encyclopedia of genetics || plant growth promoting rhizobacteria (pgpr)

4
Mayer V, Torres Ruiz RA, Berleth T et al. (1991) Mutation affecting body organization in the Arabidopsis embryo. Nature 353: 402±407. See also: Root Development, Genetics of; Seed Development, Genetics of Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) H Antoun and J Kloepper Copyright ß 2001 Academic Press doi: 10.1006/rwgn.2001.1636 The Rhizosphere In higher plants, the root zone is the site where inten- sive interactions take place between the plant, soil, and soil microorganisms. Plants take up most of their requirements in nutrients and water from the roots, and they also release from the roots a large number of low molecular weight water soluble exudates such as amino acids, hormones, organic acids, sugars, and vitamins. Plant species and age, soil nutrients, tem- perature, and plant±microbe interactions are among the many factors influencing the nature and import- ance of the different root exudates. At the beginning of the twentieth century, the term `rhizosphere' was proposed to indicate soil near roots that was under the influence of the root, as indicated by enhance micro- bial activity. In addition to root exudates, the rhizo- sphere is in contact with other plant-derived products of high or low molecular weight, that contribute to the richness of this ecological niche in nutrients. The root±soil zone is very complex and it generated many definitions for the different ecological niche involved. The plant root surface or rhizoplane can be studied as an individual niche or frequently it is included with the rhizosphere. Endophytes are microorgan- isms colonizing the interior of plant tissues, including roots. Rhizosphere Effects on Soil Microorganisms Many factors influence the importance and activity of soil microorganisms. However the availability of nutrients (mainly carbon) and water are two import- ant limiting factors. As indicated in the previous section the rhizosphere (R) is a niche containing sub- stantially more nutrients that the nonrhizophere (S) soil. The R/S ratio of the numbers of microorganisms is used to illustrate how the rhizosphere affects the different group of microorganisms. In general total microbial counts are found to be increased 10- to 50-fold in the rhizosphere. However R/S values ran- ging from 100 to more than 1000 can be observed for some specific groups of soil microorganisms (like ammonifiers or denitrifiers). Bacteria including acti- nomycetes are the most abundant group of micro- organisms present in the rhizosphere. Fungi and protozoa are also present in the rhizosphere. In add- ition to soil, rhizosphere microorganisms may arise from seedborne populations, which survive storage and germination. Effect of Rhizosphere Microorganisms on Plants Fungal or bacterial plant pathogens can be present in the rhizosphere and cause plant disease. These patho- gens obtain their nutrition by living on or in the plant host. The presence of an important number of other microorganisms in the rhizosphere can have a neutral, deleterious or beneficial effect on plant growth. Dele- terious rhizosphere microorganisms are not parasitic, but they limit plant growth by altering water or mineral ion uptake or the activity of plant growth substances. Apart from the well-known symbioses formed between plants and soil microorganisms like the mycorhizal fungi, the Frankia actinomycetes and the bacteria Rhizobium, some rhizosphere micro- organisms can promote plant growth by different mechanisms summarized later here for rhizobacteria. Trichoderma species are the most common potential beneficial nonsymbiotic saprophytic fungi found in the rhizosphere. In this paper we will only be discus- sing nonsymbiotic plant growth promoting rhizo- sphere bacteria. Plant Growth-Promoting Rhizobacteria Rhizobacteria, are bacteria that aggressively colonize plant roots. Hence, these bacteria can multiply and occupy the ecological niches found on plant roots, at most stages of plant growth. Some rhizobacteria are endophytes. Plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) are a very small portion of rhizobacteria (2± 5%) that promotes plant growth. The term PGPR was elaborated in 1978 by Kloepper and Schroth, and used to designate the rhizobacteria showing significant plant growth promotion, as shown with the substan- tial increases in fresh matter yield obtained with inoculated radishes. Rarely, PGPR can be present in high numbers, naturally like in some suppressive soils. In general, PGPR are applied by inoculation of seeds or vegetatively propagated plant parts with high populations at planting time. Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) 1477

Upload: h

Post on 11-Dec-2016

226 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Encyclopedia of Genetics || Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR)

,���� ?( #����� 8��: 8 ( .�� �� # �� ��� !����" ,�����

�������� $��� ������:���� �� �� ��$������� ��$����

������ 0=0� ;�<;���

� ����� ��� 0�+��������2 %������� �!. ����0�+��������2 %������� �!

����� % �<�� � ���������-�/���� �� B�%�C, ����� ��� 4 9������

�������� � ��� ������� �����

���� �������������������0�

��� ��-����� �

0� ����� ������ �� ���� ��� �� �� ��� ��� ����#�� ����� ����� ��" �� ���� �� ����� ���� ������ �� ������������ ����� ��" �� ���� �� �����'������� �� �������� ��� ���� ���� �� ��������� ��� ��� ��� ���� �� ����� � ��� ����� ���� �� ��� ����� ���� ���� ������ �� � ������� � ���� �������� ������ � ���� ������� ��� �������� ���� �� �� ��� ��� ��� ��������� ��#������� ��� ����4�� ��� ����� ����� �� ������� ���� �� ���� ����� ��� �� ����� ��� ������#�� �� �� ������� ���� ������� �� �� ���������� �� ������� ������ �� ��� %���������& ���������� �� ���� �� ��� ��� ����� ���� ��� ���� ������� �� �� ����� �� ���� ��� �� ���� �� ��#��� � �� ���� 0� �������� �� ���� ������� �� �����#���� �� �� ���� � ���� ���� ����#��� � ����� ���� ���� �� ���� ��� ������ ���� �������� �� ���� ���� �� ���� ���� � �� � �� ��������� ������4��� ��� �� �� ���� ��� �� ������ �������������� ��� �� ������� ���� � �� � �� � ���� ���� ���� ����� �� �������� �� � �������� �� ���� ���� �� � �� ��'���� �� �� �� ������� �� ���������� :�������� �� �� �������#���� �������� �� ������� �� ���� ������� �� �����������

��-����� � �!!���� �� ����&�� �� �������

���� �� ���� ����� �� �������� ��� � �� ����� ��� �� ������������ 3�� � �� � �������� ���������� 6����� �����7 ��� ���� �� ��� ������#��� ������� �� ����� �� ���� ��� �� �� �� ����� ���� �� ��������� 687 �� � �� � ��������� ���#�������� ��� �������� ���� �� ����������� 617���� �� 8(1 ����� �� �� ������ �� �� ������������� ��� �� ������� ��� �� ��������� ��� �� ��

������� ����� �� �� ������������ 0� ���� ������ ����� ����� �� ����� �� � �� ���� /,# ��=,#��� �� �� ���������� 3�� � 8(1 ��� ���#���� ���� /,, �� ��� ���� /,,, �� � ���� � ������ �� ��� ������ �� ��� �� ����������� 6�"���������� �� ����������7� A� ���� �� ����� � ��#���� �� �� �� ���� �������� ����� �� �� ��#��������� ����� �� �� ���������� !���� ����������� �� ��� ����� �� �� ���������� 0� ���#����� �� ���� ��������� �� ����������� ��� �������� ������ ����������� ��� � ��� � ��������� �����������

�!!��� �! ��-����� � &�� �� ������� ��������

!���� �� �� ���� ���� �������� �� � ����� ���� ��������� ��� ��� ���� ������ ��� �����#��� ������ ���� ��������� �� � ��� �� �� �� �� ��������� �� ���� �� �� ��������� ����� �� ������ ����������� �� �� ��������� �� �� � ������������� �� ���� �� �� � �� ���� ������� �#������ ��������� �� ����������� �� ��� �������� ���� ��� ���� ���� ������ �� ������ ���� ������� ��� ����" �� �� � �� ��� �� ���� ������������� �� ����� ���� �� �#"���� ������������� ���� ����� ��� ��� �� ����������� �"�� �� ������ ������ �� A���� � ������ �� ����� �� ���� ���$����� ��� ��������� �� ��#��������� �� ������ ���� ������ �� �������� ������� ��������� ��� �� ��� ������� �����7�������� �� �� �� �� ���� ����� ����������� �� ����������� ���������� ����� ����� ���� ���������� 0� ���� ���� � �� ��� � ��� ��#���� ����������� ���� ������ ��������� �����#���� �� �����

����� % �<��"� ������� ��-�/���� ��

8������ ����� �� �� ���� ���� ������� � ��������� ������ 3� � ��� �� ���� �� ������ ���� ��� �� ���� � �� �� ����� �� ���� ������ ������ ����� �� ���� ������� 1�� ������� ���� ����������� ���� ������ ��������� ������� ����6�@�87 �� � �� ��� ������� �� ������� ���� 6*4=?7 ���� ������� ���� ������� �� ��� �@�8���������� �� /+-9 �� M���� ��� 1 ������ ��� ����� ������� �� ������� ���� ������� ������� ������� ������ ���������� �� ����� ���� �� �������#��� �� ���� �� ���� ����� ��� ������� ������� ���� �������� 8���� �@�8 �� � ����� ������ ������� ������� �" �� ��� �������� �����0� ����� �@�8 �� ����� �� ��� ������ �� ����� ����� � ��������� ���� ����� ���� �������������� �� ������� ����

� �� 9���� �������� 8��:�$���� �� !�9�8" ��66

Page 2: Encyclopedia of Genetics || Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR)

������� �! �%�3������ ��� ���� �@�8 �� ����� ����� �� ����#� �� ������������ 3�� �� �������� �������������� !���������� ��� ��� ���� @���#����� �� ���� �" ������������ ������� �������������� �� �� ������� ���� �� �@�8� 8 �������� ��� ���� �� ���� ��� ������� �� ���$������� �������#������ �� ���� �������� ������ ������� �� ��� �" ���� �@�8 ���� �����#������ ����� �" ���� ��� ��� �������� � �������������� ���� ������ ���� �@�8 ���$������� �� ��� � ��� ���� � �� �� �� ��� �������� �� �� ����� ��� ����'����� �� �������� ������ :������� ���� � �� �$��������� ���� ���������#������ ������� ����� ������� ���� ���� �������� ���� ������ 2��� �������#������ �� �����"�$�������� ���� ����� ����� �� ����������3�� �� �"���$����������������������# �� �� � �� ���� ������ �� � ��� ����������� ������ ���� �������� ������ �� ������������ ����������� ����� ���� ���� ���� �@�8 ���������� �����@���#������ �� ���� ������ �� �� �� �@�8�����#������� �� �� �� �� �� �� ���� ���������� ���� �� � �� ����� �� ���������� �� �� �� �� � #����� ����������� �� �@�8 ��� � ����� ��������������� ����� ����� ���� ������� �������@�8�����������������!������������������

����� % �<�� � ��������� ���� �� �� �� �� �@�8 ���� ���� ����� #��� �� ���� ������ ��� ���� ��� �� � ��� ��� �� ���� �� ����� ���� � ����� ���� ������ ����� ��� ���� �@�8 �� �� �� ��� ��������� � ������� �� � ���� �� ������ ����������� ��� � ������� ���� �� � ��� � �� ��� ���� ������ �" �� ����� ��� �� ���� �����#���� �� ��� �� �� �� ����� � �� � �" ������ ��� �� ���� ���� �� ��������� �����#���� ���� ��� ���� ���� ������� �� �� ������#��� ����������� ���� �� ���������� ������� ����� ��� � ������ �� ������� ����� ��� ���� ��� ������ �� � ����� ��� �� � � �� �������#���� �� �'������� :��� ������ ���� �@�8�� ������� ���� ���� ����� �" ������ �������� ��� ������ �@�8 �� ������ ���� ���� ��� ������ ����� ����� ����� ��� ��� ��� ����

&��������� �! % �<�� � ������� /� �%�

����� ���� ���������� ������� �� �@�8 ��� ������ ������ � ������������������������������������ �������������#�� ���� �� ����������� ������ ��� ��� ������� � ������� �� ��� � �@�8 ������ ������ � ������

�� �� � ��� �� �� ����#����� � ������������������ � �� �� ������ � ����� � ���� �� �@�8��� �������� �� ���� ����#�������� ������ ���� �������� �� ��������� #����� �� ���� ����������� � �� �� �������� � ������� ��� ��� 6����7��= ������ �� ��������� #���������� *4-+ ���������� ���� ����� �� ��"#� �������� ��� �� ���� ��� �������� �� �� F���� 1����� ���� �� ��#����� �� �����C��������� ����� ��� ������� ������� ����� ���� ����� �� ������� �� ���������� ���� �� �������� ���� �� ������ �������1����� $3�2 �� �� #���������� ����� � � �� ����#����� ��������� �� �" *�>#��� �� ������� ������ � �� �� � � �� �� ���������� �� �� " ������� �� ���� � ��� ��"#� �� ����� ��� ������������� �������� ������� ���� � ����� �� ����8 ���� ������ ��������� �� ���� � ������ ������ �� ����� �� ����������� �� ��������� �� ��� ���� �� ������� ����� ��� ����� #���� �� ������� ����� 63$�7 �� � �������� ���� $/-J, � ������� ����� � �� 6/-$!�7� ��� ���� ��� ���� /-$!� ��� ��������� � �� ��� ����" 3$�� ���� ����� � �� �� ��������� ���� �� ����� �� ����������#���� ����� �� ���� 68��17 ���#��� �� ���������� ���� �� �� ������ � � 0� �������� �������� ��� /-$!�� ���� 8��1#��������� ��� ��� � ������� ������� �� ����� ���� ����� � ������ �������� ���� ��������� �����#���� �� � � ����� �� ����������� ��� �� �������� � ����� ������ /-$!� ��� � �� ������#��� ���"�� �� ��������� ����� ��� ������ �� !�������������� ��� �� ����� �� ����� ����� ��������� ����� � �� ������� � ���� �� ����� �� ���

F��� ����#����� ���������� ��� �@�8 ���#�� ����������� ��� � �� �� ����#�������� ������ ����� ������� ���� �� �� ���� �� �����#����� ����� � �� ����� �� ��������� ��������A� ������� !60007� ���������� �������� ���������� ���� ���������� �� ������ �� ���������� ������� �� ���� �� ����� ����� ���� �� ������ ���� ����� :�� �� �@�8 ����� �����#����� �� ��� ������ ������ � ������ ��� ���� ��� �� �� ����� 0� �������� �� ��� ��� �����#����� � ������ �� �@�8 �� �� ���������� ���#�� � �� ���� ������� ����� ������ �������������� ������� �� ��� ����� �� ��������� �� �������� ������ �� ���� ��� ����� A����� � ������ �� ��� ������ �� ���������� �� ������ �� ���������� �� ���� ����� ���� ��������� ����������$������� �� � �� ����� �� �� ��� �� � �� ����3 6��� ;7 � ��� ���� � ��� ��� � ������@�8 ����� ��� ���������� �� ��� ������� ���� ���� ��������� ���������� 0� �������� �� ������ �� �� �� ���� �� ���� ������ ��� ��������������� ��� ������ ���� ���� ���������� ����

��67 � �� 9���� �������� 8��:�$���� �� !�9�8"

Page 3: Encyclopedia of Genetics || Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR)

���� ������� ������ ���� ��� �� ����������� �� ��������� �� ����� �� ���� � ����� ��� ������� ���� �� ����� �� ���� ��������� �������� �� ������������

�� ������ � ����� � �� ��� �� ��� �@�8������� ����� �� ���� ���� ���� �� ���� ����� ������ ��� ����� �" ��������� �#/�.#�� ����� ���������� ���� � ������ ��� �� ����� �� �������� � ����� �� ������� ��� A����� ����� ������� �� !������� ������ ��� ����������� �� ����� �� ����� �� �� �����������

����� �������� �� ����� �� ������ ������������ ��� ������ �� ��� ���� ��� ����#�� �������� ���� ������� ����� ��������� �@�8 ������� �� ������ ���� ���� �� ���� � ������ ������� 60187� 0� �� ���� �� ��������� �� ��#�� �� �@�8 ���� � ���� ���� � �������������� ��������� ������ ����� ������� 018 �� � ����� ���� ���� ����� �" �� ��������� �� ��������� ��� �� ���� � �� ��� �� ��� ����� ���� ����� ���� �� �� ��������� �������� �����#�����J�@�8������ 018��� �� � � �� �� ��� #���� �� �� �� ��� �� ������ ���� �� �� ����������� ��� ��� �������� ��� ������ A� ���� ���#����� ������ 6<�17 ������ ���� ��������� ����������� !������� ��� �� �������� ��� �� ������������� � �������� �� �� ����� �� <�1 �����$���� ���� ���� � ������ ������� �� ����������� ������� �� ��� ������ @������ ������1�� �� � �� 6*#������������ � ��7 �� ������������� ���� ���� � � � �� ������ ����������� �� ������ 3�� �� 018� ������� �� ������� �������� ��� ����� ��� �� � ��� 0� �����$����4���� ��������� ���� � �� ����� ������ �� ������� �� ��� ��� �� ���� � ��� �������� � ��� ����#������ ������ 6<$2�7 ����� �� ���� �� � � �� ���� ���������� �� ����� ���� �� � � �� � ����� �� ���������� ��������������� ��� ��� ��� � �� �� �� ���������� �� ��� �� � ��#������ ���� �� ����� ����� �������� ���� ���� ���� �������� ������ �������$����� ������� � ����� ��� �� � ��� ��� � �� ����������� �� ��������� ��� ����� ������������ �� ���� ������� ��� �� � �� � ���������

����� ���� ��-�� ������������������� ����� ���� �� �� �� �� � ��������� ��� � �@�8 �� ������ ���� ������� 0�� ��#���� �� ���� ���� ����#.#� �� � �� 60��7����� ��� ��������� ��� ������������ ����������� ���� �� �� �� �� ���� �������� ������� ���� ����� ����� 0�� ������ �� ����� ��������� ���� ��� �@�8 ��� �� � ���� ������� ���� ���� ����� �� 0��J ����� ���� ��� ����� ���#�� ���� ��� ����� �� ��������� �� $�� M���� �� !�

��� H� ����� �� �� ������ 0�� ��� ���"����� �����# ��� ������� �� ���$���� �� ������� �������# ���� ������� �� ��� ����� ���� ������ �� ��������� ���� ��� ��� � ���������� ��������'������ ���������� �� ������� 6�� ������ ��0�� ��� ���"�����7 ��� ��� ������ ������ �� ������ �� �� ����� ������� 0�� ������ �� ���� �����$��������� ��������� ��� �� ���� �� ����#������� � �� ����" �� ���������� ������ ������������ �� ���� ��������� ����� �� ��#����� �� ��� ������� �������� �� ��� ������ ������ ����������� ��� �@�8 ������

#���� ���� ��-�� �������� ���������$���� ������ �� �@�8 6��������� ��� ����������7 ���� �������� �� �������������� ��� �� ������� �� ��� ��������� ��� ������� �������� �� ������� ��� ��� ��������� ������� �� �� �������� ���� ������ ���� �� ��� ����� ��� �� ��� ������� ����� ������ ������ �� ����� ������ � ���'���������� �� ����� �������� �� �� �#��������� �� ������ 8������� ��� ��������������� �� �� ����� ��� ����� �� �� ����� ����� ������� 6��7 ������ C� ���� � ���� �������� ��� ���� �� ����� �� ������ �� � ��� �� ���������� �� ����� �� �@�8� ����������� ��� �� �@���#������ �� ����� ������ ���� �� �� ����#������ �� ������� ����� ��� ���� ���� C���������� ���� �� ����� �� ����������� ������� ��������� ����� ������� ����������� ����������� �� �������� �� ����������� �� � ����� ����� ��� ����� � �� ��������� ������� ���������� ����������� ��� ������������ ������� �� C� ������� �� ������ ��� �� ��� ��� ���� �� � ������������ �� � �� �� � ����� ��� �� ��� ������� �� ��� ������ �� ������� �� ������ � ������� ������� 0� �� �� �� ��� �� ������ �������� �������� ��� ������� ������� ���� ���������� ������� ���������� �� ������ ��� ���� ���� ���� �� �� ����� � ������ �#��������������� ��� ����� �� �� ���� �� � !������������� ������ � ��� ����� �� �� ������ C� � ����

1�� �@�8 �� ������� �� " �������� �� ��������� ����� ���� �������� ����� �� � �� ��� ���� ����� ���� �� ������ � ��� ��� � ��� �������63�����7� ���������� ����� ����� � �� �@�8��� ������� ������ �������� 6�7� A� �� ���#��� �� �� �������� �� ���� �������� �� ������������#���������� �@�8 �� ����� ������������ ��������� ��� ������� 5��� ��������#���������� �@�8� �� �� ��� �� ��������� �������� �� ������� ��� �� �� ���� ������ ���#������ � ������ �� � ��

$���������� �� ���� ����� ���� � *�>#�� ����#������� �� � �� 6*�>#�7#�������� ������ ��

� �� 9���� �������� 8��:�$���� �� !�9�8" ��68

Page 4: Encyclopedia of Genetics || Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR)

!���������� ����� ���� �� �� ���� �� �� ������#���� ���������� ���� �� ���������� �� �� ����# �� �� �� ���������� 0�� ������ �� ������� �������� ������� ��� ���� �@�8 ���������� �����# ��� ������� �� ������� ������� ���� �� ������� ������� �� ���������� �� �� �� ���� �� ����#����� �� �� "� ��� ��� ��� �

���� � � �������

�@�8 ���� ������ ��� �� �� �������� �� ���#����� ��� �������� � ��� ������ ������������� ����� ���� ������ �� �@�8 �� �� ��� ������ ������� ���� � ������ �� ������ �� ���� ������ ��� � �������� ���� �@�8 �� ��� � #�� ������� ��� �� �� ��������� ������������������ �� ����� �������� �������� �� ������ ���� ������������ 0�������� ������ �� ����� �� � ����� ��� ������ �" �� � ������� �@�8 ������� ���� �� ������� �� ��� ������� �� �� ����� ��� ���� ������ �� �@�8 ������������ ���� ��� ���� ���� �� �� �� �� ������� ���� �������� �� ������� �� ��� �� ��������� ������ A ��� �� �� ������� �� ��������� ������� �@�8 ������ ���� ��� ����� �� ��� ����� ���� �� ����� �� ������� 3�� ����� ��������� �� � �� ������� �������� �� ���������� ���� �� ���� � �� ���� ������������� ���� ���������� �������� ����� ����������� �������#�������� � ������ 6�� ���� ����#���� � ������) 0E:�7 �� � �� ��������� � ���#��� ���� ���� �� ������� ����� �� ��� ������� ��� � �� �������� �� �� ���������� ����� ������ ��� ����� � ��� �� ����� ����#���� � ��� ���� (������� ��������� �������'���� 0E:� ��� ������ � ������� ����� �� ����� ����������� 8 ��� �� 0E:����� �� ������� ����� �� ��� ������ ����������� ����� ������ ���������� �� �� ������������� ������ ����������� �������� �������� �� ���� ��� �� ������� �������� ��� ������ ���� ��������� �� ��������

������ ��� � ���� %( .�������� �A( 9������� 4( ���$� 8 ��� 6� ���� 8

!���2" ������ ��� �� &��<����� ��� ��������<����� �� � ��

����� �������� ���:�$������ ��� ��� ������� ����� ��

�������� !&������ ����$�� 6�"� (��� �� ���� �;� =�<���

9 ��/ .8( ���� �6( %� ���� 9 ��� ������� 3, !����" ���!

�������� �� ������ ��������� ���� �� (��� ���-�� (�����!

� ��������� 4A� >�� � ����������

7 ������ A>( 8���MK���:+7�K$��� 8( J������ 9> �� ��� !����"

� �� ���<$������ ���������� �� $�� ����� ����� �� ��� +

$���� �������� ��� ������ �1������ � ������� ��� �� ���

��������� ����������� (��� (������ � 2� �<00�

8����� �. !����" ������� �� (��������� ����������

� �� � �� ���:�������� �$�������� ���������� � �� ;0<

=��

� ����� 1�� ����� �. ��������. ���/�����2%������� �!

����� ,� �����& �������

�������� � ��� ������� �����

���� ��������������������2

�� ���� ������� �� � ����� �� ���� �������� �� ���� �� �������� �� �� �� �� ����� �� �� ���� � ����� ��� ���������� !������ ���� ��� �� ��� �� "���� ���� ���#����) �� ������� �� ���"������ �� ������������ ��� � ��� ��� ����� ��� � ��� ������� � ��� ��� �� � ��� ��� ���������� �� �� ������ �� ���� � �� ��� �������� �� �� ����� ���� � ������ �������� ��� � � �� �� � �� ������� �� �� ����������

0� ������� ������� ���� �� � � � ������ �������� ��� �� ��������� ���� �� ��� ��� ��� ��� ������������ !�� ���� ����� �� � ������� ���������� �� � �� ����� ���� ��������� � ����������� ��� �� �� � � �� ��� �� �� ������������� ��� �� � �� �� ��� ��� ����� ������� ���� 3�� �� ���� ���� ������� ��� �� �� �� ���� �� ���� �� �������� ��� �� ������� �����

0� ���� ���� ������ ����������� ��� � ���#��� �� � ���� �� ��� ����� ���������� 3�� ��� �� ���� ������ ����� �� ��� ��������������� ����� �� ����� �� � ����� �� � ������� �� � �� ���� ���� ������� ���� �� ��� �� �������� ����������� ��� ������ �� �� ����� ���� ���� �� �� ��� �� � � �� ��� ���# ���� ���� � �� �� ���� � �� �"� �� �������� ��� ��� ������������ �� ���� ������ �������

�� ���� �������� ������� � ������ ����� ������#.#� �� � �� 60��7� ���� ������ �� �'������� ������ �� ���� � �� ���� ��� �� �� � � ���� �� ��� �� �� ���� ������ ��� � ������������ ���� ���������� �� ���� � ����������� ���� ��� �� �� �� �������� ���� �������� ��� �� ������ �� � ������6�7 ������� � ���� �� ��� ����� ��������� ��� �� ������� �� � �� ��� �� �� ���������� @��� �������� � �� ���� ����� � ���� �'���� �� � �� ����� � ������ ���������� ������� �� �� ���'�����#�������� �������� 0� ��� �"� ���� ����������� �'���� �� ���������� �� �� �� ���

��7� � �� %�������