lap.resmi gc (analisis farmasi)

8/20/2019 Lap.resmi GC (Analisis Farmasi)

1/33

A. TUJUAN

1. Dapat memahami prinsip kerja destilasi uap

2. Dapat menentukan kadar eugenol yang terkandung dalam bunga kering dengan

menggunakan kromatografi gas

B. PRINSIP

1. Destilasi Uap

Destilasi adalah teknik untuk memisahkan larutan ke dalam masing – masing

komponennya. Prinsip destilasi uap didasarkan pada perbedaan titik didih komponen zatnya.

Destilasi uap dapat digunakan untuk memurnikan senyawa – senyawa yang memiliki titik

didih berbeda sehingga dapat dihasilkan senyawa yang memiliki kemurnian yang tinggi.

2. Partisi

Tujuan melakukan partisi adalah untuk melihat distribusi dari eugenol pada dua fase

yang berbeda kepolarannya. Prinsipnya dengan pemisahan oleh beberapa lapisan.

. Pemekatan

Prinsip pada tahap pemekatan ini adalah ekstrak yang diperoleh didestilasi kembali.

Tujuannya untuk memperoleh kandungan eugenol murni dari tahap!tahap preparasi sampel

sebelumnya.

". Determinasi

Determinasi merupakan tahap pengukuran menggunakan alat kromatografi gas#$%.

Prinsip dari alat $% adalah mendeteksi senyawa!senyawa yang berupa gas& dengan ruang

lingkup yaitu sampel yang mudah menguap dan tidak rusak karena panas.

C. LATAR BELAKANG TEORITIK 'romatografi gas merupakan teknik pemisahan dimana solut – solut yang mudah

menguap (dan stabil terhadap panas) bermigrasi melalui kolom yang mengandung fase diam

dengan suatu ke*epatan yang tergantung pada distribusinya. Pada umumnya solute akan

terelusi pada peningkatan titik didihnya& ke*uali jika ada interaksi khusus antara solute dengan

fase diam. Pemisahan pada kromatografi gas didasarkan pada titik didih suatu senyawa

dikurangi dengan semua interaksi yang mungkin terjadi antara solute dengan fase diam. +ase

gerak yang berupa gas akan mengelusi solute dari ujung kolom lalu menghantarkannya ke

dete*tor. Penggunaan suhu yang meningkat bertujuan untuk menjamin solute akan menguap

dan karenanya akan *epat terelusi (,ohman-$andjar& 2/).


2/33

0ptimasi pada kromatografi gas diantaranya optimasi waktu retensi dimana langkah!

langkahnya yaitu suhu oen di set pada suhu tertentu lalu di injek sejumlah standard ditunggu

sampai pun*ak larutan baku keluar dan di*atat waktu retensinya. Dilakukan hal yang sama

dengan menggunakan sampel& serta di*atat pula waktu retensinya. 'emudian dibandingkan

pun*ak kromatogram sampel dengan standar.

0ptimasi uhu Terprogram dimana dengan menaikkan suhu dari suhu tertentu ke suhu

tertentu yang lain dengan laju yang diketahui dan terkendali dalam waktu tertentu& dan

optimasi ini mampu meningkatkan resolusi komponen!komponen dalam suatu *ampuran yang

mempunyai titik didih pada kisaran yang luas (,ohman& 212).

3alidasi metode kromatografi gas dilakukan dengan metode pendekatan dengan analisis

bahan rujukan terstandar (,4) dan dapat dibandingkan antara sampel dengan kura baku

dimana dibuat larutan baku standar dengan jumlah konsentrasi tertentu (,ohman& 212)

ifat fisika dan kimia bahan!bahan yang digunakan 5

a. Dikloromethan

TAMPILAN: 6ernih& *airan tak berwarna

BENTUK FISIK: %airan

BERAT

MOLEKUL:

7".8"

STRUKTUR

KIMIA:

%92%l2

BAU: ,ingan&4anis (sama seperti %hloroform)

BERAT JENIS

(water = 1.0):

1.

KELARUTAN

ALAM AIR

(!"!"t #):

1.2 gm# 1gm : //;+ (2


3/33

Ta$*+a, 'a, !e,t&- */*-: %@ir.

Ba&: Tidak tersedia.

Ra/a: Tidak tersedia.

Berat M"+e-&+: 1=".2 g#mol

ar,a: Tak berwarna.

$% (1# $a'ata,a*r): Tidak Tersedia.

T*t*- *'*2: 2


4/33

Ba&: edikit.

Ra/a: aline.

Berat M"+e-&+:


5/33

'eterangan 'omponen pada alat kromatografi gas 5

a) Ta,3-* $e!awa 3a/

+ungsi gas pembawa adalah mengangkut injeksi dalam kolom ke

detektor.Ferma*am!ma*am gas telah digunakan dalam '$%& misalnya& hydrogen&

helium& helium&memungkinkan difusi yang lebih longitudinal dari solute& yang

*enderung menurunkan efisiensi kolom& terutama pada laju arus yang lebih rendah.

4aka nitrogen mungkin merupakan suatu pilihan yang lebih baik untuk gas!pembawa

agar dapat dilakukan suatu pemisahan yang benar!benar sukar.

Kara-ter*/t*- 3a/ $e!awa 2*'r"3e,4 2e+*&4'a, ,*tr"3e,

'riteria gas pembawa antara lain 5

! Fersifat inert dan kemurniannya tinggi

! Tekanan berkisar antara 1 –


6/33

! Disesuaikan dengan dete*tor

!) Pe,3at&r A+*ra, 'a, Pe,3at&r Te-a,a,

pengatur atau pengurang Drager. Drager bekerja baik pada 2&<

atm& dan mengalirkan massa al iran dengan tetap. Tekanan lebih pada

tempat masuk dari kolomdiperlukan untuk mengalirkan injeksi masuk ke

d alam k olom. Eni d iseb ab kan& k en ya taan lu bang akh ir d ar i k olom

biasanya mempunya i tekanan atmosfir biasa. 6uga oleh kenya taan

bahwa suhu

kolom adalah tetap& yang diatur oleh thermostat& maka aliran gas tetap yang masuk

kolom akan tetap juga.

5) Te$at *,6e-/*

ejumlah ke*il sampel yang akan dianalisis diinjeksikan pada mesin

menggunakansemprit ke*il. 6arum semprit menembus lempengan karet tebal

(Bempengan karet ini disebut septum) yang mana akan mengubah bentuknya kembali

se*ara otomatis ketika semprit ditarik keluar dari lempengan karet tersebut.Enjektor

berada dalam oen yang mana temperaturnya dapat dikontrol. 0en tersebut *ukup

panas sehingga sampel dapat mendidih dan diangkut ke kolom oleh gas pembawa

misalnya helium atau gas lainnya. 6umlah injeksi yang disuntikan ke dalam aliran fase

gerak sekitar < GB Untuk kolom analitik memerlukan antara &1!1 GB injeksi *air

sedangkan kolom analitik preparatif memerlukan antara 2!1GB. Enjeksi

berbentuk gas dapat dimasukan dengan bantuan alat suntik gas (gas!tight syringe)

$ambar . Enjektor ports


7/33

') K"+"

'olom merupakan tempat terjadinya proses pemisahan. Untuk kromatografi gas

dikenal dua jenis kolom yaitu jenis pak ( pa*ked *olumn) dan jenis terbuka(open

tubular *olumn)

K"+" $a- ($a5-e' 5"+&,)

'olom pak terbuat dari stainless steel atau gelas dengan garis tengah !=mm

dan panjang 1!< m. 'olom diisi dengan serbuk zat padat halus atau zat padat sebagai zat pendukung

yang dilapisi zat *air kental yang sukar menguapsebagai fasa diam. 6enis kolom pak ini lebih

disukai untuk tujuan preparatif karena dapat menampung jumlah injeksi yang banyak.

'olom pak

K"+" ter!&-a ("$e, t&!&+ar 5"+&,)

'olom terbuka (kolom kapiler) lebih ke*il dan lebih panjang daripadakolom

pak. Diameter kolom terbuka berkisar antara &1!&/ mm dan panjangnyaberkisar

antara 1

penyimpanan& biasanya kolom terbuka dibentuk spiral dengangaris tengah 17 *m

'olom terbuka

Tiga faktor yang mempengaruhi resolusi 5 efisiensi& selektifitas danretensi.

Dengan kolom terbuka& faktor!faktor tesebut akan bertambah. 6adi penggunaan kolom

terbuka memberikan resolusi yang lebih tinggi daripadapenggunaan kolom pak.

'euntungan lain penggunaan kolom terbuka adalahwaktu analisis lebih pendek daripada

penggunaa kolom pak karena fasa gerak tidak mengalami hambatan ketika melewati kolom.


8/33

e) O7e, K"+"

'olom terletak didalam sebuah oen dalam instrumen. uhu oen harus diatur

dan sedikit dibawah titik didih sampel. 6ika suhu diset terlalu tinggi& *airan fase diam

bisa teruapkan& juga sedikit sampel akan larut pada suhu tinggi dan bisa mengalir

terlalu *epat dalam kolom sehingga menjadi terpisah

) ete-t"r

Detektor berfungsi sebagai pendeteksi komponen!komponen yang telah

dipisahkan dari kolom se*ara terus!menerus& *epat& akurat& dan dapat melakukan pada

suhu yang lebih tinggi. +ungsi umumnya mengubah sifat!sifat molekul dari senyawa

organik menjadi arus listrik kemudian arus listrik tersebut diteruskan ke rekorder

untuk menghasilkan kromatogram

. ALAT AN BA%AN

• @lat5

o Babu alas bulat

o Faskom

o $elas beker

o >rlenmeyer

o %orong pisah

o Pendingin liebigh

o 9eating mantel

o @dapter *laisen

• Fahan5

o Funga # daun *engkeh

o >ugenol

o @kuades

o Fatu didih

o Aa%l

o Diklormetan

o Aatrium sulfat eHi**

o $%


9/33

o


10/33

Diketahui fase gerak yang digunakan gas A2& t, satandar >ugenol 1


11/33

a. Penimbangan *engkeh

ampel F (g) ampel D (g) ampel > (g)

Ferat wadah =1. (g)

Ferat kertas .2/ &2/ &2=

Ferat kertas J Aa%l


12/33

e. eri <

1 ml H 1. ? 1 ml H %2

%2 ? 1 ppm

'onsentrasi(ppm) ,espon(@U%)

2 .211

" ."/=

= .=81

7 .7

1 1.1


13/33

? .


14/33

D &88 8"// 178 &" "7/ 7/1/< ".7/

I ,e*oery @ ? (bobot @!bobot>)#bobot eugenol adisi @ H 1I

? (.7/mg!".7/mg)#1mg H 1I

? !" I

I ,e*oery F ? (bobot F!bobot>)#bobot eugenol adisi F H 1I

? (/./mg!".7/mg)#1mg H 1I

? 2.< I

I ,e*oery % ? (bobot %!bobot>)#bobot eugenol adisi % H 1I

? (88.)#bobot eugenol adisi D H 1I

? (8".//mg!".7/mg)#1mg H 1I

?


15/33

I kesalahan determinasi ? 1 I ! I re*oery D) – (1 I ! I re*oery >)

? (1 I !


16/33

dimana adanya proses penguapan *airanoleh adanya panas& kemudian dikondensasikan

dengan adanya bantuan dari kondensor.

Dalam praktikum ini& minyak *engkeh didapatkan dari butiran *engkeh dengandestilasi uap. enyawa eugenol diisolasi dari minyak *engkeh. Dengan menggunakan gas

chromatography maka dapat ditunjukkan keefektifan metode ekstraksi yang digunakan dalam

mengisolasi senyawa eugenol.

'romatografi $as merupakan suatu teknik spektroskopi yang menggunakan prinsip

pemisahan *ampuran berdasarkan perbedaan ke*epatan migrasi komponen!komponen

penyusunnya.'romatografi gas biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang

terdapat pada *ampuran gas dan juga menetukan konsentrasi suatu senyawa dalam fase

gas.Penggunaan kromatografi gas dapat dipadukan dengan menggunakan spektroskopi

massa.Paduan keduanya dapat menghasilkan data yang lebih akurat dalam pengidentifikasian

senyawa yang dilengkapi dengan struktur molekulnya.'romatografi gas pada dasarnya mirip

dengan destilasi fraksional karena kedua proses memisahkan komponen dari *ampuran

terutama berdasarkan pada perbedaan titik didih.Aamun& destilasi fraksional biasanya

digunakan untuk memisahkan komponen!komponen dari *ampuran pada skala besar&

sedangkan $% digunakan pada skala yang lebih ke*il(dalam mikro).

$% menggunakan gas sebagai gas pembawa#fase geraknya. @da 2 jenis kromatografi

gas& yaitu 5

1. 'romatografi gas–*air ('$%) yang fase diamnya berupa *airan yang diikatkan pada suatu

pendukung sehingga solut akan terlarut dalam fase diam.

2. 'romatografi gas!padat ('$P)& yang fase diamnya berupa padatan dan kadang!kadang

berupa polimerik.

+ase Diam Dan +ase $erak Pada 'romatografi $as

1) +ase Diam

Pemilihan fasa diam juga harus disesuaikan dengan sampel yang akan dipisahkan.

Untuk sampel yang bersifat polar sebaiknya digunakan fasa diam yang polar. Fegitupun untuk

sampel yang nonpolar& digunakan fasa diam yang nonpolar agar pemisahan dapat berlangsung

lebih sempurna.

+ase diam pada 'romatografi $as biasanya berupa *airan yang disaputkan pada bahan

penyangga padat yang lembab& bukan senyawa padat yang berfungsi sebagai permukaan yang


17/33

menyerap (kromatografi gas!padat). istem gas!padat telah dipakai se*ara luas dalam

pemurnian gas dan penghilangan asap& tetapi kurang kegunaannya dalam kromatografi.

Pemakaian fase *air memungkinkan kita memilih dari sejumlah fase diam yang sangat

beragam yang akan memisahkan hampir segala ma*am *ampuran.+ase diam yang digunakan

pada praktikum kali ini adalah

2) +ase $erak

Disebut juga sebagai gas pembawa. +ungsi utamanya adalah untuk membawa uap

analit melalui system kromatografi tanpa berinteraksi dengan komponen!komponen sampel.

@dapun syarat!syarat fase gerak pada kromatografi gas yaitu sebagai berikut5

! Tidak reaktif

! 4urni (agar tidak mempengaruhi dete*tor)

! Dapat disimpan dalam tangki tekanan tinggi. Fiasanya mengandung gas helium& nitrogen&

hydrogen& atau *ampuran argon dan metana

! Pemilihan gas pembawa yang digunakan tergantung dari detektor apa yang digunakan

+ase gerak yang digunakan pada praktikum kali ini adalah gas nitrogen.

'omponen alat 5

1. Tabung gas pembawa

Ferfungsi menampung gas pembawa yang akan digunakan saat mengaliri kolom dan

membawa sampel yang akan dideteksi dengan gas kromatografi. Ferma*am!ma*amgas telah digunakan dalam '$%& misalnya& hydrogen& helium& helium&memungkinkan


18/33

difusi yang lebih longitudinal dari solute& yang *enderung menurunkan efisiensi

kolom& terutama pada laju arus yang lebih rendah. 4aka nitrogen mungkin merupakan

suatu pilihan yang lebih baik untuk gas!pembawa agar dapat dilakukan

suatu pemisahan yang benar!benar sukar.

Kara-ter*/t*- 3a/ $e!awa 2*'r"3e,4 2e+*&4'a, ,*tr"3e,

'riteria gas pembawa yang baik 5

• Tidak inert dengan sampel ataupun fase diam pada kolom

• 4urah

• 4udah didapatkan• esuai dengan dete*tor yang digunakan

(Fassett&188").

2. +low *ontroller

4engatur aliran dan tekanan gas pembawa yang digunakan pada alat. elain itu flow

*ontroller berfungi menjaga efisiensi pemakaian gas pembawa yang digunakan.

. Tempat injeksi

Dalam pemisahan dengan $B% *uplikan harus dalam bentuk fase uap. $as dan uap

dapat dimasukkan se*ara langsung. Tetapi kebanyakan senyawa organik berbentuk

*airan dan padatan. 9ingga dengan demikian senyawa yang berbentuk *airan dan

padatan pertama!tama harus diuapkan. Eni membutuhkan pemanasan sebelum masuk

dalam kolom. uhu pada inje*tor akan lebih tinggi dari suhu kolom& hal ini

dilakukan agar sampel yang digunakan benar benar berbentuk uap dan di perhatikan

suhunya agar tidak terdegradasi akibat suhu yang berlebihan.

". 'olom

'olom merupakan tempat terjadinya proses pemisahan karena di dalamnya terdapat

fase diam. @da jenis kolom pada $% yaitu kolom kemas (pa*king *olumn) dan

kolom kapiler (*apillary *olumn) dan kolom preparatie (preparatie *olumn).

! 'olom pak (pa*ked *olumn)


19/33

'olom pak terbuat dari stainless steel atau gelas dengan garis tengah !=mm

dan panjang 1!< m. 'olom diisi dengan serbuk zat padat halus atau zat padat sebagai zat pendukung

yang dilapisi zat *air kental yang sukar menguapsebagai fasa diam. 6enis kolom pak ini lebih

disukai untuk tujuan preparatif karena dapat menampung jumlah injeksi yang banyak.

K"+" $a-

! 'olom terbuka (open tubular *olumn)

'olom terbuka (kolom kapiler) lebih ke*il dan lebih panjang daripadakolom

pak. Diameter kolom terbuka berkisar antara &1!&/ mm dan panjangnyaberkisar

antara 1

penyimpanan& biasanya kolom terbuka dibentuk spiral dengangaris tengah 17 *m

K"+" ter!&-a

Tiga faktor yang mempengaruhi resolusi 5 efisiensi& selektifitas danretensi.

Dengan kolom terbuka& faktor!faktor tesebut akan bertambah. 6adi penggunaan kolom

terbuka memberikan resolusi yang lebih tinggi daripadapenggunaan kolom pak.

'euntungan lain penggunaan kolom terbuka adalahwaktu analisis lebih pendek daripada

penggunaa kolom pak karena fasa gerak tidak mengalami hambatan ketika melewati kolom.


20/33

kromatografi adalah suatu sensor elektronik yang berfungsi mengubah sinyal gas

pembawa dan komponen!komponen di dalamnya menjadi sinyal elektronik. inyal

elektronik detektor akan sangat berguna untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif

terhadap komponen!komponen yang terpisah di antara fase diam dan fase gerak.

! Feberapa sifat detektor yang digunakan dalam kromatografi gas adalah sebagai

berikut 5

6enis

Detektor

6enis ampel Fatas

Deteksi

'e*epatan @lir (ml#menit)

$as

Pembawa

92 Udara

9antaran

panas

enyawa umum

Eonisasi

nyawa

9idrokarbon 1!1 pg 2!= != 2! Aitrogen!

fosfor

enyawa

nitrogen organik

dan fospat

organi*

&1!1 g 2!" 1!< /!1

+otometri

nyala (8

nm)

enyawa!

senyawa sulfur

1!1 pg 2!"


21/33

>misi atom esuai untuk

elemen apapun

&1!2 pg =!/ !

/. ,e*order

,e*order berfungsi untuk mengartikan signal dari detektor menjadi kromatogram

sesuai dengan hasil deteksi alat.

(Qatson&28).

ESTILASI UAP

Bangkah pertama yang dilakukan adalah menimbang sampel berupa serbuk bunga

*engkeh kering yang sudah halus seberat 2gram sebanyak ).kemudian

sampel dimasukkan ke dalam labu alas bulat dan ditambahkan aRuadest.@Ruadest

ditambahkan ke B@F&aRuadest sebagai pembawa eugenol karena tekanannya lebih tinggi dari

eugenol sehingga eugenol akan terbawa bersama dengan aRuadest ke dalam erlenmayer pada

saat proses destilasi dan juga apabila eugenol langsung dipanaskan tanpa ditambah dengan

aRuadest maka eugenol akan rusak.kemudian ditambahkan pula batu didih ke dalam B@F

dengan tujuan agar proses pemanasan saat destilasi merata.

Prinsip dari destilasi uap adalah memisahkan jenis senyawa tertentu dari suatu sampel

atau *ampuran senyawa berdasarkan titik didihnya.proses destilasi terjadi dengan

memanaskan suatu larutan sehingga menguap dan uap ini kemudian didinginkan kembali agar

menjadi *airan.suatu larutan memiliki komponen masing!masing yang akan menguap

berdasarkan titik didihnya masing!masing.

B@F yang sudah disiapkan kemudian di letakkan ke dalam pemanas dan

disambungkan dengan rangkaian alat destilasi.pemanasan dilakukan dengan menaikkan

temperatur se*ara perlahan dengan tujuan menghindari terbentuknya busa yang akan

mengkontaminasi destilat.kemudian dipasang pula *orong pisah di klem *in*in bagian

atas.*orong pisah berisi aRuadest dan menyambung dengan adapter *laesin.tujuan dipasang

*orong pisah berisi aRuadest adalah untuk menyamakan sistem antara B@F dan erlenmeyer

yaitu dengan mengimbangi jumlah tetesan yang keluar dari B@F yaitu dengan meneteskan

aRuadest dari *orong pisah tersebut.kemudian diletakkan pula baskom berisi es batu untuk

mendinginkan erlenmyer tujuannya adalah agar hasil destilasi eugenol yang dihasilkan tidak

menguap.setelah semua alat disiapkan kemudian air dialirkan ke pendingin liebig.pada

pratikum ini digunakan 2 pendingin liebig.tujuan penggunaan pendingin liebig adalah untuk


22/33

mendinginkan hasil uap dari pemanasan sampel.Digunakan 2 pendingin liebig dengan tujuan

agar proses pendinginan berlangsung lebih lama sehingga hasil destilasi yang dihasilkan lebih

banyak.proses destilasi ini dilakukan selama uap yang masuk ke dalam pendingin liebig dan

kemudian didinginkan menghasilkan destilat berwarna keruh.Proses destilasi dihentikan

ketika eugenol sudah tidak ada di B@F&hal ini ditandai dengan hasil destilat yang berwarna

bening dan juga dapat dilakukan membau *elah pada pendingin liebig apakah masih ter*ium

aroma *engkeh atau tidak.pada pratikum ini pratikan menunggu selama kurang lebih "< menit

dan menghentikan destilasi karena telah dilakukan pembauan pada pendingin liebig kalau

sudah tidak ada aroma *engkeh lagi dan juga hasil destilat yang dihasilkan sudah

bening.'emudian pratikan menjadikan waktu menunggu "< menit tersebut untuk melakukan

replikasi destilasi karena kondisi proses destilasi sama.

9asil dari destilasi tadi kemudian dipindah ke *orong pisah dan ditambah


23/33

dilakukan penggojogan kemudian *orong pisah diletakkan pada penjepit dan akan terbentuk 2

lapisan yang terpisah sempurna. proses ekstraksi akan efektif apabila dilakukan berulang kali.

Pada metode ekstraksi menggunakan *orong pisah maka zat yang akan diekstraksi telah

terdistribusi pada 2 larutan berdasarkan koefisien partisinya.

Barutan diklormetan @& F& %& D& > dipindahkan ke dalam *orong pisah 12< ml.

Tambahkan 1 mg eugenol pada F& kemudian kepada setiap *orong pisah ditambahkan

ml larutan


24/33

air.pengeringan natrium sulfat anhidrat dilakukan dengan *ara memasukkan natrium sulfat ke

dalam oen menggunakan *awan petri.*awan petri dalam keadaan terbuka sehingga dapat

kandungan air dalam natrium sulfat dapat menguap.tujuan digunakan natrium sulfat anhidrat

adalah untuk mengikat tapak!tapak air yang masih ada dalam larutan diklormetan sehingga

eugenol yang terkandung lebih murni.6ika natrium sulfat terlarut atau terbentuk *ake&

mungkin larutan yang dikerjakan adalah fase airnya.

PEMEKATAN

etelah melalui proses partisi oleh kelima sampel& yaitu sampel @& F& %& D& dan >

(blanko)& lalu dilanjutkan proses pemekatan dimana tujuan dari proses pemekatan ini adalah

untuk menghilangkan pelarut yang digunakan yaitu diklorometan. ampel @& F& %& D& dan >

(blanko) masing!masing dimasukkan ke dalam labu alas bulat 1). De*anter ini

dilakukan dengan *ara menuangkan sampel ke labu alas bulat tidak seluruhnya (endapan tidak

ikut dituang) untuk mendapatkan hasil yang murni pada saat dieaporasi. Pada proses

pemekatan ini dilakukan penambahan 1 mg eugenol adalah pada labu sampel %.

@lat yang digunakan adalah rotary vacuum evaporator . ,otary a*uum eaporator

adalah instrument yang menggunakan prinsip destilasi atau pemisahan. Prinsip utama alat ini

yaitu terletak pada penurunan tekanan sehingga pelarut dapat menguap pada suhu dibawah

titik didihnya. @lat ini memiliki suatu teknik yang berbeda dengan teknik pemisahan yang

lainnya. Dan teknik yang dimaksud bukan hanya terletak pada pemanasannya tapi dengan

menurunkan tekanan pada labu alas bulat yang sesuai dan memutar labu alas bulat dengan

ke*epatan yang disesuaikan. Tekanan yang disesuaikan bertujuan agar pelarut dapat menguap

lebih dahulu sehingga meninggalkan senyawa yang diinginkan& jika tekanan yang terlalu

rendah dapat mengakibatkan suhu yang terlalu tinggi dan dapat menguapkan pelarut serta

senyawa yang di*ari. Putaran labu alas bulat bertujuan agar larutan sampel yang sedang

dieaporasi dalam labu alas bulat di alat tersebut dapat bersentuhan dengan dinding labu alas

bulat sehingga tidak hanya sebagian permukaan dari sampel yang dieaporasi& namun

keseluruhan permukaan sampel dapat tereaporasi sehingga didapatkan senyawa yang

diinginkan yang lebih baik. ehingga pada praktikum ini dari kelima sampel F& %& D& tersisa

minyak kuning pu*at yang berbau tajam dank has dari *engkeh dan mengandung sekitar 87I

eugenol& sedangkan dari sampel @ tidak didapatkan senyawa minyak tersebut. 9al ini


25/33

dikarenakan eaporasi yang terlalu lama sehingga pelarut dan senyawa eugenol menguap

seluruhnya sehingga tidak ada yang tersisa. edangkan dari sampel > sendiri adalah blanko

tanpa penambahan eugenol& sehingga tidak didapatkan senyawa minyak itu.

ETERMINASI

etelah mendapatkan analit hasil eaporasi senyawa @& F& %& D& > dengan rotary

a*uum eaporator& selanjutnya melalui proses determinasi. Pada proses determinasi ini

dilakukan penambahan 1 mg eugenol adalah pada labu D.

'olom yang digunakan adalah kolom kapiler yang berisi fase padat berupa P>$.

edangkan gas pembawa yang dipakai yaitu gas nitrogen. Digunakan pula gas hidrogen. $as

92 memiliki ke*epatan alir untuk memperloleh hasil optimum 2


26/33

etelah menginjeksikan larutan baku& maka selanjutnya diinjeksikan sampel. ampel

tidak langsung diinjeksikan ke $% namun harus dien*erkan dahulu dengan heksan. Tiap

sampel F& %& D& > dimasukkan kedalam labu ukur 1 mB masing!masing dengan pengambilan

analit berturut!turut 1 GB& 2 GB& dan diperoleh hasil yaitu & .=


27/33

didapat tersebut maka bobot eugenol dapat diketahui dengan *ara mengalikan kadar dengan

faktor pengen*erannya sehingga diperoleh bobot sampel @ ? .7/ mg& F ? /./ mg& % ?

88.


28/33

4etode ini digunakan untuk analisis senyawa organik yang mudah menguap seperti

hidrokarbon dan ester selain itu juga untuk analisis minyak mentah dan minyak atsiri dalam

buah. 4isalnya untuk analisis kafein dalam urin dan plasma dapat dianalisis dengan

kromatografi gas dalam kondisi sebagai berikut5

'olom 5 03!1/

uhu kolom 5 2"0%

$as pembawa 5 9elium& flow rate &< ml#se*

Detektor 5 Aitrogen!fosfor

uhu detektor 5 2/0%

uhu injektor 5 2=0%

3olume injeksi 5 1 Gl (tanpa peme*ahan)

'isaran linier 5 – 1 Gg#ml (plasma)

5 – " Gg#ml (urin)

tandar internal 5 A!metilfenotiazin (dalam etanol)

Penyiapan ampel

Untuk plasma& sebanyak &2 ml plasma dimasukan dalam tabung sentrifuge& ditambah


29/33

1. Destilasi adalah teknik untuk memisahkan larutan ke dalam masing – masing

komponennya. Prinsip destilasi uap didasarkan pada perbedaan titik didih komponen

zatnya. Destilasi uap dapat digunakan untuk memurnikan senyawa – senyawa yang

memiliki titik didih berbeda sehingga dapat dihasilkan senyawa yang memiliki

kemurnian yang tinggi.

2. 'adar eugonol yang terdapat dalam sampel @&F&%&D&> berturut!turut adalah 7/

µ g#mB& // µ g#mB& "8/7


30/33

I. JAABAN PERTANAAN

1. Ferdasarkan kromatogram 1 mB > yang disisihkan& tahap clean up tidak perlu

dilakukan karena pada kromatogram yang terbentuk sudah memberikan pun*ak yang

terpisah (tidak terjadi oerlapping).

2. 'onsentrsi larutan stok eugenol adalah 10.000 $$

Pembuatan seri larutan baku eugenol

a. eri 1

31 H %1 ? 32 H %2

2 ml H 1. ? 1 ml H %2

%2 ? 8000 $$

b. eri 2

" ml H 1. ? 1 ml H %2

%2 ? 000 $$

*. eri

= ml H 1. ? 1 ml H %2

%2 ? @000 $$

d. eri "

7 ml H 1. ? 1 ml H %2

%2 ? 000 $$

e. eri <

1 ml H 1. ? 1 ml H%2

%2 ? 10000 $$

Konsentrasi(pp

m)

Respon(AUC)

2000 0.2114000 0.476

6000 0.691

8000 0.833


31/33

10000 1.151

Dari kura baku& diperoleh persamaan regresi @U% s 'onsentrasi adalah

Persamaan 'ura Faku 5

@ ? !&7/

F ? &1

, 2 ? &88="

, ? &887

y ? FH J @

y ? &1H – &7/

. Perhitungan B0D - B0N

(*?>)8

2 .211 .181 .77H1!

" ."/= .81 /.1/"H1!

= .=81 .


32/33

". 'onsentrasi eugenol pada > sebesar "7/ ppm yang berarti dibawah nilai B0N. Ailai

konsentrasi eugenol yang lebih rendah dari nilai B0N membuat sampel > tidak bisa

dilakukan perlakuan analisis kuantitatif. Ailai B0N sendiri merupakan batas

konsentrasi terendah sampel yang dapat diterima& apabila konsentrasi sampel yang

diperoleh berada dibawah B0N& makan sampel tersebut perlu ditingkatkan kadarnya

agar bisa masuk dalam batas B0N.

)#bobot eugenol adisi @ H 1I

? (.7/mg!".7/mg)#1mg H 1I

? !" I

I ,e*oery F ? (bobot F!bobot>)#bobot eugenol adisi F H 1I

? (/./mg!".7/mg)#1mg H 1I

? 2.< I

I ,e*oery % ? (bobot %!bobot>)#bobot eugenol adisi % H 1I

? (88.)#bobot eugenol adisi D H 1I

? (8".//mg!".7/mg)#1mg H 1I

?


33/33

? (1 I ! ="./ I) – (1 I ! $%& 6akarta& pp. 2/8!27".

lap.resmi gc (analisis farmasi)

Documents