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MV MG LUISA ECHEVARRÍA C
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Para tener éxito en la IA
Momento apropiado dentro del ciclo estrual dela perra.
Usar buena calidad de semen.
Usar una buena técnica de IA
(Linde-Forsberg 2002)
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Experiencia en otros países
El Kennel Club controla el uso de la IA.
Restringe el uso a profesionales autorizados.
Restringe la congelación y almacenaje delsemen de los reproductores a establecimientos
autorizados.
La principal preocupación del Kennel Club es elcontrol de la identidad de las dosis de semen.
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Conocimientos básicos indispensables
Fisiología espermática, y patologías reproductivasdel macho.
Ciclo estrual de la perra, y variaciones en lapresentación del celo.
Interpretación de determinación de niveleshormonales en la especie
Frotices Vaginales – Realización e intepretación
Evaluación de semen – Colección e interpretación
de resultados.
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MicroscopioMateriales para colección de semenHemocitómetro
CentrífugaDilutores- Semen diluido, semen congeladoCoolerCatéteres de IANitrógeno líquidoTanques de nitrógeno líquido
EQUIPOS Y MATERIALES
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INSEMINACION ARTIFICIAL EN
CANINOS
1 .- Determinación de la ovulación de la perra:Progesterona,
Frotis vaginal3.- Colección y procesamiento del semen:
Fresco, refrigerado y congelado
4.- Inseminación de la hembra
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Determinación de la ovulaciónde la perra
Se propone :
Determinación de Progesterona y
Frotis vaginal
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NIVELES HORMONALES DEPROGESTERONA PARA DETERMINAR
MOMENTO DE OVULACIÓN
(Johnston, Sh. 2002)
PROGEST
Nmol/l
DÍA DE
OVULACIÓN
DÍA DE SERVICIO
3 - 6 + 2días + 4 días ( 3 – 6)
7 - 12 .+ 1 día +3días ( 2– 5 )
13 - 32 0 días + 2 días ( 1 – 4 )
> 32* - 1 a – 5 días 0 ó +1 día
2 – 5 dìas post ovulación ---- 10-25 ng/ml (Linde-Forsberg et al)
*Siempre que en los frotices vaginales se obtengan Célulasescamosas y superficiales - ESTRO
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FROTICES VAGINALES
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OBTENCIÓN DELFROTIS VAGINAL
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EVALUACIÓN DE SEMEN
• Volumen
•Color
•Motilidad
•
Concentración espermática• Morfología – Presencia de eritrocitos,leucocitos ú otras células en el eyaculado.
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PRO ESTRO
ESTRO
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FRACCIONES DEL EYACULADO
Volumen total 4-15 ml
Fracciones : 3
1) Pre eyaculado - Procedente de la próstata,
apariencia clara.
2) Fracción espermática - Contieneespermatozoides, color blanquecino, opaco.
3) Fracción prostática - Color claro
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Colección de 1ra y 2da fracción en tubograduado estéril. Evaluar motilidad
La segunda fracción del eyaculado , secompleta en 1 a 2 minutos.
El volumen es de 1 a 3 ml.
La primera y tercera fracción afectaríannegativamente a los . (England and Allen,1992; Rota et al.1995)
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Colección y Procesamientodel semen
Semen fresco
Semen diluido refrigerado
Semen congelado
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1.- Evaluación anticipada del semen
2.- Colección de semen
1ra y 2da fracciónEvaluar motilidad
Semen fresco
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3.- Inseminación de la hembra
Materiales Jeringa de 5 ó 20cc
Tubo conector
Catéter
Número y frecuencia de IA
Realizar 2 IA, días 2 y 3 ó 1 y 3
considerando el día 0 como el día
de la ovulación
Semen fresco
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INSEMINACIONDE LA HEMBRA
MATERIAL PARA IA CON SEMEN FRESCO
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Cateter Mavic para IA en caninos MINITUB
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RAZAS ml
Pequeñas 1 – 2
Medianas 3 -4
Grandes 5 - 6
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COLECCIÓN DE SEMEN
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INSEMINACIONDE LA HEMBRA
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VAGINA Y CERVIX EN DIFERENTESFASES DEL CICLO ESTRUAL
ANESTRO PROESTRO
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INSEMINACION DE LA
HEMBRA
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INSEMINACION DE LA
HEMBRA
Después de laInseminación
Mantener estaposición mínimo
10 minutos
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Se recomienda la centrifugaciòn del semen para remover el lìquidoprostàtico.
El dilutor ayuda a proteger la membrana espermàtica de los dañoscausados por el cambio de temperatura y el transporte, brindando
sustrato energètico, esatbilizaciòn de pH y presiòn osmòtica. Los espermatozoides disminuyen su tasa metabòlica por lo queaumenta su viabilidad.
Se agregan antibiòticos: 1 mg de dihydrostreptomycina a 1000 IUof benzyl penicillin, a la soluciòn final.
El semen diluido debe ser viable en promedio hasta una semanadespuès de colecciòn y preparaciòn.
Semen diluido refrigerado
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Semen diluido refrigerado
Centrifugar el semen
Al mezclar el semen con el dilutor, asegurarse queambos viales estèn en igual temperatura (shock tèrmico).
Volumen diluido finalNo mayor de 1-3 ml in IA intrauterina3-5 ml in en IA vaginal, aunque depende deltamaño de la perra.
Colocar el semen ya diluido en el refrigerador o coolerpor 30 a 60 min, dependiendo del volumen y tasa derefrigeraciòn hasta que la temperatura de la muestra lleguea+4°C.
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Semen diluido refrigerado
Chilled semen extender:Tris 3.025 g Âcido Citric (mono hydrate) 1.7 gFructosa 1.25 gStreptomicina 0.1 g Aqua dest. to 100 mlBensyl penicillinA 0.06 g (in 0.3 ml dest H20)
Yema de huevo 20 % (v/v) , se agrega antes de usarpH = 6.76Osmolarity = 324 mOsm
La soluciòn sin yema de huevo se puede almacenar en aliquotas de 2 -8 ml in el congeladorLa diluciòn a 20% (v/v) de yema d ehuevo (ejm. 0.5 ml a 2 ml Tris, o2 ml to 8 ml Tris) se hace inmediatamnete antes de diluir el semen.
DILUTOR BUFFER TRIS CITRATO
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Semen diluido refrigerado
• Minitube ®
CaniPRO ™
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Semen congelado
El semen debe mezclarse con dilutores que protejan del shocktérmico, durante la congelación y descongelación, tenga lamisma osmolaridad y mantenga el pH, del plasma seminal, asícomo proveer sustrato energético para el espermatozoide.
Buffers – TRISCrioprotectores – DMSO, glicerol Yema de huevo AzùcaresDetergentes – SDS (Sodium dodecyl sulphate), Equex Antibiòticos
Comerciales : CLONE, MINITUB – Cani PRO, Mètodo Upssala,Mètodo Ghent
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Semen congeladoSemen congelado
Las dosis de semen congelado en caninoestàn en pajillas de 0.5 o 0.25 ml, o enpellets.
Concentraciòn aproximada de 50 – 100millones por pajilla de 0.5 ml, se usan 2 a4 pajilla por IA.
Almacenamiento en tanques de nitrògeno
lìquido.
Descongelamiento: 70 C x 8 seg37C x 30 – 60 seg
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Semen congeladoSemen congelado
The Uppsala Equex 2 Extender and Freezing Procedure:(Peña and Linde-Forsberg 2000).Uppsala Equex 2: Extender 1 Extender 2 DescongelamientomediumTris 3.025 g idem idemCitric acid (monohydrate) 1.7 g idem idemFructose 1.25 g ditto dittoStreptomycin 0.1 g idem idem Aqua dest. a 77 ml a 72 ml a 100 ml
Bensyl penicillin 0.06 g (en 0.3 ml dest H20) idem idemGlycerol 3 ml 7 ml noEquex * none 1 ml noEgg yolk 20 ml idem nopH = 6.72 6.74 6.76Osmolaridad mOsm 865 1495 324
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• Catéter Noruego
• Endoscopio fibro-óptico vaginalrígido
• Laparoscopía• Laparotomía
Inseminación con Semen congelado
CATÉTER NORUEGO
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Inseminación con Semen congelado
CATÉTER NORUEGO
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Inseminación con Semen congelado
CATÉTER NORUEGO
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El catéter escandinavo consiste en un catéter de acerode 1 - 2 mm de grosor con una punta de 0.75 mm a 1mm de diámetro, con 3 diferentes longitudes: 20, 30 o40 cm.
El catéter de tamaño mediano es adecuado para lamayoría de las perras de pequeño y mediano tamaño.
El equipo se puede obtener de Nowegian Fur Criadors’Associación, P.O. Box 136, Økern, N-0509 Oslo 5,Noruega.
Inseminación con Semen congelado
CATÉTER NORUEGO
l d
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Si el catéter se introduce a ciegas ó con fuerza, podrían ocurrirperforaciones.
La IA intra-uterina con el catéter escandinavo se realiza con laperra parada sobre el piso ó sobre una mesa.
Inseminación con Semen congelado
CATÉTER NORUEGO
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Equipo y materiales
Endoscopio fibro-óptico rígido
Catéter urinario de 6 - 8 Fr de diámetro
Semen congeladoInseminación con Semen congelado
endoscopio fibro-óptico rígido
Indicacionesinseminación trans cervical intra-uterinaSin sedación
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Semen congeladoInseminación con Semen congelado
endoscopio fibro-óptico rígido
Usando IA endoscópica con semen congelado-descongelado, tasas de parición de 25% (3 de 12perras) y 80% (32 de 40 perras). Una ventajasignificativa de esta técnica es que permite la
visualización directa de la apertura cervical
l d
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Inseminación con Semen congelado
endoscopio fibro-óptico rígido
i i l d
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Inseminación con Semen congelado
endoscopio fibro-óptico rígido
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TASA DE PREÑEZ EN RELACIÒN A TIPO DE SEMENY VIA DE IA
Tipo de Semen
TASA DE PREÑEZ %
Vîa de IA
VAGINAL INTRAUTERINA
SEMEN FRESCO 47.7 (2012) 62(121)SEMENREFRIGERADO 45.4 ( 348) 65 (40)
SEMEN CONGELADO 36.7 (30) 55.5 (240)
Linde Forsberg, 2003
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Número de repeticiones de IA
Semen congelado intrauterino , si se repiteaumenta tamaño de camada
Con una sola inseminación se debe inseminarentre 2 a 5 días post ovulación.
Inseminación con Semen congelado
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COLECCIÒN DE SEMEN Vagina Artificial
Electroeyaculaciòn – Bajo sedaciòn:Medetomidina – 80mg/Kg SCKetamina – 5 mg/kg IM
Axner, E. Y Linde Forsberg,
(2003) IVIS
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EVALUACIÒN DE SEMENParámetros Seminales del gato
Volumen 0.034 – 0.04 ml ( rango: 0.01 – 0.12) ( Vag. Artif)Concentraciòn 1730 millones/ ml ( Vag Artif.)
57 – 61 millones/eyaculadoMotilidad 56 – 84%pH 6.6 – 8.8
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PROCESAMIENTO DEL SEMEN
Diluyente de lactosa yema de huevo para la
riopreserv ción de espermatozoides de gato [8]
Lactosa 11 g
Glicerol 4 ml
Sulfato de estreptomicina 1000 mg/ml
Penicilina G 1000 IU/mlYema de huevo 20 ml
Agua destilada para 100 ml
Platz, et al (1978)
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INSEMINACIÒN ARTIFICIAL
Cateter de IA en gatas
Zambelli D, 2002
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INSEMINACIÒN ARTIFICIAL
Determinación de momento de estro de la gataFrotices Vaginales – Cèlulas escamosas
Nùmero de espermatozoides por IA – 5 – 50 millones
2 IA ( 5 mill. esperm) 2 dìas seguidos 75% concepciòn VAGINAL (Sojka, 1970)
1Ia (80 mill esperm) 77.8% concepciòn VAGINAL (Tsusui, et al2000)
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MUCHAS GRACIAS PORSU ATENCIÒN