identificaciÓn y autentificaciÓn de...

IDENTIFICACIÓN Y AUTENTIFICACIÓN DE ESPECIES PESQUERAS

Carmen Glez Sotelo

Instituto de Investigaciones Marinas

• ORIGEN: PESCA BAJURAPESCA ALTURAACUICULTURAPESCADO IMPORTACIÓN

• PESCADO AGUAS COSTERAS NO SATISFACE LA DEMANDA DE PESCADO

• POR QUÉ SE DESARROLLA EL COMERCIO PESQUERO

DESARROLLO DE PESQUERIAS: BUQUES Y ARTES DE PESCAMEJORA DE LOS PROCESOS DE CONSERVACIÓN: CONGELACIÓNDESARROLLO DE LA INDUSTRIA PESQUERA EN TERCEROS PAISESDESARROLLO DE LOS MEDIOS DE TRANSPORTE Y GLOBALIZACIÓN

• INCREMENTO DEL NÚMERO DE ESPECIES EN LOS MERCADOS

AUTENTIFICACIÓN DE ESPECIES: JUSTIFICACIÓN

• CONSUMO DE NUEVAS ESPECIESCONSUMO DE NUEVAS ESPECIES• INCREMENTO EN LAS CAPTURAS MUNDIALESINCREMENTO EN LAS CAPTURAS MUNDIALES• INCREMENTO EN EL NINCREMENTO EN EL NÚÚMERO DE ESPECIES CON VALOR COMERCIALMERO DE ESPECIES CON VALOR COMERCIAL• DESCENSO DE LA CAPTURAS DE ESPECIES CON ELEVADO VALOR COMERCIALDESCENSO DE LA CAPTURAS DE ESPECIES CON ELEVADO VALOR COMERCIAL


• CAMBIOS EN LOS HCAMBIOS EN LOS HÁÁBITOS DE CONSUMO: DE PESCADO ENTERO Y FRESCO A PLATOS PREPARADOSBITOS DE CONSUMO: DE PESCADO ENTERO Y FRESCO A PLATOS PREPARADOS O O PRECOCINADOSPRECOCINADOS

• PROCESAMIENTO DE PESCADO: INDUSTRPROCESAMIENTO DE PESCADO: INDUSTRÍÍAS EN TERCEROS PAAS EN TERCEROS PAÍÍSESSES

•• MATERIA PRIMA: ESPECIES CONOCIDAS O COMPLETAMENTE DESCONOCIDASMATERIA PRIMA: ESPECIES CONOCIDAS O COMPLETAMENTE DESCONOCIDAS

• PROCESAMIENTO: ELIMINACIPROCESAMIENTO: ELIMINACIÓÓN DE CARACTERES TAXONN DE CARACTERES TAXONÓÓMICOS MORFOLMICOS MORFOLÓÓGICOSGICOS


MERCADOSLONJAS INDUSTRIAPESCA CONSUMIDORES

INTERCAMBIOS COMERCIALES: PRECIOINTERCAMBIOS COMERCIALES: PRECIO

COMPRADORES NECESITANCOMPRADORES NECESITANSABER CON CERTEZASABER CON CERTEZA

EL PRODUCTO QUEEL PRODUCTO QUEADQUIERENADQUIEREN

••CALIDADCALIDAD••ESPECIESESPECIES••AREA DE CAPTURAAREA DE CAPTURA••FECHA DE CAPTURAFECHA DE CAPTURA••EXTRACTIVA /ACUICULTURAEXTRACTIVA /ACUICULTURA••ESTACIESTACIÓÓNN

ADMINISTRACIADMINISTRACIÓÓN N DEBE GARANTIZAR LA DEBE GARANTIZAR LA

VERACIDAD DE LAS VERACIDAD DE LAS ETIQUETASETIQUETAS


MORFOLMORFOLÓÓGICOSGICOS

BIOQUBIOQUÍÍMICOSMICOS

ADN

PROTEINAS

Solea solea Glyptocepahalus cynoglossus

MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES

IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: PROTEÍNAS

PROTEOMA DE PECES: CONJUNTO DE PROTEINAS EXPRESADASPROTEOMA DE PECES: CONJUNTO DE PROTEINAS EXPRESADASTOTALTOTALFRACCIONES ESPECFRACCIONES ESPECÍÍFICASFICAS

••TRIPSINATRIPSINA

••PEPSINAPEPSINA

••CNBrCNBr

••IEFIEF••PAGEPAGE••CECE

SECUENCIACISECUENCIACIÓÓNN

HIDRHIDRÓÓLISISLISIS

TTÉÉCNICAS ELECTROFORCNICAS ELECTROFORÉÉTICASTICAS

ELISAELISA

CARACTERIZACICARACTERIZACIÓÓN DE PROTEINASN DE PROTEINASSECUENCIA AMINOACIDICASECUENCIA AMINOACIDICAPESO MOLECULARPESO MOLECULARPUNTO ISOELECTRICOPUNTO ISOELECTRICOANTIGENICIDADANTIGENICIDAD

IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: PRODUCTOS

TRATAMIENTO TTRATAMIENTO TÉÉRMICO EXHAUSTIVORMICO EXHAUSTIVO

DESNATURALIZACIDESNATURALIZACIÓÓN DE PROTEN DE PROTEÍÍNAS SEVERANAS SEVERA

LA IDENTIFICACILA IDENTIFICACIÓÓN DE ESPECIES NO ES POSIBLE UTILIZANDO PROTEINASN DE ESPECIES NO ES POSIBLE UTILIZANDO PROTEINAS

ADN SE DEGRADA PERO TODAVADN SE DEGRADA PERO TODAVÍÍA ESTAN PRESENTES FRAGMENTOS CORTOS CON A ESTAN PRESENTES FRAGMENTOS CORTOS CON CAPACIDAD DIAGNCAPACIDAD DIAGNÓÓSTICASTICA

CONSERVASFRESCO

ESTERILIZACIESTERILIZACIÓÓNN

ADNADN

ADN COMO MARCADOR DE ESPECIES

INFORMACIINFORMACIÓÓN: ADN GENN: ADN GENÓÓMICO DE PECES 0.3MICO DE PECES 0.3--0.4 BILLONES DE 0.4 BILLONES DE

PARES DE BASES (1% CODIFICAN PROTEINAS)PARES DE BASES (1% CODIFICAN PROTEINAS)

ADN NO SUFRE VARIACIONES DEPENDIENDO DEL TIPO DE TEJIDOADN NO SUFRE VARIACIONES DEPENDIENDO DEL TIPO DE TEJIDO

ADN TIENE REGIONES CON DIFERENTES TASAS DE MUTACIADN TIENE REGIONES CON DIFERENTES TASAS DE MUTACIÓÓN: N:

DIFERENTES NIVELES DE RESOLUCIDIFERENTES NIVELES DE RESOLUCIÓÓNN

SELECCIÓN DE FRAGMENTOS DIAGNÓSTICO

ADN DE PRODUCTOS PESQUEROSADN DE PRODUCTOS PESQUEROS

•• DEGRADADO (FRAGMENTADO)DEGRADADO (FRAGMENTADO)

SELECCISELECCIÓÓN Y ENSAYO DE SECUENCIAS DE ADNN Y ENSAYO DE SECUENCIAS DE ADN

•• CITOCROMO BCITOCROMO B

•• REGION CONTROLREGION CONTROL

•• rRNArRNA

•• CITOCROMO OXIDASA IIICITOCROMO OXIDASA III

REQUERIMIENTOS DE LAS SECUENCIASREQUERIMIENTOS DE LAS SECUENCIAS

•• BAJA VARIABILIDAD INTRAESPECIFICABAJA VARIABILIDAD INTRAESPECIFICA•• ALTA VARIABILIDAD INTERESPECIFICAALTA VARIABILIDAD INTERESPECIFICA

•• PERMITIR EL DISEPERMITIR EL DISEÑÑO DE CEBADORESO DE CEBADORES•• FRAGMENTOS CORTOSFRAGMENTOS CORTOS

•• PRODUCTOS DE PCR EN TODAS LAS ESPECIESPRODUCTOS DE PCR EN TODAS LAS ESPECIES

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: ADN

•• METODOS QUE NO REQUIEREN EL CONOCIMIENTO PREVIO DE LA SECUENCIA METODOS QUE NO REQUIEREN EL CONOCIMIENTO PREVIO DE LA SECUENCIA DE ADNDE ADNRAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA)RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA)SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism)SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism)

•• METODOS QUE REQUIEREN CONOCIMIENTO DE LA SECUENCIA DE ADNMETODOS QUE REQUIEREN CONOCIMIENTO DE LA SECUENCIA DE ADNFINS: SECUENCIACIFINS: SECUENCIACIÓÓN Y ESTIMACIN Y ESTIMACIÓÓN DE DISTANCIAS GENN DE DISTANCIAS GENÉÉTICASTICASPCRPCR--RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism )RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism )PCR ESPECPCR ESPECÍÍFICAFICASONDAS DE ADNSONDAS DE ADN

PCRPCR--ELISAELISASONDAS Taqman (REAL TIME PCR)SONDAS Taqman (REAL TIME PCR)ARRAYS DE SONDASARRAYS DE SONDAS

PCR: POLYMERASE CHAIN REACTION

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: RAPD

RAPD (RAPD (RRandom andom AAmplification of mplification of PPolymorphic olymorphic DDNA) NA)

•• CEBADORES MUY CORTOS: APROX. 10 nt FRAGMENTOS ENTRE CEBADORES MUY CORTOS: APROX. 10 nt FRAGMENTOS ENTRE 200200--20002000 PBPB

•• AMPLIFICACIAMPLIFICACIÓÓN A BAJA TN A BAJA Tªª DE ANNEALING (DE ANNEALING (3535--4545ººCC))

•• GENERACIGENERACIÓÓN DE PERFILES CARACTERN DE PERFILES CARACTERÍÍSTICOS DE POBLACIONES, ESPECIESSTICOS DE POBLACIONES, ESPECIES

•• REPRODUCIBILIDAD DE PATRONESREPRODUCIBILIDAD DE PATRONES

•• CALIDAD ADNCALIDAD ADN•• TERMOCICLADOR TERMOCICLADOR •• CONDICIONES DE PCR REPRODUCIBLESCONDICIONES DE PCR REPRODUCIBLES•• POLIMERASAPOLIMERASA•• CONDICIONES DE SEPARACICONDICIONES DE SEPARACIÓÓN Y DETECCIN Y DETECCIÓÓNN•• VARIABILIDAD INTRAESPECVARIABILIDAD INTRAESPECÍÍFICAFICA

SSCP (SSCP (SSingle ingle SStrand trand CConformation onformation PPolymorphism)olymorphism)

•• PCR: ENTRE PCR: ENTRE 100100--300300 PBPB

•• DESNATURALIZACIDESNATURALIZACIÓÓN: CADENAS SENCILLASN: CADENAS SENCILLAS

•• DIFERENTE CONFORMACIDIFERENTE CONFORMACIÓÓN DEPENDIENTE DE SECUENCIAN DEPENDIENTE DE SECUENCIA

•• DETECCIDETECCIÓÓN DE DIFERENCIAS INTRAESPECN DE DIFERENCIAS INTRAESPECÍÍFICASFICAS

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: SSCP

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: FINS

FINS (FINS (FForensically IIdentification dentification NNucleotide ucleotide SSequencing)equencing)

•• SECUENCIACISECUENCIACIÓÓN Y ANN Y ANÁÁLISIS DE SECUENCIASLISIS DE SECUENCIAS

5’ttacaaagacctccttggtttcgtgattctgctagtagcactcgcctctctagcactattctctcccaacctcctaggagacccagacaacttcacccctgccaaccccatggttaccccacctca-3’

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: FINS10 20 30 40 50 60

. . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . . . . | . .

arochei18 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei28 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei24 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei31 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei25 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei21 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei19 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei10 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCarochei23 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGTCathazard1 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tathazard4 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTACGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis1_ CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis2_ CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis5 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis10 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis11 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT A T TAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis13 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TG GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis12 CAAGAACCT T AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TG GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis9 CAAGAACCT T AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TG GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis7 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TG GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis6 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ANTAAAAA TG GCTAACGACG CACTAGT Tkpelamis3_ CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CCCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Teallettera CAAGAACCGT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tealleterat CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Tealleterat CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalbacares CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalbacares CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalbacares CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalbacares CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA T T GCTAACGACG CACTAGT Ttatlanticu CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT TIIM693-1-L CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttatlanticu CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttatlanticu CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttatlanticu CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttthynnus6 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttthy7 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttthynnus1_ CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttobesus39 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttobesus45 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttobesus40 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttobesus41 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttobesus36 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalalunga5 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttori1 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttori2 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttori3 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalalunga6 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCACT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalalunga4 CCAGCCCCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalalunga1 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT Ttalalunga5 CAAGAACCCT AA TGGCAAGC CTCCGAAAAA CTCACCCGCT ACTAAAAA TC GCTAACGACG CACTAGT T

[ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 ] [ 1] [ 2] 0.01 [ 3] 0.00 0.00 [ 4] 0.00 0.01 0.00 [ 5] 0.11 0.12 0.11 0.11 [ 6] 0.10 0.10 0.11 0.11 0.02 [ 7] 0.12 0.12 0.12 0.12 0.10 0.10 [ 8] 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.08 [ 9] 0.11 0.11 0.10 0.11 0.12 0.10 0.08 0.00 [10] 0.13 0.14 0.13 0.14 0.13 0.13 0.13 0.11 0.11 [11] 0.13 0.13 0.13 0.13 0.13 0.13 0.13 0.11 0.12 0.00 [12] 0.13 0.14 0.13 0.14 0.13 0.13 0.13 0.11 0.11 0.00 0.00 [13] 0.12 0.13 0.12 0.13 0.14 0.13 0.12 0.12 0.12 0.08 0.08 0.08 [14] 0.11 0.11 0.12 0.11 0.12 0.12 0.11 0.12 0.12 0.07 0.07 0.07 0.03 [15] 0.11 0.11 0.11 0.11 0.12 0.11 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.08 0.07 [16] 0.11 0.11 0.11 0.11 0.12 0.11 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.08 0.07 0.00 [17] 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.08 0.07 0.00 0.00 [18] 0.14 0.15 0.14 0.14 0.12 0.11 0.10 0.10 0.10 0.09 0.10 0.09 0.09 0.09 0.05 0.05 0.05 [19] 0.14 0.15 0.14 0.15 0.12 0.11 0.10 0.10 0.10 0.09 0.10 0.09 0.09 0.09 0.05 0.05 0.05 0.00 [20] 0.14 0.15 0.15 0.15 0.12 0.12 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.09 0.09 0.05 0.05 0.05 0.01 0.01 [21] 0.25 0.27 0.25 0.25 0.26 0.26 0.25 0.24 0.24 0.27 0.27 0.27 0.28 0.28 0.24 0.24 0.24 0.25 0.26 0.26 [22] 0.24 0.24 0.24 0.24 0.25 0.25 0.24 0.23 0.23 0.26 0.26 0.26 0.28 0.27 0.23 0.23 0.23 0.24 0.24 0.24 0.01 [23] 0.24 0.26 0.25 0.25 0.24 0.23 0.25 0.25 0.24 0.26 0.26 0.26 0.25 0.25 0.24 0.24 0.25 0.26 0.26 0.26 0.13 0.12 [24] 0.26 0.27 0.27 0.26 0.25 0.24 0.26 0.26 0.26 0.27 0.27 0.27 0.26 0.26 0.25 0.25 0.26 0.27 0.28 0.27 0.14 0.13 0.01 [25] 0.21 0.22 0.21 0.21 0.24 0.25 0.25 0.25 0.25 0.27 0.27 0.27 0.24 0.26 0.26 0.26 0.27 0.28 0.28 0.28 0.21 0.21 0.20 0.21 [26] 0.21 0.22 0.21 0.21 0.23 0.24 0.24 0.25 0.25 0.27 0.27 0.27 0.24 0.26 0.26 0.26 0.27 0.27 0.28 0.28 0.20 0.21 0.20 0.21 0.00 [27] 0.24 0.25 0.24 0.23 0.22 0.24 0.24 0.23 0.23 0.27 0.27 0.27 0.26 0.27 0.26 0.26 0.26 0.26 0.26 0.26 0.20 0.22 0.20 0.21 0.12 0.12 [28] 0.23 0.24 0.23 0.22 0.21 0.22 0.23 0.22 0.22 0.26 0.26 0.26 0.25 0.25 0.24 0.24 0.24 0.24 0.25 0.25 0.20 0.20 0.19 0.20 0.11 0.11 0.02 [29] 0.25 0.25 0.25 0.24 0.27 0.27 0.27 0.27 0.27 0.31 0.32 0.31 0.28 0.30 0.29 0.29 0.29 0.30 0.30 0.30 0.32 0.33 0.28 0.29 0.27 0.27 0.28 0.27 [30] 0.25 0.25 0.25 0.24 0.28 0.28 0.27 0.28 0.27 0.31 0.32 0.31 0.28 0.30 0.29 0.29 0.30 0.30 0.30 0.30 0.32 0.32 0.28 0.29 0.27 0.27 0.29 0.27 0.01 [31] 0.31 0.31 0.30 0.31 0.31 0.31 0.33 0.31 0.31 0.32 0.32 0.32 0.33 0.35 0.31 0.31 0.31 0.32 0.32 0.33 0.40 0.39 0.34 0.35 0.34 0.34 0.34 0.33 0.25 0.26 [32] 0.27 0.28 0.27 0.27 0.26 0.26 0.28 0.26 0.26 0.31 0.31 0.31 0.30 0.28 0.27 0.27 0.25 0.26 0.26 0.26 0.26 0.26 0.27 0.28 0.24 0.24 0.28 0.27 0.21 0.21 0.22 [33] 0.27 0.28 0.27 0.27 0.26 0.26 0.28 0.26 0.26 0.31 0.31 0.31 0.30 0.28 0.27 0.27 0.25 0.26 0.26 0.26 0.26 0.26 0.27 0.28 0.24 0.24 0.28 0.27 0.21 0.21 0.22 0.00 [34] 0.27 0.28 0.27 0.27 0.26 0.26 0.28 0.26 0.26 0.31 0.31 0.31 0.29 0.28 0.26 0.26 0.25 0.25 0.26 0.25 0.26 0.26 0.26 0.28 0.24 0.24 0.28 0.27 0.20 0.21 0.22 0.00 0.00 [35] 0.27 0.27 0.27 0.27 0.26 0.26 0.27 0.25 0.25 0.31 0.31 0.31 0.28 0.28 0.26 0.26 0.26 0.26 0.26 0.25 0.25 0.24 0.25 0.27 0.23 0.22 0.27 0.26 0.20 0.20 0.18 0.00 0.00 0.00 [36] 0.31 0.31 0.30 0.31 0.31 0.31 0.32 0.30 0.30 0.32 0.32 0.32 0.32 0.34 0.31 0.31 0.31 0.32 0.32 0.32 0.40 0.39 0.34 0.34 0.34 0.33 0.34 0.32 0.25 0.25 0.00 0.22 0.22 0.22 0.18 [37] 0.32 0.32 0.32 0.32 0.31 0.31 0.30 0.29 0.29 0.34 0.34 0.34 0.33 0.33 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.31 0.34 0.33 0.32 0.33 0.30 0.30 0.33 0.32 0.27 0.27 0.21 0.18 0.18 0.18 0.14 0.21 [38] 0.28 0.28 0.29 0.28 0.29 0.30 0.31 0.27 0.27 0.32 0.32 0.32 0.29 0.30 0.28 0.28 0.28 0.29 0.29 0.28 0.31 0.30 0.30 0.31 0.30 0.29 0.32 0.30 0.26 0.26 0.18 0.15 0.15 0.15 0.12 0.18 0.18 [39] 0.31 0.31 0.31 0.31 0.31 0.32 0.32 0.29 0.29 0.32 0.32 0.32 0.31 0.33 0.30 0.30 0.30 0.28 0.28 0.29 0.33 0.32 0.32 0.33 0.32 0.31 0.29 0.28 0.21 0.22 0.19 0.26 0.26 0.26 0.22 0.19 0.22 0.21 [40] 0.26 0.26 0.26 0.26 0.29 0.29 0.30 0.29 0.29 0.33 0.33 0.33 0.30 0.32 0.31 0.31 0.31 0.31 0.31 0.32 0.35 0.34 0.31 0.32 0.30 0.30 0.30 0.29 0.04 0.04 0.20 0.23 0.23 0.23 0.20 0.20 0.22 0.20 0.16 [41] 0.32 0.32 0.32 0.32 0.34 0.33 0.34 0.31 0.31 0.34 0.34 0.34 0.35 0.35 0.32 0.32 0.32 0.31 0.31 0.31 0.35 0.34 0.35 0.36 0.33 0.33 0.33 0.31 0.22 0.23 0.24 0.29 0.29 0.29 0.25 0.23 0.22 0.21 0.17 0.17 [42] 0.29 0.29 0.30 0.29 0.29 0.30 0.35 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.34 0.34 0.29 0.29 0.29 0.31 0.31 0.31 0.41 0.39 0.35 0.37 0.36 0.36 0.33 0.32 0.29 0.30 0.20 0.29 0.29 0.29 0.25 0.19 0.28 0.23 0.23 0.24 0.22


0,05

Platichthys flesusPlatichthys flesusPleuronectes platessaPleuronectes platessa

Hippoglossoides spp.Hippoglossoides spp.Limanda spp.Limanda spp.

Reinhardtius hippoglossoidesReinhardtius hippoglossoidesMicrostomus kittMicrostomus kittGlyptocephalus cynoglossusGlyptocephalus cynoglossus

Lepidorhombus bosciiLepidorhombus bosciiL. wiffiagonisL. wiffiagonisScophthalmus rhombusScophthalmus rhombusScophthalmus maximusScophthalmus maximus

Dicologoglosa cuneataDicologoglosa cuneataMonochirus spp.Monochirus spp.Solea imparSolea impar

Solea senegalensis+S. kleiniSolea senegalensis+S. kleiniSolea soleaSolea solea

SOLEID

AE

SOLEID

AE

SCO

PHTH

ALM

IDA

ESC

OPH

THA

LMID

AE

PLEUR

ON

ECTID

AE

PLEUR

ON

ECTID

AE



Thunnus obesus (Patudo)Thunnus obesus (Patudo)

•• DISTANCIAS GENDISTANCIAS GENÉÉTICAS Y ARBOL FILOGENTICAS Y ARBOL FILOGENÉÉTICO TICO A1

A2

A3

A6

L1

L2

L3

L6

P4

P8

P10

RB1

RB2

RO2

RO7

RO9

RO13

S2

UNKNOWN

64

90

71

100

6356

93

98

52

38

21

78

80

0,02

BASE DE DATOS DE SECUENCIASBASE DE DATOS DE SECUENCIAS•• GRUPOS DE ESPECIES RELACIONADAS FILOGENGRUPOS DE ESPECIES RELACIONADAS FILOGENÉÉTICAMENTETICAMENTE

•• NNºº DE INDIVIDUOS/ESPECIE : VARIABILIDAD INTRAESPECDE INDIVIDUOS/ESPECIE : VARIABILIDAD INTRAESPECÍÍFICAFICA

•• NNºº DE ESPECIES: VARIABILIDAD INTERESPECDE ESPECIES: VARIABILIDAD INTERESPECÍÍFICAFICA

SELECCISELECCIÓÓN DE SECUENCIAS DIAGNN DE SECUENCIAS DIAGNÓÓSTICOSTICO•• SUFICIENTE VARIABILIDAD INTERESPECSUFICIENTE VARIABILIDAD INTERESPECÍÍFICA/ BAJA INTRAESPECFICA/ BAJA INTRAESPECÍÍFICAFICA

•• LONGITUD DEL FRAGMENTO DIAGNLONGITUD DEL FRAGMENTO DIAGNÓÓSTICO: APLICACISTICO: APLICACIÓÓN A DISTINTOS PRODUCTOSN A DISTINTOS PRODUCTOS

VENTAJAS DE FINSVENTAJAS DE FINS•• CLASIFICACICLASIFICACIÓÓN/ IDENTIFICACIN/ IDENTIFICACIÓÓN DE MUESTRAS DESCONOCIDASN DE MUESTRAS DESCONOCIDAS

•• DETECCIDETECCIÓÓN DE NUEVAS ESPECIES QUE APARECEN EN EL MERCADON DE NUEVAS ESPECIES QUE APARECEN EN EL MERCADO

•• PALIAR LOS PROBLEMAS DE LA VARIABILIDAD INTRAESPECPALIAR LOS PROBLEMAS DE LA VARIABILIDAD INTRAESPECÍÍFICA: SECUENCIA ENTERAFICA: SECUENCIA ENTERA


5’- ATTGCTAGTTACTGTATCTTATGCTAGTACGTAAATGATGGCATSTGCTAG-3’5’- ATTGCTAGTTACTGATCCTTATGCTAGTACGTAAATGATGGCATSTGCTAG-3’5’- ATTGCTAGTTACTGATCCTTATGCTAGTACGTAAATGACGGCATSTGCTAG-3’

Mbo I Bcef I

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: PCR-RFLP

RFLP (RFLP (RRestriction FFragment ragment LLength ength PPolymorphism)olymorphism)

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: PCR-RFLP

ELECT. CAPILARELECT. CAPILAR

CHIPCHIP

SEPARACISEPARACIÓÓN N 30 MIN30 MIN

ANANÁÁLISIS RESULTADOSLISIS RESULTADOS

Dooley et al.,2005. J. Agric. Food Chem. 53:3348Dooley et al.,2005. J. Agric. Food Chem. 53:3348--3357.3357.

PCRPCR--RFLP: aplicaciones RFLP: aplicaciones LABLAB--ONON--AA--CHIPCHIP

TAQMAN PROBETAQMAN PROBE

TEMPLATE TEMPLATE

FLU

OR

ES

CE

NC

E

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: RT-PCR

RTRT--PCR (PCR (RReal TTime ime PCRPCR))


PCR TIEMPO REALPCR TIEMPO REAL

0

0,5

1

1,5

2

2,51 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43

Cycles

Rn

10000001000001000100

y = -1,6996Ln(x) + 43,438R2 = 0,9988

0

10

20

30

40

100 1000 10000 100000

Molecules

Ct m

ean

THRESHOLD CYCLE(Ct)THRESHOLD CYCLE(Ct)

Ct a

Ct a

Ct b

Ct b

Ct c

Ct c

Ct d

Ct d


SONDA BACALAO (SONDA BACALAO (Gadus morhuaGadus morhua))

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

Cyc

le 1

Cyc

le 3

Cyc

le 5

Cyc

le 7

Cyc

le 9

Cyc

le 1

1

Cyc

le 1

3

Cyc

le 1

5

Cyc

le 1

7

Cyc

le 1

9

Cyc

le 2

1

Cyc

le 2

3

Cyc

le 2

5

Cyc

le 2

7

Cyc

le 2

9

Cyc

le 3

1

Cyc

le 3

3

Cyc

le 3

5

Cyc

le 3

7

Cyc

le 3

9

Ct

Rn

GMACGMACGMACGOGACGOGACGOGACGMORGMORGMORTLUSTLUSTLUSMPOUMPOUMPOUMMOLMMOLMMOLGDENGDENGDENMMERMMERMMERBERTOBERTOBERTOBROTBROTBROTCORUJCORUJCORUJSSOLSSOLSSOLAAASSALSSALSSALNTCNTC

OBJECTIVO: MOBJECTIVO: MÉÉTODOS SIMPLIFICADOSTODOS SIMPLIFICADOSTECNOLOGTECNOLOGÍÍA MICROARRAY A MICROARRAY

MÉTODOS IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES: DNA-ARRAYS

LABORATORIO · CONSULTORÍA · INNOVACIÓN

identificaciÓn y autentificaciÓn de...

Documents