8/18/2019 Enzimas dee Restriccion Resumen Modificado

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ENZIMAS DE RESTRICCION

Las enzimas de restricción o también llamadas endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces

fosfodiéster de la doble hebra de DNA a partir de una secuencia especifica que reconocen (sitio de

restricción). Permiten cortar la doble hebra de DNA, donde reconocen secuencias palindrómicas los

cortes se realizan en dos maneras distintas!

" #ortes cohesi$os

" #ortes romos

%a tres tipos de enzimas de restricción diferentes las cuales se diferencian b&sicamente en!

Los tipos de secuencias que reconocen

• La forma en la que realizan el corte

• La estructura de la enzima

 Aplicaciones!

• %acer mapa de restricción de un pl'smido o bacteriófao

• ramentar DNA enómico para separación de electroforesis southern blot

• *eneración de framentos para ser usados como sondas marcadas en southern northern

blottin

• *eneración de framentos para ser subclonados en los $ectores apropiados, creación de DNA

recombinante

NUCLEASAS

+n las mismas condiciones, la $ida media del AN es de solamente - aos. Las nucleasas son

enzimas hidrolasa del tipo esterasa que deradan &cidos nucleicos /01. Las fosfodiesterasas onucleasas son enzimas hidrolasas que catalizan la ruptura de los enlaces fosfodiéster, como por

e2emplo los que se establecen en los &cidos nucleicos entre la pentosa de un nucleótido el rupo

fosfato de otro. 3u acción reula la concentración dentro de las células del A4P c5clico del *4P

c5clico. +st&n descriptas 6 isoenzimas. +n la actualidad ha f&rmacos usados como inhibidores de las

fosfodiesterasas (cafe5na, aminofilina, sildenafilo, etc.). 3e clasifican se7n el tipo de &cido nucleico

el tipo de enlace que hidrolizan.

8ipos

3ecuencia de corte espec5fico de la enzima de restricción +co9

ibonucleasas. 3on espec5ficas del AN, por lo que también se llaman ANasas o Nasas.

Deso:irribonucleasas. 3on espec5ficas del ADN, por lo que también se llaman ADNasas o DNasa.

+:onucleasas. +scinden el 7ltimo nucleótido del e:tremo 6; o

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+ndonucleasas. #ortan los enlaces fosfodiéster situados en el interior de los polinucleótidos. +stas

enzimas no requieren un e:tremo libre, por lo que pueden cortar &cidos nucleicos circulares. Alunas

endonucleasas, como la ADNasa 9 la ADNasa 99, son poco espec5ficas por lo que se refiere a la

secuencia de nucleótidos que hidrolizan.

+ndonucleasas de restricción. 3on endonucleasas que reconocen cortan secuencias de nucleótidos

mu espec5ficas (secuencias palindrómicas en una cadena doble de ADN), este tipo de enzima se

utiliza mucho en las técnicas de ADN recombinante.

4eanucleasas! son altamente espec5ficas. 4odifican las prote5nas son capaces de arrelar la

mutación que este per2udic&ndola pro$ocando una determinada enfermedad. No debemos

confundirlas con los llamados =dedos de zinc= nucleasas que cortan al material enético.

LIGASAS

 ADN liasa es una enzima de tipo liasa que forma enlaces co$alentes entre el e:tremo 6> de una

cadena polinucleot5dica el e:tremo de otra cadena polinucleot5dica. 8ambién se denomina enzima

de unión de polinucleótidos. La reparación por escisión puede ser realizada por < enzimas! lacorrendonucleasa ?.@., iniciadora del proceso, la ADN polimerasa 9, que elimina reconstrue el

framento de ADN, la ADN liasa, que realiza la unión de los framentos nue$os antiuos. Para

conseuir una replicación cuidadosa del ADN (&cido deso:irribonucleico), cada cadena de la doble

hélice hace de molde para sintetizar la nue$a cadena que tendr& una secuencia complementaria a la

cadena molde. Por un lado, como las dos cadenas de la doble hélice tienen direcciones opuestas (una

es 6;< ;mientras que el otro es