manual tb del ins

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bacteriología detuberculosis

baciloscopia y medio de Ogawa Kudoh

autoras:María Consuelo Garzón Torres

Claudia Llerena PoloDora Leticia Orjuela Gamboa

Graciela Mejía RestrepoMicobacterias - RNL - Instituto Nacional de Salud

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cont

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o IntroducciónI. Tuberculosis

¿Qué es la tuberculosis?¿Quién puede tener tuberculosis?¿Cómo se sabe que la persona tiene tuberculosis?¿Qué se debe hacer cuándo se tiene tuberculosis?¿Cómo se cura la tuberculosis?

II. Muestra para la baciloscopia1. Frasco para recoger la muestra del esputo2. Recolección de las muestras3. Recibo de las muestras4. Orden para el registro diario de Baciloscopia (Bk) y

medio de Ogawa Kudoh (Ok)

III. Baciloscopia1. Lugar de trabajo2. Elementos y reactivos3. Lavado de portaobjetos o láminas4. Preparación para realizar la baciloscopia5. Procedimiento para el extendido6. Coloración de Ziehl Neelsen (ZN)7. Observación del extendido al microscopio

IV. Medio de Ogawa Kudoh1. Elementos y reactivos2. Método del escobillón de Kudoh3. Control al tratamiento de Tuberculosis

Bibliografía

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Este manual esta dirigido a los promotores, auxiliares y líderes comunitarios de pueblos indígenas, como material de enseñanza y consulta de la baciloscopia y uso del medio Ogawa Kudoh para el diagnóstico de tuberculosis del sintomático respiratorio.

Se elaboró por el Grupo de Micobacterias - RNL Instituto Nacional de Salud, en un lenguaje sencillo y con dibujos que facilitan la comprensión. Se ha revisado teniendo en cuenta la experiencia durante las capacitaciones a promotores y líderes comunitarios de diferentes pueblos indígenas del país.

Introducción

Tuberculosis

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Qué es la tuberculosis?Es una enfermedad contagiosa,

es decir que pasa fácilmente de una persona a otra. Es causada por un microbio llamado bacilo tuberculoso o Mycobacterium tuberculosis y se transmite a través de las goticas de saliva, que las personas enfermas eliminan al hablar, toser, reír, estornudar y escupir.

Es importante encontrar las personas enfermas de tuberculosis, por medio de la baciloscopia y el uso del medio Ogawa Kudoh en el esputo, catarro, gargajo o flema, que sale con la tos y es producido en los pulmones y darles tratamiento para curarlos.

Tuberculosis

I. Tuberculosis

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Los enfermos de tuberculosis botan estos microbios al aire, las personas que están a su alrededor respiran esos microbios y entran a los pulmones por la nariz, lo que produce la enfermedad y la persona puede llegar a morir cuando no toman todo el tratamiento.

Quién puedetener tuberculosis

El sintomático respiratorio, es la persona con tos y expectoración por más de 15 días o dos semanas.

Tuberculosis

6Tuberculosis

Esta enfermedad ataca principalmente los pulmones y también a otras partes del cuerpo

7Tuberculosis

Por medio de la baciloscopia, que consiste en examinar la muestra de esputo, catarro, gargajo o flema a través del microscopio, observando los microbios teñidos de color rojo.

¿Cómo se sabe que la persona tiene tuberculosis?

8Tuberculosis

¿Qué se debe hacer cuándo se tiene tuberculosis

El enfermo de tuberculosis, debe cubrirse la boca y la nariz al toser o estornudar para que no salgan los microbios al aire y no se transmita a otras personas.

9Tuberculosis

Cómo se cura la tuberculosis?

Cuando a las personas enfermas se les da tratamiento rápidamente con varias medicinas, en la cantidad necesaria durante seis meses, se curan porque los microbios mueren y se previene que se transmita a sus familiares y a la comunidad.

10Tuberculosis

Es necesario que las personas con tuberculosis reciban y tomen todas las medicinas que se les han recetado para curarse.

Cuando no se toman las medicinas, los microbios no se mueren y pueden hacerse resistentes a las medicinas; esto quiere decir que los microbios quedan vivos. En este caso la persona continúa enferma y no se cura.

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II. Muestra para la baciloscopia

1. Frasco para recoger la muestra de esputo

Muestra para la baciloscopia

• Frasco grande de boca ancha, para que la persona sintomática respiratoria escupa el esputo, gargajo, flema o catarro, dentro del frasco.

• Que se pueda cerrar bien, para que no se salga la muestra.

• Después de hacer la baciloscopia y usar el medio de Ogawa Kudoh, quemar los frascos.

JOSE PEREZ2-Abril-2009

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12Muestra para la baciloscopia

2. Recolección de las muestras

Entregue a la persona sintomática respiratoria, el frasco para la recolección de la muestra de esputo gargajo, flema o catarro, marcado con nombres, apellidos completos y fecha.

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Se deben tomar tres muestra de esputo, gargajo, flema o catarro, durante 3 días seguidos recolectadas preferiblemente en el momento en que la persona se despierta debido a que los esputos, gargajos, flemas o catarros se acumulan durante la noche, aumentando la posibilidad de encontrar el microbio de la tuberculosis.


14Muestra para la baciloscopia

Siempre se debe indicar a la persona sintomática respiratoria cómo recolectar la muestra:

• Dígale que tome aire por la nariz profundamente, que lo retenga en los pulmones y con un esfuerzo de tos, escupa dentro del frasco.

• Esto se debe hacer 3 veces sin untar la parte externa del frasco,

• Coloque la tapa y cierre bien.

• Lave las manos y entregue el frasco con la muestra al promotor.


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Cuando la persona sintomática respiratoria no pueda recoger las muestras del esputo los 3 días seguidos, debe recolectarlas así:

• En un día, a diferente hora, recoja las 3 muestras.

3. Recibo de las muestras

• Siempre se debe comprobar que el frasco contenga la muestra.• Cuando se recibe muestra de saliva, se debe procesar y solicitar al paciente una nueva

muestra indicándole la forma correcta de tomarla.

4. Orden para el registro diario de Baciloscopia (Bk) y medio de Ogawa Kudoh (Ok)

• Dar un numero de acuerdo con el orden de llegada del sintomático respiratorio, escribir la fecha en que se recibió la muestra, el nombre completo del paciente, si es mujer se escribe su edad en años y si es hombre se escribe su edad en años, historia clínica, resguardo y comunidad, institución prestadora de salud o municipio, afiliación, entidad afiliadora y clase de muestra (esputo).


• Escriba en el frasco el número que sea igual al libro de registro diario de baciloscopia y medio Ogawa Kudoh. (primera, segunda y tercera, según el caso).

• Nunca marque sobre la tapa del frasco.


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LIBRO DE REGISTRO DIARIO DE BACILOSCOPIA Y MEDIO OGAWA KUDOH

17Baciloscopia

III. Baciloscopia1. Lugar de trabajo

El lugar de trabajo debe tener buena ventilación y que llegue el sol, para realizar la baciloscopia.

18Baciloscopia

SOPORTE PARA LAMINAS

BAJA LENGUAS EN MADERA

PAPEL PERIODICO

MUESTRAS

MECHERO

LAPIZ DE CERA

ACEITE DE INMERSION

MICROSCOPIO

LAMINAS PORTAOBJETOS

RECIPIENTE CONBLANQUEADOR DE ROPA

CINTA DE ENMASCARAR

REGISTRO DIARIO BACILOSCOPIA Y MEDIO OGAWA KUDOH

PAPEL SUAVE

RECIPIENTE METALICO PARA QUEMAR MATERIAL CONTAMINADO

2. Elementos y reactivos:

ESFERO

19Baciloscopia

• Fucsina. • Alcohol- ácido al 3%. • Azul de metileno.

También debe tener:

• Alcohol industrial para el mechero.• Papel suave para limpiar el microscopio y las láminas portaobjeto.• Colorantes de Ziehl Neelsen:

20Baciloscopia

3. Lavado de portaobjetos o láminas

• Coloque las láminas nuevas en agua jabonosa mínimo por 2 horas.• Lave una a una por ambos lados con abundante agua.

2 Horas

1 Hora

• Una vez escurridas sumérjalas en alcohol durante mínimo 1 hora.

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• Seque cada una de las láminas con una tela absorbente limpia.

Baciloscopia

• Guárdelas en una caja o recipiente, protegidas del polvo

Siempre se deben usar láminas nuevas

22Baciloscopia

4. Preparación para realizar la baciloscopia

• Antes de realizar el trabajo lávese las manos y en lo posible colóquese una bata.

23Baciloscopia

• Cubra la mesa con papel.


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3

24Baciloscopia

• Coloque las muestras en el orden en que aparecen en el libro de registro diario de baciloscopia y medio de Ogawa Kudoh.

• Realice en grupos de 6 muestras.• Coloque el mechero, entre las muestras y usted.


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• Como lo muestra el dibujo, haga una línea en la lámina, con lápiz de cera azul o negro, este espacio se usa para marcar la lámina indicando primero el número de registro y luego el número de la muestra (primera, segunda o tercera, según el caso). El resto de la lámina es para extender la muestra.

Baciloscopia

26Baciloscopia

• Revise que el frasco de la muestra que se va a procesar y la lámina, tengan el mismo número.

• Coloque el mechero en la mitad, entre la muestra y usted, para evitar que se contagie.

• Divida el palo de madera o baja lenguas en dos.


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5. Procedimiento para el extendido

Baciloscopia

• Con un pedazo del palo de madera o baja lenguas, coja la partícula útil, que es el moco de color verde, café o amarillo y en algunos casos tiene sangre.

28Baciloscopia

• Coja la lámina por el lado que tiene el número.• Con el palo de madera o baja lenguas extienda la partícula útil sobre la lámina de modo uniforme,

con movimiento de lado a lado, hasta lograr un extendido que cubra el resto de la lámina, sin llegar hasta el borde de ella.

• Después de realizar el extendido de la muestra, coloque el palo de madera o baja lenguas en el recipiente que contiene blanqueador de ropa.

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• Cuando el extendido de la muestra sea muy delgado, deje secar y realice otra vez el extendido sobre la misma lámina.

Baciloscopia


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• Tape el frasco que contiene la muestra.JOSE PEREZ

2-Abril-20091-1


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30Baciloscopia

• Deje secar el extendido a temperatura ambiente cerca del mechero. No acelere el secado pasando las láminas sobre la llama, ésto daña el extendido y dificulta la observación al microscopio.

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• Lávese las manos con agua y jabón.

Baciloscopia

• Una vez secos los extendidos, páselos rápidamente sobre la llama del mechero tres veces, con el extendido hacia arriba con el fin de fijar la muestra.

32Baciloscopia

6. Coloración de Ziehl Neelsen (ZN)

La técnica de coloración que se usa en nuestro país es la de ZIEHL - NEELSEN.

FundamentoEsta coloración busca teñir los microbios con el colorante de color rojo, ayudado con el calor que

proporciona el mechero, luego se decolora con el líquido incoloro y finalmente se agrega el colorante azul, que tiñe todo lo diferente al bacilo tuberculoso. Al mirar en el microscopio los microbios se observan de color rojo en un fondo azul.

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La coloración se realiza en tres tiempos: coloración fucsina (rojo), decoloración alcohol-ácido (incoloro) y coloración con azul de metileno (azul).

Antes de iniciar la coloración de ZN los colorantes se deben filtrar para eliminar grumos o basurita que dificultan la lectura al microscopio.

Control de calidad de la coloraciónSe usa cuando se realiza la coloración de ZN.• Control positivo: láminas con bacilos ácido-alcohol resistentes (Vacuna BCG).• Control negativo: lámina con bacilos ácido-alcohol sensibles.• Los controles deben ser entregados por la IPS o el Laboratorio de Salud Pública del departamento.

Baciloscopia

A. Coloración fucsina (rojo)• Coloque las láminas sobre el soporte con

el extendido hacia arriba, separadas en orden numérico.

34Baciloscopia

• Cubra la totalidad de la lámina con fucsina de Ziehl Neelsen (rojo).

FUCSINA

FUCSINA

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• Caliente las láminas por debajo pasando la llama del mechero y cuando se produzcan vapores, empiece a contar 10 minutos. Retire el mechero y o cuando los vapores desaparezcan, caliente nuevamente, haga esto cuantas veces sea necesario hasta completar los 10 minutos.

• Evite que el colorante se hierva o se seque, si ésto pasa agregue más colorante y continúe produciendo los vapores.

Baciloscopia

10 Minutos

36Baciloscopia

• Deje enfriar y lave cuidadosamente con agua limpia.

B. Decoloración alcohol ácido (incoloro)

• Cubra el extendido, con alcohol - ácido (líquido incoloro) durante 1 minuto

1 Minuto

ALCOHOL-ACIDO

ALCOHOL-ACIDO

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• Lave cuidadosamente con agua limpia.

• Si el extendido conserva el color rojo o rosado vuelva a agregar alcohol-ácido por 1 minuto como lo hizo anteriormente y lave nuevamente.

Baciloscopia

C. Coloración con azul de metileno (azul)• Cubra el extendido decolorado con azul de

metileno durante 2 minutos.

1 Minuto

2 Minutos

AZUL DEMETILENO

AZUL DEMETILENO

38Baciloscopia

• Lave cuidadosamente con agua limpia.

• Limpie con papel suave la parte de atrás de la lámina, es decir donde no está el extendido, para retirar los residuos de colorante que dificultan la lectura.

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• Deje secar a temperatura ambiente protegidos de la luz directa del sol.• Una vez secos los extendidos coloreados, revise la numeración.

Baciloscopia

aceite deinmersion

40Baciloscopia

7. Observación del extendido al microscopio

Con la técnica de coloración de ZN, el bacilo tuberculoso, se observa a través del microscópio teñido de rojo en un fondo azul.

41Baciloscopia

Microscopio

El microscopio es un instrumento con lentes que aumentan el tamaño de los microbios, que no se observan a simple vista. Posee una lámpara como fuente de luz, o un espejo que se puede utilizar con la luz del sol.

El microscopio se usa para observar y contar los microbios, debe ser tratado con mucho cuidado. Revíselo y límpielo antes y después de usarlo, para que siempre funcione bien.

CARRO

TUBO OCULAR

OCULAR

BASE

CONDENSADOR

PLATINA

OBJETIVOINMERSION

BRAZO

TORNILLOMACROMETRICO

TORNILLOMICROMETRICO

DIAFRAGMA

42Baciloscopia

Los oculares, objetivos y el condensador (ver dibujo) deben limpiarse cuidadosamente con un papel suave antes y después de usarlo, especialmente el objetivo de inmersión, que por ningún motivo debe quedar sucio, porque el aceite se seca y lo daña.

Guarde el microscopio donde no haya humedad, ni polvo para evitar que se dañe.

El microscopio no se debe desarmar. Nunca quite ninguna de las partes porque se puede dañar definitivamente. Este trabajo debe ser realizado por personal especializado.

43Baciloscopia

Lectura de las láminas en el microscopio

• Deje caer una gota de aceite de inmersión sobre el extendido, evite que la punta del gotero toque la lámina.

• Coloque la lámina en la platina del microscopio, observe a través del ocular con el objetivo 10X enfocando con el tornillo macrométrico hasta observar un fondo azul, luego cambie al objetivo de inmersión 100X y enfoque con el tornillo micrométrico, los microbios se van a ver teñidos de color rojo sobre un fondo azul.

44Baciloscopia

• Primero se leen las láminas de los controles. Para leer una lámina mueva el carro (página 41) para desplazar la lámina sobre la platina y al mismo tiempo usando el tornillo micrométrico realice la búsqueda de bacilos ácido-alcohol resistentes de color rojo.

• Haga la búsqueda sobre toda la lámina de los microbios de color rojo.

• Para informar el resultado de la lectura se debe tener en cuenta la cantidad de microbios ácido alcohol resistentes que se encontraron con el objetivo de inmersión.

• Cuando termine de observar al microscopio, limpie cuidadosamente con papel suave el aceite de inmersión de cada una de las láminas, sin dañar los extendidos.

• Guardelas protegidas de la luz y el polvo para enviarlas al Laboratorio de Salud Pública, con el fin de realizar el Control de Calidad que evalúa el extendido, la coloración y la lectura.

45Baciloscopia

Informe de resultados para escala semicuantitativa

(-) No se observan bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes, en 100 campos microscópicos observados ó en diez minutos de observación.

(+) Menos de un bacilo o microbio ácido-alcohol resistente por

campo, en 100 campos microscópicos observados.

(++) Uno a diez bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes por campo, en 50 campos microscópicos observados.

(+++) Se observan más de 10 bacilos o microbios ácido-alcohol resis-tentes por campo, en 20 campos microscópicos observados.

46Baciloscopia

Ejemplo 1: Baciloscopia en la cual no se observan bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes en 100 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (-)

Ejemplo 2: Baciloscopia en la cual se observa menos de un bacilo o microbio (muy pocos) ácido-alcohol resistente por campo, en 100 campos microscópicos.El resultado de esta baciloscopia es (+)

47Baciloscopia

Ejemplo 3: Baciloscopia en la cual se observan (algunos) de uno a diez bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes por campo, en 50 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (++)

Ejemplo 4: Baciloscopia en la cual se observan más de diez bacilos o microbios (muchos) ácido-alcohol resistentes por campo, en 20 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (+++)

48Baciloscopia

Escriba el resultado de la lectura de la baciloscopia correspondiente a cada persona en el libro de registro diario de baciloscopia y medio de Ogawa Kudoh y en la hoja de informe de resultados.

HOJA DE INFORME

FECHA:

NOMBRE:

NUMERO:

EDAD:

RESULTADO DE LA BACILOSCOPIA:

NOMBRE DEL PROMOTOR:

1 DE MARZO DE 2009

JOSE PEREZ1

25 ANOS

(+) BACILOSACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

JUAN RUIZ

49Baciloscopia

IV. Medio de Ogawa Kudoh (OK)Para el diagnóstico de tuberculosis en un sintomático respiratorio, además de la baciloscopia se

usa el medio Ogawa Kudoh que permite encontrar los microbios de tuberculosis en una muestra de esputo, gargajo, flema o catarro.

El medio de Ogawa Kudoh permite encontrar más pacientes de los que se pueden hallar por Baciloscopia.

El medio de Ogawa Kudoh se guarda en un sitio limpio donde no le llegue el sol ni los insectos.

50Baciloscopia

Uso medio de Ogawa Kudoh • Cubra la mesa de trabajo con papel.• Coloque las muestras en el orden en que aparecen en el registro diario de baciloscopia y medio de Ogawa Kudoh.

1. Elementos y reactivos MEDIO DE OK

ESCOBILLONES ESTERILES

HIDROXIDO DE SODIONaOH 4% ESTERIL

CINTA DE ENMASCARAR

51Medio de Ogawa Kudoh

Marque la parte posterior de los tubos de medio de OK con la cinta, escribiendo el nombre del paciente, clase de muestra con el número del registro que se le asignó al paciente en el registro de baciloscopia y medio OK y la fecha de siembra. Recuerde que para cada muestra se utilizan dos tubos de medio OK.

El medio de OK se conserva bien tapado, cuando se destapa sin necesidad, entran microorganismos del ambiente y crecen impidiendo su uso para los casos de tuberculosis. Solo se debe destapar cuando se va a usar el medio de OK.LUIS MESA 2

FEBRERO 28 DE 2009

ESPUTO

Medio Ogawa Kudoh / Nombre paciente / Número / de orden / Fecha de siembra /

Clase de muestra


• Tome el frasco de la muestra que se va a procesar y compruebe que los 2 tubos de medio de OK, estén marcados correctamente.

• Coloque el mechero en la mitad, entre el frasco de la muestra y usted.

LUIS MESA28-FEB.-2009

2-3

LUIS MESA

ESPUTO REGISTRO ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009

LUIS MESA

ESPUTO REGISTRO ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009


LUIS MESA

ESPUTO No. ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009

LUIS MESA

ESPUTO No. ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009

2. Método del escobillón de Kudoh

Este método se realiza con hidróxido de sodio (NaOH) 4% para descontaminar la muestra, es decir, eliminar otros microbios que crecen más rápido y no dejan crecer los microbios que producen la tuberculosis e impiden su desarrollo.

• Moje la totalidad del algodón de un escobillón estéril con la partícula útil de la muestra. (que es el moco de color verde, café o amarillo y en algunos casos tiene sangre).


• Meta el escobillón, en un tubo que contenga 3 ml de NaOH al 4%, deje en reposo durante 2 minutos.

2 Minutos

LUIS MESA28-FEB.-2006

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LUIS MESA

ESPUTO No. ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009

LUIS MESA

ESPUTO No. ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009


• Meta en el tubo de medio de OK el escobillón que ha sacado del hidróxido de sodio, siembre con movimientos de rotación y presión sobre todo el medio.

• Use un escobillón para cada tubo del medio de OK y el mismo hidróxido de sodio por muestra.

• Realice la baciloscopia tomando la partícula útil de la muestra como se indicó anteriormente.

• Los medios de Ok sembrados se tapan bien y se les coloca cinta de enmascarar alrededor de la tapa, se envuelven uno a uno con papel, se colocan en un recipiente o caja que evite que se rompan y se envían al laboratorio para incubarlos. Además se debe relacionar la información de los medios y pacientes que envía.

LUIS MESA

ESPUTO No. ORDEN 2

FEBRERO 28 DE 2009


CONTROL AL TRATAMIENTO DE TUBERCULOSIS

Después de colocar la muestra de esputo, catarro, gargajo o flema en los tubos de medio OK, se

mandan a la Institución Prestadora de Salud Indígena IPSI.

MEDIO OGAWA KUDOH-BACILOSCOPIA DE ESPUTO.

Segundo mes Cuarto mes Sexto mes

LUISM

ESA

ESPU

TO No

. ord

en 2

FEBR

ERO

28 D

E 200

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LUIS

MESA

ESPU

TO No

. ord

en 2

FEBR

ERO

28 D

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Bibliografía1. Garzón MC, Llerena C, Orjuela DL, Victoria J. Tuberculosis. Técnicas y procedimientos. Subdirección de Epidemiología

y LNR. Instituto Nacional de Salud. Bogotá, Colombia. 2004.2. Garzón MC, Naranjo ON, Sierra CR, Llerena C, Orjuela DL. Bacteriología del Mycobacterium tuberculosis y

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Bibliografía

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Este material se realizó con el apoyo de la Organizacion Panamericana de la Salud y la Agencia Canadiense para el Desarrollo Internacional.

Segunda EdiciónBogotá D.C. Colombia, Marzo de 2009

manual tb del ins

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