gas chromatography/mass spectrometric characterisation of pyrolysis/silylation products of glucose...
TRANSCRIPT
��� ������������ ���� ����������� ���������������� ��������� ��������� ������� �� ������ ��� ���������
Daniele Fabbri*, Giuseppe Chiavari, Silvia Prati, Ivano Vassura and Marta VangelistaLaboratorio di Chimica Ambientale, C.I.R.S.A. – Universita di Bologna, via Marconi 2, 48100 Ravenna, Italy
�������� �� �� ���� ������� � ������� ���� �������� � ������� ����
��� ���� ������ �� ������������ ����� ���������� �� �������� ����������� ��������� ������� ��
������ ��� ��������� ���� �������� �� �� ������������ ���� ���������� ��� ��� �������� ��
��� ���������� �� � �����������������! � ������� " ����� " ���������� # ���! $ ��������
������ � �����������! $ ����� � ������ ����! % ������� & ����� ���� ����� � ���! � ����� #
������� �%�� ����� % ��� ������� ��� "!& ������� � ' ������������ ������������! (��) *���! �
� ��� "!& ������� � ' ������������! % � ��� "!& ������� � ' ������������ ��� �!% ��� �
��� "!& ������� � ' ������������ ���� ��������� ���� �� ����������� �� ������� ����� ���
�������� ��������� ���� ������ �� ������� ������� ���� �������� �������� �����������
��������! ����� ��� ���������� ���� �� +���� ������� ���������� �� ,- ����� ��
������������) * ���+ � ��� ""& ��� ����� � �� ������������ �� �� ���� ������ �� ��������
�������� ������������! ��� �� ����� ���� �� ���� ������ �� �� ����������� �������) .��������
�� �� �� ��������� �� �� �������� �� ���������������/��� �������� ����������� �� � ��� % ���
����� ��� �� �!% ��� ��� ���� �� (�! ������� �� $ ��� �������� � ����������� ��� �
�������� ��������� ��������� ������ �� ������) ��� ���� ������ �� ���� ������� ���������
��������� ������� ��� ��������) ������� � �00� 1��� 2���� 3 ����! (�)
��� ������ ����������� �� ������ ��� �� ��� �������
������ �� �� ��������� ���� ������ ��� ��������
�������� ������ �� ����� ��� �� ���� ������������ ��� �
���������� ������� ��������� ��� ��� ����� �������!"#$
%������� �� ����������� &��� ��� �������������� ���'��
���� ������������ ��� ���� ��� �� �������� ��� �������� ��
������ ����������� ������� �� ����� ��� �����!�#(
��� �������� �������� ������ �� ����� �� ���������
)"�*+�������+�+,+������������ -./� &���� �� � �����+
��� ����������� �������� ����� �� ��������� ���� �� ���
������ ������� �� ��� ������� ��������� �����!
���������� -. �� ���������� � ��� �������� ��� �� ���
����� ���� ��� � ���0� ��� ������� ���������� ���� ���
���� ������� ��� �������� �� ������������ �� ������������
������!"��""
��� ������ ��������� �� -. ��� ����� ������������ )�!�!
"�*+������������������ "��+������������������/ ���+
���� �� ��� �������� �� ������ �� � �������� %�'.1
������� ��� �� ���������� �� ����� ���� �������� ����
�� �� �������� ���� ��� %�'.1 ��������� ��� ���� �����
��� � &��� ������� ���� ������ .1 �����! -. ��
������ ������� �� .1'23 �� ��� ���� �� ��� �������� ������
��� ���������� ��� �� ����������� �� ���� &��� ������+
��� ����� �� ��� �������� �� ��� ���������� �������
����������������� �����0��� )�2�4/!"� 4�&�����
�������� �� ����� ��� ����� &��� �2�4 �������
������������ ��������� ���0������� ������ ����� ���
�����0��� ��� �� �2�4�������� �������� ��������� ����
&��� ������ ����������� ����&��� )�������������� �0���+
����� ���������/!"$
���������������� �� � &���� ������ ��������������
�������� ��� ��� .1'23 ������� �� �������������� �����
�23 ����������� ��� ������� ���� ������� ����� ���
������� ��� �0����� � ������ .1 �������� ��� � ������ 23
�������� �������� ���� ��� ������������� ������������
���������!"� 2�������� ��� ��������� �� ��������������
��������� �� ��� ���� ������� �� ������� ������������
����������� ���� ��� �������������� �� ��� ������ ���+
�����!"5#"6 7�� ���� ������� �������� ��� �� � ����
���������� �� ���������� �� �������� ��������� ��� ���
�������� �� ��������'�������� &��� ��0�����������8���
)42,3/ ��� ��� .1'23 ������� �� �����0�+�������
�������� ������� �� ������������� ��� ���� �������
���������!"9 3���� 42,3 �� ��� ����� ���� �2�4� �����+
��� ������ ����������� ������� �� �� ���������� ���
���� ��������'�������� ������� ������ ���� �����
���� ���� ���������� �� �23 ����������� �� ������ ������
����������� ������� �� �����! 4�&����� ���������� -.
&�� �������� �� ��� � ����� ������ �� ��������'
��������'.1'23 ������� �� ������ ��� ��� ��������
�� � ����� �� ������� �� �������������� ��������'
�������� ������� �������� ��������� ����� ����� ����
������� ��� ��� ������ �� ���� ������� ���� ���������!
��� ��� �� ���� ����&�� �� ������� ������ ������� ���
*���������� ��: ,! 7������ -���������� �� 1������ ������+��� �'� ;�;3� 1;�3� # <���������= �� >������ ��� 2������ ���9"�� �������� ;���!?+���: �������@�����!����!��
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��!
��%;, 1�22<C;1��;�C3 ;C 2�33 3%?1���2?��D
��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
%������ ����� �� A��� ;����3������ )&&&!������������!&���!���/! ,�;: "�!"���'���!95*
.1'23 ����������� �� ��������'�������� ������� ��
����� ��� ������ ��� ��� ����������� ����� ��������
�� �����0 ��������!
45.467�48�*(
���������� ���&��� �������� �������� &��� ��������
���� 3����+������: �+�����0����������� �+�����0�+"+
�����+"+����������+$+���� 5+)�����0������/+�+�����+
����� �+�����0�+*+�����+)��/+�����+�+���� �+�����+$+��+
���0�+)��/+�����+�+��� )����/� "�*+�������+�+,+�����)���������� -./� ��� ,+�����! 5+2����+�+����� ����
&�� �������� �� E�1���6 �0������� �� 5+�����+�+�����+
���� �� ������ &����'������� �� *�°1!3������� �� ���� ������� &�� ��������� �� ��������
��� ����� �������� �� �������� &��� �!5 �- 42,3 ���
�!$ �- ������������������ )�213/! ����� " � �� ����
����������� ��� ��0��� &�� ���������� ���� � ������ ��
��������� ��� ��� ������ &�� �������� �� ��������������
),12/ ��� ������� �� .1'23! ;� ����� �� ������ �������
������� ������� �� -.� * �� �� -. �������� �� ��������'
,12 &��� ������� &��� �� �- 42,3 ��� " �- �213!
��F��� �� ��� �������� ������ &��� ������� �� .1'23
����� "5 ��� ��� "* � �� ���� ����������� ��� ����� �����
��� �������� �� ������� �!� �- 42,3!
*�������� &������ ����� �� ������������ ����� )���� �!�" ��/
&�� �������� ���� � F���8 ��� ���������� F���8 &��� ����
5 �- 42,3 &��� ������ ����� ���� ��� ���� ��� ���
��0��� &�� ���� �������� �� 6��°1 ���� � 1,3 "���
%�������� ������ ������ ������� �������� )1������
,��� 3������� �0����� <3�/� ������� ��������� �� � G�����
$��� ��� ������������� ����� �� � G����� 3���� ;; ���
���� ���� ������������ �� ����� �� � %�'.1 ��������� ���
�� "5�°1!"9 � 3���� 2,C+53 ������� ���� )���+5H
�������'(5H ����������0��� ���������� ������ $� ��
�!�5 �� �!�!� �!�5 �� ��� ���� ����/ &�� ��� &��� �
���������� ��������� ���� 5� �� $��°1 �� "5°1'����
&��� ���� �� ������� ���!
2��� ������� �� ��� ������� ������ ���� )6� �G/ &���
�������� �� " ����'� ���� ��� ���&��� ����������: ���
����� �5#5��� ������� ������ "� ��� ��� ���� �� "9�°1�������� ������ "$5� G! 1������� ������ ���� ����+
���� �� �������� -. &��� �0������ �� .1'23 ���� ��
������� ������ )���������� �� �����/ ��� ������� ������+
���� )1;/ ����� ���� � G����� 3���� ���� ��� ���� ����
������������! 1; &�� ��������� &��� ������� �� �������
��� )���������� ���� "��� ��� �������� ���� �� ��/!
Figure 1. Mass spectra of silylated standard compounds: 2-hydroxymethylfuran; 5-methyl-2-furoic acid; 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde; 2-hydroxy-1-methyl-1-cyclopenten-3-one; 4-hydroxy-6-methyl-(2H)-pyran-2-one; and 2-methyl-3-hydroxy-(4H)-pyran-4-one (maltol).
Figure 2. GC/MS traces obtained from the analysis of asolution containing levoglucosan (6 mg) and HMDS (22 �L)after (a) 15 min; (b) 16 h; and (c) the addition of excess HMDS.Compounds L1–L4 are the same as in Figs 3 and 5.
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
�$5� ,! 7����� � ���
64�9(�� *8' '7��9��7,8
�������� ������� ���������3������ �������� ������� �������������� �� �������
������ ������� ���������� �� ������ ����������� ��
����� )������ ��������������� ���������/� ������� �4
����� �� ����� ������ ��������� &��� ������� ���
������� �� .1'?;+23! ����� ���� ������� ��� �������� ��
7��! "!
��� ���&��� �����0����� ����� ���� ���� ����������9
�� ����� ��������� �� ����+�������� 23: �+ ���
$+)�����0������/����� �+�����+$+�����0�+��$+�������+
����� 5+)�����0������/+�+���������� ��� 5+)�+�����+
0����������/+5�+����+�+���! ;� ���� ���� &� ����
���������� ��� �23 ������ �� �&� ����� ���������� ���
�����0��0��������� ����� �+)�23+�0������/���� ���
5+)�23+�0������/+�+���������! ����� ����� &��� �
�����0��� ����� ��� ��� ����� ����� �� ����� ���� &��
���������� ���������� �� ����� ���������!9 7���� " ���&�
��� ���� ������� �� ��� �23 ����� �� 5+�����+�+�����
����! ��� ���� ��� �� ��� "$( �� ��������� �� � ������
������������� ����&�� �� �����0��� ���� �23 ������� ���
��� �� � ����� ���� ���&�� �� � ���� �������������
&��� �0����� �� 1��!"�
3����� ��������� ������� �����0� ����� ���� ����
�������� �� �������� ������� �� ������ �������
�+�����0�+5�*+�������+)��/+�����+�+���� $+�����0�+*+
�����+)��/+�����+�+���� $+�����0�+�+�����+)��/+�����+
�+���� �+�����0������+��$+������������+�+���� $�5+����+
���0�+�+�����+)��/+�����+�+���� ��� �+�����0������+
��$+�������+5+�����0�+)��/+�����+�+���!9 ��� ���� �������
�� �&� ������� �������� �������������� �� �������+
���0������+�+��� ��� �����+�+��� ��� ���&� �� 7��! "!
��� ���� ������� �� �+�23+�0�+*+����������+�+��� ��
������������� �� �� ���+������� ��� �� ��� "6� ����������
&��� ��� ���������� �� 1�! ��� ���� ������� �� �������
���� )�+�����+$+�23+�0�+)��/+�����+�+���/ �� ����+
����� �� ��� I2� "5J� ��� �� ��� "9$! ��� �0���� ���� ��
� � �������� �� ��� �23+�0� ����� ������ �� ������� �
���������� ���� &��� ��� ������� �����������0� �����
������� ������� ��� ��� ���� ��� ������������� ��
I2� "5J�!1������������� ��� ������� ���� �� �������� �������
�� ������ ��� �+�����0�+"+�����+"+����������+$+��� ��
Figure 3. Mass spectra of peaks L1–L4 of Fig. 2 with the proposed structurescorresponding to silylated derivatives of levoglucosan.
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
.1'23 �� %�������'�������� ������� �� ����� �$5"
��� �� ��� ���� ��������� ��� �������!9 ��� ���� �������
�� ��� �23 ����� ���������� �� ��������� �� 7��! "! �� ��������
����� ��� ����� ��� I2� "5J� ���� ��� ������ �� ���
���������� �� ��� �0���� ���� � �� ��� �23+�0� ����!
3���� -. �� ��� ���� ��������� �������� ������ ��
������ ��� �������� �� �������� ���������� &�� �������
�� ���� �����! 7���� � ���&� ��� ������������� �� �
�������� ������ ���������� -. �� ��������� �������� �����
���&��� ��� �������� �� �� �F����� )&��� ������� �� �4
�����/ ����� �� 42,3! �� ��� ��������� �� ��� ��������
�&� �������� ��� �� -" ��� -�� ��� �������� �������� &���
��� ����� ��� �� ������������ -.! �� ��� ��������
��������� ��� ����������� �� ��� � -" ��� -� �������� ��
����� �� ��� -$! ?������� ����� ��� �������� �� �0����
42,3� ��� ���������� -. )��� -�/ ������� ������� )7��!
�/!
%�� � -" ��� -� ��� ��������� �� ��� �����������
����������� �� -.� ��� ��� -$ �� ��� ��������� -. )$�* ,�/!
��� ����� ���������� �� �� ���������� &��� ��� .1'1;+23
������� ���� ������� �� ������� ���! ��� 1; ����
������� �� -$ �� ������������� �� � ��� �� ��� $�6 ��� ���
���������� ������ &���� ��������� &���� �� ���� ��
������� ��� �� ��� �9(!
;� �� &���� ������ ����� ����� ��� ����� ������� ���+�23+
�0� -. �������� ��� ��� ������� ������� �� �� ������ �� ���
�������������� ��������! ��� �0�������� ������� �������
�� ��� ��������� ������������ �� ��� �4 �����! 7�� �0�����
��� ���������� �� �4 ����� �� ������������ ��&����
��������� ��������� �� ��� �����: �+�F������ � $+�F � �+
�0�� � �+�0�� � �+�F � $+�0!"( >����� �� ��� ������ "1�
������������ �� -.� � ����� �4 ����� ��� �0��� �� ���
�4 ���� �� �������� $ �� ��� ���� �������� ��� ������� ��
������ ���������! ����� ��� �0����� �� ��� ��������
���&��� ���� ��� �4 ���� �� �������� $ �� ��� ��������
���� ����� �� ��������� � ��� � ��&���� ��������!�� �� ����
������ ��� -$ �� �������� �� ��� ���+���+�23 ����� �� -. ����
�� � �����F���� �� ���� ����������� ��� �����������
������������ �������� -" ��� -� ��� �������� �� ��� �+
��� �+�23 ������ �� -.!
����� ������� ����������� ����� �� ��� ���������� �� -.
Figure 4. Simplified mechanism for the mass spectral fragmentation of silylated derivativesof levoglucosan. Numbers below each ion indicate the m/z values when R is H or TMS.
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
�$5� ,! 7����� � ���
��� ���������� &��� ��� ������� �� ��� ���� ������� ��������
�� 7��! $! ;� ����� �� ��������� ��� ���������� � ������
������ ��������� ��� �������� ������������� ����&��� ��
-. ��� ��� ����������� �� �������� �� 7��! �! ��� ������ ��
������� ���� ���������� �� ������������� �������� ��������
�� ��� �������� ��� �������� ������ ��������� �!�! -.
��� ��� ������������ ������������" ��� ���������� �+
����!"* %������� ��������� ��� ���� ����� �� ��� ���������
���������� ������ ����� �� $ ��� � )�!�! ����� ������� �4 ��
�23+�0� �����/� �� ����� ��� ��� ���� ��������
�����������! ��� �������������� &��� ������ ��������� ��
��� �+1)�/ ��� ��� ������ 1)"/+1)�/ ���� �������� ���� ����
����������! ��� ���������� ����&�� &��� ��� ������
�������� �� �+1)�/ ��� &��� 1)�/+1)5/ ���� �������� ��
������ �� �� ��� �������! ��� "�$+���0���� ������
������ �� -. �� � �� �� �� ���� ����� &��� ��� �������
������� �� �� 1)"/ ������ ���� �� 1)5/� ����� �� ��� ������
���� �&� �0���� ����� �������� ��� ������ �� ���������!
;� ��� ���� ������� �� -. ���+���+�23 ������ ��� ��� ��
��� �*" �� ��������� �� ��� �������� I14�)*/K14)5/+14)�/
)��23/+14)$/)�4/+14)�/+��23J�� &������ ��� ��� � ��
��� �"6 ��� "�( ��� ��������� �� I�23�14)�/K14)$/+
14)�/��23J� ��� I14�)*/K14+14��23J�� �����������)��� 7��! �/! ��� ����� �&� ��������� �������� �!�! �����
������������� �� ��� ���� �����0� �� ������ � �� �� &��
���� ���� �0������ �� �������� ��� ��� I�23�14 K 14+
14�4J� �� ��� "�5! ��� ����� ������� �� ��� ��� �� ���
"�5 ������� ��� �������� ���������� �� ��� ������ &��� ���
���� �4 ���� �� 1)$/!
��� ��� �� ��� ���� �������� �� ��� I�23�14 K
14��23J�� �������� �� &���� �&� �23+�0� ����� ���
�� �������� �������� �� ��������� �� ������������ &��� ���
������������ �� ���+�23 -.! ;� �� ������� ���� ���� ��� ��
������ ������ � ������������� �������� �������� ��� �����
�� � �23+�0� ����! 2�������� �� �23 ����� �� F���
������� ��� �0����� ��� ��������� �� ��� ������ ��� � ��
��� "(" ��� "�6� ������������� �� I�23�+14 K��23J�
��� I�23�3�)14$/�J�� �����������!"��"*
��� ���������� �� ��� � -" ��� -� �� ��� �&� ����+
������� -. ������� &��� � ������������ �4 ���� �� 1)$/
�� �� ��������� &��� ��� ���� ������� �������� �� ��� ���
�� ��� "�5 �� ����� ���� ������� )7��! $/� ��������� ��
I�23�14 K 14+14+�4J�! ��� ���� ������� �� �+�23 -.
��� �+�23 -. ��� ���������� ��� ��������� ��� ���������� ��
��� � -" ��� -� �� ���� ������ �� �� �������� �������
������ ��� �����������&���! � ��������� ���������� �� ���
������ ������� �������� �� ��� ���+������� ���� ����� ""*
��� "$� �� ��� ���� ������� �� ������� -� &��� �������
�� ���� �� ������ -"! ��� ��� �� ��� "$� �� ����������
��������� �� ��� �������� I4�14)$/K14)�/+��23J�� )���������������� ���������� ���� ����� �� ��� ��� ��� ��
������ �� ���������� ��0���� ��� -./! ������� ��� �����
""* )���������� ��������� �� ��� �������� I14�)$/K14)�/+
��23J��/ �� �������������� �� ������� ������� �������+
����� ��� �� ������ ���� ��� ���� ������� �� ���
������������� ���������� ������������! ��� ���� ����
��� ��� � ����� ""* ��� "$� ���� �& �������� �� ��� ����
������� �� ������� -" ������� ��� ���& ���� ���
�������� ����������� �� ������� ���� ��� �������� ���
���������� ������ ����� �� ��������� � ��� $� &��� ��� ����
�� ��� 1)�/+1)$/ ������� �������� �� ��� �������! ����
�������� -" ��� -� ��� ���������� ���������� �� �+�23 -.
��� �+�23 -.� �����������! ;� ���������� &��� ���
�������� ����������� ��� ���� ��� �� ������� -" �����
Figure 5. GC/MS traces obtained from on-line Py/GC/MS ofcellulose and glucose with HMDS. Analyses were runconsecutively from (a) to (d), with repeated blanks in between.Mass spectra of peaks X1–X4 are depicted in Fig. 6.
Figure 6. Mass spectra of pyrolysis/silylation products ofglucose and cellulose, X1–X4 (see Fig. 5).
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
.1'23 �� %�������'�������� ������� �� ����� �$5$
�� ��� "�(� ���������� &��� ��� �0������ �������� ���
I14�)*/K14)5/+14)�/+��23J� )��� 7��! �/!
.�������� ��������� �������7���� 5 ���&� ��� .1'23 ������ �������� ���� ��������
&��� 42,3 �� ����� ��� ����� �� 6��°1! %������������� ����������� �� -. )-"#-$/ ��� ���������� �� ���+
������� &��� ��� .1'23 ��������������� �� ��� ��������
�������� ���� ������� �� �������� -. ������� ����������
42,3! ,�+ ��� ����+�23 ������ �� -. ��� ��������� �� ���
�������������� �������� ��� �� ��� ""*! %�������'�������� ��
�������� ������� � ���+�23 ����� �� ���������������
&��� � ���� ������� ������ �� ���� �� ���+���+�23 -.�
������������� �� ��� ��� �� ��� ""*!"9 ��� �������� ��� ���
�� �������� ��� ����� ����� ����� �� �� ������
���������"9 �� ��� � �� ��� �5� ��� ���������� ��������
�� ������� ���������� ������������� ��� ���� ���������� ��
��������� ��������������� ��� +������ �����������! ���
�������� �� ������� ������� ������������ ��������� �����
���� ��� �0��������� ���������� ��� ����� ��+��� %�'
.1'23 &��� 42,3 �� ��� ��������� �� �������� ��������
&��� �������� �����0� ������ ��� �� -.! � ���������
�����F���� �� ��� ������ �������� �� -. �� ��� ���������
�� ������ �������! ;������ ��� ������� &��� 42,3 �����
� ��������'�������� �� �� ����� ����� ���� �� ���
��������� �� ������� ��� � ���������� &��� ��� �������
����������� �� -.! ;� �� ������� ���� ���� �������
������� -. ��� -. ������ ������ ���� ��������'��������
�� ������ ���� ���� ��� %�'.1 ��������� ��� �������� ����!
���� ��� ������� �� � ���� ������� ����� �� 42,3
������ ���� ��������� �������!
��+��� ��������'�������� �� ��� ���� ����������
����� ��� ���������� �� ����� F��������! C����������
������� ��� ��������� ��������� &��� ��������� &�����
� ����� ���� ������ ��� ����� �������� ��� � &��� �
�������� �������! ��� .1'23 ������ �������� �� 7��! 5 ���
��� ��� ���������� ������� �� ����� ��� ����� )�� ���
����� �+�/! �������� ���������� ���� ��� %�'.1 ��������� ��
5 �- 42,3� ����� �� ���� �������� &��� ���� ��� ��
������� ������� &��� ���������! 1�������� ��� .1'23
������ ��� ����� ��� ������ �� �� ������� ���� ��� �����
������� � ������ ���������� �� 5+)�23+�0������/+�+
���������! ���� ������� �� �� ��������� &��� � �����&$ ��
�������� ���� ���&��� ���� ����� ����� �� ������ �
������ ���������� �� �����0��������������� &��� ��+
����� �� -. ���� �����!$ ��� ���� ������ ������ ��� ��
��� �� �� ���� ��������� �� 7��! 5� ��� ���� �������� ��
������� ��������'�������� �0���������!$ ��� ������ ���
������ ��� ��������� ����������� �� ����� ��� �����
���� ������ ������������ �� ��� ��� �� ����� �� ���
��������� ������������ �� ����� ��� ����� ��&����
�������� ��������! 3������� �� ��� ����� ����� ����
����� �� ��������� ������ ��� ������� ���� ��� ������ �� ��
���� ���������� ����� ���������� ������ ��� ��� �������� ��
��������'�������� �0���������! C���������� ��� ��������
������� �����0� �� 1)*/ ����� �� ������� ����� ��
��������� �� &���� ���� ����� �� �0���� �� ��� ��������
������ ��� ��� ��������� �� -. &�� �� �������!
>�� ��� �� ���� �����0� �� ���+�������� ��������� &���
�����F��� ���������� �� -. ���������� &�� �� ����
������� ��� ����� ���� ��� ��� ��� ���� ������
������� ��������� ��� ��� �������� �����!
���� &��� ������� -. ��� �+)�23+�0������/+�+��+
�������� ��� �������� �� "+�����+�+�23+�0�+"+��������+
$+��� ��� ������� ���� �� ��������� �� 42,3 �����+
����� �� ���� ����� ��� ����� ��&����� 5+�����+�+
���������0��� ���� �23 ����� ��� �+�23+�0�+*+�����+
)��/+�����+�+��� &��� ��� ��������!
��� ���� ������� �� ����� ������� ��������'��������
������� ��� &���� �������� �������� &��� ��� �������
��� �������� �� 7��! * )���� ��� ����������� ����� L"� L��
L$ ��� L�/! ��� ���� ������� �� L" �������� ���� �� �+
)�23+�0������/+�+���������� ��� ��� ��� �� ��+
������ �� ��� ������ $+)�23+�0������/+�+���������!
������� ������� ������� �� ��� ������� ��� ������� ��
���������������+��$+�����! 1������� L� ��� L$ ���+
��� ��� ����� ���� ������� &��� ���������� �� ��� ���������
��� ���������� ����� �� ��� ��� � �����������! ��� ����+
�� ���� �� ��� �6� ��� �59 ��� ���������� &��� ��� �������
I2� 6$J� ������ �� ��� $�5 ��� $$"� �����������! ������+
��� �� 2��������� L$ ��� �� ���������� ��������� �� $+
�23+�0�+�+�23+�0������+�+����������+"+���� ��� ����+
��� L� �� ���+�23+�0��������������!
1������ L� �� � ������ ��������'�������� ������
�� ������ ��� ��� ������� ��� ���� ��������� �� �+�23+
�0������+5+�23+�0�+��$+�������+)��/+�����+�+���!"9 ;�
����� ��� ������������ �������� )����� ��� �� "��+
�����0�+,+������+��0+"+����������+$+��� �� "�5+����+
���+�+���0�+,+������+��0+"+��+$+���/ �� � ������� ����+
�� ����������� ������ &���� &�� ������� �� 3����8����
� ����� ���� ��� �������� ���� ����� ��������! ��� ��� ��
��� �99 �� �������� �� ��� ������ ���� �� ��������� &���
��� �����'��� ����� ����� $*" )�99� 6$/! ��� ���� ���
������������� �� I2� "5J� �� �� ���������� &��� ���
�������� )�������� �����/ �� �������� ������� ���+
����� &���� ���� �� �0���� ���� �� ��� � �������� �� ���
�23+�0� ����! ���� I2� "5J� ��� ���� (� ,� )�23�4/
������ ��� ��� �� ��� "9$� &���� �� ��� ��� �������� 1�
������ ��� ��� �� ��� "55! 4�&����� ����� ������ ��������
������ �� ������������ ������ ��������� ��� ��������
������� ������� ��������� ��� �������������������!
;� ����� ������� ����� ��� � ��������� ���� ������� ������
�� ���� �� L� )&��� �������������� ��� ��� � �� ��� �99� �6$�
��5� "9$� ��� "55/ ��� �������� �� .1'23 ������ �� �����'
����� 42,3 ���������� )��� ���&� �� 7��! 5/!
�,8�(9�7,8�
;� ��������� ��� ���� ������� �� ��������'��������
������� ��������� �� ���� &�� ��� �� ���� ������ ��
�������� ������������ ��� ��� �� .1'23 ������ ��������
���� ��������'�������� �� �����0 ��������! 7�� ���������
�������������� ���� �� ��� "9$ ��� �������� ��� ��� ��� ��0����
)�!�! 5+�23+�0������+�+���������/� �� ��� ""* ��� ���+
���� ������� ������������� ��� ����� �"6 ��� ����������
������������� ��� �� ��� �� ������ ���� �� ����
������������� �� �����0 42,3'���������� ���� ���
������! ;� ����� �� ��� ���������� �� �� ������ �������� ��
������������� ��+��� ��������'.1'23 &��� 42,3 ���
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
�$5� ,! 7����� � ���
���&� ��� ������� �� ��������� �� ������������� �� �������+
����� ��������� ��� �� ���� �������� ��������!�$
64:4648�4�
"! 3��M8���� 7! ���� ���������� ���� ������� "(*9 �#: �"(!�! 2������� 31! �������� �������� �� ����� ��������������� ;� ������F�� ��� ;������������� �� ��������1��������� ��! ��! ?������� "((9 �"6#$"5!
$! 3������ ?>� .������� �;� 3����� �;! �� ����� ��� ������� �������!
�! ������� �� E��� E� �� ��� ?! ������ �� "(65 ;: �$"!5! 3����� 4+�� >��� <� .�N��8 A! �� ����� ��� ������ "(9� #:��(!
*! >��� ,�� 4���� ?�� 4��� ��! ����� ����� ���� "(96 "<�: ��$!
6! ����8 %A� -���0 ��� >��� ��! ����� ���� "((� &�: "5"(!9! %�&�� �,� ?�� � .>� >��� ��! �� ����� ��� ������ "(9( "%:�$6!
(! -���0 ��� 1�������� �2� ����8 %A� >��� ��! �� �������� ������ "((" "<: *5!
"�! 7����� 2%� -� ������� E! ������� ���� !������ ���� #%:�5*�!
""! ?��� G�� 3������� >��� 1������� �1� ���F >! "���������������� ���� ���" &$: �*6!
"�! 3��&��8����� 1� ����8�� ;� 3������ 4! �� ����� ��� ���������� &�: "6(!
"$! 7����� ,� 4��� �! �� ����� ��� ������ "((( %<: �66!"�! %����� �?! ���������� �# $������ ��������� %����� 1������
1������: ;������ "(*9!"5! %������� .� 3������ �� ���� E� ��� 3���& ?!���� ����
������ "(*6 �": "�5"!"*! ,� ����� ,1� ������� �� 4����� �,� 4�������� 3� >����� 2�
,�&��� .� 3&���� 11! �� ��� ���� ���� "(*( <": "6�9!"6! >���� �� 2������ %� 3������ �� .����� 3� ������ �! ��
���������� � "((* ;�0: �6!"9! 7����� ,� 1������� .! ����� ����� ���� ���" %%<: �6"!"(! >�� 2! ����������� �������� ����%�� ���� A���: C�& D�� !
"((* ����! *!��! >����� ,4� ���� ,�� ���8������� �1! !�������� &��� "((�
##: **�(!�"! 4���� E� .�N �8������ 47� 3�������� 4� 2N �� ,!
'�������� ���� '������ "(** $: ��9!��! 3��M8���� 7� 7����0 �4� 3�������� ��� 1������ �.!
���������� �� "(69 &;: �$$!�$! 7����� ,� %���� 3� G����� ;! �� ������� �������� ���� %: �"�!
1�������� � ���� ���� A��� B 3���� -��! ��� ������� ���� ������� ���� "&: �$�(#�$55
.1'23 �� %�������'�������� ������� �� ����� �$55