deteksi koloni enterobactericeae pada susu...
TRANSCRIPT
DETEKSI KOLONI ENTEROBACTERICEAE
PADA SUSU SAPI SEGAR TANPA MELALUI MEDIA
SELEKTIF ENTEROBACTERIACEAE
ENRICHMENT BROTH
Oleh :
Ista Ayuh Paramita2/10/2010
1
Dosen Pembimbing :
ND Kuswytasari, S.Si, M.Si
Ir. Sri Nurhatika,MP
Sidang Tugas Akhir – SB 091358
Jurusan Biologi FMIPA ITS-2010
2/10/2010
2
2
Joosten Han, et al., 2008, Beberapa isolat Enterobacteriaceae tidak dapat tumbuh dengan baik / bahkan mengalami kematian pada medium broth ini.
Deteksi Koloni EB tanpa melalui medium selektif Enterobacteriaceae enrichment broth (EE)
Metode Alternatif Deteksi Koloni Enterobacteriaceae
ISO Standar 21528-1:2004 : Deteksi koloni Enterobacteriaceae pada sample susu segar dengan media selektif EE.
Latar Belakang
2/10/2010
3
• Beberapa isolat Enterobacteriaceae tidakdapat tumbuh dengan baik atau bahkanmengalami kematian pada medium EE Brothini.
3Rumusan Masalah
2/10/2010
4
2/10/2010
Metode deteksi Enterobacteriaceae yang mengacupada metode ISO Standar 21528-1:2004.
Batasan Masalah
2/10/2010
5
2/10/2010
5
• Mendeteksi keberadaan koloni Enterobacteriaceae pada susu sapi segar menggunakan modifikasi metode ISO 21528-1:2004.
Tujuan Penelitian
2/10/2010
6
2/10/2010
6
• Deteksi koloni Enterobacteriaceae dengan modifikasi metode ISO 21528-1:2004 dapat diterapkan sebagai metode alternatif deteksi koloni Enterobacteriaceae pada produk pangan lain
Manfaat Penelitian
7
7
2/10/2010
Metodologi
Waktu Penelitian Bulan Agustus s/d Desember 2009.
Tempat PenelitianLaboratorium Mikrobiologidan Bioteknologi ITS
Rancangan Penelitian Data dianalisis secara deskriptif dankualitatif. Isolat bakteri dianalisa secaradeskriptif. Perbedaan kehadiran isolatEnterobacteriaceae dari hasil uji Penegasan pada metode modifikasi ISO dengan metode ISO dianalisa denganmetode Kualitatif
2/10/2010
8
2/10/2010
Deteksi Koloni Enterobacteriaceae ISO 21528-1:2004
Skema Kerja
A.Persiapan Sampel
B. Analisis Mikrobiologi
Deteksi EB dengan MetodeModifikasi ISO
Deteksi EB denganmetode ISO
2/10/2010
9
9
Metode ISO Metode Modifikasi ISO
Metode Deteksi EB
analisa dengan metodeT-TEST non parametrik
Persiapan Sampel
Inokulasi
Pengkayaan pada Media SelektifEnterobacteriaceae EnrichmentBroth (EE)
Pengkayaan pada MediaNon Selektif BPW
Isolasi
Uji Penegasan
Persiapan Sampel
Inokulasi
Pengkayaan pada MediaNon Selektif BPW
Isolasi
Uji Penegasan
Deteksi Koloni EB pada Susu Sapi Segar
17 Isolat dugaan EB
Modifikasi Metode ISO 21528-1:2004~ “Metode
Modifikasi ISO”
Metode ISO 21528-1:2004~ “Metode ISO”
Deteksi Koloni EB pada Susu Sapi Segar
12 Isolat dugaan EB
2/10/2010
10
Pembahasan
2/10/2010
11
Karakteristik Makroskopis Koloni EB
• ungu tua, ungu kebiruan-merah muda dengan zona, berbentuk bulat dengan pinggiran koloni rata dan permukaan koloni mukoid atau berlendir
2/10/2010
12
Ciri keluarga Enterobacteriaceae : berbentuk bulat,mukoid, dancembung, tepi yang berbeda-beda, beberapa diantaranya lebihmukoid & cenderung untuk bergabung bila masa inkubasinyadiperpanjang (Brooks, G. et al., 2005).
Uji Penegasan
• Dipilih beberapa koloni yang memiliki karakter berbeda& dapat mewakili keseluruhan karakter koloni
• Dipilih koloni merah muda s/d ungu (dengan/tanpa halo precipitate)
2/10/2010
13
Fermentasi Tes
Oksidase Tes
Uji Penegasan
• Terjadi perubahan warna glucose agar ungukuning.
• Bromocresol Purple berperan sebagai indikator pH. Menguning pada kondisi asam
• Terbentuk gas sebagai hasil fermentasi
• Fermentasi Tes Positif Koloni EB Positif
2/10/2010
14
Fermentasi Tes
Kontrol (-) Kontrol (+) Sampel (-)
Hasil fermentasites positif dengangas
2/10/2010
15
• Tabel 4.3 Uji Penegasan ke-29 isolat bakteri
Fer
men
tasi
Tes Metode
Modifikasi ISO
Metode ISO
17
12
+
–4 isolat
13 isolat
–
+3 isolat
9 isolat
Kode isolat
Kode isolat
• Dari 29 isolat, 22 isolat mampu memfermentasi glukosa, Enterobacteriaceae positif. 13 isolat dari metode modifikasi ISO dan 9 isolat dari metode ISO
• Dari 29 isolat, 7 isolat tidak mampu memfermentasi glukosa, Enterobacteriaceae Negatif. 4 isolat dari metode modifikasi ISO dan 3 isolat dari metode ISO
2/10/2010
16
• Kode koloni positif dan negatif (Tabel kecil&tabel besar)
• Oksidase tes positif : ungu, biru tua, ungu kebiruan
• Oksidase tes negatif : kuning
2/10/2010
17
Oksidase Tes
Hasil Oksidase tes positif
Hasil Oksidase tes negatif
2/10/2010
18
Ok
sid
ase
Tes
MetodeModifikasi ISO
Metode ISO
17
12
–
+5 isolat
12 isolat
–
+none
12 isolat
2/10/2010
19
• Dari 29 isolat, 24 isolat menghasilkan oksidase tes negatif , Enterobacteriaceae positif. 12 isolat dari metode modifikasi ISO dan 12 isolat dari metode ISO.
• Dari 29 isolat, 5 isolat menghasilkan oksidase tes positif , Enterobacteriaceae Negatif. 5 isolat tsb dari metode modifikasi ISO.
2/10/2010
20
Det
eksi
Ko
lon
iE
B
MetodeModifikasi ISO
Metode ISO
17
12
29
Variasipenampakan
makroskopis >>
12 +
5 –
Variasipenampakan
makroskopis >>
9 +
3 –
Diperoleh 29 isolat bakteri dugaan koloni Enterobacteriaceae. 12 dari 17 isolat menggunakan modifikasi metode ISO, positif Enterobacteriaceae. Sedangkan pada metode ISO, 9 dari 12 isolat, positif Enterobacteriaceae. Metode modifikasi ISO masih dapat digunakan sebagai metode deteksi koloni Enterobacteriaceae.
2/10/2010
21
Kesimpulan
Saran
Hasil deteksi koloni Enterobacteriaceae dapatdigunakan sebagai referensi pembanding dalam pemilihanmetode deteksi koloni Enterobacteriaceae pada produk-produk pangan lainya,
2/10/2010
22