métodos de estudio de las enteroparasitosis
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MÉTODOS DE ESTUDIO DE LAS ENTEROPARASITOSIS
IMPORTANCIA
Diagnóstico de enteroparasitosis sintomáticas, asintomáticas.
Diagnóstico diferencial de infecciones entéricas.
Diagnóstico diferencial con otras patologías del aparato digestivo.
Tratamiento específico.
Valoración de respuesta al tratamiento.
Prevención.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
DIAGNÓSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
Pre-analítica
Analítica
Post-analítica
ETAPAS DEL DIAGNÓSTICO
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
DIAGNÓSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
MÉTODOS DIRECTOS:
Coproparasitario
Coloraciones
Método de Graham - Espátula adhesiva
Sondeo Duodenal
Biopsia duodenal
Coproantígenos
MÉTODOS INDIRECTOS:
En suero: anticuerpos séricos
Amibiasis invasiva, estrongiloidiasis,fasciolosis,esquistosomiasis, etc
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
5ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
Indicaciones del examen parasitario
Pacientes con sintomatología sugestiva; pacientes asintomáticos con antecedentes epidemiológicos relevantes; control o control post-tratamiento
Solicitud del examen parasitario
Datos filiatorios del paciente
Datos clínicos (síntomas y signos, diagnóstico clínico presuntivo)
Antecedentes personales: inmunosupresión, viajes al exterior
Antecedentes familiares
Antecedentes ambientales (agua potable, saneamiento)
Tratamientos previos anti diarreicos, antiparasitarios, antibióticos etc.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
Indicación de Régimen alimentario
48 a 72 hs antes de realizarse el estudio (libre de frutas, verduras y grasas dado que estas preparaciones obstaculizan la visualización microscópica lo que puede conducir a resultados Falsos Negativos o Falsos Positivos).
Necesario?
Emisión
Espontánea.
No en período menstrual, ni posterior a realización de estudio radiológico con bario.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA PRE-ANALÍTICA
Muestra de materia fecal
Aproximadamente 50 grs (tamaño de una nuez) si heces formadas, o 10 a 15 ml si heces líquidas.
Rotular adecuadamente.
En recipiente de boca ancha, transparente y con tapa de rosca.
Emitidas recientemente o conservadas en heladera hasta 24 horas.
Evitar contaminación con orina para evitar deterioro de los parásitos.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA ANALÍTICA
9ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
COPROPARASITARIO
DEFINICIÓN
Conjunto de técnicas diagnósticas complementarias que permiten la identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas por protozoarios y helmintos intestinales o de aquellos que si bien tienen una localización tesidual sus huevos se eliminan en las materias fecales.
Se debe tener en cuenta a la hora de su indicación que esta metodología es útil para protozoarios y helmintos cuyas formas evolutivas se eliminan con las materias fecales:
Trofozoítos
Quistes
Ooquistes
Huevos
Larvas
Adultos
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN COPROPARASITARIO SERIADO
Se considera que muestras únicas solo permiten un diagnóstico positivo en un 60% aprox. de las materias fecales con parásitos (debido a que en los ciclos de los parásitos alternan períodos negativos de eliminación de quistes) *
Esquemas sobre la secuencia de recolección de materia fecal para realizar el examen coproparasitario. Los más usados son:
3 muestras seriadas en días alternos
3 muestras separadas por intervalos de una semana entre sí
* Manual de Toma de muestras para estudio Bacteriológico y Micológico.
Departamento de Laboratorio Clínico. Hospital de Clínicas. 2004.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MACROSCÓPICO
Consistencia: moldeada, pastosa, semilíquida, inhomogénea
Color: marrón, amarillo, macilla, negruzco, verdoso
Olor: “sui generis”, fétido, butírico
Presencia de elementos anormales: sangre, mucus, pus
Presencia de seudoparásitos
Búsqueda de parásitos macroscópicos
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MACROSCÓPICO13
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MACROSCÓPICO
En el caso de hallar proglótides de Taenia:
Dejar en agua destilada durante 24hs
Colocar el segmento sobre un recuadro de papel
Comprimir entre dos láminas
Observar las ramificaciones del útero
También se pueden teñir con Carmín Clorhídrico
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MICROSCÓPICO
Examen directo de una pequeña porción de heces frescas
Examen después de aplicar un método de concentración
Examen de frotis o preparaciones permanentes
EXAMEN DIRECTO
Suero Fisiológico
Lugol
Objetivo 10 x
Objetivo 25-40 x
Habitualmente no se emplea objetivo de inmersión
Importante: No diluir demasiado las muestras
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EXAMEN MICROSCÓPICO
DIRECTO EN FRESCO CON SUERO FISIOLÓGICO Y LUGOL
Inconvenientes:
Escaso material, por lo que es necesario la realización de técnicas de Enriquecimiento o Concentración (Ritchie, Faust, Sheater)
Ventajas:
Movilidad de trofozoítos, células intestinales, células inflamatorias, mala absorción.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODOS DE ENRIQUECIMIENTO O CONCENTRACIÓN
Procedimientos por Sedimentación
Procedimientos por Flotación
Procedimientos Biológicos
Aumentan el número de parásitos a partir de un volumen conocido.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO O CONCENTRACIÓN
MÉTODOS FÍSICOS
o Dilución minuciosa de heces en líquido o solución de densidad:
o Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)o Superior a la de los parásitos (Técnicas de flotación)
o Ventajas:
o Realización muy simple
o Precisan poco material
o Inconvenientes:
o Procesos largos
o Exigen mucha manipulación
o No aplicables a series grandes de muestras
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODOS FÍSICOS
SEDIMENTACIÓN SIMPLE
• Espontánea
SEDIMENTACIÓN -CENTRIFUGACIÓN
• Ritchie (formol-éter)
• Telemann (éter-ácido clorhídrico)
• Carles y Barthélémy (éter-ácido cítrico)
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO POR SEDIMENTACIÓN
Basados en la utilización de suero fisiológico (SF) y otras soluciones de baja densidad.
Se recuperan huevos, larvas, ooquistes y quistes del fondo de un tubo en el que se depositan por ser más densos.
SEDIMENTACIÓN SIMPLE
Lentos y poco prácticos
Mayor utilidad para huevos de trematodos
SEDIMENTACIÓN /CENTRIFUGACIÓN
Se destaca el método de Ritchie (con formol y éter o acetato de etilo), que es el más usado en los laboratorios de nuestro medio
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
SEDIMENTACIÓN SIMPLE
o Homogeneizar 2 a 5 gr de heces (10-20 gr) en 10 ml de SF o agua.
o Colocar la dilución en tubo cónico de 50 ml, filtrando a través de gasa.
o Completar el volumen con SF o agua de la canilla.
o Agitar y dejar reposar por 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Resuspender con SF o agua de la canilla.
o Dejar sedimentar 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Repetir esta operación varias veces, hasta que el sobrenadante quede
transparente.
o Tomar con pipeta el material sedimentado.
o Hacer tres tomas:o Superficieo Media alturao Fondo Sensibilidad 55%
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODO DE RITCHIESEDIMENTACIÓN-CENTRIFUGACIÓN
o Homogeneizar materia fecal con SF (aprox. 25 ml).o Filtrar suspensión por embudo con triple gasa a tubo de centrífuga de fondo
cónico.o Centrifugar a 2300 rpm por 1 min, descartar sobrenadante, resuspender con SF
y agitar con varilla de vidrio. o Centrifugar nuevamente a 2300 rpm por 1 min, repitiendo hasta 3 veces o hasta
obtener un sobrenadante límpido.o Agregar al sedimento obtenido 3 a 5 ml de formol al 10%, homogeneizando con
varilla o pipeta Pasteur. o Dejar reposar por 5 min con fines de fijación.o Agregar 1 ml de éter o acetato de etilo, agitar vigorosamente el tubo tapado
para extraer las grasas.o Centrifugar tubo a 1500 rpm durante 2 min. o Descartar sobrenadante y limpiar la boca del tubo con hisopo de algodón.o Tomar con pipeta el sedimento obtenido .o Depositar sobre lamina y laminilla con SF y lugol parasitológico.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
Restos vegetales y
grasa
Éter
Formol 10%
Sedimento (Parásitos)
MÉTODO DE RITCHIE23
ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
EQUIPOS COMERCIALES DE SEDIMENTACIÓN - CENTRIFUGACIÓN
Aspectos comunes
• Unidades de filtración
• Limpios
• Bioseguridad
Diferencias
• Tubos
• Con o sin conservantes
• Con o sin surfactante
• Cucharitas
• Hisopos
• Bolsas
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
FECAL PARASITE CONCENTRATOR JUMBO EVERGREEN ®
• Remplaza embudo y gasa.• Los orificios del filtro permiten pasar larvas, huevos, quistes y retienen la mayorparte de los desechos fecales.• Surfactante Tritón x-100, disuelve y disgrega las heces y el mucus.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO POR
FLOTACIÓN
FLOTACIÓN SIMPLE
• Bass
FLOTACIÓN -CENTRIFUGACIÓN
• Faust (Sulfato de Zinc)
• Sheater modificado (azúcar). Para coccidios
• Bailinger (Éter y Sulfato de Zinc)
• Quinn (Sulfato de Magnesio)
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN FLOTACIÓN
Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un líquido denso al cual ascienden por su menor peso específico.
Características a considerar:Densidad solución empleada, densidad de parásitos,concentración en superficie.Importante:
• Manipular rápidamente• Posible alteración en la morfología
de los huevos
Sedimento
Película superficial
Sulfato Zinc
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODO DE BAERMANN TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN
Basados en el conocimiento del ciclo vital del parásito
MÉTODO DE BAERMANN
Apropiado para el diagnóstico de Estrongiloidiasis (aprovechando la termofilia e hidrofilia de las larvas
de Strongyloides stercoralis)
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODO HARADA - MORITÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN
Busca embrionar huevos de trematodes y cestodes.
Larvas de nematodes.
Strongyloides stercoralis
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
TÉCNICAS PARA RECUENTO DE HUEVOS
Intensidad de infección de helmintos transmitidos por el suelo.
Cuantifican el número de huevos por gramo de materia fecal.
Recuento en placa microscópica.
Técnica de Kato – Katz.
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
COLORACIONES
Coloraciones temporarias
Lugol, Clorazol, Tionina
Coloraciones permanentes (Frotis)
Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun para diagnóstico de coccidiosis intestinales (Criptosporidiosis, Isosporosis, Ciclosporosis)
Hematoxilina Férrica para amibiasis
Tricrómica y Gram Cromotrope para microsporidiosis
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
COLORACIÓN DE KINYOUN ZIEHL NEELSEN MODIFICADO EN FRÍO
PARA COCCIDIOS INTESTINALES
Fijación frotis: Metanol por 30 seg
Tinción: 5 min (frío) con solución de Fucsina básica
Fucsina básica 4 g
Fenol 8 g
Etanol (95%) 90 ml
Agua destilada 100 ml
Lavado
Etanol 50%: 3-5 min
Agua corriente
Decoloración: Ácido sulfúrico 1% por 2 min
Contracoloración: Verde de Malaquita o Azul de Metileno por 1-2 min
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNÓSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS
EXAMEN DIRECTO DE LÍQUIDO DUODENALo Se obtiene por sondeo duodenal o con cápsula entérica o test del cordón o“Enterotest”
o Observación
o Fresco (directo o tras centrifugación)
o Frotis coloreados
o Utilidad / Rendimiento
o Trofozoítos de Giardia lamblia
o Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
o Huevos de Fasciola hepatica
o Larvas de Strongyloides stercoralis
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
o Restos alimenticios semi-digeridos
o Células epiteliales (mucosa intestinal)
o Células sanguíneas • Leucocitos (úlceras intestinales)• Macrófagos amebas patógenas• Hematíes
o Bacterias
o Hongos
ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
Restos alimenticios
o Tejido conjuntivo
o Fibras musculares estriadas (carne)
o Grasas neutras Glóbulos refringentes tamaño variable
o Ácidos grasos Agujas finas
o Almidón
o Crudo: Granos en capas concéntricaso Células reserva amilácea
o Celulosao Digerible: Masas celulósicas (células reserva)
o No digerible: Traqueadas, pelos vegetales, polen etc.
ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
Cristaleso Origen alimentario (oxalato de calcio)
o Endógeno (Ox. calcio, fosfato amónico-
magnésico, Charcot-Leyden)
o Medicamentos
ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
o Oxiurosis o Enterobiosis (Enterobius vermicularis)
o Observación microscópica del material recogido de la zona perianal, por aplicación de una superficie adhesiva.
o La cinta se dispone sobre un soporte rígido, con la superficie adhesiva hacia el exterior.
o Se aplica varias veces sobre la piel de la región perianal sin introducir en el recto.
o Se envía al laboratorio y se observa al microscopio (10X).
IMPORTANTE
o Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes de levantarse de la
cama, durante 3 mañanas consecutivas
MÉTODO DE ESPÁTULA ADHESIVA TÉCNICA DE GRAHAM
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MÉTODO DE GRAHAMDIAGNÓSTICO OXIURIOSIS
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA POST-ANALÍTICA
39ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ETAPA POST-ANALÍTICA
Validación
Informe correcto de los resultados
Importancia de la buena comunicación con el médico clínico
Observaciones, orientaciones y sugerencias
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
METODOLOGÍA
ESPÁTULA ADHESIVA
EXAMEN DIRECTO
• Trofozoítos• B. hominis
ENRIQUECIMIENTO
• Quistes de patógenos:• Primarios• Oportunistas• Discutidos
• Huevos• Larvas
COLORACIONES
• Ziehl Neelsen• Tricrómica• H. férrica
MACROSCÓPICO
• Nematodes• Platelmintos
COPROANTÍGENOS
• G. lamblia• Crypto. spp• E. histolytica
COPROPARASITARIO
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
ORIENTACIÓN CLÍNICA
CUADROS CLÍNICOS
VINCULADOS A
ENTEROPARASITOSIS
EOSINOFILIAS: CPs+EA
SÍNTOMAS INESPECÍFICOS:
CP+EA
DIARREA CRÓNICA CON
MALABSORCIÓN: CPs+CAg
DIARREA AGUDA INFANTIL,DIARREA PROLONGADA:
CP+ZN INMUNODEPRIMI
DOS CON DIARREA:
CPs+ZN+TRIC+CAg+CAcp
DIARREA DEL VIAJERO: CP+ZN
DIARREA DEL ADULTO: CP
DOLOR ABDOMINAL:
CPs+EA
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA
MUCHAS GRACIAS
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ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA