I. Efecto de la temperatura

Objetivos:

Determinar la temperatura de muerte térmica de los microorganismos estudiados tratados a 40°C y 65°C durante diferentes intervalos de tiempo.

Determinar el número de microorganismos supervivientes resistentes al tratamiento térmico.

II. Acción de la presión osmótica

Objetivo:

Determinar la concentración de NaCl que afecta el crecimiento microbiano.

Acción de agentes químicos sobre los microorganismos

I. Efecto de la concentración de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

Objetivo:

Determinar el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo microbiano.

II. Acción de los desinfectantes y antisépticos.

Objetivo:

Observar y comparar el efecto de los desinfectantes y antisépticos en el desarrollo microbiano.

Pruebas de diferenciación bioquímica

Objetivo:

Caracterizar a los microorganismos en función de su capacidad fermentativa de diferentes carbohidratos.

3) Metodología

I. Efecto de la temperatura

Materiales:

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aereus

II. Acción de la presión osmótica

Materiales:

Cepa de Escherichia coli de 24 horas de edad crecida en

caldo de cultivo.

4 Placas Petri (concentraciones de NaCl al

5%,10%,20%,40% en medio base Agar Nutritivo)

1 Placa con Agar Nutritivo.

Asa de siembra

Encendedor

III. Efecto de la concentración de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

Materiales:

Cultivos de 24 horas de edad de Escherichia coli.

Tubos con caldo nutritivo estéril previamente ajustados con HCl 1 N y NaOH 1Na

valores de pH de 3, 5 , 7 , 9 , 11 (1 de cada una).

IV. Acción de los desinfectantes y antisépticos.

Materiales:

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus

Medio de cultivo: Agar nutritivo.

Desinfectantes:

Lejía 10%

Cresol 5%

Pinesol

Antisépticos:

Alcohol 70%

Agua oxigenada

Merthiolate

Jabón medicado(Protex)

Otros

Disco de papel filtro, pinzas.

Plumón indeleble.

V. Prueba de diferenciación bioquímica

Materiales:

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus. Caldo base rojo fenol Carbohidratos: glucosa, sacarosa y lactosa Pipetas estériles. Plumón indeleble

Procedimiento

I. Efecto de la temperatura

SOMETEMOS

CADA

II. Acción de la presión osmótica

EFECTO DE LA TEMPERATURA

CULTIVO

Escherichiacoli Sthaphylococcusaureus

40°C y 65°C

0’, 40‘y 80’ y 100’

HACEMOS DILUCIONES SERIADAS (1ML) DE CADA CULTIVO (10-3)

SEMBRAMOS 0,1 ML DE CULTIVO POR DIFUSIÓN EN MEDIO DE AGAR NUTRITIVO

ROTULAMOS LAS PLACAS DE MANERA ADECUADA

INCUBAR A 28°C por 48 HORAS EN POSICION INVERTIDA

BASE DE AGAR CON

CONCENTRACIÓN

ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS

ACCIÓN DE PRESIÓN OSMÓTICA

SEMBRAMOS E. Coli POR ESTRIADO SIMPLE EN PLACAS

NaCl

5% 10% 20% 40%

ROTULAMOS LAS PLACAS DE MANERA

ADECUADA

INCUBAR POR 48 HORAS A 28°C

COMPARAMOS RESULTADOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

III. Efecto de la concentración de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

SOBRE

CON

IV. Acción de los desinfectantes y antisépticos.

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE PH EN

LOS MICROORGANISMOS

INOCULAMOS E. Coli CON AGUJA DE NICROM CIRCULAR

TUBOS EN CONCOTENIDO DE CALDO NUTRITIVO

PH 3 PH 5 PH 7 PH 9

INCUBAMOS A 28°C por 48 HORAS

ANOTAMOS OBSERVACIONES

PH 11

ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

AGENTES DESINFECTANTES AGENTES ANTISEPTICOS

DIVISION DE PLACAS CON MARCADOR

3 DIVISIONES 4 DIVISIONES

SEMBRAMOS S. AUREUS POR

DIFUSION

1 ml de cultivo + Agar nutritivo

1 ml de cultivo + Agar nutritivo

CON UN PINZA ESTERIL COLOCAMOS UN DISCO

DE PAPEL FILTRO PREVIAMENTE EMBEBIDO EN

SOLUCION SOBRE LA PLACA

.LEJIA AL 10%

.CRESOL

. PINESOL

.ALCOHOL AL 70%

.AGUA OXIGENADA

.MERTHIOLATE

.JABON

INCUBAMOS A 28°CPOR 48 HORAS

V. Prueba de diferenciación bioquímica

EN

CON

CUESTIONARIO

INOCULAMOS 1 ML DE CADA CEPA

Escherichiacoli Staphylococcusaureus

CALDO DE ROJO FENOL

GLUCOSA LACTOSA SACAROSA

INCUBAR LOS TUBOS A 28°C POR 48

HORAS

5. ¿Cuál es la razón de usar alcohol de 70°C?

El mecanismo de acción de los alcoholes es la desnaturalización de las proteínas de los microorganismos. La desnaturalización proteica sólo es posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las mezclas de alcoholes con agua, por esta razón se utiliza alcohol a 70°C.Podría tener cierta acción bacteriostática al inhibir la producción de metabolitos esenciales para la división celular rápida.Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluyendo patógenos multirresistentes (Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Enterococcus). El alcohol al 70% puede matar al 90% de las bacterias de la piel si ésta se mantiene húmeda (con el antiséptico) durante dos minutos. La friega con algodón humedecido en etanol que se deja secar sobre la piel mata como máximo al 75% de las bacterias.

6. En un proceso productivo de derivados de frutas, ¿Cuál sería el agente contaminante principal? ¿Cuál sería su agente químico de control? ¿Qué función cumpliría este agente? Proponga un ejemplo.

Zumos de fruta

Los zumos de frutas son en su mayoría productos ácidos, de pH inferior a 4,0. Esta característica normalmente impide que proliferen en ellos microorganismos patógenos, sobre todo después de someter el producto a los tratamientos térmicos habituales durante su proceso de producción.Los jugos de frutas, conservas y concentrados de frutas. Su contenido en carbohidratos varia de 40 a 60 %, entre los microorganismos que pueden estar presentes como agentes patógenos son solo los mohos aciduricos, las levaduras y las bacterias (L actobacillus, Acetobacter), que poseen la capacidad para causar descomposición si no se usan buenos métodos de conservación.

Agente químico de control

Función del Ácido cítrico Saborizante y regulador del pH; incrementa la efectividad de los conservantes antimicrobianos.

7. Explique el efecto de los desinfectantes y antisépticos en el desarrollo microbiano.

Efecto de los desinfectantes:

El desinfectante típico detiene el crecimiento de las bacterias matándolas. Un segundo tipo de desinfectante, el inhibidor, previene que las bacterias crezcan

en el lugar donde se aplica el químico. El desinfectante conocido como "agente bacteriostático" no mata las bacterias,

sino que detiene temporalmente el crecimiento bacteriano.

Efecto de los antisépticos:

Los antisépticos son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre la piel para reducir la posibilidad de infección,sepsis o putrefacción. Algunos antisépticos son auténticos germicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas), mientras que otros son bacteriostáticos y solamente previenen o inhiben su crecimiento.

El mecanismo de acción de los antisépticos y desinfectantes depende de tres mecanismos básicos: Capacidad de coagular y precipitar proteínas, alterar las características de permeabilidad celular y toxicidad o envenenamiento de los sistemas enzimáticos de las bacterias, que a su vez dependen del grupo químico. Éstos pueden producir la muerte o inhibición celular de las bacterias por oxidación, hidrólisis o inactivación de enzimas, con pérdida de los constituyentes celulares. Son más selectivos.

Sin embargo se han hecho estudios sobre las resistencias que presentan ciertos microorganismos a antisépticos y desinfectantes.Las bacterias Gram negativas por lo general son más resistentes a los antisépticos y desinfectantes que las Grampositivas.Se han hecho estudios donde se midieron las concentraciones mínimas inhibitorias (CIM) que presentan tanto las Grampositivas como las Gram negativas, y se estableció que hay diferencias marcadas entre Staph. Aureus y E. coli esto porque la membrana externa de las bacterias Gram negativas actúa como una barrera que limita la entrada de varios tipos de agentes antibacterianos sin relación química.

8. De acuerdo a la capacidad fermentativa de los carbohidratos por las bacterias estudiadas. Indique los alimentos que pueden ser potencialmente deteriorados por esta actividadMetabólica. ¿Por qué?

Alimentos potencialmente deteriorados

Existen diversos alimentos asociados debido a la capacidad fermentativa de diversos carbohidratos de e. coli, la fuente más frecuente es la carne de vacuno y los productos cárnicos de vacuno (hamburguesas, carne picada, etc.) que hayan sido poco cocinados, así como la leche cruda sin pasteurizar y los productos elaborados con ella (queso, nata)etc(lactosa).

Bibliografía

http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/4274/Capitulo1.pdf

La resistencia de bacterias a antibióticos, antisépticos y desinfectantes una manifestación de los mecanismos de supervivencia y adaptación CRISTINA EUGENIA CABRERA, M.SC. 1, ROMMEL FABIÁN GÓMEZ, B.SC. 2, ANDRÉS EDMUNDO ZÚÑIGA, B.SC. 3

https://books.google.com.pe/books?isbn=8495447592