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GESTION DE LABORATORIO

CLINICO

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MANUAL DE PROCESO DE

LABORATORIO

INMUNOSEROLOGIA

VERSION: 02 Página 1 de 24


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LABORATORIO

INMUNOSEROLOGIA


LA PRUEBA RAPIDA CUALITATIVA PARA LA DETECCION DE

ANTICUERPOS CONTRA EL TREPONEMA PALLIDUM

1. OBJETIVO

Esta guía tiene por objeto describir el procedimiento detallado para realizar las pruebas

de inmunoserologia tales como Prueba Rápida de Sífilis, Prueba Rápida de VIH, VDRL,

Pruebas Embarazo; pruebas de laboratorio de baja complejidad que hace parte de la

resolución 5261 de agosto 5 de 1994, (manual de actividades, procedimientos e

intervenciones del plan obligatorio de salud).

2. ALCANCE

Este procedimiento inicia con la toma de la muestra al paciente y termina con la entrega

del resultado; siendo este documento el que se tomará como referencia única para

realizar Prueba Rápida de Sífilis, Prueba Rápida de VIH, VDRL, Pruebas Embarazo, en

los laboratorios clínicos que hacen parte de la red de IPS-S de IMSALUD E.S.E. la cual

presta los servicios de salud de primer nivel de atención en el municipio de San José de

Cúcuta.

3. RESPONSABILIDAD

El bacteriólogo(a) con funciones de coordinador del área de Laboratorios tendrá a su

cargo la planeación y proyección de los recursos, técnicos, humanos, insumos y reactivos

necesarios para poder realizar esta prueba de laboratorio en cumplimiento a la normas

contempladas en el sistema obligatorio de garantía de calidad de atención en salud del

(SGSSS), decreto 1011 del 3 de abril del 2006.

Igualmente el coordinador del área de laboratorios será el responsable de proyectar las

necesidades de capacitación, entrenamiento e inducción del personal tanto de auxiliares

como profesionales bacteriólogos(as), así como participar en la actualización de nuevas

técnicas o métodos y socialización de los protocolos o guías de manejo para la ejecución

de este procedimiento.

Es responsabilidad del personal de laboratorio tanto auxiliares como bacteriólogos(as)

ejecutar el procedimiento teniendo adherencia a la presente guía para cumplir con el

propósito y alcance de la misma.


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4. DEFINICIONES.

SIFILIS: La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual infecciosa crónica producida

por la bacteria espiroqueta Treponema pallidum, subespecie pallidum (pronunciado

pállidum).Este microorganismo es una bacteria móvil espiriforme (con forma de hilo en

espiral), perteneciente al orden Spirochaetales, familia Spirochaetaceae. Su diámetro es

de 0,1 a 0,4 micrómetros y su longitud entre 5 y 15 micrómetros.

TREPONEMA: Es un género de espiroquetas, bacterias finas y pequeñas 0.1 a 0.4 mm

de diámetro 5 a 15 um de largo con espiras regulares y apretadas y extremos afilados. En

fresco solo pueden observarse en un microscopio de campo oscuro o de contraste de

fase.

CASO PROBABLE DE SIFILIS GESTACIONAL: Toda mujer gestante, puérpera o con

aborto en los últimos 40 días con o sin signos clínicos sugestivos de sífilis (como por

ejemplo: úlcera genital, erupción cutánea, placas en palmas y plantas), con una prueba

treponémica rápida positiva, que no haya recibido tratamiento adecuado para sífilis de

acuerdo a su estadio clínico durante la presente gestación*. En todos los casos se debe

solicitar prueba no treponémica (VDRL, RPR) y esta debe ser reportada en diluciones.

Los casos probables no son notificados al SIVIGILA.

CASO CONFIRMADO: Toda mujer gestante, puérpera o con aborto en los últimos 40

días con o sin signos clínicos sugestivos de sífilis (como por ejemplo úlcera genital,

erupción cutánea, placas en palmas y plantas), con prueba treponémica rápida positiva

acompañada de una prueba no treponémica reactiva (VDRL, RPR) a cualquier dilución,

que no ha recibido tratamiento adecuado para sífilis durante la presente gestación o que

tiene una reinfección no tratada. Los casos confirmados se deben notificar al SIVIGILA.

SIFILIS CONGENITA: Criterio uno: Fruto de la gestación (mortinato o nacido vivo) de

madre con sífilis gestacional sin tratamiento o con tratamiento inadecuado para prevenir

la sífilis congénita, sin importar el resultado de la prueba no treponémica (VDRL,

RPR) del neonato. Se considera tratamiento adecuado para prevenir la sífilis

congénita haber recibido al menos una dosis de Penicilina benzatínica de

2´400.000 UI intramuscular (IM) aplicada 30 o más días antes del momento del

parto (Criterio por nexo epidemiológico).

CRITERIO DOS: Todo fruto de la gestación con prueba no treponémica (VDRL, RPR) con

títulos cuatro veces mayores que los títulos de la madre al momento del parto, lo que

equivale a dos diluciones por encima del título materno.


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CRITERIO TRES: Todo recién nacido hijo de gestante con diagnóstico de sífilis en el

embarazo actual, con una o varias manifestaciones sugestivas de sífilis congénita al

examen físico con exámenes paraclínicos sugestivos de sífilis congénita.

Clínica sugestiva: bajo peso, prematurez, pénfigo palmoplantar, rash,

hepatoesplenomegalia, rágades, rinorrea mucosanguinolenta, hidrops-fetalis.

Paraclínicos: Cuadro hemático: presencia de anemia, reacción leucemoide

(leucocitos>35.000 x mm3), Trombocitopenia (<150.000 plaquetas x mm3) siempre que

no esté asociado a trastorno hipertensivo gestacional. Radiografía de huesos largos: que

evidencie periostitis, bandas metafisiarias u osteocondritis. Líquido cefalorraquídeo:

(LCR): con VDRL reactivo en cualquier dilución o aumento de las proteínas (>150 mg/dL

en el recién nacido a término o >170 mg/dL en el recién nacido pretérmino) o conteo de

células >25 x mm3 en LCR a expensas de linfocitos (meningitis aséptica) sin otra causa

que lo explique. Aminotransferasas elevadas e hiperbilirrubinemia directa: Aspartato

aminotransferasa - AST (valor de referencia 20.54U/L ± 13.92 U/L), Alanina

aminotransferasa - ALT (valor de referencia 7.95 U/L ± 4.4 U/L), bilirrubina directa o

conjugada > 20% del total de la bilirrubina total. Uroanálisis: con proteinuria, hematuria,

cilindruria.

5. PROTOCOLO DE MANEJO

Principio de la prueba

La prueba rápida ad-bio Sífilis Ab permite la medición de los anticuerpos (IgM, IgG e IgA)

contra los antígenos recombinantes de Tp en sangre de forma rápida y fiable sin

instrumentación.

La prueba rápida ad-bio Sífilis Ab en un inmunoensayo de cromatografía de flujo. La

prueba de casete consiste en: 1) una almohadilla que contiene el conjugado coloreado de

borgoña con los antígenos recombinantes de Tp conjugados con oro coloidal (conjugado

Tp) y conjugado IgG-oro de conejo, 2) una membrana de nitrocelulosa que contiene una

banda de prueba (banda T), y una banda de control (banda C). La banda T está pre-

recubierta previamente con antígenos recombinantes no conjugados de Tp, y la banda C

con anticuerpos de cabra anti IgG de conejo.


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Cuando un volumen adecuado de muestra es dispensada en el pozo de muestra del

casete, la muestra migra por acción capilar a través del casete. Los anticuerpos Anti-Tp si

están presentes en la muestra se unirán con el conjugado Tp. El inmunocomplejo es

entonces capturado en la membrana pre-recubierta del antígeno Tp, formando la banda T

coloreada, indicando anticuerpos Tp positivos en el resultado de la prueba.

La ausencia de la formación de la banda T sugiere un resultado negativo. La prueba

contiene un control interno (banda C), la cual muestra una banda coloreada de borgoña

por el inmunocomplejo de cabra anti IgG de conejo / conjugado IgG-oro de conejo, que se

debe formar independientemente de la banda T. El resultado es inválido si la línea C no

aparece, y debe ser repetida la prueba en un nuevo casete.

MATERIALES Y REACTIVOS UTILIZADOS

1. Dispositivos de prueba, cada uno sellado en una bolsa de aluminio que contienen:

a. Un dispositivo de casete

b. Un desecante

2. Goteros plásticos

3. Solución salina estéril 0,98%

4. cronometro.


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ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

Para uso de Diagnóstico in Vitro

1. Esta guía debe revisarse y actualizarse cada vez que se actualice o modifique el inserto

y debe ser leída completamente antes de la realización de la prueba. Si no se sigue la

guía o el inserto se pueden generar resultados erróneos.

2. No abra el empaque sellado hasta que no se vaya a realizar la prueba.

3. No use los dispositivos si se encuentran vencidos

4. Atempere los reactivos de 15 a 30°C antes de usarlos.

5. No utilice los componentes de otro tipo de prueba como sustituto de los componentes

de este kit.

6. No utilice sangre hemolizada para la prueba.

7. Siga todas las precauciones universales y del manual de bioseguridad para la

realización de este tipo de pruebas.

8. Deseche todas las muestras y los materiales del kit usados como residuos biológicos

peligrosos.

9. En caso de usar controles adicionales al kit manipule los controles positivos y negativos

de la misma forma como a las muestras de los pacientes.

10. Los resultados de las pruebas pueden ser leídos 10 minutos después de agregar la

muestra al pozo de muestra. Leer los resultados después de los 10 minutos puede

generar resultados erróneos.

11. No procese la muestra en un lugar con fuerte corriente de aire, con ventiladores o aire

acondicionado.

PREPARACION DE LOS REACTIVOS E INSTRUCIONES DE ALMACENAMIENTO

Todos los reactivos vienen listos para ser usados. El almacenamiento de los dispositivos

cerrados debe ser de 2-30°C. Si se dispone de los controles positivos y negativos deben

mantenerse 2-8°C. Si se almacena de 2-8°C, asegúrese de que el dispositivo de prueba

se lleva a temperatura ambiente antes de la apertura. El dispositivo de prueba es estable

hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa. No congele el kit ni lo exponga a más de

30°C.


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RECOLECCION DE LA MUESTRA Y MANIPULACION

Considere todos los materiales de origen humano como infecciosos y manipúlelos

siguiendo los procedimientos de bioseguridad.

Plasma (Solo en caso de no disponer de suero)

1. Recolecte la muestra en un tubo tapa lila, azul o verde (que contenga EDTA, Citrato o

Heparina) por ven punción.

2. Separe el plasma por centrifugación. (Ver manual de toma de muestras).

3. Usar tubo primario cuando la muestra se procese inmediatamente o transferir el plasma

a un vial nuevo. Garantizar siempre la trazabilidad en la identificación de la muestra al

momento de hacer alícuotas.

Suero

1. Recolecte por venopunción la muestra en un tubo tapa amarilla (sin anticoagulantes).

2. Espere la formación del coagulo.

3. Separe el suero por centrifugación. (Ver manual de toma de muestras).

4. Usar tubo primario cuando la muestra se procese inmediatamente o transferir el suero a

un vial nuevo. Garantizar siempre la trazabilidad en la identificación de la muestra al

momento de hacer alícuotas.

Las muestras deben ser procesadas lo más pronto posible después de la recolección.

Almacenar de 2°C -8°C si no se va a procesar inmediatamente.

Guarde de 2°C-8°C hasta 5 días. Las muestras pueden ser congeladas a -20°C para un

almacenamiento más prolongado.

Evite los múltiples ciclos de descongelación. Antes de la prueba, descongelar las

muestras a temperatura ambiente y mézclelas bien. Si la muestra presenta partículas

visibles, retírelas por centrifugación. No use muestras lipémicas, hemolizadas o turbias ya

que pueden presentar interferencia en la interpretación de los resultados.


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PROCEDIMIENTO

Paso 1: Lleve las muestras y componentes del ensayo a temperatura ambiente si es

refrigerada o congelada. Mezcle bien la muestra antes del ensayo una vez descongelado.

Paso 2: Cuando esté preparado para realizar la prueba, abra el empaque y saque el

dispositivo. Colóquelo sobre una superficie limpia y plana.

Paso 3: Asegúrese de marcar el dispositivo con la identificación del paciente.

Paso 4: Llene la pipeta con la muestra. En posición vertical, dispense 2 gotas (60- 90 μL)

de muestra dentro del pozo asegurándose de que no hayan burbujas de aire.

Nota: Adicione 1 gota de solución salina o Buffer de Sal-Fosfato (buffer de uso

clínico común, no suministrados en el kit) dentro del pozo de muestra, si no se

observa migración de la muestra trascurridos 30 segundos, lo cual ocurre con

muestras espesas.

Paso 5: Contabilice el tiempo.

Paso 6: Los resultados deben ser leídos a los 10 minutos. Los resultados positivos o

reactivos se hacen visibles transcurrido 1 minuto.

No lea los resultados después de 15 minutos. Para evitar confusiones descarte el

casete después de leer el resultado.

CONTROL DE CALIDAD INTERNO

1. Control Interno: Esta prueba contiene un control incluido, la banda C. Esta se

desarrolla después de adicionar la muestra y el diluyente de muestra. De lo contrario,

revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo.


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INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

1. RESULTADO NEGATIVO: Si solo se desarrolla color en la banda C, la prueba

indica que no hay anticuerpos detectables de anti-Tp presentes en la muestra. El

resultado es negativo.

NEGATIVO

2. RESULTADO POSITIVO: Ambas bandas C y T desarrollan color, la prueba

indica la presencia de anticuerpos anti-Tp en la muestra. El resultado es positivo.

POSITIVO POSITIVO

3. RESULTADO INVALIDO: Si la banda C no se colorea, el ensayo se considera

inválido a pesar de que las otras bandas se tiñan. Se debe realizar nuevamente la

prueba en otro casete.

INVALIDO


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LIMITACIONES DE LA PRUEBA

1. El procedimiento y la interpretación de los resultados de la prueba deben

seguirse cuidadosamente cuando indiquen la presencia de anticuerpos anti-Tp en

el suero o plasma de los pacientes. La falla en el seguimiento puede generar

resultados inexactos.

2. La prueba rápida ad-bio Sífilis Ab se limita a la detección cualitativa de los

anticuerpos anti-Tp en suero o plasma humano. La intensidad del color de la

banda no tiene correlación lineal con el título de anticuerpos presentados en la

muestra.

3. Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos detectables de anti-Tp.

Sin embargo esto no excluye la posibilidad de la exposición o infección con Tp.

4. Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad de anticuerpos anti-Tp

presentes en la muestra es menor a los límites de detección de la prueba, o los

anticuerpos que son detectados no están presentes en la etapa de la enfermedad

en la que es recolectada la muestra.

5. Algunas muestras que contienen alto título inusual de anticuerpos heterófilos o

de factor reumatoideo pueden afectar los resultados.

6. Los resultados obtenidos con esta prueba deben ser interpretados junto con

otros procedimientos diagnósticos y la sintomatología clínica.

NOTA: Ver características de rendimiento clínico y precisión en el inserto de la

prueba.


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PRUEBA DE SEROLOGIA VDRL

CONSIDERACIONES IMPORTANTES

SIFILIS: La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual infecciosa crónica

producida por la bacteria espiroqueta Treponema pallidum,

subespecie pallidum (pronunciado pállidum).Este microorganismo es

una bacteria móvil espiriforme (con forma de hilo en espiral), perteneciente al

orden Spirochaetales, familia Spirochaetaceae. Su diámetro es de 0,1 a 0,4

micrómetros y su longitud entre 5 y 15 micrómetros.

VDRL: La prueba VDRL ( venereal disease Research laboratory ) constiruye una

técnica serológica con suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el

diagnóstico de sífilis y analizar la respuesta al tratamiento específico.

TREPONEMA: Es un género de espiroquetas, bacterias finas y pequeñas ( 0.1 a

0.4 mm de diametro 5 a 15 um de largo )con espiras regulares y apretadas y

extremos afilados. En fresco solo pueden observarse en un microscopio de campo

oscuro o de contraste de fase.

FLOCULACION: La floculación es la aglomeración de partículas desestabilizadas

en microflóculos y después en los flóculos más grandes que tienden a depositarse

en el fondo de los recipientes construidos para este fin, denominados

sedimentadores.

REAGINAS: En el suero sanguíneo de pacientes con sífilis se encuentran

globulinas ( anticuerpos ), los cuales reaccionan con antígenos de naturaleza

lipídica como la cardiolipina que es un componente del reactivo para la prueba de

VDRL.

ETS: Enfermedad de transmisión sexual.

http://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad_de_transmisi%C3%B3n_sexual

http://es.wikipedia.org/wiki/Infecci%C3%B3n

http://es.wikipedia.org/wiki/Espiroqueta

http://es.wikipedia.org/wiki/Treponema_pallidum

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria

http://es.wikipedia.org/wiki/Spirochaetales

http://es.wikipedia.org/wiki/Spirochaetaceae

http://es.wikipedia.org/wiki/Micr%C3%B3metro


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PROTOCOLO DE MANEJO

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA

Treponema es un género de espiroquetas, finas y pequeñas (de 0,1 a 0,4 mm de

diámetro), con espiras regulares y apretadas y extremos afilados. En fresco solo

pueden observarse por microscopía de campo oscuro o por contraste de fase.

Se tiñen difícilmente con colorantes de anilina y fácilmente con Giemsa o por

impregnación argéntica. Son móviles en medios líquidos por medios de rotación o

translación. Tienen de 1 a 5 flagelos, generalmente 3. Son organismos quimio

heterótrofos, utilizando una gran variedad de carbohidratos o aminoácidos como

fuente de energía y carbono. Realizan una respiración aerobia estricta o

microaerófila.

Las especies patógenas son difíciles de cultivar en laboratorio. Normalmente son

parásitos y patógenos del hombre y animales. Viven en la cavidad oral, el aparato

digestivo y órganos genitales.

Las reaginas, presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en

suero por la reacción con un antígeno cardiolipinico purificado y estabilizado. Si la

muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación

visible en microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de

antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de

la técnica USR en la que no es necesario inactivar la muestra.

Factores que intervienen

La hemolisis excesiva y la lipemia pueden afectar los resultados de la prueba.

El exceso de quilomicrones en la sangre puede interferir en los resultados de la

prueba.

Existen muchos procesos que pueden producir resultados positivos falsos del

VDRL, incluyendo neumonía por virales, enfermedades autoinmunes y el

embarazo.

http://es.wikipedia.org/wiki/G%C3%A9nero_%28biolog%C3%ADa%29

http://es.wikipedia.org/wiki/Spirochaetales

http://es.wikipedia.org/wiki/Di%C3%A1metro

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Microscop%C3%ADa_de_campo_oscuro&action=edit

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Microscop%C3%ADa_de_contraste_de_fase&action=edit

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Tinci%C3%B3n_Giemsa&action=edit

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Impregnaci%C3%B3n_arg%C3%A9ntica&action=edit

http://es.wikipedia.org/wiki/Flagelo

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Quimioheter%C3%B3trofos&action=edit

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Quimioheter%C3%B3trofos&action=edit

http://es.wikipedia.org/wiki/Carbohidrato

http://es.wikipedia.org/wiki/Amino%C3%A1cido

http://es.wikipedia.org/wiki/Respiraci%C3%B3n_aerobia

http://es.wikipedia.org/wiki/Microaer%C3%B3filo

http://es.wikipedia.org/wiki/Cavidad_oral

http://es.wikipedia.org/wiki/Aparato_digestivo

http://es.wikipedia.org/wiki/Aparato_digestivo

http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%93rganos_genitales


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Materiales

Lamina escavada con pozos

Reactivo de serología

Agitador de Mazzini

Cronometro

Micropipetas y puntas

Tubos para diluciones.

Procedimiento y cuidado del paciente

Adoptar todas las medidas de bioseguridad para la realización del procedimiento.

Obtener la muestra mediante punción venosa preferiblemente en ayunas para

evitar realizar la prueba con sueros lipémicos, los cuales pueden interferir con la

prueba.

Por tratarse de una prueba para apoyar el diagnóstico de Enfermedad de

transmisión sexual (ETS), en caso de resultados Reactivos se debe entregar el

resultado de acuerdo a la actividad No. 6 del procedimiento de laboratorio clínico.

Técnica

Tanto el reactivo como la muestra deben estar a temperatura ambiente.

En la placa para leer VDRL Colocar:

Muestra 50 ul

Control Positivo 50 ul

Control Negativo 50 ul

Con gotero provisto colocar sobre la muestra y controles:

Antígeno 50 ul

Agitar horizontalmente la placa a 180 R.P.M durante 4 minutos

Observar inmediatamente en microscopio en objetivo de 10X y hacer contraste

cerrando el condensador.


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Si la prueba da reactiva, hacer diluciones del suero 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con

solución salina fisiológica.

DILUCIONES: Se preparan diluciones en serie así: (Dilución ½) Pozo No, 1:

dispensar 50 ul de suero a un pozo conteniendo 50 ul de solucion salina y

mezclar. (Dilución ¼) Trasladar 50 ul del Pozo No. 1 al siguiente pozo No. 2 que

contiene 50 ul de solucion salina y mezclar. (Dilución 1/8) Trasladar 50ul del pozo

No.2 al siguiente pozo No, 3 que contiene 50 ul de solucion salina y mezclar y así

sucesivamente.

Las diluciones se procesaran igual a la técnica descrita.

Interpretación y valores Normales

REACTIVO: Presencia de floculación (Se incluye Reactivo 0 Diluciones).

NO REACTIVO: Ausencia completa de floculación

RESULTADO: El titulo estará dado por la inversa de la última dilución que se

observe reactiva.

En caso de duda en el momento de la interpretación realizar el reproceso de la

prueba con la misma muestra o solicitar nueva muestra antes de validar un

resultado. En cualquier caso antes de validar un resultado de VDRL proceder

según la actividad No. 5 del procedimiento de laboratorio clínico en lo referente a

los criterios de validación.

CONTROL DE CALIDAD

Diligenciar el formato de registro diario de control de calidad de VDRL.

Significado Clínico

El VDRL es una prueba de tamizaje, no define ningún diagnóstico y requiere

realizar una prueba confirmatoria para la correlación por parte del clínico.

Puntos de Control:

1- Asegurarse que el Agitador está configurado a 180 rpm.


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2- Asegurarse que se está dispensando el volumen de muestra indicado en el

procedimiento y/o en las diluciones realizadas.

3- Asegurarse de realizar las lecturas inmediatamente a los 4 minutos de

terminado el proceso de agitación.

PRUEBA RAPIDA CUALITATIVA PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS HIV-1/2

ABON

CONSIDERACIONES IMPORTANTES

SIDA: Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida: un síndrome caracterizado por el

desarrollo de una infección oportunista producto de daño al sistema inmunológico

provocado por un virus llamado Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH).

ELISA: Prueba de laboratorio para detectar anticuerpos al VIH.

CONSENTIMIENTO INFORMADO: El test de VIH sólo puede realizarse siempre y

cuando la persona entienda sus implicaciones y el posible impacto del resultado. En

muchos países se requiere que la persona exprese por escrito su voluntad de realizarse el

test.

PROTOCOLO DE MANEJO

Principio de la prueba

La prueba HIV 1/2 Human Immunodeficiency Virus Rapid Test Strip (Sangre

Total/Suero/Plasma) es un inmunoensayo en membrana, cualitativo, para la detección de

anticuerpos 1/2 en sangre total, suero o plasma. La membrana esta pre cubierta con

antígenos HIV recombinantes. Durante la prueba, las muestras de sangre total, suero o

plasma reacciona con las partículas cubiertas con antígeno HIV en la tira de prueba. La

mezcla migra luego por la membrana cromatográficamente por acción capilar y reacciona

con el antígeno HIV recombinante en la membrana en la región de la línea de prueba. Si

la muestra contiene anticuerpos HIV 1 y/o HIV 2, aparecerá una línea de color en la región

de la línea de prueba, indicando un resultado positivo. Si la muestra no contiene

anticuerpos HIV 1 y/o HIV 2, no aparecerá la línea de color en la región de la línea de

prueba, indicando un resultado negativo. Como procedimiento de control, una línea de

color aparecerá siempre en la región de la línea de control, indicando un volumen

apropiado de muestra y buena permeabilidad en la membrana.


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ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El kit puede ser almacenado a temperatura

ambiente o refrigerado (2- 30°C). El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de

vencimiento impresa en el empaque. La tira de prueba debe permanecer en el empaque

hasta su uso. NO CONGELAR. No usar luego de la fecha de vencimiento.

REACTIVOS Y MATERIALES UTILIZADOS

Materiales Suministrados

• Tiras de Prueba • Goteros de muestra desechable • Buffer • Inserto • Tarjetas de

prueba

• Tubos para toma de muestra • Lancetas (solo para sangre total de punción digital) •

Centrifuga (solo para plasma) • Cronómetro • Tubos capilares heparinzado desechables y

tapas dispensadoras (solo para prueba de punción digital)

INSTRUCCIONES PARA USO

• Permitir que el dispositivo de prueba, muestra, buffer y/o controles alcancen temperatura

ambiente (15-30°C) antes del análisis.

• Retirar la tira de prueba del empaque y usar tan pronto como sea posible. Serán

obtenidos mejores resultados si el ensayo es realizado dentro de la primera hora.

• Retire la cinta de la tarjeta de prueba y pegue la tira de prueba en la mitad de la tarjeta

de prueba con las flechas hacia abajo en la tarjeta de prueba como se ilustra.

• Para muestras de Suero, Plasma o Sangre Total de Venopunción: Mantener el

gotero verticalmente y transferir 1 gota de suero, plasma o sangre total de venopunción

(aproximadamente 25 L) a la almohadilla de muestra de la tira de prueba, agregar luego

2 gotas de buffer (aproximadamente 80 L) e iniciar el cronómetro. Ver la ilustración.

• Para muestra de Sangre total de punción digital:

• Para usar tubo capilar: Llenar el tubo capilar y transferir aproximadamente 25 l de

sangre total de punción digital a la almohadilla de muestra de la tira de prueba, agregar

luego 2 gotas de buffer (aproximadamente 80l) e iniciar el cronómetro. Ver la ilustración

inferior.


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• Para usar caída libre: Permitir caer 1 gota de sangre total de punción digital

(aproximadamente 25 l) en el centro de la almohadilla de muestra de la tira de prueba,

agregar luego 2 gotas de buffer (aproximadamente 80l) e iniciar el cronómetro. Ver la

ilustración inferior.

1. Esperar que aparezca la(s) línea(s) de color. El resultado debe ser leído a los 15

minutos. No interpretar los resultados después de 20 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS (Favor remitirse a la ilustración)

POSITIVO:* Aparecen dos líneas de color. Una línea debe estar en la región control (C) y

otra línea debe estar en la región de prueba (T).

* NOTA: La intensidad de color en la región de la línea de prueba (T) puede variar

dependiendo de la concentración de anticuerpos HIV presentes en la muestra. Por

consiguiente, cualquier intensidad de línea en la región de prueba (T) debe ser

considerada positiva.

NEGATIVO: Una línea de color en la región control (C). Ninguna línea de color en la

región de prueba (T).


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INVALIDO: Falla en la presencia de la línea control. Volumen de muestra insuficiente o

técnicas en el procedimiento incorrectas son las razonas más comunes para la falla en la

línea control. Revisar el procedimiento y repetir la prueba con una nueva tira de prueba. Si

el problema persiste, descontinuar el uso del kit inmediatamente y contactar a su

distribuidor local.

CONTROL DE CALIDAD

Controles internos son incluidos en la prueba. Una línea de color que aparece en la

región control (C) es un control interno. Esto confirma el volumen suficiente de muestra y

la técnica correcta del procedimiento. Controles estándares no son suministrados con este

kit; sin embargo, se recomienda que controles negativos y positivos sean analizados

como una buena práctica de laboratorio para confirmar el procedimiento del análisis y

verificar el apropiado funcionamiento de la prueba.

LIMITACION

• La prueba HIV 1/2 Human Immunodeficiency Virus Rapid Test Strip (Sangre

Total/Suero/Plasma) es solo para uso diagnóstico in vitro. Esta prueba debe ser usada

para la detección de anticuerpos HIV en muestras de sangre total, suero o plasma. Ni el

valor cuantitativo, ni la tasa de incremento en la concentración de anticuerpos HIV pueden

ser determinados por esta prueba cualitativa.

• La prueba HIV 1/2 Human Immunodeficiency Virus Rapid Test Strip (Sangre

Total/Suero/Plasma) solo indicará la presencia de anticuerpos HIV en la muestra y no

debe ser usada como único criterio para el diagnóstico de infección por HIV 1 y/o HIV 2.

• Para confirmación, se deben realizar análisis adicionales de las muestras, como ELISA

y/o Western Blot.

• Como con todas las pruebas diagnósticas, todos los resultados deben ser evaluados

con otra información clínica disponible por el médico.

• Si el resultado de la prueba es negativo y la sintomatología persiste, se sugiere realizar

pruebas adicionales de seguimiento por otro método diagnóstico. Un resultado negativo

no excluye la posibilidad de infección viral de HIV 1 y /o infección por HIV 2.


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CONTROL DE CALIDAD INTERNO

1. Control Interno: Esta prueba contiene un control incluido, la banda C. esta se

desarrolla después de adicionar la muestra y el diluyente de muestra. Si la línea C no se

desarrolla, revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo.

PRUEBAS DE LABORATORIO A UTILIZAR EN LOS LABORATORIOS DE LA RED DE

LA ESE IMSALUD HABILITADOS:

1- Como prueba presuntiva se realizara la prueba rápida en placa.

2- Como segunda prueba para verificar el resultado de la prueba presuntiva con resultado

reactivo se realizara microelisa de 4ª generación en el Laboratorio clínico de la UBPBL.

3- Como tercera prueba para definir el resultado cuando se presente discordancia entre la

prueba presuntiva y la segunda prueba microelisa, se realizara prueba rápida en placa de

marca diferente a la presuntiva.

La prueba rápida de VIH se ingresa al sistema (LIS) con el código HIVPR

La prueba de VIH Microelisa se ingresa al sistema (LIS) con el código HIV

Procedimiento para el diagnóstico de infección por VIH en adolescentes con 13

años de edad o más y adultos (Aplica también para mayores de 18 meses)

CASO 1

En el CASO 1 prueba presuntiva (prueba rápida) con resultado NO REACTIVA validar el

resultado de la prueba rápida de acuerdo a los criterios de la actividad No. 5 del

procedimiento de laboratorio clínico y entregar el resultado a la jefe de P y P para

asesoría post test.

CASO 2

1. En el CASO 2 prueba presuntiva (prueba rápida) con resultado REACTIVA validar el

resultado de la prueba rápida de acuerdo a los criterios de la actividad No. 5 del

procedimiento de laboratorio clínico y entregar el resultado a la jefe de P y P para

asesoría post test.


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2. El paciente con resultado de prueba presuntiva REACTIVA será remitido al laboratorio

nuevamente para realizar segunda prueba: En este caso se debe tomar al paciente

nueva muestra y remitirla al laboratorio clínico de la IPS Puente barco Leones para

realizar Microelisa de cuarta generación.

3. Si el resultado de la segunda prueba por microelisa es REACTIVO validar el

resultado de la prueba de acuerdo a los criterios de la actividad No. 5 del procedimiento

de laboratorio clínico y entregar el resultado a la jefe de P y P para asesoría post test.

CASO 3

En el CASO 3 si el resultado de la prueba presuntiva prueba rápida es REACTIVA y la

segunda prueba microelisa es NO REACTIVA en el laboratorio clínico de la IPS puente

barco leones se debe realizar una tercera prueba utilizando una prueba rápida de marca

diferente a la presuntiva.

Validar el resultado de la Tercera prueba sea REACTIVA o NO REACTIVA de acuerdo a

los criterios de la actividad No. 5 del procedimiento de laboratorio clínico y entregar el

resultado a la jefe de P y P para asesoría post test.

CASO 4

En el CASO 4 si el resultado de la prueba presuntiva es REACTIVA, la segunda prueba

NO REACTIVA, y la tercera prueba indeterminada o invalida, la interpretación será NO

CONCLUYENTE O INDETERMINADO, No se puede validar el resultado.

Informar de la situación a la jefe de P y P para continuar con el algoritmo diagnóstico de la

guía de práctica clínica GPC-2014-39.

DETERMINACION CUALITATIVA DE GONADOTROPINA CORIONICA SUB UNIDAD

BETA (PRUEBA DE EMBARAZO EN PLACA)

1. CONSIDERACIONES IMPORTANTES

HGC (B): Abreviatura de la hormona gonadotrópina coriónica sub-unidad Beta.

Es una hormona glicoproteica producida por la placenta en desarrollo, poco despues de la

fertilizacion. En el embarazo humano, la hCG puede detectarse tanto en orina como en

suero ya a los 7 dias de la concepcion. Los niveles de hCG continuan aumentando muy

rapidamente, superando las 100 mUI/ml a las 10-12 semanas de embarazo. La aparicion


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de hCG en orina y suero poco despues de la concepcion y su posterior aumento rapido

durante el principio de la gestacion convirten a esta hormona en un excelente marcador

para la deteccion precoz del embarazo.

GONADOTROFINAS: Conjunto de hormonas secretadas por la glándula hipófisis

(glándula pituitaria) que estan implicadas en los procesos de regulación y reproducción de

los vertebrados.La tres hormonas gonadotrofinas son la LH (hormona luteinizante), la FSH

(foliculo estimulante) y la HGC.

GRAVINDEX: Es una prueba realizada a una muestra de orina de una mujer que cursa

en periodo de amenorrea para determinar si está embarazada o no.

AMENORREA: Se define como la ausencia de la menstruación por un periodo mayor a

90 dias.

OBITO FETAL: Cuando un feto muere dentro del utero con un peso mayor de 500gm y/o

con un desarrollo fetal mayor de 22 semanas; es decir cuando ha alcanzado un desarrollo

tal, que en condiciones optimas, la vida fuera del utero pudiera haber sido posible.

MOLA HIDATIFORME: La mola hidatiforme o embarazo molar, es la forma mas benigna

de la enfermedad trofoblastica del embarazo, un tipo de tumor que se desarrolla en lugar

de una gestacion, en los tejidos en donde debia desarrollarse laplacenta y el embrion.

EMBARAZO ECTOPICO: Es una complicacion del embarazo en la que el ovulo fertilizado

o blastocisto se dedesarrolla en los tejidos distintos a la cavidad uterina ya sea en la

trompa de Falopio (lo mas frecuente) o en el ovario, o en el canal cervical o en la cavidad

pelvica o abdominal.

PROTOCOLO DE MANEJO

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA

La prueba ultra HGC de Embarazo en un solo paso en placa es un inmunoensayo

cromatografico rápido para la detección cualitativa de la Gonadotropina coriónica humana

en orina o en suero, para el diagnóstico precoz del embarazo. La prueba utiliza dos líneas

para indicar el resultado. La línea de la prueba utiliza una combinación de anticuerpos

que incluyen un anticuerpo monoclonal hGC para detectar selectivamente niveles

elevados de hGC. La línea de control está compuesta por anticuerpos policlonales de

cabra y partículas coloidales de oro. El ensayo se realiza añadiendo la muestra de orina o

suero al pocillo de la placa y observando la formación de las líneas de color. La muestra

migra por acción capilar por la membrana para reaccionar con el conjugado de color.


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Las muestras positivas reaccionan con el conjugado de color del anticuerpo específico

anti-hGC para formar una línea de color en la región de la línea de la prueba (T) de la

membrana. La ausencia de esta línea de color sugiere el resultado negativo. Para servir

como control del procedimiento, siempre aparecerá una línea de color en la región de la

línea de control (C), si la prueba se ha realizado correctamente.

Limitaciones

Ver limitaciones, características técnicas, sensibilidad, especificidad e interferencias en el

inserto adjunto provisto por la casa comercial en la caja del producto.

Materiales

Placas

Cuenta gotas

Cronometro

Muestra

Técnica

Deje que la placa y la muestra de suero alcancen la temperatura ambiente (15-

30°C) antes de realizar la prueba.

1. Deje estabilizar la bolsa sellada a temperatura ambiente antes de abrirla. Extraiga la

placa de la bolsa sellada y úsela en cuanto sea posible.

2. Coloque la placa en una superficie limpia y nivelada. Mantenga el cuentagotas en

posición vertical y deposite 3 gotas de suero (aproximadamente 100ul) en el pocillo de

la placa (S) y ponga en marcha el cronometro. Evite que queden retenidas burbujas de

aire en el pocillo de la placa (S).

3. Esperar hasta que aparezcan una o dos líneas coloreadas. Los resultados deberán

leerse a los 5 minutos cuando se analice una muestra de suero.

Nota: Una concentración baja de hCG podría dar lugar, después de un periodo de

tiempo prolongado, a la aparición de una débil línea en la región de la prueba (T); por

lo tanto no interpretar el resultado después de 10 minutos.


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Interpretación de resultados

POSITIVO: Aparecen dos líneas coloreadas distintas. Una línea quedara en la región C

(Control) y otra línea quedara en la región de la prueba T (Test).

NEGATIVO: Una línea coloreada aparece en la región C, y no aparece ninguna línea

coloreada en la región T.

INVALIDO: No aparece la línea de control.

NOTA: Esta prueba proporciona un diagnóstico de presunción del embarazo. El medico

solo establecerá un diagnostico confirmado del embarazo después de evaluar todos los

resultados clínicos y analíticos.

Significado Clínico

Niveles Aumentados:

Embarazo ectópico

Mola hidatiforme

Coriocarcinoma de útero

Tumores

Niveles Disminuidos:

Amenaza de Aborto

Aborto incompleto

Feto muerto


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5. HISTORIAL DE CAMBIOS

VERSION MOTIVO FECHA

01 Creacion Del Documento 23/02/2017

02 Actualizacion y revisión

09/09/2019

03

Elaboró Revisó Aprobó

Ruth Valentina Leal Polentino Coordinadora Laboratorio Clinico

Andrea del Pilar Mogollón Buitrago Subgerente

Katherine Calabró Galvis

Gerente

gestion de laboratorio codigo: pm- fecha:09- clinico …

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