

Causante de la diarrea del viajero

Dosis infecciosas altas

Vehculo: agua o alimento contaminado con aguas usadas

E. coli enteropatognico (EPEC)

Mecanismo de virulencia probablemente por la produccin de una verotoxina (Shiga-liketoxin)

Alimentos implicados son carne molida y pollo

E. coli enterohemorrgico(EHEC)

E. coli O157:H7 es habitante normal de los intestinos de todos animales incluyendo los humanosProduccin de una verotoxinaDosis tan bajas como 10 organismosNo fermenta sorbitol, MUG negative

E. coli enterohemorrgico(EHEC)- Alimentos implicados

E. coli enteroinvasivo (EIEC)

Parte de la flora intestinal normal de los humanos y otros primatesDosis infecciosa ~ 10 organismosProduce bacillary dysenterySe confunde con shigellosisVehculos: hamberguer, leche no pausterizada

Infecciones E. coli O157:H7

Taco Bell Dic 200671 personas afectadas

Septiembre-Octubre 2006199 personas afectadas;3 muertos

Mtodos para DetectarColiformes

MPNBasado en probabilidad estadisticaNO es contaje directoTcnica lquida

SlidoContaje directo en medio

Coliformes

MPN - Continuacin

El objetivo es diluir el organismoSeleccione la muestra msdiluda con todos los tubospositivos y los prximos dos

3,2,1 Nuestra combinacin

Determine el MPN utilizando la tabla de MPN

Coliformes

Se asume en MPN

Distribucin al azar de la bacteriaLos organismos no se aglutinanSi hay un microorganismopresente, crecerExisten las condicionesapropiadas para crecer

Ventajas sobre el uso de placasEl tamao de la muestra puedeser mayorMejor para nmeros bajos de organismosEl medio lquido es ms suave para el organismo porque no se expone al calorRequiere preparacin de mediocon antelacin

Medios - LSTLauryl Sulfate Tryptose BrothPrueba PRESUMPTIVA para coliformes

Se informa como presumptive coliforms/gIngredientes

Lauryl Sulfate Algunas bacterias no pueden crecer - SelectivoLactosa Produccin de gas Diferencialw/durham tuboNaCl Aumenta razn de reproduccinTryptona Fuente de Nitrgeno

Incube a 35oC por 48 horas

Medio - BGLBBrilliant Green Lactose BileIncube a 35oC por 48 horasProduccin de gas PositivoIngredientes

Oxgall forma de bilisBrilliant Green Dye Inhibe Gram +

Resultados son coliformesconfirmadosNo utilize BGLB directamente Altamente inhibitorio

Medio EMB AgarEosine Methylene Blue AgarPlacas ya servidasEstriado para aislar del MPNIngredientes - Diferencial

Peptona ProtenaLactosa Produccin de cidoTinte Eosine InhibitorioAzul de metileno Indicador de pH

E. coli and EnterobacerNucleated, dark centered, with or without a metallic green sheen CONFIRMED COLIFORMS

Coliformes

Coliformes

Mtodo Slido

VRBAViolet Red Bile Agar

Peptona Fuente de nitrgenoLactosa Produccin de cidoRojo neutral Indicador (6.8 rojo, 8.0 amarillo)Cristal Violeta Inhibe Gram +NaCl Aumenta razn de crecimientoSales biliares

VRBATpica Rojo-prpura, ColoniasElpticas, puede ser una zona de precipitacinSe recomiendan placas con 10-100 colonias Colonias msgrandesPonga una capa de agar luegoque la primera solidifiqueResultados PresumptivaColiformes

Coliformes

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