QuickTime™ et un décompresseurGIF sont requis pour visualiser

cette image.

QuickTime™ et un décompresseurGIF sont requis pour visualiser

cette image.

Kuhns MS. Kuhns MS. et alet al.Immunity 24 : 133-139 (2006.Immunity 24 : 133-139 (2006))

Complexes TCR/CD3Complexes TCR/CD3

Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466

Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466

Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466

Conformation des peptides trouvésdans les molécules de classe Ia

Conformation des peptides trouvésdans les molécules de classe II

Enzymes impliquées dans la Jonction des extrêmitésnon homologues : Non Homologous End Joining (NHEJ)

1)Ku 70 et KU 80 forment des hétérodimères qui possèdent des activités leur permettant de fixer les extrêmités de DNA.

2) Ku70/Ku80 s’associe à la sous-unité catalytique d’une protéine Kinase, DNA-PKcs pour former la protéine kinase dépendante du DNA.

3) Artémis qui est une nucléase et la DNA-PK jouent un rôle essentiel dans la formation des jonctions codantes.

4) XRCC4 et DNA ligase IV sont impliquées dans la ligation des jonctionscodantes et des séquences de recombinaison (RSS).

SCID = severe combined immune deficiencyExemple : souris ayant une mutation de l’enzyme DNA-Protein Kinase

Absence de mutations somatiques dans les régions variables des chaînes alpha et beta du TCR

• Diversité combinatoire :- recombinaison aléatoire entre les segments géniques V(D)J

- appariement entre une chaîne et une chaîne pour le récepteur des lymphocytes T (TCR)

Diversité des récepteurs pour l’antigène

• Diversité jonctionnelle : - délétion de nucléotides - addition de nucléotides :

dépendante de la matrice (élément P) indépendante de la matrice (élément N): médiée par la Terminale déoxynucléotidyl Transférase (TdT)

Diversité des récepteurs pour l’antigène

• la TdT est une ADN polymérase atypique puisque elle ne recopie aucun brin matrice

•Son expression est: retrouvée dans toutes les espèces de

vertébrés tissu-spécifique (thymus et moelle osseuse) transitoire au cours de l’ontogénie des cellules B et T ainsi qu’au cours du développement.

Migration sur ungel dénaturant

Analyse

6 7 8 910116 7 8 91011

Amplification par PCR BV BJBD BC

Elongation d’une amorce fluorescente

*

ADNcARN

La technique Immunoscope

L’obtention de souris déficientes en TdT (TdTko)

a permis de montrer de façon absolue que seule la

protéine TdT est responsable in vivo de l’addition des

éléments N.(Gilfillan et coll., Science, 1993, 261: 1175-78.

Komori et coll., Science, 1993, 261:1171-75)

Quelle est l’influence de la TdT sur la production du répertoire des

Lymphocytes T ?

Cabaniols J.P., Fazilleau N. et al. J.of Exp. Med (2001) 194: 1385-1390.

Nature du répertoire des lymphocytes T des souris déficientes en TdT (TdTko)

I nte

nsi

t é d

e fl

uore

scen

ce (

Uni t

é a

rbi t

r ai r

e)

Taille de CDR3 Taille de CDR3

Répertoire T

La technique Immunoscope II

Analyse statistique

CDR3J C

V D

Amplificationpar PCR

Séquençage exhaustif

6 7 8 9 10Taille CDR3

Aire(% du total)

X % Y %

Analyse Immunoscope

Extrapolation à la taille du répertoire

des Lymphocytes

T

• Le répertoire des cellules T des souris TdTko est polyclonal.

• Dans les souris TdTko, la taille du répertoire des TCR représente 5 à 10% de celle des souris de génotype sauvage.

• La baisse de diversité n’est pas contre-balancée par un accroissement de l’appariement d’une chaîne avec plusieurs chaînes .

Conclusion

Au moins 90% de la diversité du TCR est due à la TdT

De façon surprenante, lorsque la déficience en TdT

est introduite dans un fonds génétique prédisposant à

une maladie autoimmune, elle a un rôle protecteur.(Gilfillan et coll., 1995, Immunol Rev, 148:201-219

Conde et coll., 1998, JI, 161:7023-30Feeney et coll., 2001, JI, 167:3486-93Robey et coll., 2004, JI, 172:4624-29)

Quelle est l’influence de la TdT sur le répertoire des cellules T autoréactives

?