7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 1/30

Metode

electrokinetice: electroforeza,electrofocalizarea,imunoelectroforeza

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 2/30

11/15/2012 2

I. Electroforeza şi

aplicaţiile sale pentrudiagnostic

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 3/30

11/15/2012 3

I.1.Principiul fizic al

electroforezei  Metoda de separare prin migrarea particulelor 

 încărcate electric în câmp electric 

-  - + - 

-  - + 

+ - 

+ +

- + + 

- +

Electrozi 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 4/30

Forţe care acţionează asupra

particulei în câmp electric:

 pH 

 Ze

+

 Fe

 F f 

_

_

_

_

_

+

+

+

+

+

Fe = Ff 

ZeE= 6 r vv=

ZeE 

6π rη

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 5/30

 Explicarea termenilor: 

Fe = forţa electrică  Fη = forţa de frecare 

Ze = sarcina electrică a

particulei E = intensitea câmpului

electric

η = viscositea mediului r = raza particulei

v = viteza particulei

Fe

= ZeE

Ff  = 6 r v

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 6/30

FACTORI DE DEPENDENŢĂ 

AI VITEZEI PARTICULEI :

 sarcina electrică (pH-ul mediului)

raza particulei (deci dimensiunile)

viscozitatea mediului

intensitatea câmpului electric

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 7/30

11/15/2012 7

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 8/30

11/15/2012 8

I.2.Dispozitivul 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 9/30

  pipetă 

deplasare

tampon  l 

Electro-

fore-grama:

Schema electroforezei

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 10/30

11/15/2012 10

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 11/30

11/15/2012 11

II.3. Electroforeza

proteinelor serice

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 12/30

Electroforeza = migrare

diferenţială în câmp electric, deciposibilitate de separare a: 

AMINOACIZILOR

PEPTIDELOR

PROTEINELOR

ACIZILOR NUCLEICI

El f

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 13/30

11/15/2012 13

Electroforezaproteinelor serice 

- separarea proteinelor în cinci fracţiuni.

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 14/30

11/15/2012 14

Electroforegrama normală 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 15/30

Benzile proteice separate pot fi cuantificateprin densitometrie sau fotocolorimetrie

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 16/30

11/15/2012 16

Electrophoregrama normală - valori: 

 Albumine  54-66%

 Alfa-1 globuline  2-4% Alfa-2 globuline  6-12%

Beta- globuline  8-14% 

Gamma globuline  13-22% 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 17/30

11/15/2012 17

Aplicaţie:electroforegrama patologică 

(exemple):

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 18/30

11/15/2012 18

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 19/30

Boala hepatică: 

pacient în vârstă de 46 ani, diagnosticat cuciroză hepatică, secundară abuzuluicronic de alcool. Decedează 5 luni dupăacest rezultat.

Normal 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 20/30

Pattern inflamator acut:

gamma diminuate, alfa2 mare 

Normal 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 21/30

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 22/30

Electroforegramă urinară 

Electroforeza de urină este tehnica de electie pentruidentificarea de proteinei Bence-Jones, la pacienţii cu mielommultiplu.Acesta trebuie să fie întotdeauna efectuata în lcomparatie cuelectroforeza serica, astfel încât rezultatele sa poata ficomparate direct.

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 23/30

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 24/30

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 25/30

Gammapatie policlonal ă   Secundar unor boli cronice. Ex.: secundar sarcoidozei 

Normal 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 26/30

11/15/2012 26

Focalizarea izoelectrică: electroforeză în gradient de pH,

migrarea şi separarea depinde doar de pI (punctul izoelelctric)

Princip iul  fizic : 

Dacă un amestec de proteine este supus unei electroforeze în gradientde pH fiecare proteină va migra până în locul unde pH-ul mediului

corespunde pH-ului său izoelectric (când proteina va avea sarcină

globală nulă). 

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 27/30

11/15/2012 27

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 28/30

11/15/2012 28

Imunoelectroforeza

Principiul fizic:

2 etape:

1. electroforeza 2. imunodifuzia.

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 29/30

= ELECTROFOREZA + IMUNODIFUZIE = separarea unui amestec de antigeni

1) elctroforeza în gel2) + amestec de anticorpi : Reacţie Ag –Ac

+imunodifuzie

7/30/2019 Curs Electro for Ez a Rom

http://slidepdf.com/reader/full/curs-electro-for-ez-a-rom 30/30

11/15/2012 30

Imunoelectroforeza (rezultate)

Grosimea şi poziţia

arcurilor deprecipitare.

Aplicaţie frecventă: gamapatie monoclonală.