Lymphomes diffus à grandes cellules B

Diagnostic et recherche Diagnostic et recherche translationnelletranslationnelle au sein du LYSAau sein du LYSA

T. J. MolinaT. J. Molina

Morphological, biological and clinical studies have subdivided DLBCL into• Morphological variants• Molecular and

immunophenotypicalsubgroups

• Subtypes• Distinct disease entities

WHO 2008 Classification of DLBCL

Diffuse large B-cell lymphoma subtypesT-cell rich large B-cell lymphomaPrimary DLBCL of the CNS (EBV)Primary cutaneous DLBCL, leg typeEBV positive DLBCL of the elderly

Other lymphomas of large B-cellsPrimary mediastinal (thymic) large B-celllymphomaIntravascular large B-cell lymphomaDLBCL associated with chronic inflammation (EBVLymphomatoid granulomatosis (EBV)ALK positive DLBCL (ALK )Plasmablastic lymphoma (EBV)Large B-cell lymphoma arising in HHV-8 associatedmulticentric Castleman disease (HHV8)Primary Effusion lymphoma (HHV8, EBV)

Diffuse Large B-cell lymphomas, not otherwise specified(NOS)

Common morphological variantsCentroblasticImmunoblasticAnaplastic

Rare morphological variantsMolecular subgroups

Germinal centre B-cell like (GC-B)Activated B-cell like (ABC)

Immunohistochemical subgroupsCD5+DLBCLGerminal Centre B-cell like (GCB)Non Germinal centre B-cell like (non-GCB)

Importance of assessing if this lymphomaarises de novo or is developing from

B-CLL (Richter Syndrome )Follicular lymphomaMarginal zone lymphomaNLPHL (Nodular Lymphocyte

Predominance Hodgkin lymphoma )

Crucial role of the size of the sample

Centroblastic

Plasmablastic

DLBCL, Molecular subgroups

• GC like DLBCL

• Activated like DLBCL

Alizadeh et al, 2000

Cell of Originsignature

Lenz , NEJM, 2008

Molecular subgroups defined by GEP or QRTPCR impacts on survivalIndepedently from IPI among R-CHOP treated DLBCL patients

Lenz, New Engl J Med, 2008, 359, 2313-23

DLBCL NOS

• Immunohistochemical subgroups– Germinal center B-cell (GC-B)

– Non germinal center B-cell (n-GCB)

C Hans et al, Blood 2004

Borderline cases

B-cell lymphoma, unclassifiable, with featuresintermediate between DLBCL and Burkitt lymphoma

B-cell lymphoma, unclassifiable, with featuresintermediate between DLBCL (PMBL) and classicalHodgkin lymphoma

BURKITT LYMPHOMA

CD10

Mib-1

CD10

MIB1 BCL2

Sporadic Burkitt, Child, EBV -

Hummel, NEJM, 2006

MIB1BCL2

Diffuse Large B-cell Lymphoma or Intermediate BL/DLBC L?

Recommandation WHO

• Look for myc rearrangement

• Look for double hit lymphoma ((bcl2/myc, bcl6/myc, bcl2/bcl6/myc).

• Double hit particularly myc/bcl2 have a worse prognosis compared to pairedDLBCL – May qualify for intermediate features between

BL and DLBCL

• Interest of MYC antibody

Renseignements cliniques

• Homme de 85 ans• Polyadénopathies• Altération de l’état général• Biopsie d’un ganglion cervical droit

(ganglion de 2.5x1.5x1.5 cm)

Lymphome diffus à grandes cellules B de sous type immunohistochimique « centre germinatif »?

Algorithme d’immunohistochimieDangereux!

Ne jamais oublier

CD5

CD5

Cycline D1

FISH : DR Isabelle Radford Weiss, NeckerProbable rearrangement dans les regions 3’ de la cycline D1

Diagnostic proposé (OMS 2008)

• Lymphome à cellules du manteau– Variante agressive

• Sous- type pléomorphe

Proposition d’algorithme pour les lymphomes diffus à grandes cellules B

NOS• CD20• CD5• Mib1

– Si CD5 + • Cycline D1 (clone SP4)+++++

– Si positif, manteau variante agressive– Si négatif, CD10, bcl6, mum1.

– Si CD5 –• CD10, bcl6, mum1.

Page 32

La biopathologie LYSA

Page 33

Objectifs• LYSA un des groupes leader en matière de recherche trans lationnelle

du lymphome en interaction avec CALYM et les autres équipes de

recherche au niveau national

• Développer des biomarqueurs moléculaires et cellulaires, sanguins o u

tissulaires prédictifs ou pronostique d’une réponse aux thérapeutiques

classiques et innovantes .

• Plateforme de pathologie LYSA/LYSARC référence internationale pour la

relecture et la recherche histopathologique sur le lymphome

• Qualité de relecture des cas protocolaires ET réduction des temps de

relecture entre l’inclusion du patient et le rendu du diagnostic final

Page 34

Le LYSA-P

Page 35

LYSA-P actuel• Une équipe dédiée

– 3 techniciens (2,5 ETP)– 2 assistantes administratives (1,5 ETP) – 1 directrice des opérations biologiques et histopathologiques (1 ETP)

• Un réseau d’hématopathologistes français, belges et portugais.• Une réunion mensuelle du bureau du LYSA-P

– Thierry Molina (coord), Antoine Martin, Josette Brière, Diane Damotte, Bettina Fabiani, Christiane Copie Bergman,, Luc Xerri, Philippe Gaulard.

• Des coordonnateurs par pathologie– Folliculaire : L Xerri, B Fabiani– Manteau : A Moreau, D Canioni– Indolents : A Traverse Glehen, C Copie Bergman– DLBCL : J Brière, T Molina– PTCL : P Gaulard, A Martin– Hodgkin : A Traverse Glehen, D Damotte

• Une proximité et une interaction forte avec le département de pathologie et l’unité de Recherche du Pr Gaulard (INSERM /UPEC)

Page 36

LYSAP

• Les techniques actuelles et en développement: – Collecte des prélèvements tumoraux fixés– Collecte des prélèvements tumoraux congelés– Histopathologie : coupe, coloration– Immunohistochimie sur l’automate Ultra de Roche Tissue Diagnostics – Fabrication des puces tissulaires (TMAs)– FISH– Extraction automatisée d’ADN et d’ARN à partir des

prélèvements tumoraux fixés en paraffine ( Siemens)

Page 37

LYSA-Bio

• Département d’Immunologie (MH Delfau)– Etude moléculaire centralisée de la maladie résiduelle

(LYMA)– Etude phénotypique des populations cellulaires

sanguines.• Département d’Hématologie (Gilles Salles)

– Collecte centralisée des prélèvements sanguins et plasmatiques

• DNA thèque : SNIP

• Département d’Hématologie (Th Fest)– Collecte de prélèvements sanguins et plasmatiques

• Bio-Gained.

Page 38

Projets

• Impliquant LYSA/LYSARC, les équipes de recherche institutionnelles et des partenaires académiques et/ou industriels– Exemples :

• Programme BiologiqueDLBCL LNH 2003 : – GHEDI (F Jardin PI) :

» Tissu tumoral Congelé : Transcriptome, CGH, Séquençage microRNA

» Tissu fixé Paraffine : IHC (Hans et autres algorithmes), FISH, QMPSF, Mutations, projets transcriptome,

– GOAL (G Salles PI) : sang : SNIPs• Programme Biologique 075 (T Fest , PI)

» Sang : transcriptome, Dosage sérique biomarqueurs voies oncogéniques cibles thérapeutiques potentielles.

» Tumeur Paraffine : IHC, FISH, (transcriptome paraffine/congel)• Programme monitoring immunologique sanguin(PI MH Delfau)

» Bio-Remarc : (Cytologie, extraction d’ADN)» Bio-Revail : (Cytologie, extraction d’ADN)