Regional Distrito CapitalSistema de Gestión de la Calidad

Informe de Laboratorio No 02DETERMINACIÓN DE BIOINDICADORES MICROBIOLÓGICOS EN LA INDUSTRÍA

EMPRESA CUART’S LTDA.

Aprendices GINA LIZZETH MORENO CORDERO

ELIANA MILENA SANCHEZ JUISAMAYRA ALEJANDRA SOTO TABIMBA

InstructorSONIA MARCELA BUITRAGO MORALES

Centro de Gestión IndustrialDiciembre de 2014

Tabla de contenido

1. Introducción

Se realizó una siembra de microorganismos (hongos, bacterias, levaduras) en diferentes agares con la cantidad de nutrientes necesarios para su crecimiento con el fin de determinar la existencia de estos en la muestra de agua tomada de las curtiembres de San Benito las cuales contenían sulfuros, para lo cual se hizo necesario hacer una serie de cálculos con el único objetivo de determinar la cantidad de agar necesario para preparar y luego servir en las cajas de Petri donde se haría la siembra de la muestra de agua con contenido microbiano.

Como primera medida se prepararon los agares y el agua peptonada necesaria para las diluciones utilizadas en toda la práctica. A continuación se llevó a autoclave todo el material necesario como: Cajas de Petri, pipetas, bastón de vidrio y los frascos Scott los cuales contenían los agares por 15 minutos a 121° C.

Luego de tener esterilizados todo el material se procedió a servir los agares en las cajas de Petri, en este caso se utilizaron técnicas en superficie y profundidad para la siembra de bacterias (profundidad), hongos y levaduras (superficie) y se utilizaron tubos de ensayo con los cuales se pretendía estudiar la presencia de coliformes y E.coli en la muestra de agua, los agares con su respectiva siembra de la muestra liquida fueron llevados a la incubadora por un periodo de tiempo de 48 horas a una temperatura de 35°C +/- 2 °C, al cabo del cual se procedió a realizar el conteo de las colonias presentes en cada una de las cajas en UFC (unidades formadoras de colonia) / g o ml y en el caso de los tubos en NPM

(Numero más probable) / g o ml. Los procedimientos y resultados se presentan en todo el contenido del informe.

2. Objetivos:

Objetivo General

Sembrar microorganismos en las cajas de Petri para su posterior conteo e identificación macroscópica y microscópica.

Objetivos Específicos

Preparar los agares y servirlos en las cajas de Petri de manera tal que se induzca el crecimiento de los microorganismos.

Realizar el conteo de las colonias presentes en los agares y reportar los resultados en UFC y NPM según sea el caso.

3. ProcedimientoMediante diagramas de flujo deben realizarse los siguientes procedimientos 3.1 Elaboración de medios de cultivo

3.2 Montaje de la técnica de recuento en placa (bacterias, hongos y levaduras)

3.3 Montaje de la técnica de NMP de coliformes totales y Escherichia coli

3.4 Montaje de la técnica de aislamiento

3.5 Lectura de resultados de los recuentos obtenidos en la práctica.

4. Cálculos

4.1 Preparación de medios de cultivo

Agua peptonada

Frasco de 90 ml2 tubos de ensayo de 9 ml

ml de agua destilada = 90+9+9= 108 ml de agua destilada

Agua peptonada 20 ml/1000 ml *108 ml = 2,16 g de agua peptonada pesados y agregados en los 108 ml de agua destilada.

20 ML DE AGUA PARA CADA CAJA DE PETRI.

Agar plate count

3 Cajas de Petri con Plate Count 20 ml * 3 cajas = 60 ml

23,5 g/1000ml * 60 ml = 1.41 g de agar plate count en 60 ml de agua destilada.

Agar PDA

3 Cajas de Petri con agar PDA 20 ml * 3 cajas = 60 ml

39 g/1000 ml * 60 ml = 2.34 g de agar PDA en 60 ml de agua destilada.

Agar mac conkey

2 Cajas de Petri con agar Mac Conkey20 ml *2 cajas = 40 ml

50 g/1000 ml * 40 ml = 2 g de agar Mac Conkey en 40 ml de agua destilada.

4.2 Recuentos microbianos Agar plate count = 9 colonias (10-1) 9 *10 = 90 UFC/ml 9 x 101 UFC/ml

Agar PDA Levaduras: 15 colonias (10-1)15*10 = 150 UFC/ml1.5 x 10² UFC/ml

Hongos: 10 colonias (10-1)1.0 x101

5. Resultados

5.1. Recuento de bacterias totales en placa

Al finalizar el tiempo de incubación se realizó el conteo de las bacterias presentes en la parte profunda de las cajas de Petri, seleccionando la caja marcada con la dilución 10-1, ya que esta contenía una cantidad mayor de microorganismos. Las colonias fueron contadas usando un marcador, a partir de la cantidad encontrada se realizan los respectivos cálculos para la determinación de la ufc/g o ml. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1)

5.1.2. Recuento de hongos y levaduras en placa

Al finalizar el tiempo de incubación se realizó el conteo de los hongos y las levaduras presentes en las diluciones, siendo la dilución 10-1 la que contenía mayor número de microorganismos y con la cual se hizo el respectivo conteo y los cálculos para la determinación de la ufc/g o ml. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1, que se encuentra párrafos abajo).

5.1.3 Recuento de Escherichia coli por NMP

Al cabo de las 48 horas de incubación se determinó que en los tubos de ensayo no existía presencia de E.coli, ya que no hubo cambio en ninguna de las muestras en cuanto a las características de las mismas. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1)

5.1.2 Recuento de coliformes totales de NMP

Al cabo de las 48 horas de la incubación se determinó que en los tubos no existía presencia de coliformes ya que no presentaron cambio de color a azul- verdoso el cual indicaba la presencia de la bacteria gran negativa en la muestra de agua contenida en los tubos de ensayo. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1)

Tabla 1. Recuento de bioindicadores en la muestra de agua de curtiembre de la empresa Cuart’s Ltda.

ANÁLISISRecuento UFC o NMP/ml

Temperatura de Incubación

Técnica utilizada

Bacterias totales9 x 101 UFC/ml 35° C +/- 2°C

Recuento en profundidad

Coliformes totales < 3 NMP/ ml 35° C +/- 2°C

Técnica por Número más probable

Hongos 1.0 x101 UFC/ml 25°C+/-2°CRecuento en superficie

Levaduras 1.5 x 10² 25°C+/-2°C Recuento en superficie

UFC/ml

Escherichia coli < 3 NMP/ ml Técnica por Número más probable

5.2 Identificación de los microorganismos aislados

5.2.1 Identificación macroscópica y microscópica de los microorganismos aislados

Medio de cultivo de donde se toma el microorganismo

Características macroscópicas

Características microscópicas

A

B

El número de microorganismos dependerá de las colonias que el grupo proyecto haya concertado con el Instructor para su caracterización.

6. Análisis de resultados

El análisis de coliformes totales y e.coli en la muestra de agua residual de la curtiembre no mostro resultado por la técnica de número más probable donde sembró en el caldo LMX en tubos para su posterior análisis, debido a que las condiciones de pH de crecimiento de la bacteria Gram negativa esta entre (4-10) y

la muestra de agua contenía un pH de 13.

En el análisis de hongos y levaduras en la muestra de agua, el recuento obtenido fue de XXX, debido a que la muestra de agua es de características industriales lo cual implica altos contenidos de materia inorgánica y baja de orgánica, la cual es esencial para el crecimiento de los hongos y levaduras.

Los análisis realizados a la muestra buscan identificar la presencia de bacterias dañinas para la salud y son realizadas para el control de calidad de alimentos y agua potable, se realizaron en la muestra de agua residual a fin de conocer el procedimiento y resultados de la misma pero no son necesarios para este tipo de muestra, la muestra contenía un pH alcalino, alto contenido de sulfuros, materia inorgánica y baja concentraciones de materia orgánica, lo cual impidió el alto desarrollo de los diferentes microorganismos.

7. Conclusiones

Se realizaron los diferentes medios de cultico para cada análisis y se llevaron a montaje donde se sembró la muestra en cada uno y se llevó a incubación, se mostró un bajo crecimiento bacteriano en los diferentes

medios lo que indica que las condiciones ideales para el crecimiento de cada microorganismo no eran las adecuadas.

Se realizó el conteo de las colonias presentes en la disolución más concentrada de la muestra en cada una las siembras y se reportaron los resultados con la técnica del número más probable y las unidades formadoras de colonias donde se mostraron como negativos la alta concentración de los microorganismos, lo que indica que la muestra es muy alcalina, o no contenga los microorganismos.

8. Bibliografía

FUNDACIÓN VASCA PARA LA SEGURIDAD ALIMENTARIA. Escherichia coli<http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento84/3.Ecoli.pdf> (citado 10 de diciembre de 2014)

Anexos