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配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统
功能指南
715004391ZH/修订版 B
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2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 ii 页
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ACQUITY UPLC® 是 Waters Corporation 的注册商标。
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MassLynx® 是 Waters Corporation 的注册商标。
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“THE SCIENCE OF WHAT’S POSSIBLE.”® 是 Waters Corporation 的注册商标。
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MP35N® 是 SPS Technologies 的注册商标。
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电源线更换危险
压手危险
高压危险
溶剂瓶放置禁忌
FCC 辐射干扰声明用户若未经有关法规认证部门明确允许而进行改变或改装，将失去合法使用本设备的权利。本设备符合 FCC 规则第 15 款之规定。设备操作受下列两个条件限制：(1) 本设备不得产生有害干扰， (2) 本设备可接受任何接收到的干扰，包括可能会影响正常操作的干扰。
电源安全声明不要将该仪器放在不方便断开电源线的位置。
设备不当使用声明如果未按照生产商指定的方式使用设备，设备设计中所提供的个人防护可能失效。
警告：为避免电击，在美国请使用 SVT 型电源线，在欧洲则使用 HAR 型 （或更好的）电 源线。更换主电源线时必须仅使用前述其中一种适用额定功率的电源线。有关在其他国家/地区使用何种电源线的信息，请联系当地的 Waters 分销商。
警告：为避免与源中摆动或旋转部件相关的危险，请不要接触标记有黄色和灰色标签的区域。
警告：为避免电击，请遵守以下预防措施：• 请不要取下质谱仪的保护面板。保护面板内的组件不需要用户维护。• 仪器处于 Operate （操作）模式时，应避免接触标有高压警告符号的区域。要接触标有
此符号的外部区域，应首先将仪器切换至 Standby （待机）模式。
警告：为避免因电击或火灾造成伤害，以及避免对设备造成损害，请勿在工作站或辅助设备顶部放置装有液体的容器，否则液体将滴溅到这些设备上。
禁止：切勿将含有液体的容器 （如，溶剂瓶）放置在工作站或辅助设备的顶部，否则液体会滴溅到这些设备上。
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安全忠告请参阅附录 A 查看警告提示和注意事项综合列表。
操作系统
操作系统时，请遵循本节介绍的标准质量控制 (QC) 程序和指导原则。
适用符号
符号 定义
制造商
生产日期
欧盟授权代表
确认生产的产品符合所有对其适用的欧盟指令
或
澳大利亚 EMC 认证
确认生产的产品符合所有对其适用的美国和加拿大的安全要求
请参阅使用说明
交流电
具有此符号的电气及电子设备可能含有有害物质，不应作为一般废弃物处理。为符合《报废电子电气设备指令》(WEEE) 2012/19/EU，请联系 Waters Corporation 获取有关正确处理和回收的说明。
序列号
部件号、目录号���
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对象与目的Waters 准备的此文档旨在向新老用户说明 ACQUITY 2D 技术的特征和规格。
配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统的设计用途Waters 设计的配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统可用于执行色谱分离。相关系统仅用于研 究，并非设计用于诊断应用。
校正要校正 LC 系统，请遵照可接受的使用至少五个标准样生成标准曲线的校正方法。标准样的浓度范 围必须包括质量控制样本、典型标本和非典型标本的全部范围。
质量控制定期运行三个 QC 样本，分别代表正常水平以下、正常水平和正常水平以上的化合物。如果样品盘 相同或非常相似，可改变样品盘中 QC 样品的位置。确保 QC 样本的结果在允许范围内，并在每 天、每次测试时都评估其精确度。 QC 样本的结果超出范围时采集的数据可能无效。在确定仪器的 运行状态满足要求前，请勿报告这些数据。
EMC 注意事项
加拿大光谱管理放射性声明本 A 类数字产品仪器符合加拿大 ICES-001 的要求。
Cet appareil numérique de la classe A est conforme à la norme NMB-001.
ISM 分类：ISM 第 1 组 B 类该分类是根据 IEC CISPR 11 工业、科学与医学（Industrial Scientific and Medical，ISM）仪 器要求确定的。
第 1 组产品适用于有意生成的和/或使用的传导性耦合射频能量，它是设备实现内部功能所必需的。
B 类产品同时适用于商业区和居住区，而且可以直接连接到低压供电网络。
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EC 授权代表
Waters CorporationStamford AvenueAltrincham RoadWilmslow SK9 4AX UK
电话： +44-161-946-2400
传真： +44-161-946-2480
联系人： 质量经理
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目录
常规信息 ....................................................................................... iii
版权声明 ..................................................................................................... iii
商标 .......................................................................................................... iii
客户意见或建议 ............................................................................................ iv
联系 Waters ................................................................................................ iv
安全注意事项 ............................................................................................... iv安全危险符号声明 ............................................................................... ivFCC 辐射干扰声明 .............................................................................. v电源安全声明 .................................................................................... v设备不当使用声明 ............................................................................... v安全忠告 .......................................................................................... vi
操作系统 ..................................................................................................... vi适用符号 .......................................................................................... vi对象与目的 ...................................................................................... vii配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统的设计用途....................................... vii校正 .............................................................................................. vii质量控制 ......................................................................................... vii
EMC 注意事项 ............................................................................................. vii加拿大光谱管理放射性声明 ................................................................... viiISM 分类：ISM 第 1 组 B 类 ............................................................... vii
EC 授权代表 .............................................................................................. viii
1 配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统 ............................................. 11
1.1 概述 ........................................................................................................ 11
2 配置系统 ..................................................................................... 13
2.1 在 Empower 3 软件上配置系统 ...................................................................... 13
2.2 在 MassLynx 软件中配置系统 ......................................................................... 14
2.3 配置 Waters 泵控制软件 ............................................................................... 15
2.4 配置 CM-A ................................................................................................ 17
2.5 连接外部阀至 CM-A ..................................................................................... 18
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3 系统组件和功能 ............................................................................. 21
3.1 配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统介绍 ......................................................... 213.1.1 色谱柱管理器 (CM-A) ......................................................................... 223.1.2 溶剂管理器....................................................................................... 233.1.3 额外的泵 ......................................................................................... 243.1.4 外部阀 ............................................................................................ 243.1.5 管路 ............................................................................................... 24
4 系统配置示例 ............................................................................... 25
4.1 流路配置 ................................................................................................... 254.1.1 阀位置 ............................................................................................ 254.1.2 富集和反冲洗脱配置............................................................................ 264.1.3 富集和反冲洗脱，色谱柱头处稀释 (ACD) .................................................. 274.1.4 富集和正冲洗脱配置............................................................................ 284.1.5 中心切割配置 .................................................................................... 294.1.6 平行柱再生配置 ................................................................................. 31
4.2 全面的 2D UPLC ......................................................................................... 32
5 备件 ........................................................................................... 33
5.1 备件列表 ................................................................................................... 33
6 工作表 ........................................................................................ 35
6.1 工作表 ..................................................................................................... 356.1.1 空白工作表....................................................................................... 366.1.2 已完成的工作表 ................................................................................. 39
A 安全忠告 ..................................................................................... 43
A.1 警告符号 ................................................................................................... 43A.1.1 特定警告 ......................................................................................... 44
A.2 注意 ........................................................................................................ 45
A.3 瓶禁止符号 ................................................................................................ 45
A.4 所需的保护措施 .......................................................................................... 45
A.5 适用于所有 Waters 仪器和设备的警告 .............................................................. 46
A.6 实施保险丝更换的警告 .................................................................................. 46
A.7 电气和搬运符号 .......................................................................................... 47A.7.1 电气符号 ......................................................................................... 47A.7.2 搬运符号 ......................................................................................... 48
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1 配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统
本章将对配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 进行概述。
1.1 概述
配备 2D 技术的 Waters ACQUITY UPLC® 系统采用了溶剂管理器 （泵）、样品管理器、色谱柱 管理器、光学检测器、质谱仪和多种分离填料以促进多维分析。为满足应用的特定需要，可以配置包含 多三个 ACQUITY UPLC 溶剂管理器和 多三个 515 泵 （或一个 1525 泵）的 2D 系统。 色谱柱管理器 (CM-A) 是所有 2D 系统的必备部件，其中具有可设定的切换阀和两个带主动预热功 能的独立加热区。 UPLC® 系列中的各种核心系统均可作为 2D 技术的基础。
提示：您可以将传统的 ACQUITY UPLC 系统升级为包含 2D 技术。
使用配备 2D 技术的系统，可实现以下目标：
• 消除基质效应• 提高峰容量 （增强选择性和灵敏度）• 提高稳定性 （MS 源更洁净、延长色谱柱寿命）
• 获取用于决策制定的更优质数据
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2 配置系统
用户必须将系统配置为在 Empower 或 MassLynx 软件控制下运行，同时还必须配置 “Waters 泵 控制”软件，并将外部阀连接至 CM-A。
重要说明：
• 要启用 2D 功能，必须在 “高级”模式下操作 CM-A。
• 如需获取关于泵和样品管理器的配置信息 （除本文档中列出的以外），请联系 Waters 技术 支持。
• 运行包含多个泵和阀的任意系统时，必须了解包括流通池、泵、阀和色谱柱在内所有系统组件的压力限制。而且，系统运行过程中必须考虑方法各个阶段的压力，需要注意的是，不同的配置和操作方法在系统中产生的压力不同，因此系统中各个组件的压力会随之发生变化。
• 为配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统添加或更换仪器组件时，请重复下列系统配置步 骤。为新仪器重复配置步骤之后才能确保通讯顺畅。
2.1 在 Empower 3 软件上配置系统
注：要在 Empower 控制下使用 2D 技术，必须联用 Empower 3 软件和 Driver Pack 4。
要在 Empower 软件上配置系统：
1. 打开 Empower 软件并选择 “配置系统”。
2. 选择 “系统” > “新建” > “色谱系统”。
3. 在 “新建色谱系统向导”中，从 “可用仪器”列表中将要包括在系统中的模块拖放至 “新系统仪器”列表中，然后单击 “下一步”。
4. 在 “允许访问”下方选择所需的访问，然后单击 “下一步”。
5. 在 “系统名称”框中键入系统名称，然后单击 “完成”。
对于 Empower 软件控制的系统，必须选择二元溶剂管理器作为系统的主要液流来源。
要配置系统的主要液流来源：
1. 从 Empower 3 的 “运行样品”中打开 “系统控制台”。
2. 在控制台软件中，选择 “配置” > “主要液流来源”，然后选择要使用的二元溶剂管理器。
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2.2 在 MassLynx 软件中配置系统
MassLynx 控制的 2D 技术需要使用带 Driver Pack 3 或 Driver Pack 4 的 MassLynx 软件。
要在 MassLynx 软件中配置系统：
1. 确定所有需要的仪器电缆都已连接，并且所有仪器的电源都已打开。
2. 打开 MassLynx 软件，选择 Inlet Method （液相方法）。
3. 选择 Tool（工具）> Instrument Configuration（仪器配置），打开 Inlet Configuration （液相配置）对话框。
4. 单击 Configure （配置），打开向导，然后在向导的 Welcome （欢迎）页面中单击 Next （下一步）。
5. 在 Select Pump（选择泵）页面上，选择 Waters Pump Control（Waters 泵控制），然 后单击 Next （下一步）。
6. 在 Select Auto Sample （选择自动样品）页面上，选择适用的 Sample Manager （样品 管理器），然后单击 Next （下一步）。
7. 在 Select Detector （选择检测器）页面上，选择 Waters ACQUITY CM，并使用右向箭 头将选中的检测器拖放至该页面的 Configured Detector （已配置检测器）区域。
8. 按顺序选择各个适用的检测器，将其拖放至 Configured Detector （已配置检测器）区域， 然后单击 Next （下一步）。
9. 在 Configured Communication（已配置通讯）页面上，单击 Scan for Instruments（扫 描仪器）。
10. 确定 Waters Instrument Scan（Waters 仪器扫描）对话框中显示的 ACQUITY® 模块列 表正确，然后单击 OK （确定）。
11. 在与每台仪器相对应的框中，单击列表，选择仪器的 ID，然后单击 Next （下一步）。
12. 出现 “Configuration Successful”（配置成功）提示后，单击 Finish （完成）。
13. 如有任何检测器 （包括色谱柱管理器）无法在 Selected Configuration Addresse （选择 的配置地址）部分显示，请在进行步骤 4 之前重复步骤 12 至步骤 14。
14. 在 Inlet Configuration （液相配置）页面，单击 Event （事件）和 Triggering （触发）， 然后单击 Next （下一步）。
15. 在 Choose Event （选择事件）页面中，单击 Next （下一步），保持缺省设置不变。
注：无需配置事件电线。
16. 在 Choose Triggering Method （选择触发方法）页面中，选择 Trigger by Contact Closure for the Pump and Detector （由泵和检测器的接线端子触发），单击 Next （下 一步），然后单击 Finish （完成）。
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2.3 配置 Waters 泵控制软件
注：只需在 MassLynx 软件中执行此步骤。
要配置 Waters 泵控制软件：
1. 在 Inlet Editor （液相编辑器）中，单击 Inlet （液相）。
2. 在仪器方法窗口中，单击 Config （配置）。
3. 为每个泵输入相应的模块名称。
示例：下图中，泵 1 和泵 2 分别被命名为 “Alpha Pump”（α 泵）和 “Beta Pump”（β 泵）。
4. 单击 Scan （扫描）。
5. 确认所有仪器和设备都存在之后，单击 Close （关闭）。
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7. 单击 OK （确定）。
8. 系统提示后，请单击 OK （确定），确认和重置通讯。
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2.4 配置 CM-A
使用 MassLynx 或 Empower 软件时，都必须在控制台软件中配置 Column Manager - Active Preheater (CM-A) （色谱柱管理器 - 主动预加热器 (CM-A)）。
要配置 CM-A：
1. 在控制台软件的 “色谱柱管理器”中，单击 “配置” > “仪器”。
2. 在 “仪器配置”对话框中，从右侧的列表中选择 “2 根色谱柱”。
要求：确保按如下方式指定左侧的色谱柱位置选择。
限制：选择的色谱柱不可超过两根。
3. 单击 “确定”接受该配置。
4. 在控制台软件的 “色谱柱管理器”中，选择 “配置” > “操作模式”。
结果：出现 “操作模式配置”页面。
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5. 单击 “高级”，为左侧和右侧位置选择 2，为左端口和右端口选择 6，然后单击 “确定”。
6. 显示“配置已更改”对话框时，请重启 CM-A，然后单击“确定”重新启动并打开控制台软件。
7. 在 “液相方法编辑器”中 “重置通讯”。
8. 在控制台中，选择 “色谱柱管理器”，然后单击 “配置” > “预加热器”。
结果：显示 “预加热器配置”页面。
限制：只可在每个凹槽的左侧或右侧安装一个预加热器，可在 “预加热器配置”页面中为每个凹槽选择预加热器配置。
9. 为色谱柱位置 1 和 2 选择 “主动”或 “被动”。
10. 单击 “确定”。
11. 显示 “配置已更改”对话框时，请重启 CM-A，然后单击 “确定”重新启动控制台软件。
另请参阅：ACQUITY UPLC Column Compartments Operator’s Overview andMaintenance Information 《ACQUITY UPLC 色谱柱室操作员概述和维护信息》，获取有 关 CM-A 的详细信息。
2.5 连接外部阀至 CM-A
要求：如果需要将现有的 CM-A 升级为新型 2D 系统的一部分，请咨询您当地的服务工程师以确 保兼容性。
要连接外部阀：
1. 请将适配器线缆 （部件号 441000459）连接到 CM-A 后面板上标记有 COM B 的接头。
2. 将随阀提供的串行线缆一端连接至适配器线缆，另一端连接至阀。
3. 使用每个阀后面的地址盘设置相应的地址。
要求：每个阀必须设置一个唯一的地址：1、2 或 3（与外部阀识别号相对应：1、2 或 3）。
4. 打开 CM-A 电源。
5. 打开外部阀的电源。
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要配置阀：
1. 在控制台软件中，选择 “色谱柱管理器”。
2. 单击 “配置” > “操作系统”。
3. 勾选当前所用一个或多个外部阀对应的复选框。
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3 系统组件和功能
本章将对配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 仪器组件和功能进行详述。
3.1 配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统介绍
图 3–1: 配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统
上图展示了配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统。下列各项是该系统的必备组件：
• 配备可设定切换阀的色谱柱管理器 (CM-A)
• Waters 泵控制软件
• Windows 7 或 Windows XP 操作系统。（请参阅相应的 MassLynx® SCN 或 Empower 发行说明，了解必需的工作站配置。）
• MassLynx 4.1 版 （带软件变更记录 (SCN) 781， 低要求）
• Empower 3， Feature Release 2
• ACQUITY UPLC Systems November 2013 Driver Pack 4
样品管理器
溶剂管理器 溶剂管理器
色谱柱管理器(CM-A)
检测器 （可选）
溶剂瓶托盘
溶剂瓶托盘
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3.1.1 色谱柱管理器 (CM-A)色谱柱管理器 (CM-A) 包括两个 6 端口、 2 位阀和两个具有独立温度控制功能的色谱柱凹槽。在 CM-A 中运行 2D 应用时， 多可使用两个主动预加热器。在事件表中，可以指定特定时间使用的 阀 （“左侧阀”或 “右侧阀”）和各自的位置。
要求：在运行样品之前确认每根色谱柱均处于所需温度，可在色谱柱达到其温度设定值之前开始进样。
限制：不能将柱温箱 (CM-Aux)使用与 2D 系统联用。
图 3–2: 门打开时的色谱柱管理器
图 3–3: 主动预加热器装置
TP03446
色谱柱室凹槽
eCord 插孔
主动预加热器止动器 （固定主动预加热器装置）
配备渗漏传感器的滴盘
6 端口， 2 位阀
TP03360A
TP03360A
主动预加热器装置（接头如下所示）
连接到主动预加热器接头
来自主动预加热器
主动预加热器 止动器
主动预加热器接头
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另请参阅：ACQUITY UPLC Column Compartments Operator's Overview and Maintenance Information （《ACQUITY UPLC 色谱柱室操作员概述和维护信息》）。
图 3–4: 阀 （6 个端口， 2 个位置）
提示：生物惰性阀适用于含水量高、离子强度高的流动相。
3.1.2 溶剂管理器典型的系统配置包含两个二元溶剂管理器，或者一个四元溶剂管理器和一个二元溶剂管理器。配备2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统 多可以使用三个 ACQUITY UPLC 溶剂管理器。
要求：必须在 “Waters 泵控制”软件中将四元溶剂管理器配置为第一维泵 （泵 1）（请参阅 第 15 页）。
限制：为避免出现影响保留时间重现性的问题，请勿在分析中使用四元溶剂管理器作为第二维泵。
另请参阅：系统用户文档，获取关于溶剂管理器的其它信息。
表 3–1: 色谱柱管理器组件
组件 说明
主动预加热器装置 在流入的溶剂进入色谱柱之前将溶剂加热至指定的柱温。主动预加热器止动器 将主动预加热器固定在色谱柱室中。阀 6 端口， 2 位置阀
滴盘 承接色谱柱或色谱柱连接的所有渗漏液，并将其导流至滴液管理系统。
CM-A 阀芯部件号 说明
205000952 套件， ACQUITY UPLC 2D 技术 SS 阀205000953 套件， ACQ UPLC 2D 技术生物惰性阀
正视图 侧视图
阀芯外壳对齐的凹槽六角螺钉
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3.1.3 额外的泵一个 2D 系统中 多可以使用三个 515 泵或一个 1525 泵，额外的泵可用于色谱柱头处稀释或添 加试剂。额外的泵在 大压力为 34,473 kPa（344 bar，5000 psi）的条件下能够达到的 高流 速为 10 mL/min。1525 泵和控制 515 泵的泵控制模块 (PCM) 将通过 IEEE 488 与系统的工作 站进行通讯。
另请参阅：
• Waters 1525 and 1525EF HPLC Pump Installation and Maintenance Guide（《Waters 1525 和 1525EF HPLC 泵安装与维护指南》）
• Waters Pump Control Module II Installation Guide（《Waters 泵控制模块 II 安装指南》）
3.1.4 外部阀CM-A 包括两个 6 端口，2 位阀，且可以在分析方法执行过程中独立控制 多三个外部阀（列于下 表）。外部阀采用单独的电源，利用 RS232 电缆连接（部件号 441000459）与 CM-A 进行通讯。
重要说明：如果要将现有的 CM-A 升级为包含外部阀的新型 2D 系统的一部分，请咨询您当地的 服务工程师以确保兼容性。
3.1.5 管路2D 系统需要使用耐高压且非常洁净的管路组件，您可以根据应用选择不锈钢或 MP35N 管路组件。 在诸如分离生物样品等所需的高离子强度水溶液条件下，请使用具有抗腐蚀性的 MP35N 管路。
另请参阅：
• 第 33 页上的备件信息，获取关于管路组件的更多信息。
• Waters.com 中的 Waters Spare Parts Locator，获取管路组件的当前在售列表。
外部阀部件号 端口 位置 材料 额定压力
417000138 10 2 钛 34,473 kPa（344 bar，5000 psi）
417000139 7 6 PEEK 34,473 kPa（344 bar，5000 psi）
417000150 11 10 不锈钢 34,473 kPa（344 bar，5000 psi）
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4 系统配置示例
本章将列出系统配置的详细信息。
4.1 流路配置
配备 2D 技术的 ACQUITY UPLC 系统具有极大的流路配置灵活性。
可能的流路配置如下所示：
• 富集和反冲洗脱配置• 富集和反冲洗脱，色谱柱头处稀释 (ACD) 配置
• 富集和正冲洗脱配置• 中心切割配置• 平行柱再生配置
重要说明：下文将展示每种配置的图示，其中 “泵 1”和 “泵 2”分别被指定为 α 泵和 β 泵。
4.1.1 阀位置图 4–1: 阀位置
12
3
4 5
6
12
3
4 5
6
阀位置 1 阀位置 2
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4.1.1.1 阀使用情况
以下是富集和反向传输配置的典型使用条件：
• 泵 A，以 1.0 mL/min 的流速运行水
• 泵 B，以 0.7 mL/min 的流速运行 50:50 乙腈/水
• 色谱柱 1 为采用 2.0 μm 粒径填料的 2.1 × 30 mm 色谱柱
• 色谱柱 2 为采用 1.7 μm 粒径填料的 2.1 × 50 mm 色谱柱
在此配置中，泵 1 （α 泵）产生的压力为 6895 kPa （68.95 bar， 1,000 psi），泵 2 （β 泵） 产生的压力为 62050 kPa （621 bar， 9,000 psi）。
建议：在典型条件下运行过 50,000 个循环后请更换阀。
4.1.2 富集和反冲洗脱配置注：安装过程中， Waters 服务工程师将为基本的 “富集和反向传输”配置执行系统安装测试，确 保系统模块达到 佳性能且流路配置正确。
富集色谱柱上捕获到目标分析物时即会进行富集，从而构成第一维分析，然后目标分析物会被传输至第二根色谱柱进行分析分离，即，第二维分析。
用户可以针对在线样品制备或简化分离等各种应用使用富集和反冲洗脱配置。
图 4–2: 富集和反冲洗脱步骤 1
在此配置中，α 泵会将样品加载到色谱柱 1，富集目标分析物。然后 α 泵会执行一次冲洗，使目标分 析物保留下来并将一些杂质冲入废液。冲洗之后，α 泵会降低其流速，CM-A 的左侧阀则会从位置 1 切换至位置 2。
CM-A
左 右
色谱柱 1
色谱柱 2
W
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
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图 4–3: 富集和反冲洗脱步骤 2
左侧阀处于位置 2 时，β 泵会泵送梯度液流通过色谱柱 1，将分析物传输至色谱柱 2 进行分析分离。
4.1.3 富集和反冲洗脱，色谱柱头处稀释 (ACD)色谱柱头处稀释可实现在强溶剂中进行大体积的样品直接进样，此功能可在样品到达柱头之前对注入的样品进行稀释。下列示例将介绍富集和反向传输应用中的 ACD。
图 4–4: 富集和反冲洗脱 （色谱柱头处稀释 (ACD)）步骤 1
负载 α 泵的管路 A 输送有机溶剂，并将样品推送入小体积混合器 （部件号 205000272）。 α 泵 的管路 B 会将 100% 水溶液输送入小体积混合器，并在样品到达色谱柱 1 之前对其稀释。
CM-A 的左侧和右侧阀均处于位置 1 时， α 泵会将样品加载至色谱柱 1。
然后目标分析物会在色谱柱 1 的柱头上富集。随后 α 泵停止运行， CM-A 右侧阀从位置 1 切换至 位置 2。
CM-A
左 右
色谱柱 1
色谱柱 2
W
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
CM-A
左 右
色谱柱 1
色谱柱 2
混合器SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
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图 4–5: 富集和反冲洗脱 （色谱柱头处稀释 (ACD)）步骤 2
CM-A 右侧阀处于位置 2 时，β 泵启动。对目标分析物执行梯度洗脱，将其从色谱柱 1 洗脱至保留 性更强的色谱柱 2，然后在该柱进行分析分离。
4.1.4 富集和正冲洗脱配置过滤器富集配置可防止杂质到达分析柱的柱头。
图 4–6: 富集和正冲洗脱步骤 1
样品将注入由 α 泵产生的液流中。目标分析物将流经色谱柱 1，此色谱柱就像一个过滤器，可截留 杂质。分析物通过色谱柱 1 后会汇集到色谱柱 2 的柱头。然后 α 泵降低流速， CM-A 左侧阀从位 置 2 切换至位置 1。
CM-A
左 右
色谱柱 1
色谱柱 2
混合器SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
CM-A
左 右
色谱柱 1
色谱柱 2
W
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
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图 4–7: 富集和正冲洗脱步骤 2
CM-A 左侧阀从位置 2 切换至位置 1 后， β 泵启动液流，对色谱柱 1 进行重新平衡并将所有杂质 冲入废液。 α 泵则启动通过色谱柱 2 的液流，执行分析分离。
4.1.5 中心切割配置中心切割功能是指将第一根分析柱洗脱出的目标分析物转移至第二根色谱柱，进行进一步的分析分离。使用中心切割可获取互补的选择性或降低样品加载量，实现更好的分离度。以下图例展示了中心切割的一种方法。
图 4–8: 中心切割步骤 1
α 泵在色谱柱 1 上执行分析分离，此色谱中的特定预定义区间将转移进行第二次分析分离。随着分 析分离的预定义区间从色谱柱 1 上洗脱， CM-A 的左侧阀将从位置 1 切换至位置 2。
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
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图 4–9: 中心切割步骤 2
CM-A 的左侧阀处于位置 2 时，β 泵会从色谱柱 1 中洗脱目标分析物并将其转移至色谱柱 2。色谱 柱 1 中的分析分离区间转移至色谱柱 2 之后， CM-A 的左侧阀将从位置 2 切换至位置 1。
图 4–10: 中心切割步骤 3
CM-A 的左侧阀处于位置 1 时，β 泵在色谱柱 2 上对转移区间执行分析分离。α 泵会重新平衡色谱 柱 1。
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM/SM-FTN
αBSM/QSM βBSM
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4.1.6 平行柱再生配置在平行柱再生配置中，一根色谱柱用于分析，另一根色谱柱进行重新平衡，准备下一次进样。对于一系列的样品和分析分离，这两根色谱柱可交替使用。
平行柱再生配置对于增加通量非常有效。
图 4–11: 平行柱再生步骤 1
进样后，通过 α 泵的液流将样品推送至色谱柱 2 进行分析分离。β 泵会重新平衡色谱柱 1，准备下 一次进样。在色谱柱 2 上执行分析分离且色谱柱 1 重新平衡之后，CM-A 的左侧阀和右侧阀会从位 置 1 切换至位置 2。
图 4–12: 平行柱再生步骤 2
CM-A 的左侧和右侧阀均处于位置 2 时， α 泵会为色谱柱 1 的分析分离提供液流，而 β 泵则重新 平衡色谱柱 2。
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM
αBSM βBSM
CM-A
左 右
色谱柱 1
W
色谱柱 2
SM
αBSM βBSM
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4.2 全面的 2D UPLC
全面的二维 (2D) 色谱 (C2DC) 是一种色谱方法，其中两个色谱系统通过高压切换阀相连接。这两 个系统 （第一维和第二维）经过配置之后，来自第一维系统的洗脱液会被收集并导入至第二维系统的色谱柱。系统中会连接有一个或多个切换阀和采样定量环，因此来自各系统泵的液流可在两个采样定量环之间交替流动。交替功能可收集第一维系统的洗脱液，并将其传输至两个采样定量环中的任何一个，进入该环的洗脱液将通过阀切换转移入第二维系统的液流。完成液流转移之后，第一维洗脱液将汇集至另一采样定量环，此时第二维系统会处理第一个采样定量环中的物质。理论上来说，通过在两个采样定量环之间交替流路，可汇集所有的第一维洗脱液并将其转移至第二维系统，从而实现整个第一维分离的全面收集和转移。事实上，C2DC 是指第一维分离洗脱液的自动、在线 馏分收集。
结合使用的两套色谱系统 （各配有一根色谱柱）具备两种潜在优势。首先，这种方法可增加任何给定样品进样的理论塔板数；第二种关于全面 2D 色谱的潜在优势是能够帮助获得样品的不同信息或 更多信息。要切实获得此优势，两种维度的分离原理基础涉及的色谱条件必须有所不同。这两种维度 （系统）必须是正交或互补的两种色谱技术。例如，一种理想的 C2DC 组合为：第一维系统使 用分区型色谱 （通常为反相色谱），第二维系统使用体积排阻 (SEC) 或凝胶渗透色谱 (GPC)。
注：使用重复功能为全面的 2D UPLC 配置系统时，请在 “二元溶剂管理器”梯度表和 “色谱柱 管理器”事件表上方选择 2D 重复功能。
指导原则：“二元溶剂管理器”梯度表和 “色谱柱管理器”事件表的 后一行显示的时间定义了一次循环的持续时间，该持续时间段会在样品的运行过程中不断重复。
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 32 页
5 备件
以下表格给出了备件列表。
5.1 备件列表
有关备件的详细信息，请参阅 Waters 网站 Services & Support（服务与支持）页面上的 Waters Quality Parts Locator。
图 5–1: 备件
部件号 材料 内径 in (mm) 长度 in (mm) 接头 （请参阅下文的注意事项）
430001486 不锈钢 0.010 (0.254) 24 (610) HP/HP430002582700005476
不锈钢 0.004 (0.102) 14.5 (368) HP/HP
430002599700005479
不锈钢 0.004 (0.102) 19.0 (483) HP/HP
430002600 MP35N 0.004 (0.102) 14.5 (368) HP/HP430002641 MP35N 0.004 (0.102) 19.0 (483) HP/HP430002657700005480
不锈钢 0.004 (0.102) 22.5 (572) LP/LP
430002658700005485
MP35N 0.004 (0.102) 22.5 (572) LP/LP
430002681700005477
不锈钢 0.004 (0.102) 14.5 (368) LP/LP
430002682700005482
MP35N 0.004 (0.102) 14.5 (368) LP/LP
430002683700005478
不锈钢 0.004 (0.102) 19.0 (483) LP/LP
430002684700005483
MP35N 0.004 (0.102) 19.0 (483) LP/LP
430002717 不锈钢 0.004 (0.102) 22.5 (572) HP/HP430002718 MP35N 0.004 (0.102) 22.5 (572) HP/HP430002727 不锈钢 0.010 (0.254) 30 (762) HP/无430002738 不锈钢 0.007 (0.178) 19.0 (483) HP/HP
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注：
• HP：高压接头，镀金压力螺钉和两件式锥箍。
• LP：低压接头，单件式 PEEK 接头。
430002739 不锈钢 0.004 (0.102) 27.0 (686) HP/HP430002769700005532
不锈钢 0.004 (0.102) 36.0 (914) HP/HP
430002772 不锈钢 0.004 (0.102) 44.0 (1118) LP/LP430002779 MP35N 0.005 (0.127) 17 (432) HP/HP430002852700005535
不锈钢 0.004 (0.102) 22.5 (572) HP/LP
430002972 MP35N 0.004 (0.102) 6.0 (152) HP/HP430002974 MP35N 0.004 (0.102) 27.0 (686) HP/HP430002977 MP35N 0.004 (0.102) 36.0 (914) HP/HP430002980 MP35N 0.004 (0.102) 44.0 (1118) HP/HP430002983 不锈钢 0.004 (0.102) 6.0 (152) HP/HP430002986 不锈钢 0.004 (0.102) 36.0 (914) HP/HP430002992 不锈钢 0.004 (0.102) 44.0 (1118) HP/HP430002996 不锈钢 0.007 (0.178) 14.5 (368) HP/HP430002999 不锈钢 0.007 (0.178) 22.5 (572) HP/HP430003002 不锈钢 0.007 (0.178) 27.0 (686) HP/HP430003005 不锈钢 0.007 (0.178) 36.0 (914) HP/HP430003008 不锈钢 0.007 (0.178) 6.0 (152) HP/HP
图 5–1: 备件
部件号 材料 内径 in (mm) 长度 in (mm) 接头 （请参阅下文的注意事项）
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 34 页
6 工作表
本章包含可打印的空白工作表，以及已完成的工作表示例。
6.1 工作表
请根据需要打印下列图表，记录 CM-A 设置、阀标识和阀位置。空白工作表和已完成的工作表示例 如下所示。
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 35 页
CM-A
曲线 阀 位置
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 36 页
6.1.1 空白工作表
表 6–1: 2D 设定工作表
α 泵 β 泵
时间 流速 %A %B 曲线 流速 %A %B
时间 操作 连接和位置
12
3
4 5
6
12
3
4 5
6
阀位置 1 阀位置 2
12
3
4 5
6
12
3
4 5
6
阀位置 _
C
D
A
B
阀位置 _
12
3
4 5
6
12
3
4 5
6
阀位置 _
C
D
A
B
阀位置 _
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 37 页
时间 操作 连接和位置
12
3
4 5
6
12
3
4 5
6
阀位置 1 阀位置 2
12
3
4 5
6
阀位置 _
C
D
A
B
12
3
4 5
6
阀位置 _
C
D
A
B
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 38 页
CM-A
曲线 阀 位置
左 1
6 左 2
6 左 2
6 左 2
6 左 2
6 左 2
6 左 2
11 左 2
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 39 页
6.1.2 已完成的工作表
表 6–2: 2D 设定工作表
α 泵 β 泵
时间 流速 %A %B 曲线 流速 %A %B
0.0 1.0 100 0 0.5 90 10
0.5 1.0 100 0 11 0.5 90 10
0.6 0.1 0 100 11 0.5 90 10
1.0 0.1 0 100 11 0.5 90 10
2.0 0.1 0 100 11 0.5 5 95
3.0 0.1 0 100 11 0.5 5 95
3.5 1.0 100 0 11 0.5 90 10
5.5 1.0 100 0 11 0.5 90 10
时间 操作 连接和位置
0.0 至 0.5 进样
0.0 至 0.5 富集化合物
α 泵/SM
废液
β 泵
阀位置 1
液流
富集
分析
C
D
A
B检测
液流
TP03439
α 泵/SM
β 泵
废液
液流
分析
C
D
A
B
富集
检测液流
阀位置 1
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 40 页
时间 操作 连接和位置
0.0 至 0.5 冲掉污染物
0.5 切换阀。β 泵现在沿反方向泵送液流通过富集色谱柱，将分析物传输至分析色谱柱柱头。
废液
β 泵
液流
富集
分析
检测
C
D
A
B
α 泵/SM
液流
阀位置 1
TP03439
β 泵
液流
废液
富集
分析
检测
A
B
C
D
α 泵/SM
液流
阀位置 2
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 41 页
时间 操作 连接和位置
0.5 至 3.5 分析分离
3.5 至 5.5 切换阀，重新平衡系统
废液
β 泵
液流
富集
分析
检测
C
D
A
B
阀位置 2
α 泵/SM
液流
TP03439
β 泵
废液
液流
富集
分析
阀位置 1
D
AC
B
检测
α 泵/SM
液流
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 42 页
A 安全忠告
Waters 仪器及设备会显示危险符号，这些符号用于警示用户与产品的操作和维护相关的潜在危 险。这些符号还会显示在产品手册中，并带有介绍这些危险以及告诉您如何避免这些危险的文字说明。本附录介绍的安全符号和说明适用于所有由 Waters 提供的产品。
A.1 警告符号
警告符号将提醒用户注意与仪器或设备的不当使用相关的死亡、伤害或严重不良生理反应的危险。安装、维修或操作任何 Waters 仪器或设备时，请注意所有警告。对于安装、维修或操作任何仪器 或设备的人员不执行安全预防措施而导致的伤害或财产损失情况， Waters 不承担任何责任。
以下符号提醒用户注意在操作或维护 Waters 仪器或设备或其组件时可能出现的危险。当以下符号 出现在手册的叙述部分或步骤中时，其附带的文字指明了具体的危险并说明了避免的方法。
警告：（常规风险。当此符号显示在仪器上时，请在使用仪器前参考仪器的用户文档以查看重要的安全信息。）
警告：（接触过热表面的灼伤危险。）
警告：（电击危险。）
警告：（火灾危险。）
警告：（尖头刺伤的危险。）
警告：（手部挤压受伤的危险。）
警告：（移动机械时导致受伤的危险。）
警告：（暴露于紫外线辐射的危险。）
警告：（接触腐蚀性物质的危险。）
警告：（暴露于有毒物质的危险。）
警告：（人员暴露于激光辐射下的危险。）
警告：（暴露于可造成严重健康威胁的生物制剂的危险。）
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 43 页
A.1.1 特定警告以下警告 （符号和文字）可能出现在特定仪器和设备的用户手册中，以及粘贴在这些仪器或其组件上的标签中。
A.1.1.1 爆裂警告
该警告适用于安装有非金属管的 Waters 仪器和设备。
A.1.1.2 生物危害警告
以下警告适用的 Waters 仪器和设备可处理可能造成生物危害的材料：含有能对人体造成危害的生 物制剂的物质。
警告：（倾倒危险。）
警告：（爆炸危险。）
警告：（高压气体释放危险。）
警告：为避免因非金属管材爆裂而受伤，此类管材加压时，在其附近工作请注意做好以下预防措施：• 佩戴护目镜。• 熄灭附近所有明火。• 请勿使用 （曾经）受压或弯曲的管材。• 请勿将非金属管路暴露至以下化学不相容的化合物：例如，四氢呋喃、硝酸和硫酸。• 请注意，某些化合物 （例如二氯甲烷和二甲基亚砜）会导致非金属管材的膨胀，膨胀管
材的抗压能力将显著降低，更容易破裂。
警告：为避免具有潜在传染性的人体来源产品、去活的微生物和其它生物材料造成传染，请将处理的所有生物液体都视为具有传染性。
新版本的美国国家卫生研究院 (NIH) 出版物 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) （《微生物及生物医学实验室生物安全规范》）介绍了具体的防范措施。请始终遵守 “优良实验室规范 (GLP)”，尤其是在使用有害物质时，并就有关正确使用和处理传染性物质的方法咨询所在组织的生物危害安全代表。
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 44 页
A.1.1.3 生物危害和化学危险警告
该警告适用于可处理生物危害性物质、腐蚀性物质或有毒物质的 Waters 仪器和设备。
A.2 注意
在使用或不当使用仪器或设备可能会对其造成损坏或影响非临床样品完整性 （对临床样品完整性的危害附在警告符号中）的位置，将标有注意事项。惊叹号及其相关说明文字提醒用户此类风险。
A.3 瓶禁止符号
“溶剂瓶禁止”符号用于提醒用户注意溶剂溢出导致设备损坏的危险。
A.4 所需的保护措施
“使用护目镜”和 “穿戴防护手套”符号将警示用户需要穿戴个人防护装备。请根据您所在组织的标准操作程序选择合适的防护装备。
警告：为避免人员受到生物危害性物质、有毒物质或腐蚀性物质的污染，必须知晓与处理相关的危害。
新的 “国家研究委员会”出版物 Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards （《实验室谨慎操作：化学危险品的处理与管理》）说明了正确使用和处理此类材料的指导原则。 请始终遵守 “优良实验室规范 (GLP)”，尤其是在使用有害物质时，并就有关处理此类物质的方案咨询所在组织的安全代表。
注意：为避免损坏仪器外壳，请勿使用磨蚀性材料或溶剂清洗。
禁止：为避免溢出溶剂导致设备损坏，请勿将溶剂瓶直接放置于仪器、设备顶部或其前部边缘。应将溶剂瓶放置在溶剂瓶托盘内，该托盘可在发生溢出时充当第二层保护。
要求：重新装填或更换溶剂瓶时，请使用护目镜。
要求：处理样品时，请戴上干净、耐化学物质的无粉手套。
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 45 页
A.5 适用于所有 Waters 仪器和设备的警告
操作本设备时，请遵守标准质量控制程序以及本部分提供的设备指导原则。
A.6 实施保险丝更换的警告
以下警告适用于配备有用户可更换保险丝的仪器和设备。有时 （但并非始终），仪器或设备上会附有保险丝类型和额定值的说明信息。
寻找仪器或设备上所附的保险丝类型和额定值信息
寻找未附在仪器或设备上的保险丝类型和额定值信息
注意：未经有关法规认证部门明确允许对本设备进行的改变或改装，可能会使使用者丧失操作该设备的合法性。
警告：当有压力的情况下使用管线时，小心注意以下几点：• 当接近有压力的聚合物管线时一定要戴防护眼镜。• 熄灭附近所有的火焰。• 不要使用已经被压瘪或严重弯曲的管线。• 不要在非金属管线中使用四氢呋喃或浓硝酸或浓硫酸。• 要了解使用二氯甲烷及二甲基亚砜会导致非金属管线膨胀，大大降低管线的耐压能力。
警告：使用者必须非常清楚如果设备不是按照制造厂商指定的方式使用，那么该设备所提供的保护将被削弱。
警告：为了避免火灾，应更换与仪器保险丝盖旁边面板上印刷的类型和规格相同的保险丝。
警告：为了避免火灾，应更换 “维护步骤”一章的 “更换保险丝”一节中介绍的相同类型和规格的保险丝。
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 46 页
A.7 电气和搬运符号
A.7.1 电气符号以下电气符号及其相关说明文字可能显示在仪器手册中，以及仪器的前后面板上。
符号 说明
电源打开
电源关闭
待机
直流电
交流电
交流电 （3 相）
安全接地
框架或底盘，接线端
保险丝
功能性接地
输入
输出
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 47 页
A.7.2 搬运符号以下搬运符号及其相关文字说明可能显示在仪器、设备及组件发货外包装所粘贴的标签上。
符号 说明
向上！
防潮！
易碎！
请勿用钩！
温度上限
温度下限
温度限制
2015 年 9 月 25 日， 715004391ZH 修订版 B第 48 页