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Listeria monocytogenes: sicurezza alimentare edesportazioni

Prof. Antonello Paparella, Dott. Francesco Pomilio

XXIX Convegno Nazionale Italiana VeterinarI Igienisti10-12 Settembre 2019 - Bari

Export

Export italiano è il 20% dell’agroalimentare

Quindi tra 45 e 50 miliardi di euro

È in aumento

L. monocytogenes è uno degli agenti di MTA di maggior interesse

Bari 12 settembre 2019

Export

Criticità rispetto a Lm

• Assenza nella Legislazione UE di catagorie di alimenti RTE ( in EU abbiamo solo pH e Aw)

• Assenza di procedure per la gestione delle non conformità, campioni positivi dall’ambiente di produzione e dai prodotti

• Assenza di un piano di campionamento ufficialenella vendita al dettaglio (non è più vero se consideriamo il Piano Nazionale Integrato), al momento non c’è analisi del rischio relative aiprodotti che mettiamo in commercio


Export

Cosa stiamo facendo

• È in Italia una delegazione ufficiale della CINA per le carni bovine

• Oggi a Bruxelles c’è una riunione del gruppo di lavoro per il nuovo trattato EU e Canada per export di RTE

• Dobiamo cercare di restare al minimo come procedure altrimenti per ciascuno stato nel quale esportiamo dobbiamo mettere in atto un Sistema ad hoc, il che comporta enorme esborso di denaroda parte delle aziende e delle autorità competenti.


Torniamo a Listeria monocytogenes news



Maury et al., 2016

Biodiversità di ceppi

Le nuove possibilità diagnostiche(sequenziamento dell’intero genoma) permettono di ottenere dati relativi allacomposizione nucleotidica del DNA che eranoimpensabili qualche anno fa, ad un costoaccettabile da parte di un laboratorio.


Biodiversità di ceppi

Le differenze nucleotidiche evidenziabili con NGS permettono di identificare e differenziare i ceppi traloro, rendendo più agevole il lavoro degliepidemiologi nell’ambito delle loro attività di indagini• Sorveglianza epidemiologica• Alimentazione dei sistemi di allerta• Indagini nel corso di focolai di MTA• Anche in casi clinici isolati


Biodiversità

Cosa ci interessa valutare

• La diffusione in ambienti diversi

• La provenienza diversa e la presenza nelle diverse nicchie: rifiuti, acque, letame e altri ambienti zootecnici, uccelli

• L’adattamento alle diverse condizioni e la possibilità di divenire persistenti

• L’isolamento nei malati

• L’isolamento nelle industrie alimentari e negli alimenti


Biodiversità

• La presenza in ambienti diversi

• Acquatico

- Acque dolci: laghi, fiumi, piscine e altri luoghi di ricreazione

• Terrestre

- Campi

- Boschi

- Agricoltura

- Effluenti di stalle

- Ambiente antropico

- Industrie alimentari


Biodiversità

• Successivamente quando abbiamo le colonie quali sono i metodi per valutare la biodiversità

• Sicuramente NGS

• Sequenziamento

- cgMLST: schema Pasteur o RIDOM

- SNP analysis

• Presenza di geni relativi a tante proprietà: virulenza resistenza, stress, tolleranza

• Ma non dimentichiamo dei meccanismi che sono sulle membrane


Biodiversità

• Non è vero che una azienda ha solo alcuni ceppi, se sono seguite nel tempo a volte i ceppi entrano e sono eliminati, oppure si aggiungono ad altri già presenti

• Alcuni ceppi sono diffusi e non collegati da un punto di vista epidemiologico oppure non sappiamo se lo sono

• Altri ceppi girano e sono diffusi, magari trasportati dagli uccelli o altri animali che si muovono, persone che si muovono.


Biodiversità

• I ceppi presenti nelle strutture sembrano cambiare poco nel tempo.

• Ad esempio, nel periodo 2013-2015 nel corso di 3 indagini relative a focolai di MTA legate al formaggio a pasta molle, gli alimenti e gli isolati ambientali raccolti dalla stessa struttura sono risultati altamente correlati (≤13 alleli in cgMLST).


Diversità della collezione del LNR Lm



Minimum spanning tree of cgMLST analysis perfomed on dairy processing plant samples (DPP).


Neighbor joining tree of SNPs analysis performed on dairy processing plant samples (DPP).


Minimum spanning tree of cgMLST analysis performed on meat processing plant samples.

Latte


Carne


Grafico CC• 47 CC

• CC1: Bird, Crayfish, Fallow deer, Fox, Red Deer, slugs (A. vulgaris), Wild boar. In five different country. Interesting because is a CC common in human

• CC315: Only in bird. Present in 10 strains among 50 (20% of the total)

• CC37: Badger, Crayfish, Fallow deer, Fox, Hedgehog, Red Deer, slugs (A. vulgaris), Wild boar from 6 different country.

• 19 CC from Finland (bird), 16 from Germany, 19 from Italy and 13 from Norway (slugs)


Evidenza della contaminazione per lungo tempo degli ambienti di lavorazione «one» o più ceppi

Risultati dei tamponi ambientali


ContaminazioneA livello di posto o luogo

(uno o più siti)A livello dell’impianto

Entrata Eliminazione Ricontaminazione o

persistenza?

Azienda Salumificio AltobelloRicerca Listeria monocytogenesPresente

TAMPONI Data prelievo

Reparto di prelievo

Numero

Progressivo

Tipo di prelievo (Matrice

del campione) Tipo di prelievo (sub-area)

Tipo di

superfiCie

07/03/2017 16/05/2017 27/06/2017 26/09/2017 08/11/2017 11/04/2018

Totale

complessi

vo

2 Macchinari Confezionatrice NC 1 1 GX6A12.0047 GX6A16.0024

5 Attrezzatura Tavolo di confezionamento NC 1 1 GX6A12.0349 GX6A16.0255

6 Impianto Ruota/piedini/Sostegni NC 1 1 GX6A12.0140 GX6A16.0002

9 Materiale per la pulizia Tira acqua NC 1 1 GX6A12.0349 GX6A16.0255

19 Impianto Cella frigorifera NC 1 1 GX6A12.0349 GX6A16.0255

12 Impianto Lavandino NC 1 1 GX6A12.0103 GX6A16.0002

13 Impianto Lavandino NC 1 1 2 GX6A12.0349 GX6A16.0255

23 Utensile Coltello C 1 1 GX6A12.0349 GX6A16.0255

24 Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 2 GX6A12.0349 GX6A16.0255 GX6A12.0048 GX6A16.0025

29 Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggioNC 2 1 1 4 GX6A12.0188 GX6A16.0002 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0104 GX6A16.0002 GX6A12.0062 GX6A16.0048

30 Abbigliamento Stivali/Calzari/Scarpe NC 1 1 2 GX6A12.0143 GX6A16.0048 GX6A12.0001 GX6A16.0007

34 Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 2 GX6A12.0349 GX6A16.0255 GX6A12.0001 GX6A16.0007

31 Macchinari Scalda sugna C 1 1 1 3 GX6A12.0103 GX6A16.0002 GX6A12.0104 GX6A16.0002 GX6A12.0349 GX6A16.0255

32 Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggioNC 1 1 1 1 1 5 GX6A12.0140 GX6A16.0002 GX6A12.0104 GX6A16.0002 GX6A12.0349 GX6A16.0255 GX6A12.0103 GX6A16.0002

33 Impianto Lavandino NC 1 1 2 GX6A12.0349 GX6A16.0255

Totale complessivo 8 5 5 5 4 1 29

PRODOTTI

Listeria monocytogenes 16/05/2017 Soppressata Metà stagionatura GX6A12.0050 GX6A16.0007

Listeria monocytogenes 27/06/2017 Prosciutto crudo Fine stagionatura GX6A12.0349 GX6A16.0255

Listeria monocytogenes 27/06/2017 Soppressata Metà stagionatura GX6A12.0349 GX6A16.0255 GX6A12.0001 GX6A16.0007

Listeria monocytogenes 25/09/2017 Salsiccia Metà stagionatura GX6A12.0393 GX6A16.0273



Confezionamento

Impianto

Insacco

Sugnatura

Post-disinfezioneDurante lavorazione

Salumificio Alto

Salumificio

Alto

2 principali cluster presenti in quasi tutte le sessioni e in tutti i

reparti.

Un cluster è coincidente con il pulsotipo GX6A12.0349-

GX6A16.0255 che si riscontra in tutte le fasi di produzioni anche

se non legato a un unico punto di prelievo (contaminante

ambientale?) e anche nei prodotti.

Un secondo cluster è rappresentato da un insieme di pulsotipi:

GX6A12.0104 -GX6A16.0002

GX6A12.0140-GX6A16.0002

GX6A12.0103-GX6A16.0002

Assieme si riscontrano in modo costante nei vari prelievi sptt nel

reparto sugnatura, nel pozzetto di scarico delle acque.


Azienda Caseificio FlòRicerca Listeria monocytogenes Presente

TAMPONI Data prelievoTotale

complessivo

Reparto di prelievo

Numero

Progressivo

Tipo di prelievo (Matrice del

campione) Tipo di prelievo (sub-area)

Tipo di

superfiCie07/03/2017 16/05/2017 20/06/2017 26/09/2017 08/11/2017 11/04/2018



24 Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 GX6A12.0005 GX6A16.0009


30 Abbigliamento Stivali/Calzari/Scarpe NC 1 1 1 1 4 GX6A12.0005 GX6A16.0009


Confezionamento 4 Utensile Carrello NC 1 1 GX6A12.0005 GX6A16.0009

7 Impianto Maniglia porta NC 1 1 GX6A12.0005 GX6A16.0009

9 Materiale per la pulizia Tira acqua NC 1 1 1 3 GX6A12.0005 GX6A16.0009

16 Impianto Cella frigorifera C 1 1 GX6A12.0005 GX6A16.0009


29 Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggio NC 1 1 1 1 1 1 6 GX6A12.0005 GX6A16.0009

32 Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggio NC 1 1 2 GX6A12.0005 GX6A16.0009 GX6A12.0349 GX6A16.0255


PRODOTTI

Listeria monocytogenes 25/09/2017 Mozzarella Fine stagionatura GX6A12.0005 GX6A16.0009

Listeria monocytogenes 08/11/2017 Mozzarella Fine stagionatura nd nd

Listeria monocytogenes 12/04/2018 Mozzarella Fine stagionatura GX6A12.0005 GX6A16.0009


Coagulazione

Impianto

Caseificio

FioreUn unico cluster, identificabile con il pulsotipo

GX6A12.0005-GX6A16.0009, presente in tutti

i reparti di produzione e persistente nel

tempo. In particolare risulta presente in

maniera costante in alcuni punti di prelievo.


Azienda Caseificio Del GiudiceRicerca Listeria monocytogenes Presente


Reparto di prelievo

Numero

Progressivo

Tipo di prelievo

(Matrice del

campione)

Tipo di prelievo

(sub-area)

Tipo di

superfiCie

14/03/2017 08/05/2017 12/06/2017 10/10/2017 04/12/2017 15/05/2018 Totale

complessivo

19 Impianto Cella frigorifera NC 1 1 1 1 1 5 GX6A12.0002 GX6A16.0007

31 Impianto Cella frigorifera NC 1 1 1 1 1 5 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0373 GX6A16.0261

32 Impianto Cella frigorifera NC 1 1 1 1 1 5 GX6A12.0002 GX6A16.0007


Prodotti Listeria Assente


Impianto

Caseificio

Giudicato

Un unico cluster, identificabile con i due pulsotipi rilevati, presente in

maniera costante nella cella frigorifera dell’impianto.


Azienda Salumificio Euro cash Ricerca Listeria monocytogenesPresente


Reparto di prelievo

Numero

Progressivo



Tipo di

superfiCie

22/03/2017 07/06/2017 12/07/2017 16/10/2017 29/11/2017 23/05/2018

Totale

complessi

vo

Confezionamento 1 Macchinari Confezionatrice NC 2 2 GX6A12.0026 GX6A16.0072 GX6A12.0050 GX6A16.0007

7 Impianto Maniglia porta NC 1 1 GX6A12.0001 GX6A16.0007

9 Materiale per la pulizia Tira acqua NC 1 1 1 3 GX6A12.0026 GX6A16.0072



11 Materiale per la pulizia Tubo acqua NC 1 1 GX6A12.0294 GX6A16.0226


13 Impianto Lavandino NC 1 1 2 GX6A12.0026 GX6A16.0072 GX6A12.0050 GX6A16.0007

22 Utensile Vassoio C 1 1 2 GX6A12.0001 GX6A16.0007



26 Macchinari Impastatrice C 2 1 3 GX6A12.0001 GX6A16.0007 GX6A12.0026 GX6A16.0209 GX6A12.0050 GX6A16.0007

27 Macchinari Insaccatrice C 1 1 2 GX6A12.0050 GX6A16.0007 GX6A12.0294 GX6A16.0226

28 Macchinari Tritacarne C 1 1 GX6A12.0001 GX6A16.0007

29 Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggioNC 1 1 1 3 GX6A12.0026 GX6A16.0072

30 Abbigliamento Stivali/Calzari/Scarpe NC 1 1 1 3 GX6A12.0367 GX6A16.0001 GX6A12.0026 GX6A16.0072 GX6A12.0050 GX6A16.0007

31 Impianto Pavimento NC 1 1 2 GX6A12.0001 GX6A16.0007 GX6A12.0026 GX6A16.0072


PRODOTTI

Listeria monocytogenes 22/03/2017 Filetto Fine stagionatura GX6A12.0026 GX6A16.0072

Listeria monocytogenes 22/03/2017 Salsiccia Fine stagionatura GX6A12.0001 GX6A16.0007






Impianto

Insacco

Durante lavorazione Post-disinfezione

Salumificio

Cassa


Salumificio Cassa

Due cluster.

Il primo identificabile con i pulsotipi:

GX6A12.0001-GX6A16.0007

GX6A12.0050-GX6A16.0007 (per quest’ultimo pulsotipo

un isolato risulta differente dagli altri e si tratta di un

isolato rilevato nella macchina confezionatrice assieme

ad un altro pulsotipo [GX6A12.0026-GX6A16.0072]). Il

cluster risulta presente in più sessioni di prelievo e in più

reparti, con l’eccezione del confezionamento. Nei prodotti

è stato riscontrato in una salsiccia.

Il secondo cluster è identificabile con i pulsotipi:

GX6A12.0026-GX6A16.0072

GX6A12.0026-GX6A16.0209

GX6A12.0294-GX6A16.0226

GX6A12.0050-GX6A16.0007 (un unico isolato rilevato

nella macchina confezionatrice assieme a GX6A12.0026-

GX6A16.0072).

Questo secondo cluster è presente in tutte le sessioni di

prelievo e in tutti i reparti di produzione, e si riscontra in

maniera pressoché costante nei prodotti finali.


Azienda Salumificio PepponeRicerca Listeria monocytogenesPresente


Durante lavorazione

Reparto di prelievo

Numero

Progressivo



Tipo di

superfiCie22/03/2017 15/05/2017 20/06/2017 18/10/2017 27/11/2017 23/05/2018

Totale

complessivo

3 Macchinari Bilancia NC 1 1 GX6A12.0362 GX6A16.0127

4 Utensile Carrello NC 1 1 2 GX6A12.0103 GX6A16.0002 GX6A12.0362 GX6A16.0127

Cottura 35 Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 GX6A12.0232 GX6A16.0048

9 Materiale per la pulizia Tira acqua NC 1 1 1 1 4 GX6A12.0164 GX6A16.0007 GX6A12.0050 GX6A16.0007 GX6A12.0362 GX6A16.0127




22 Utensile Vassoio C 1 1 GX6A12.0003 GX6A16.0288

23 Utensile Coltello C 1 1 GX6A12.0362 GX6A16.0127

24 Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 2 GX6A12.0362 GX6A16.0127


26 Macchinari Impastatrice C 1 1 1 3 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0164 GX6A16.0007 GX6A12.0050 GX6A16.0007

30 Abbigliamento Stivali/Calzari/Scarpe NC 1 1 1 3 GX6A12.0362 GX6A16.0127 GX6A12.0144 GX6A16.0127 GX6A12.0002 GX6A16.0007

32 Macchinari Impastatrice C 1 1 2 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0050 GX6A16.0005

33 Macchinari Nastro C 1 1 GX6A12.0050 GX6A16.0007



PRODOTTI

Listeria monocytogenes22/03/2017 Salame Fine stagionatura GX6A12.0364 GX6A16.0040



Listeria monocytogenes15/05/2017 Salame Metà stagionatura GX6A12.0050 GX6A16.0007

Listeria monocytogenes15/05/2017 Salame Metà stagionatura GX6A12.0050 GX6A16.0007



Confezionamento

Impianto

Insacco

Durante lavorazionePost-disinfezione

Salumificio Giuseppe


Salumificio Giuseppe

Tre cluster principali.

Il primo cluster è identificabile con i pulsotipi:

GX6A12.0002-GX6A16.0007

GX6A12.0050-GX6A16.0007 (un unico isolato rilevato il

27/11/2017 nell’impastatrice del reparto di insaccatura e

differisce in parte dagli altri isolati del medesimo

pulsotipo, tutti rilevati in altri reparti e punti di prelievo in

sessioni di prelievo precedenti). Il medesimo pulsotipo si

ritrova anche nei prodotti (salame a metà stagionatura).

Secondo cluster identificabile con i pulsotipi:

GX6A12.0050-GX6A16.0007

GX6A12.0164-GX6A16.0007

GX6A12.0050-GX6A16.0005

GX6A12.0020-GX6A16.0005

Complessivamente gli appartenenti a questo cluster sono

stati rilevati durante le varie sessioni di prelievo anche se

non in modo costante su singoli punti di prelievo.

Terzo cluster rappresentato dai pulsotipi:

GX6A12.0362-GX6A16.0127

GX6A12.0144-GX6A16.0127

Complessivamente gli appartenenti a questo cluster sono

stati rilevati durante le varie sessioni di prelievo e nei vari

reparti di produzione.


Salumificio Sorrentino

Data prelievo

Tipo di prelievo (Matrice del

campione) Tipo di prelievo (sub-area)

Tipo di

superfiCie20/03/2017 23/05/2017 18/07/2017 11/10/2017 28/11/2017 24/05/2018

Totale

complessivo

Macchinari Bilancia NC 1 1 GX6A12.0140 GX6A16.0002

Attrezzatura Armadio/Scaffale/Cassettiera NC 1 1 GX6A12.0140 GX6A16.0002

Attrezzatura Bidone rifiuti NC 1 1 GX6A12.0047 GX6A16.0024

Materiale per la pulizia Tira acqua NC 1 1 1 2 2 1 8 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0140 GX6A16.0002 GX6A12.0062 GX6A16.0048

Impianto Giunzione pavimento parete NC 1 1 1 3 GX6A12.0047 GX6A16.0024

Impianto Cella frigorifera C 1 1 2 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0050 GX6A16.0007

Impianto Cella frigorifera NC 1 1 2 GX6A12.0140 GX6A16.0002 GX6A12.0034 GX6A16.0007

Impianto Cella frigorifera NC 1 1 2 GX6A12.0140 GX6A16.0002 GX6A12.0001 GX6A16.0007

Materiale per la pulizia Tubo acqua NC 1 1 2 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0140 GX6A16.0002

Impianto Lavandino NC 1 1 2 GX6A12.0050 GX6A16.0007 GX6A12.0391 GX6A16.0286

Impianto Lavandino NC 1 1 GX6A12.0108 GX6A16.0268

Utensile Coltello C 1 1 GX6A12.0141 GX6A16.0078

Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 1 1 4 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0062 GX6A16.0048 GX6A12.0047 GX6A16.0024

Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 1 1 1 3 GX6A12.0190 GX6A16.0007 GX6A12.0062 GX6A16.0048 GX6A12.0143 GX6A16.0048

Macchinari Impastatrice C 1 1 2 GX6A12.0002 GX6A16.0040 GX6A12.0050 GX6A16.0007

Macchinari Insaccatrice C 1 1 2 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0062 GX6A16.0048

Macchinari Tritacarne C 1 1 GX6A12.0194 GX6A16.0151

Abbigliamento Stivali/Calzari/Scarpe NC 1 1 1 1 4 GX6A12.0002 GX6A16.0007 GX6A12.0144 GX6A16.0005 GX6A12.0062 GX6A16.0048 GX6A12.0103 GX6A16.0002

Impianto Pozzetto di scarico delle acque di lavaggio NC 2 3 1 2 1 2 11 GX6A12.0143 GX6A16.0048 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0148 GX6A16.0100 GX6A12.0062 GX6A16.0048

Attrezzatura Tavolo di lavorazione C 2 2 1 1 1 1 8 GX6A12.0143 GX6A16.0048 GX6A12.0190 GX6A16.0007 GX6A12.0001 GX6A16.0007 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0062 GX6A16.0048

Impianto Pavimento NC 1 1 2 1 1 2 8 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0001 GX6A16.0007 GX6A12.0062 GX6A16.0048 GX6A12.0164 GX6A16.0007

Impianto Cella stagionatura NC 1 1 2 GX6A12.0047 GX6A16.0024 GX6A12.0143 GX6A16.0048

7 17 14 11 4 7 71

Salame Metà stagionatura GX6A12.0062 GX6A16.0048 GX6A12.0001 GX6A16.0007

Salame Fine stagionatura GX6A12.0001 GX6A16.0007

Ventricina Metà stagionatura GX6A12.0103 GX6A16.0002


Salame Metà stagionatura GX6A12.0165 GX6A16.0011


Durante lavorazione Post-disinfezione

Salumificio

Sorre


Diversi cluster, di cui due principali.

Primo cluster rappresentato da un unico pulsotipo:

GX6A12.0047-GX6A16.0024

Gli isolati di questo cluster sono presenti costantemente

nel corso delle diverse sessioni di prelievo e nei vari

reparti di produzione. In particolare, sono presenti quasi

costantemente in alcuni punti di prelievo quali un pozzetto

di scarico delle acque di lavaggio del reparto di

insaccatura e su un tira acqua utilizzato nei locali di

produzione.

Un secondo cluster principale è rappresentato dai

pulsotipi:

GX6A12.0062-GX6A16.0048

GX6A12.0143-GX6A16.0048

Gli isolati di questo cluster sono presenti costantemente

nel corso delle diverse sessioni di prelievo e in vari reparti

di produzione, in particolare nel reparto di insaccatura.

Salumificio

Sorre


Utilizzo della diversità

Laboratorio• A migliorare le performance del laboratorio che esegue le

prove



Studi epidemiologici

• A giustificare la necessità di isolare più ceppi nei campioni esaminati (alimenti e ambienti di lavorazione degli alimenti) per fornire un quadro che rispecchia maggiormente la realtà

• Identificare i ceppi presenti in una azienda e determinarne meglio le caratteristiche genetiche, per poi verificare che queste siano espresse.



Studi epidemiologici

• Di costruire database in grado di identificare l’azienda di origine dei ceppi

• A migliorare la capacità di identificare i cluster prima e più rapidamente al fine di permettere di risolvere i focolai più rapidamente.

• Identificare e investigare i focolai per ridurre il numero dei focolai e dei malati


Quindi a cosa servono questi

studi

Pulizia e disinfezione• Studiare la produzione di biofilm dei ceppi diversi tra loro

• Ottimizzare l’uso dei disinfettanti e/o battericidi efficaci in azienda, modificare i tempi di contatto.

• Ottimizzare i processi di pulizia e disinfezione nelle aziende



Salva il mondo dalla plastica


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Research project on persistence

Persistence Resistance

Long time detection

TK

MIC

Biofilm production

Were

When


listeria monocytogenes: sicurezza alimentare ed …aivi.it/uploads/documenti/76985499.pdflisteria...

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