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1TOBACCO SMOKE INDUCES CHANGES IN IL-1 FAMILY IN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS OBTAINED FROM ASTHMATIC INDIVIDUALSV Gagné-Ouellet1, E Jacques2, A-M Boucher-Lafleur1, S Plante2, L Bouchard3, J Chakir2, C Laprise11UQAC, Chicoutimi; 2IUCPQ, Québec2; 3Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QCExposure to tobacco smoke (ETS) induces epigenetic modifications including DNA methylation.In asthma, it has been shown that those modifications affect immune cell differentiation by downregulating expression of specific pro-inflammatory cytokines. Interleukin 1 (IL-1) is recognized to be increased in asthma and by cigarette smoke. Based on previous genetic association and DNA meth-ylation signature of receptors in asthma and/or atopy the aim of this study is to evaluate the changes in expression and methylation pattern induced by ETS for IL-1 subunit alpha (IL-1A) and beta (IL-1B), receptors type I (IL-1R1), type II (IL-1R2) and antagonist (IL-1RA) and for interleukin 33 (IL-33) in lung tissue. Primary epithelium cells isolated from bronchial biopsies of mild asthmatics and non-asthmatics individuals were exposed to whole tobacco smoke according to method described. Level of mRNA was measured by qRT-PCR and methylation was assessed by bis-pyrosequencing for IL-1R1, IL-1R2 and IL-1RA. ETS increased mRNA level of IL-1A and IL-1B in both asthmatic and non-asthmatic individuals. IL-33 showed a significant decrease in gene expression following ETS in asthmatic indi-viduals but not in non-asthmatics. IL-1R1 was decreased in non-asthmatic individuals but no change was observed in asthmatics. IL-1R2 and IL-1RA increased in both asthmatic and non-asthmatic individuals. We observed DNA methylation differences in IL-1R1 promoter between ETS and non-ETS cells. Modifications of genes expression induced by tobacco smoke could modify IL-1 family resulting in an increase of inflammation in lung tissues of asthmatic and non-asthmatic individuals. These changes may be induced by DNA methylation. Efforts to better interpret and integrate data from genetics and epigenetics are wished to better understand the biology of asthma as well as a better comprehension of the impact of tobacco smoke in the inflammatory component of asthma.

2THE ROLE OF EUCAPNIC VOLUNTARY HYPERPNEA IN THE DIAGNOSIS OF EXERCISE-INDUCED VOCAL CORD DYSFUNCTION IN ATHLETES: A PILOT STUDYJ Turmel1, S Gagnon2, M Bernier3, LP Boulet11Centre de recherche de l’Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec; 2Centre hospitalier affilié universitaire de Québec-Département d’ORL; 3Clinique d’orthophonie Québec, Québec, QCIntroductIon: Exercise-induced bronchoconstriction (EIB) is a common condition in endurance athletes. Exercise-induced vocal cords dysfunction (EIVCD) is a frequent confounder of EIB and is the most com-mon cause of upper airway obstruction during exercise. The diagnosis of EIVCD is not obvious and can be missed as the problem is often intermit-tent and may only occur during intense exercise. Eucapnic voluntary hyperpnea (EVH) is considered one of the best tests to detect EIB. AIm: This pilot study aims to assess whether EVH can be helpful in the diagnosis of EIVCD associated or not to EIB in athletes.methods: A nasolaryngoscopy was done during a 6-minute EVH test by an otorhinolaryngologist (ENT), in 13 female athletes, aged 21±6 years, suspected to have EIVCD. Image analysis was conducted by 2 ENT in random order.

results: During the EVH, 3 athletes showed incomplete paradoxical vocal cords movement, without inspiratory stridor. However, 12 athletes showed supraglottic movement without inspiratory stridor. In 2 athletes, this supraglottic movement was severe, one showing a marked epiglottis collapse with an almost complete obstruction of the larynx by the arytenoid cartilage mucosa. In 3 of the 12 athletes with supraglottic movement, severe vibration of the arytenoid cartilages mucosa was also observed.conclusIons: By reproducing the hyperventilation-induced laryngeal movement, the EVH identified laryngeal dysfunctions, which are not always reproducible during a resting nasolaryngoscopy. The exercise-induced inspiratory stridor reported by athletes may be associated with EIVCD or a supraglottic movement of different intensities.

3LA RÉSOLVINE D1 DIMINUE LES MARQUEURS DE L’INFLAMMATION ET L’HYPERRÉACTIVITÉ INDUITE IN VITRO SUR LES ARTÈRES PULMONAIRES HUMAINESR Hiram1, E Rizcallah2, M Sirois3, C Sirois3, C Morin4, E Rousseau11Départements de Physiologie et Biophysique de la Faculté de Médecine et des Sciences de la Santé de l’Université de Sherbrooke; 2Départements de Pathologie du CHUS; 3Service de Chirurgie Thoracique du CHUS, Sherbrooke; 4SCF Pharma Rimouski, Québec, QCL’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie progressive rare. Elle est caractérisée par une augmentation anormale de la pression artérielle pulmonaire due au remodelage de la paroi des vaisseaux. Le rôle potentiel des dérivés d’oméga-3 tels que les monoacylglycérides de DHA (MAG-DHA) a été évalué dans des modèles expérimentaux d’hyperten-sion pulmonaire (Morin et al., 2008). Le But du travail était de confirmer le mode d’action de la Résolvine D1 (RvD1) sur les artères pulmonaires humaines (APH) présentant un statut inflammatoire induit et rendues hyperréactives. Objectifs spécifiques: 1) Démontrer les effets de la RvD1 sur la tension mécanique et la sensibilité au Ca2+ des APH prétraitées (ou non) soit au TNF-a ou à l’IL-6; 2) Décrire les effets de la RvD1 et de ses précur-seurs métaboliques sur les niveaux de détection de la P-CPI-17, MYPT-1, TMEM16A et le GPR32; 3) Évaluer in vivo, les conséquences d’un trai-tement curatif avec le MAG-DHA, un précurseur de la RvD1, dans un modèle d’HTAP induite à la monocrotaline chez le rat. Nos résultats démontrent que par rapport au contrôle, les APH traitées avec 10 ng/ml TNF-a ou 10 ng/ml IL-6 développent une hyperréactivité en réponse à 80 mM KCl, 30 nM de U46619 (un agoniste des récepteurs TP), à 1 µM 5-HT et à 1 µM de PDBu. 300 nM de RvD1 réduisent significativement cette hyperréactivité induite par le TNF-a et l’IL-6. Les analyses par Western Blot et Immunofluorescence démontrent une modulation de l’expression de protéines membranaires comme le TMEM16A et le GPR32 ainsi qu’une diminution de l’expression de protéines impliquées dans le contrôle de la contraction des cellules musculaires lisses comme la CPI-17 phosphorylée et MYPT-1. Enfin, le MAG-DHA résout efficacement le remodelage tissu-laire induit par la monocrotaline chez le rat. Dans des conditions d’HTAP expérimentales, un anti-inflammatoire comme la RvD1 ou ses précurseurs, pourrait avoir des effets vaso- modulateurs et antihypertenseurs potentiels.

Congrès québécois en santé respiratoire, 6 et 7 novembre 2014 • Montréal, Québec

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4LA COMBINAISON DE L’OSELTAMIVIR AVEC L’IBUPROFÈNE ET/OU L’AZITHROMYCINE NE DÉMONTRE PAS D’AVANTAGE CLINIQUE PAR RAPPORT À L’OSELTAMIVIR SEUL CHEZ DES SOURIS INFECTÉES AVEC L’INFLUENZA A(H1N1)PDM2009A Pizzorno, Y Abed, C Rhéaume, G BoivinCentre de Recherche en Infectiologie du CHU de Québec et Université Laval, Québec, QCobjectIfs : Bien que l’oseltamivir (OSE) est considéré l’antiviral de choix pour le contrôle des infections grippales, la thérapie antivirale n’est souvent pas suffisante en cas des «tempête de cytokines» induites lors des infections sévères. L’objectif de cette étude était d’évaluer l’effet de la com-binaison de l’OSE avec des immunomodulateurs sur l’amélioration de la réponse clinique et virologique chez des souris infectées avec le virus influenza A(H1N1)pdm09. méthodes : Des groupes de 20 souris C57BL/6 ont été infectés par voie intranasale avec un virus A(H1N1)pdm09 recombinant sauvage. Un groupe non-infecté a été inclus comme contrôle. 48 h post-infection (p.i.), les souris infectées ont été traitées soit avec de la saline (placebo), l’OSE per os, ou une combinaison d’OSE-ibuprofène (IBU), OSE-azithromycine (AZM), ou OSE-IBU-AZM avec un régime quotidien pendant 5 jours. Des signes cliniques comme la perte de poids et la mortalité ont été monitorés pendant 14 jours. Au jours 4 et 6 p.i., 5 souris par groupe ont été sacrifiées afin de déterminer les titres viraux pulmonaires (TVP). résultAts : L’efficacité du traitement avec l’OSE-IBU a été compa-rable à celle de l’OSE et significativement supérieure à celle du groupe pla-cebo au niveau de la survie (60% et 50% vs 10%), de l’espérance de vie moyenne (11 et 11.5 jours vs 6.5 jours), et de la perte de poids moyenne (8.1% et 9.1% vs 16.9%), respectivement. Par contre, les traitements avec OSE-AZM et OSE-IBU-AZM ont conféré des taux de survie de 40% et 30%, avec des espérances de vie moyennes de 6.5 et 8 jours ainsi que des pertes de poids moyennes de 15.2% et 12.7%, respectivement. La détermi-nation des TVP est en cours.conclusIons : Aucune des trois combinaisons testées dans notre modèle n’a démontré d’avantage clinique significatif par rapport à la mono-thérapie avec l’OSE. Le développement de nouvelles molécules ainsi que des thérapies combinées plus efficaces s’avèrent nécessaires.

5L’ENROBAGE DES BACTÉRIES PATHOGÈNES PAR LES PROTOZOAIRES : DIVERSITÉ DES INTERACTIONS ET RÔLE DES AMIBES DANS LA PRODUCTION DE L’ENROBAGEAM Denoncourt, VE Paquet, SJ CharetteInstitut de biologie intégrative et des systèmes, Université Laval, Québec, QCCertaines bactéries pathogènes comme Legionella pneumophila vivent en étroite association avec les protozoaires, des micro-organismes eucaryotes ubiquitaires dans divers environnements. Certains protozoaires comme les amibes peuvent ingérer des bactéries pathogènes et les enrober dans des structures membraneuses appelées corps multilamellaires (CML). Ces CML sont ensuite sécrétés dans le milieu extracellulaire. Les bactéries ainsi enro-bées sont plus résistantes à divers stress et plus aptes à survivre que les bac-téries libres. Cette étude visait à recenser l’ensemble des interactions déjà décrites dans la littérature entre protozoaires et bactéries menant à l’enro-bage bactérien. De plus, nous avons cherché à élucider lequel des micro-organismes en interaction - la bactérie ou le protozoaire - contrôle la formation des CML. Une revue exhaustive de la littérature a été réalisée. De plus, en utilisant l’amibe modèle Dictyostelium discoideum, la morpho-logie et la composition des CML ont été étudiées en microscopie électronique à transmission. Il en ressort que sept espèces de protozoaires ciliés ou amibiens ont été décrites comme étant capables d’enrober cinq espèces différentes de bactéries pathogènes jusqu’à maintenant. De plus, des billes mimant des bactéries non digérables peuvent être enrobées dans des CML, suggérant que le processus d’enrobage bactérien est principalement sous le contrôle de l’amibe. Par contre, le type de bactéries ingérées peut affecter la morphologie de l’enrobage. Ainsi, il s’avère qu’un nombre

grandissant de protozoaires peut effectuer de l’enrobage bactérien. De plus, nos résultats suggèrent que les protozoaires contrôlent la production de l’en-robage. Une meilleure compréhension de l’ampleur de ce phénomène dans divers environnements et du potentiel infectieux des bactéries enrobées pourra ultimement permettre de mieux évaluer le rôle de l’enrobage bacté-rien dans la transmission de certaines maladies infectieuses respiratoires.

6IS PULMONARY REHABILITATION EFFECTIVE AFTER AECOPD?E Dajczman, R Wardini, K Maharaj, MA Baltzan, N WolkoveHôpital Mont-Sinaï, Montréal, QCIntroductIon: There is discrepancy in the literature regarding tim-ing of pulmonary rehabilitation (PR) following acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (AECOPD). As a hospital special-izing in sub-acute care and PR, we aimed to compare change in six minute walk distance (6MWD) in patients with or without a recent AECOPD admitted for PR. methods: Patients with a primary diagnosis of COPD admitted to the respiratory ward for PR in 2013 were identified. Charts were reviewed for basic demographics and characteristics including severity of disease. Of particular interest, was patient provenance (hospital vs home), recent AECOPD, length of stay (LOS) in PR, and 6 MWD pre and post PR. Results:This cohort included 288 patients (133 male) with a mean age of 71±10 years and a mean FEV1 of 0.80±0.40 L (FEV1% pred = 34±17 %). Forty six percent of patients were admitted from an acute care hospital vs. 54% admitted from home. Forty percent (116/288) had a recent AECOPD. Of those with an AECOPD, 92% were admitted from hospital. They had a mean LOS in PR of 32±18 days compared with 26±10 days in those (172/288) who did not have a recent AECOPD (p

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rs3807807 dont l’allèle A, allèle de risque pour l’asthme, diminue l’expression de ICA1 au niveau du poumon. De plus, le rs2249828 régulant l’expression du gène PIGP dans le poumon est aussi associé à l’asthme (P=1,71E-02) et deux SNP en déséquilibre de liaison avec celui-ci (rs2032088, R2=1,0; rs2835624, R2=0,92) ont démontré une association avec l’asthme dans la méta-analyse du Consortium européen GABRIEL (P

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11RÔLE COOPÉRATIF DU CANAL POTASSIQUE KCA3.1, DE L’INTÉGRINE BÉTA-1 ET DU CANAL CALCIQUE TRPC4 DANS LES MÉCANISMES DE RÉPARATION ÉPITHÉLIALE ALVÉOLAIREA Girault, J Chebli, Ntn Trinh, A Privé, E Maillé, E BrochieroCRCHUM, Montréal, QCLes mécanismes de réparation épithéliale sont cruciaux pour restaurer l’in-tégrité et la fonction des tissus après une lésion. Parmi les acteurs impliqués, les canaux potassiques (K+) jouent un rôle important dans la régulation de ces mécanismes. Nous avons montré précédemment que les canaux KvLQT1 et KATP participaient à la réparation alvéolaire. Cependant, le rôle du canal K+ activé par le calcium KCa3.1, sa relation avec les récep-teurs de la matrice extracellulaire et ses interactions avec les canaux cal-ciques (Ca2+) n’ont jamais été étudiés dans ces cellules.A l’aide d’un modèle de plaies mécaniques, nous avons montré que la pré-sence de fibronectine (FN) augmentait la vitesse de réparation de mono-couches de cellules alvéolaires de rat (ATII) comparativement aux cellules cultivées en absence de matrice. L’inhibition ou l’extinction moléculaire du KCa3.1 ralentissent la vitesse de réparation uniquement en présence de FN alors que son activation l’accélère. La migration et la prolifération des cel-lules ATII sont aussi en partie dépendantes de la présence de FN et du KCa3.1. Nous avons donc évalué une possible relation entre le KCa3.1 et un récepteur de la FN, l’intégrine béta-1. Nous avons observé que ces pro-téines étaient localisées dans les mêmes domaines et qu’elles interagissaient physiquement par co-immunoprécipitation. Nous nous sommes alors inté-ressés au rôle du Ca2+ dans ces mécanismes et nous avons montré que la présence de FN augmentait d’une part la concentration de Ca2+ intracellu-laire et la perméabilité membranaire des cellules ATII au Ca2+ et d’autre part l’expression du canal calcique TRPC4. Enfin, nous avons montré que le ralentissement de la vitesse de réparation sur FN induit par l’inhibition du TRPC4 était additif avec l’effet de l’inhibition du KCa3.1.Cette étude rapporte pour la première fois un rôle complémentaire de KCa3.1, de l’intégrine béta-1 et du TRPC4 dans les mécanismes de répa-ration alvéolaire.Financé par IRSC, FRQS et RSR du FRQS.

12VOIE MÉTABOLIQUE DE LA SPHINGOSINE-1-PHOSPHATE : CIBLE POSSIBLE POUR LA MODULATION DES TISSUS LYMPHOÏDES TERTIAIRESCA Huppé, P Blais Lecours, D MarsolaisCRIUCPQ, Québec, QCIntroductIon : La sphingosine est un lipide bioactif de la famille des sphingolipides possédant plusieurs rôles métaboliques tel que le contrôle de la circulation des lymphocytes dans les ganglions lymphatiques. Par exemple, des drogues analogues à la sphingosine induisent la séquestration des lym-phocytes dans les ganglions par la modulation du récepteur S1P1. D’autres structures lymphoïdes ont des rôles reconnus, quoique encore débattus, dans la régulation de la réponse immune pulmonaire. Par exemple, une inflamma-tion des voies aériennes causée par un antigène ou par un agent infectieux induit la formation de tissus lymphoïdes tertiaires (TLT) dans les poumons. L’objectif du projet est de déterminer si ces TLT peuvent être modulés par des composés pharmacologiques agissant sur la voie de la S1P. méthodes : Des souris ont été exposées à l’archée Methanosphaera stadtmanae (MSS) par des instillations intranasales trois fois par semaine durant trois semaines, de manière à induire la formation du TLT. Ces souris ont ensuite reçu des traitements visant à moduler la voie de la S1P dont un analogue de la sphingosine (FTY720), un analogue de la S1P (FTY720-P), un agoniste (RP001) et un antagoniste (W146) du récepteur S1P1. Des analyses histologiques ont permis de déterminer si ces composés ont eu un effet sur la régulation du nombre et de la taille des TLT. résultAts : L’administration de FTY720 tend à augmenter la surface occupée par les TLT dans le poumon (0,55% comparativement à 0,33% pour les contrôles). L’administration de l’agoniste maintient les TLT dans le poumon (0,63% contre 0,33% pour les contrôles) alors que l’antagoniste accélère sa résorption (0,23% contre 0,33% pour les contrôles). conclusIon : La voie de la S1P a un impact sur la modulation des TLT pulmonaires. Le récepteur S1P1 pourrait être impliqué dans cette régulation.

13ALGORITHME DE DÉPISTAGE DE LA DÉFICIENCE EN ALPHA-1-ANTITRYPSINE INTÉGRANT L’ÉLECTROPHORÈSE CAPILLAIRE DES PROTÉINES À HAUTE RÉSOLUTION (CZE-HR) : REVUE D’EFFICIENCEJP Émond, C Bergeron, M BeaulieuCHUM, Montréal, QCIntroductIon : La déficience en alpha-1-antitrypsine (DAAT) est une condition clinique nettement sous-diagnostiquée prédisposant à un emphysème précoce chez l’adulte. Nous proposons un algorithme en 3 étapes incluant l’électrophorèse capillaire des protéines sériques à haute résolution (CZE-HR) en 1ère ligne afin d’accroître l’exactitude diagnostique, de réduire les investigations inutiles et les coûts. CZE-HR permet d’intégrer des conditions cliniques telles que l’inflammation affectant l’exactitude des résultats dans la prise de décision.objectIfs : Évaluer l’efficience de l’algorithme implanté en décembre 2012. Démontrer le potentiel de CZE-HR comme outil diagnostique de première ligne.résultAts : Population de 172 adultes (83 H, 89 F). L’investigation fut concluante en 1ère ligne dans 58% des cas (n=99; génotypage non requis); en 2ème ligne, pour 25% des cas (n=43; avec génotypage), alors que le phénotypage fut requis dans seulement 17% des cas (n=30; 3ème ligne). Le taux de détection de DAAT dans notre population fut établi à 11% soit 7,0%, (variants communs SS, SZ, ZZ) et 4,0% variants rares à préciser par séquençage du gène SERPINA1. Nous avons identifié 23 porteurs hétéro-zygotes (13,4%; 17 patients avec l’allèle S et 6, allèle Z). Un patient avec génotype MS antérieur fut corrigé pour un phénotype Pi*SNull lorsque réévalué selon notre algorithme. L’efficience financière est accrue malgré l’ajout CZE- HR et phénotype : Réduction de 30 % en comparaison avec les dosage et génotype de l’AAT. conclusIons : En intégrant CZE-HR, notre algorithme détecte des conditions cliniques affectant l’exactitude du dosage de l’AAT. Notre approche intégrée permet d’augmenter l’efficience du dépistage tout en éliminant le recours au génotypage dans la majorité des cas et de réduire les coûts diagnostiques. L’algorithme permet d’identifier les patients requérant un séquençage du gène pour la recherche d’un rare variant associé à une déficience et d’éviter un diagnostic erroné.

14BRAIN ERYTHROPOIETINE AS RESPIRATORY STIMULANT IN NEWBORNS AND ADULTSO Ballot, J Soliz, V JosephCentre de recherche du CHU de Québec, Hôpital Saint François d’Assis, Québec, QCUpon severe hypoxia conditions, the exogenous administration of Erythropoietin (Epo) acts on the CNS as respiratory stimulant. In parallel, the inhibition of the endogenously synthesized Epo in the brain by its antagonist (soluble Epo receptor; sEpoR) suppresses the ventilatory acclima-tization to chronic hypoxia. However, whether the cerebrally synthesized Epo stimulates ventilation during the postnatal development and at adult-hood, and in a sex-dependent manner it is yet unknown. Newborn (9 days old) and adults (3 months old) mice received one intracisternal injection of sEpoR or control (0.1% BSA + 1× PBS). 24h later, respiratory (Ve=Ventilation; Vt=Tidal Volume; fR= Respiratory frequency) and meta-bolic (VO2= O2 consumption) parameters were recorded by using the whole body plethysmography technique. After normoxic conditions, animals were exposed to moderate (12% O2), severe (10% O2) and extreme (6% O2) hypoxia (10 min each). Our results show that sEpoR decreases normoxic Ve in newborn animals. However, Ve diminution was due to a decreased Vt in male, but a decreased FR in female mice. During moderate/severe hypoxia, the Ve normalized by VO2 (Ve/VO2) was decreased in sEpoR-treated neo-nates of both sexes. More interestingly, upon extreme hypoxia, sEpoR-treated newborns showed signs of respiratory depression, asphyxia and a very high mortality (males: 15/18; females: 8/10). At adulthood, sEpoR injection reduced normoxic Ve in males and females. This reduction was due to decreased fR in females, and almost significant reduction of Vt in males. During moderate hypoxia, sEpoR treatment decreased Ve/VO2 in male but

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not in female mice. No mortality was observed in adult mice exposed to extreme hypoxia. We concluded that the endogenously synthesized cerebral Epo is a respiratory stimulant in newborns and adults that in the neonatal brain decreases normoxic Ve and induces a high respiratory depression lead-ing to death in extreme hypoxia and that acts sex-dependant manner.

15CARACTÉRISATION PHÉNOTYPIQUE DE MUTANTS AMIBIENS POUR DES GÈNES LIÉS À L’ENROBAGE DE BACTÉRIES, UN PROCESSUS POTENTIELLEMENT IMPLIQUÉ DANS LA PROPAGATION DE PATHOGÈNES RESPIRATOIRESVE Paquet1, JR Faucher1, F Letourneur2, SJ Charette11IBIS et CRIUCPQ, Université Laval, Québec, QC; 2CNRS, Université Montpellier, FranceDans l’environnement, les protozoaires tels les amibes phagocytent les bac-téries pour se nourrir. Les déchets non digérables sont sécrétés via les corps multilamellaires (CML). Certains pathogènes respiratoires telle Legionella pneumophila sont capables d’éviter la dégradation enzymatique et se retrouvent enrobés dans des CML puis sécrétés dans l’environnement. Les bactéries ainsi enrobées sont vivantes et protégées des conditions non favo-rables. Les protozoaires représentent donc de potentiels vecteurs de mala-dies infectieuses pulmonaires.La compréhension des mécanismes de formation des CML est primordiale afin d’établir l’impact des bactéries enrobées sur la santé humaine. Sur la base de la littérature, des mutants pour les gènes acap-A, tom1, tsg101 et eps15 chez l’amibe modèle Dictyostelium discoideum ont été étudiés pour leur implication dans les étapes de production des CML nécessaire à l’enro-bage de bactéries. En microscopie à épifluorescence grâce à des marqueurs cellulaires déjà connus ainsi qu’en microscopie électronique à transmission, la morphologie générale des mutants et celle des compartiments de la voie endocytique (site de formation des CML) ont été analysées. Deux ten-dances principales sont ressorties : le défaut du cytosquelette d’actine chez le mutant acap-A pourrait avoir une influence sur le mécanisme d’exocy-tose en milieu axénique, provoquant ainsi une accumulation des comparti-ments à l’intérieur des cellules et les protéines Eps15 et Tom1 pourraient être des acteurs clés dans la régulation de la production ou de la sécrétion de CML. Une analyse plus approfondie de ces mutants en présence de bacté-ries enrobables est la prochaine étape de ce projet pour mieux comprendre l’enrobage de bactéries.

16LES CELLULES DENDRITIQUES EN TANT QUE BIOSENSEURS DE LA QUALITÉ BIOLOGIQUE DE L’AIRM Boucher, P Blais Lecours, D MarsolaisCRIUCPQ, Québec, QCIntroductIon : La cellule dendritique est une cellule grandement impliquée dans la réponse immunitaire, puisqu’elle présente les antigènes aux lymphocytes T naïfs, ce qui les active et enclenche la réponse adapta-tive. Son rôle a été suggéré dans l’initiation de réponses immuno-pathologiques induites par des composantes des bioaérosols. Toutefois on comprend encore mal comment les différentes composantes de ces bio-aérosols modulent l’activation des cellules dendritiques. L’objectif de ce projet d’été était de mettre au point des cultures de cellules dendritiques et de comparer le potentiel immunogène d’agents purifiés qui se retrou-vent dans les environnements de travail riches en bioaérosols. méthodes : Des cellules de moelle osseuse murines ont été différenciées en cellules dendritiques. Elles ont été stimulées avec des doses croissantes d’endotoxines, de peptidoglycane, de b-D-glucan, d’ADN enrichie en motifs CPG, et d’archées Methanosphaera stadtmanae et Methanobrevibacter smithii. La maturation des cellules a été évaluée par cytométrie de flux en quantifiant le pourcentage des cellules positives pour certains marqueurs d’activation (CMH II, CD86, CD40). résultAts : La LPS a augmenté la fréquence des cellules positives pour le CMH II (de 34,1 ± 2,2% à 40,7± 1,6%) et CD86 (de 18 ± 2,6% à 34,0 ± 1,4%), de manière dose-dépendante. Comparativement à ce standard, nous avons pu déterminer que le peptidoglycan et les archées sont des agents plus immunogènes que les motifs CPG et le b-D-glucan.

conclusIon : Dans le contexte actuel, les agents retrouvés dans les bioaérosols ont des potentiels immunogènes différents. En perspective, nous proposons de comparer l’immunogénicité d’échantillons complexes prove-nant d’environnements de travail.

17DÉVELOPPEMENT DE VACCINS SOUS-UNITAIRES CONTRE LE METPNEUMOVIRUS HUMAIN (HMPV) CONSTITUÉS DES PROTÉINES VIRALES DE FUSION ET DE LA MATRICEL Aerts1, C Rhéaume1, J Carbonneau1, S Lavigne2, C Couture2, M-E Hamelin1, G Boivin11CRI du CHU de Quebec et Université Laval, Québec, QC; 2Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QCLe HMPV est un paramyxovirus responsable d’infections des voies respira-toires aiguës, pour lequel aucun vaccin n’est disponible. La protéine de fusion (F) du HMPV est la protéine virale immunodominante, mais les vaccins qui ne contiennent que la F ne confèrent pas une protection com-plète. La protéine de la matrice (M) de HMPV est capable d’induire la maturation des cellules dendritiques (CD) Nous avons alors émis l’hypo-thèse que l’ajout de la M dans un vaccin sous-unitaire contenant la protéine F pourrait avoir un effet adjuvant.Nous avons administré la protéine F, à 2 reprises par voie intramusculaire, adjuvantée ou non avec l’alum, avec la protéine M ou avec les deux, à des souris BALB/c à un intervalle de 3 semaines. Trois semaines après le boost, les souris ont été infectées par le HMPV et monitorées pendant 14 jours. Au jour 5 post infection (p.i.), des souris ont été sacrifiées et les poumons ont été récoltés pour déterminer les titres viraux et effectuer des analyses d’histopathologie.Les souris immunisées avec les vaccins adjuvantés F+alum ou F+M+alum ont généré des titres d’anticorps neutralisants significativement plus élevés comparativement aux souris recevant la F seule (47±7 (p

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19SAFETY OF HIGH-FLOW NASAL CANNULA IN A PEDIATRIC INTENSIVE CARE UNITS Gagnon, F Baudin, F Proulx, P Jouvet, G EmeriaudSoins intensifs pédiatriques, CHU Ste-Justine, Montréal, QCIntroductIon: High-flow nasal cannula (HFNC) is increasingly used in pediatric intensive care units (PICU) as a convenient step between conventional oxygen therapy and non-invasive ventilation (NIV). While little evidence supports HFNC use, a risk of barotraumas has been sug-gested. This retrospective study aims to assess the incidence of complica-tions in children treated with HFNC in our PICU.PAtIents And methods: Between January 2013 and 2014, all children (< 18 years old) exposed to HFNC in the PICU of CHU Sainte-Justine (Montreal, Canada) were included. Demographic data, HFNC settings, chest X-ray and blood gas were recorded from the electronic medi-cal records. Complications included new pneumothorax (PTX) or pneu-momediastinum and severe epistaxis. As frequently observed in postoperative of cardiac surgery, a diagnosis of “drain related airleak” was considered when the PTX was small and resolved after drain removal. Failure of HFNC was considered when escalation to non-invasive or inva-sive ventilation was needed.results: 145 patients (48% boys) with a median [25th – 75th percentile] age of 8 [2-28] months were included. Of all 177 episodes, HFNC was used in 31% as a primary support, 36% after extubation, 18% after NIV and 16% for nitric oxide delivery. Duration was 36 [17-61] hours. Two cases (1.1%) of new PTX were observed. A chest tube was installed in both cases. Five (2.8%) “drain-related airleaks” and 1 epistaxis (0.6%) were also noted. Among 6 preexisting PTX, none of them worsened during HFNC. The median number of blood gas and x-ray per episode was 4 [2-7] and 1[1-3], respectively. Failure of HFNC occurred in 32 cases (28 switch to NIV and 5 intubations).conclusIon: While HFNC is increasingly used because of simplicity and good tolerance, the non- negligible complications in these conditions merit attention. Further evidence is needed before implementing HFNC outside of PICU.

20L’EXERCICE COMBINÉ CONTRIBUE AU CONTRÔLE GLYCÉMIQUE EN FIBROSE KYSTIQUEN Beaudoin, G Bouvet, R Rabasa-Lhoret, Y BerthiaumeInstitut de Recherches Cliniques de Montréal, Montréal, QCLa fibrose kystique (FK) est une des maladies rares la plus fréquente au Québec avec un âge médian de survie de 49 ans. Toutefois, l’amélioration de l’espérance de vie s’est associée à l’émergence de complications secon-daires telles que le diabète associé à la FK (DAFK).Présent chez 25 à 40% des adultes, il augmente de 6 fois le risque de morbi-dité et de mortalité. Plusieurs études sur des populations atteintes de diabète de type II ont démontrés les bienfaits de programmes d’exercices combinés (aérobie et résistance) sur l’amélioration du contrôle glycémique. L’objectif de l’étude visait à déterminer si un programme d’exercices combinés per-mettait d’améliorer les anomalies de la tolérance au glucose et le contrôle glycémique chez les patients FK. 14 individus FK et dysglycémiques ont été recrutés pour cette étude (âge: 33 ans ± 10, FEV1: 71,5% pred ± 8,78%, IMC 22,58 kg/m2 ± 2,5). Les participants ont été assignés au hasard à l’un des 2 groupes suivants : contrôle ou exercice. Les participants du groupe exercice recevaient un programme d’exercices combinés d’une durée de 12 semaines, à raison de 3 séances/semaine, de 40 à 60 minutes. Les tests sui-vants ont permis d’évaluer les groupes, pré et post intervention: VO2max, hyperglycémie provoquée par voie orale (HGPO), tests de force et d’endu-rance musculaire, questionnaire de qualité de vie (CFQ-R) et d’activité physique. L’analyse préliminaire des 10 premiers patients (exercice n= 7, contrôle n= 3) démontre que les participants du groupe exercice ayant adhéré au programme ont amélioré leur glycémie à 2 heures de l’HGPO (−2,1 mmol/L; p = 0,03). Aucun changement n’a été observé sur la qualité de vie, ni sur les autres mesures après l’intervention. En conclusion, le pro-gramme d’exercices combinés semble améliorer le contrôle glycémique chez les patients FK. Une période d’intervention de plus longue durée pourrait permettre de démontrer des changements au niveau de la qualité de vie et des tests d’endurance musculaire.

21DÉTERMINATION DES FACTEURS DE RISQUE DE VENTILATION ASSISTÉE PROLONGÉE CHEZ LE NOUVEAU-NÉM Sauthier, G Lodygensky, G Emeriaud, P JouvetCHU Ste-Justine, Montréal, QCIntroductIon : La ventilation assistée prolongée en période néona-tale (VAP) est associée à une morbimortalité élevée. En préalable à une étude sur les facteurs de risque (FdR) de séquelles respiratoires au décours d’une VAP néonatale qui inclura près de 200 patients sur 10 ans, nous avons mené une étude auprès d’experts pour déterminer quels FdR devraient être étudiés. méthode : Nous avons effectué une phase de génération des FdR en rele-vant les facteurs pertinents dans la littérature, puis en consultant des intensi-vistes pédiatriques et néonatals du CHU Sainte- Justine. Il leur était demandé d’indiquer l’ensemble des FdR présumés d’une VAP qui se prolongerait au-delà de l’âge de 3 mois d’âge corrigé. Les éléments ont ensuite été évalués selon une échelle de Likert à 4 points (−2, −1, 1 et 2), afin de déterminer les 7 premiers FdR qui pourraient être analysés en multivarié pour un groupe estimé de 70 patients dans le groupe VAP > 3 mois. Il y avait accord si la médiane de cota-tion était de 1 ou 2, puis détermination du pourcentage de cotation (Cot1-2).résultAts : Parmi les 8 experts sollicités, 6 ont répondus à la phase de génération et de sélection. 66 facteurs de risque (42 différents) ont été générés. Lors de la sélection, la majorité des facteurs suggérés avaient un accord (38/42). 18 facteurs avaient un Cot1-2 de 6/6. Tous les facteurs auront une analyse univariée. En excluant les facteurs rares ou évidents, les 7 facteurs privilégiés pour l’analyse multivariée sont : maladie neuromuscu-laire congénitale, trachéobronchomalacie endoscopique, âge gestationnel, hypoplasie pulmonaire radiologique, ratio SpO2/FiO2, pression moyenne, hypertension pulmonaire (septum type II). conclusIon : Nous avons pu identifier 38 FdR potentiels et les 7 prin-cipaux facteurs qui permettraient d’identifier précocement les nouveau-nés à risque de VAP. La révision des cas qui ont eu une VAP permettra de mesurer ces FdR et de fournir des hypothèses thérapeutiques, afin de dimi-nuer leur durée de ventilation.

22PREVIOUS PHYSICIAN DIAGNOSES OF COPD: DOES IT MAKE A DIFFERENCE ON THE IMPACTS AND OUTCOMES OF EXACERBATIONS-LIKE EVENTS?: A CANCOLD STUDYL Labonté1, P Mancino1, PZ Li1, W Tan2, J Bourbeau11CanCOLD research group, McGill University, Montréal, QC; 2University of British Columbia, Vancouver, BCIntroductIon: The global burden of COPD is largely due to its exacerbations. Most of our understanding of these acute respiratory events comes from patients with advanced disease who are treated for their COPD. Yet many people currently living with COPD remain unaware of their con-dition and never receive a Physician diagnosis. Consequently, they are untreated and likely to experience exacerbations, which may have serious consequences on their health.objectIve: Compare in a population-based sample of subjects the impacts of exacerbation-like respiratory events in subjects who reported a previous Physician diagnosis of COPD to those in subjects with unreported COPD.methods: Canadian Cohort Obstructive Lung Disease (CanCOLD) is a longitudinal, multi-center study, 1400 subjects, >/=40 years old, identified by random digit dialling from the general population. Subjects are sex- and age-matched, and grouped:1) COPD moderate+ (GOLD2+); 2) COPD mild (GOLD1); 3) at risk (ever smoker); 4) healthy (never smoker, no obstruction). An exacerbation questionnaire is administered at baseline and every 3 months to detect changes in respiratory symptoms, medication, work and health service use.results: In a preliminary analysis of 376 subjects with COPD who expe-rienced exacerbation- like respiratory events over 12 months, 168 reported having a previous Physician diagnosis of COPD, while 208 did not. Compared to subjects who reported a previous Physician-diagnosis, subjects with unre-ported COPD had more doctor visits (p=0.002), increased use of bronchodi-lators (p=0.006) and antibiotics and/or prednisone (p

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conclusIons: From a population-sampling based cohort that mirrors the population of COPD patients at large, exacerbation-like respiratory events have significantly more impact on subjects with unreported COPD. This strongly suggests that more thorough testing for COPD is required in the primary care setting.

23IMPACT OF CORRECTORS AND POTENTIATOR COMBINATIONS ON CF AIRWAY EPITHELIAL REPAIR UNDER INFECTIOUS CONDITIONSC Bilodeau, M Ruffin, NTN Trinh, É Maillé, E BrochieroCentre de recherche du Centre hospitalier de l’Université de Montréal (CRCHUM), Montréal, QCCystic fibrosis (CF), caused by CFTR mutations, is characterized by bacte-rial colonization and chronic inflammation leading to a progressive damage of the airway epithelium. Our previous studies revealed a delayed CF airway wound repair, in part due to the basic defect of CFTR, which is partially reverse after CFTR rescue. However, CFTR correction was compromised in the presence of Pseudomonas aeriginosa diffusible material (PsaDM) and wound repair was impaired. In order to find the best combination of com-pounds to improve epithelial repair, we decided to test the impact of correc-tors and potentiator under non-infectious and infectious conditions.We evaluated the efficiency of the CFTR correctors (VRT-325, Vx-809) and potentiator (Vx-770) on the early phases of epithelial repair, by per-forming wound healing experiments on different cell models.Our results in the absence of infection showed a higher increase in repair rates in cell lines (CuFi-4, CuFi-1) and in CF human primary airway cells treated with combination of a corrector (VRT-325 or Vx-809) and a poten-tiator (Vx-770) compared to a corrector alone. Unfortunately, in the pres-ence of infection (PsaDM), the beneficial effect of VRT-325 or Vx-809 alone on human primary airway epithelial repair was severely impaired. A significant improvement of wound repair was however observed with the combination of one corrector and one potentiator. Interestingly the combi-nation of all three components (VRT-325, Vx-770, Vx-809) seemed to further enhance the repair rates in the presence of PsaDM.Altogether, our data first showed that the presence of infectious products affected the ability of CFTR correctors to improve CF airway epithelial repair. However, CFTR functional rescue with CFTR correctors in combi-nation with a potentiator allowed a better restoration of repair rates, even in the presence of infection.Project supported by Cystic Fibrosis Canada and Biobank of of CRCHUM and RHN of FRQS.

24IMPACT D’EXOPRODUITS DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA SUR LA FONCTION DU CANAL CFTR DANS LES CELLULES ÉPITHÉLIALES DES VOIES AÉRIENNESÉ Maillé1, NTN Trinh1, C Bilodeau1, M Ruffin1, M-C Quintal2, M-Y Desrosiers1, S Rousseau3, E Brochiero11Centre de recherche du Centre hospitalier de l’Université de Montréal (CRCHUM); 2Centre hospitalier Universitaire de Sainte-Justine; 3Meakins-Christie Laboratories, Department of Medicine, McGill University, Montreal, QCLa présence d’infections bactériennes à P.aeruginosa (PA) dans les voies aériennes est une caractéristique de plusieurs pathologies pulmonaires telles que les maladies pulmonaires obstructives chroniques (MPOC) et la Fibrose Kystique (FK). Cet aspect de ces pathologies a été grandement étudié, mais son rôle sur la fonction du canal CFTR, n’est pas clairement défini. Nous avons donc évalué l’impact d’exoproduits de PA (PSADM), sur l’expression et la fonction de CFTR dans les cellules épithéliales des voies aériennes non Fibrose Kystique ainsi que leurs impact sur la correction du CFTR muté delta-F508 par le VRT-325 dans les cellules épithéliales des voies aériennes Fibrose Kystique. Tout d’abord, nous avons pu constater que la présence de PSADM diminue le courant et l’expression de CFTR dans les cellules épithéliales bronchiques non-FK (CFBE wt) via une augmentation de la vitesse de dégradation et une diminution de la synthèse de la protéine. Dans les cellules épithéliales bronchiques FK (CFBE delta-F508), le PSADM

réduit de façon importante la maturation du CFTR induite par le correcteur VRT-325. Nous avons observé le même effet délétère du PSADM sur la fonction du canal CFTR dans les cellules primaires non- FK ainsi que sur la correction de la fonction du CFTR delta-F508 par le VRT-325 dans les cellules primaires FK. Afin d’identifier plus finement les exoproduits de PA entrainant cet effet, nous avons étudié l’impact de filtrat provenant de souches mutantes de PA et nous avons pu constater que les exoproduits sous le contrôle du quorum sensing LasR semblent grandement impliqués dans la perte de correction et de maturation du CFTR delta-F508 dans les CFBE.En conclusion, la présence de PA affecte la fonction et la correction du canal CFTR, suggérant que l’efficacité des correcteurs de CFTR pourrait être limitée par la présence d’agents infectieux chez les patients FK.Supporté par : CFC, FRSQ-RSR, Banque de tissus respiratoire CRCHUM-RSR

25LE 17,18-EPETE CIBLE LES VOIES DE SIGNALISATIONS CYTOPLASMIQUES POUR RÉDUIRE L’HYPERRÉACTIVITÉ INDUITE SUR LES MUSCLES LISSES DES TRACHÉES DES COBAYESR Khaddaj-Mallat, E RousseauUniversité de Sherbrooke, Sherbrooke, QCLa dérégulation des voies de signalisation (PKC/CPI-17 et Rho kinase) qui modulent la contraction musculaire est connu pour être impliqué dans l’hyperréactivité bronchique (Henry et al., 2005, Morin et al., 2012). Dans les muscles lisses des voies respiratoires, les relations entre les mécanismes inflammatoires et ces voies de régulation ne sont pas claires. Des études récentes ont révélé les effets bénéfiques des dérivés des acides gras polyin-saturés à longue chaîne comme l’acide 17,18-époxyéicosatetraénoïque (17,18-EpETE) pour minimiser les effets de conditions pro-inflammatoires. Le but de l’étude est d’évaluer les effets du 17,18- EpETE sur la réactivité mécanique et les marqueurs inflammatoires dans un modèle d’hyperréacti-vité trachéal in vitro, utilisant des trachées des cobayes. Les objectifs sont : 1) analyser l’effet du 17,18-EpETE en absence ou en présence des inhibiteurs de PKC (calphostin C) ou de Rho kinase (Y-27632) sur les réponses muscari-niques des anneaux de trachées contrôles et en condition pro-inflammatoire. 2) tester l’effet du 17,18-EpETE sur les niveaux d’expression des sous-unités d’AP-1 (c-fos, c-Jun) et sur les niveaux de phosphorylation de NFkB, dans les fractions nucléaires de ces trachées. En condition contrôle, le 17,18-EpETE réduit de 50% la réactivité pharmacomécanique déclenché par 30 nM U-46619. En présence de prétraitement avec 10 ng/ml TNF alpha, l’addition de 300 nM 17,18-EpETE + 100 nM calphostin C ou de 300 nM 17,18-EpETE + 1 µM Y-27632 diminue significativement la tension induite par 1 µM MCh. Les Western blot montrent que le 17,18-EpETE amplifie les effets inhibiteurs de la calphostin C et du Y-27632 sur les niveaux de détection de c-fos, c-Jun et de P-NFkB. Le 17,18-EpETE diminue l’hyperréactivité bronchique via l’activation de voies cytosoliques et nucléaires dans les muscles lisses des tra-chées de cobayes. Ce type d’éicosanoïde pourrait donc servir de molécule prototypique pour développer de nouveaux agents thérapeutiques.

26ASTHME ET POLLUTION DE L’AIRL Tétreault1, M Doucet2, P Gamache2, M Fournier3, A Smargiassi11Université de Montréal, Montréal; 2Institut national de santé publique du Québec et Université Laval, Québec; 3Direction de la santé publique de Montréal, Montréal, QCL’asthme est la maladie chronique la plus fréquente chez les enfants dans les pays industrialisés, en plus d’être responsable d’une part significative des hospitalisations et visites à l’urgence. Au Québec, chez les moins de 13 ans, la prévalence de l’asthme a augmenté depuis dix ans pour atteindre 13% en 2010. Parmi les facteurs de risque associés à l’asthme, on retrouve l’exposi-tion aux polluants de l’air. Divers organismes internationaux ont caractérisé le lien entre l’exposition aux polluants de l’air et l’incidence de l’asthme comme étant probablement causal. L’objectif de cette étude est de produire des indicateurs du fardeau de l’asthme infantile attribuable à la pollution de l’air en utilisant des fonctions de risque conçues pour une population québé-coise. Nous avons utilisé une cohorte de naissance formée à partir des données du Système intégré de surveillance des maladies chroniques du

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Québec (SISMACQ), à laquelle ont été jumelés des niveaux de polluants de l’air modélisés au code postal des sujets. Les polluants de l’air sélection-nés sont les particules fines (PM2.5), l’ozone (O3) et le dioxyde d’azote (NO2). Des analyses de survie (modèles de Cox) ont été utilisées afin de caractériser la relation. Les rapports de risque ajustés d’incidence de l’asthme pour les PM2.5, l’O3 et le NO2 sont respectivement 1,23 (IC 99,9%: 1,20-1,26), 1,08 (IC 99,9%: 1,03-1,14) et 1,10 (IC 99,9%: 1,06-1,14) par augmentation de 10 µg/m3 de l’exposition à la naissance chez les Montréalais. Les associations annuelles dans cette population sont légère-ment plus élevées que celles à la naissance (PM2.5 1,23 [IC 99,9%: 1,21-1,26], O3 1,19 [IC 99,9%: 1,15-1,23] et NO2 1,14 [IC 99,9%: 1,06-1,21]) par augmentation de 10 µg/m3). Ces associations sont similaires à celles rapportées dans la littérature. Les associations nous permettront d’estimer le fardeau de l’asthme infantile attribuable aux polluants de l’air et serviront à développer des indicateurs de surveillance en santé publique.

27L’EXPRESSION DU CD200 PAR LES MACROPHAGES ALVÉOLAIRES INHIBE L’ACTIVATION DES MASTOCYTESK Santerre, D Marsolais, E BissonnetteInstitut Universitaire de Cardiologie et Pneumologie de Québec, Québec, QCL’asthme est une maladie inflammatoire chronique des voies respiratoires causée par l’altération de plusieurs mécanismes dont certains sont encore méconnus. Le CD200, une molécule transmembranaire, joue un rôle impor-tant dans la résolution de l’inflammation. Le CD200 est exprimé par une panoplie de cellules dont les macrophages alvéolaires (MA), alors que son récepteur, le CD200R, est exprimé uniquement sur les cellules myéloïdes incluant les mastocytes. L’expression du CD200 sur les MA est augmentée lors d’une exposition allergénique d’un animal normal, et non pas chez l’ani-mal allergique asthmatique. De plus, l’administration de CD200 à des rats allergiques asthmatiques empêche le développement de l’hyperréactivité bronchique. Puisque l’expression du CD200 est augmentée sur MA normaux, l’objectif principal de cette étude est donc de déterminer si les MA inhibent l’activation des mastocytes lors d’une exposition allergénique via le CD200.Les mastocytes provenant d’une lignée cellulaire (RBL 2H3) ont été sensi-bilisés avec des IgE anti-DNP et mis en présence de MA. La coculture a été stimulée avec l’antigène, le DNP- ovalbumine et les produits de la dégranu-lation ainsi que l’IL-4 ont été mesurés dans le surnageant. L’anticorps neu-tralisant contre le CD200R a été utilisé pour confirmer la spécificité de la voie CD200-CD200R. La stimulation allergénique cause une augmentation de la dégranulation et du relâchement d’IL-4 par les mastocytes. La pré-sence des MA inhibe le relâchement de ces 2 types de médiateurs. L’ajout d’un anticorps bloquant le récepteur du CD200, prévient l’inhibition cau-sée par les MA. Nos résultats suggèrent que les MA de rats normaux inhibent l’activation des mastocytes via la voie du CD200/CD200R. D’autres études sont en cours pour mieux comprendre les mécanismes per-mettant de réduire la réponse allergique asthmatique par le CD200.

28STRETCH-INDUCED ATP RELEASE IN RAT ALVEOLAR TYPE II CELLSJJ Tan, E Brochiero, R GrygorczykCentre de recherche du CHUM, Département de médecine, Université de Montréal, Montréal, QCExtracellular ATP is an important autocrine/paracrine mediator in the lungs. By binding to cell surface purinergic receptors, it initiates the purinergic sig-naling cascade, which regulates mucociliary clearance and surfactant secre-tion. Under physiological conditions, cells may release ATP into the extracellular environment without cell lysis, but this mechanism is poorly understood. Our previous work demonstrated that ATP is released due to mechanical stresses, such as stretch, which also increases intracellular calcium ([Ca2+]i). This study investigates the physiological mechanism of stretch-induced ATP release and [Ca2+]i signaling in pulmonary cells, and the poten-tial involvement of pannexin channels. Rat alveolar type II (ATII) cells are seeded onto a flexible silicone chamber at a low or high confluency. 2-3-day-old primary cells are bathed in luciferin-luciferase (LL) containing DMEM

and subjected to a 1-second stretch of 25-100%. Released ATP is visualized in real-time by imaging ATP-dependent LL bioluminescence with an EMCCD camera and [Ca2+]i by Fura-2 fluorescence imaging. After a stretch, the peak concentration of ATP released from ATII cells varied from 1-5 µM. The num-ber of responding cells was proportional to the extent of stretch. 5-minute pre-treatment with carbenoxolone (CBX, an inhibitor of pannexin) caused a 120-second-delay in ATP response. High-confluency seeding showed more profound ATP responses than low-confluency ones. Also, stretch-induced [Ca2+]i was elevated, with responses proportional to the magnitude of stretch, and was reduced with CBX. Our results show the importance of stretch-induced ATP release in mechano-purinergic signaling in alveoli. Hemichannels may play a role in [Ca2+]i signaling and in Ca2+-regulated ATP release. Our study contributes to a better understanding of purinergic signaling and its role in the lungs, which may suggest novel therapeutic approaches for respiratory diseases, such as asthma and COPD. Funded by CIHR.

29VOIES DE SIGNALISATIONS IMPLIQUÉES DANS LE DÉVELOPPEMENT DU GAIN DE FORCE SE PRODUISANT DURANT L’EXPOSITION À UN TONUS INDUIT PAR UN SPASMOGÈNEA Lee-Gosselin, M-R Blanchet, D Marsolais, Y BosséUniversité Laval, CRIUCPQ, Québec, QCIntroductIon : L’hyperréactivité bronchique et un tonus élevé du muscle lisse sont deux caractéristiques de l’asthme. Nous avons démontré dans des trachées et dans un modèle murin in vivo qu’un tonus élevé aug-mente la réactivité bronchique en augmentant la capacité contractile du muscle lisse. Toutefois, la cinétique par laquelle ce phénomène se produit et les voies de signalisation impliquées demeurent à identifier. objectIfs : 1) Déterminer la cinétique du gain de force induit par un tonus. 2) Identifier les voies de signalisation à l’aide de divers inhibiteurs pharmacologiques et différents inducteurs de tonus. méthodes : La capacité contractile d’anneaux trachéaux isolés de sou-ris a été mesurée en réponse à une concentration élevée de métacholine (MCh) (10−4 M) avec et sans pré-exposition à un tonus induit par la pré-sence continue de ce spasmogène. Le tonus a été induit pendant 3, 5, 10, 20 ou 30 min. Les expériences ont été répétés à 30 min en présence de dif-férents inhibiteurs pharmacologiques: Y-27632, latrunculine B, SP600125, U0126 et SB203580. La capacité contractile du muscle lisse a été mesurée suivant une pré-exposition à un tonus induit par des agents non- physiolo-giques: orthovanadate de sodium (activateur de la chaîne légère de myo-sine), phorbol 12,13-dibutyrate (activateur de protéines kinases C), et chlorure de potassium (KCl) (dépolarisateur de la membrane plasmique). résultAts : Le gain de force se produisant lors de l’exposition à un tonus débute 10 min après l’introduction de MCh et atteint un plateau après 20 min. Aucun inhibiteur pharmacologique n’a bloqué le gain de force induit par le tonus. Le tonus induit par l’orthovanadate de sodium et le KCl n’ont pas augmenté la capacité contractile du muscle lisse, contrai-rement au phorbol 12,13-dibutyrate. conclusIon : Nos résultats suggèrent qu’un tonus élevé augmente la capacité contractile du muscle lisse des voies respiratoires en activant des voies de signalisation en amont des récepteurs couplés aux protéines G.

30RÔLE IMPORTANT DE LA CCL26 DANS L’ÉOSINOPHILIE PULMONAIRE : CORRÉLATION ENTRE LE NIVEAU DE CCL26 ET LE NOMBRE D’ÉOSINOPHILES DANS LES EXPECTORATIONS INDUITESMC Larose, J Chakir, V Provost, AS Archambault , C Couture, M Laviolette, N FlamandCentre de recherche de l’IUCPQ, Québec, QCIntroductIon : L’éosinophilie pulmonaire corrèle avec les symp-tômes et la sévérité de l’asthme. Le recrutement des éosinophiles dépend de facteurs chimiotactiques spécialement la CCL26 qui est principalement sécrétée par les cellules épithéliales bronchiques (CÉB). Nous postulons que la persistance de l’éosinophilie pulmonaire chez les asthmatiques sévères pourrait être causée par la CCL26 produite par les CÉB.

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méthodes : Des CÉB et des coupes histologiques provenant de biopsies bronchiques et des expectorations induites ont été obtenues de sujets avec différentes sévérités d’asthme. L’ARNm des chimiokines humaines a été quantifié par qPCR chez des CÉB stimulées ou non avec de l’IL-13. L’expression protéique de la CCL26 a été mesurée par ELISA dans les sur-nageants des CÉB et dans les expectorations induites. Sur les coupes histo-logiques, le niveau de la CCL26 et le nombre d’éosinophiles ont été évalués par immunohistochimie. résultAts : Parmi toutes les chimiokines humaines, seul l’ARNm de la CCL26 est fortement augmenté chez les CÉB stimulées avec l’IL-13. L’expression génique et protéique de la CCL26 augmente avec le temps et elle est plus importante chez les CÉB d’asthmatiques sévères éosinophiliques. D’une part, les analyses immunohistochimiques sur les biopsies bron-chiques démontrent un niveau similaire de la CCL26 entre les sujets avec différentes sévérités d’asthme et aucune corrélation entre le niveau de la CCL26 et le nombre d’éosinophiles. D’autre part, dans les expectorations induites, le niveau de la CCL26 corrèle avec le nombre d’éosinophiles chez les asthmatiques.conclusIon : Nos résultats suggèrent que la CCL26 serait importante dans l’asthme sévère et qu’elle induirait le recrutement des éosinophiles vers la lumière bronchique. Puisque l’éosinophilie pulmonaire est une caractéristique majeure de l’asthme sévère, l’inhibition de la production de la CCL26 par les CÉB serait une voie thérapeutique très intéressante dans l’asthme sévère.

31EXERTIONAL DYSPNEA IN OBESITY: ROLE OF NEURAL RESPIRATORY DRIVEK Pham, R Reid, MR Schaeffer, RA Andersen, D JensenMcGill University, Montréal, QCrAtIonAle: Obesity is a risk factor for increased activity-related dyspnea, even after adjustment for age, sex, smoking history and FEV1. Nevertheless, the physiological mechanism(s) of increased exertional dyspnea in obesity remains poorly understood. Thus, we compared detailed ventilatory, breath-ing pattern, operating lung volume, diaphragmatic EMG (EMGdi expressed as a percentage of maximal voluntary EMGdi; EMGdi%max) and perceptual responses to symptom-limited incremental cycle exercise testing between 25 healthy obese (OB) and 25 healthy non-obese (NOB) adults matched for age, sex (15W:10M per group), height and FEV1.results: Despite only modest differences when examined in relation to absolute work rate, physiological and perceptual responses (VO2, ventila-tion, EMGdi%max, dyspnea intensity) to exercise in OB are magnified when examined in relation to work rate corrected for between- group differ-ences in DXA derived estimates of leg lean mass. Mean values of IC and IRV are consistently higher at rest and at any given absolute VE during exercise in OB vs. NOB. OB show higher drive to breathe (EMGdi%max) and dyspnea intensity at any given mass-specific work rate (MSWR). Diaphragm EMGdi%max-IRV and dyspnea intensity-IRV relationships are both shifted parallel to the left for OB. By contrast, EMGdi%max-VE, dyspnea intensity-VE and dyspnea intensity-EMGdi%max relationships were superimposed throughout much of exercise in OB vs. NOB.conclusIons: Mechanical adaptations of the respiratory system, includ-ing recruitment of resting IC and IRV, help to preserve the relationship between increasing EMGdi%max and increasing VE during exercise in OB vs. NOB adults. Under these circumstances, the increased perception of dyspnea during exercise in obesity likely reflects the awareness of a rela-tively higher neural respiratory drive (EMGdi%max) and attendant cen-tral corollary discharge.

32A NEW VIEW ON THE LATCH-STATE IN HUMAN AIRWAY SMOOTH MUSCLEG Ijpma, L Kachmar, A-M LauzonMcGill University, Meakins-Christie Laboratories, Montréal, QCrAtIonAle: The latch-state describes the ability of tonic smooth mus-cle to maintain force at reduced ATP consumption and crossbridge cycling rate. In animal models this is evidenced by reduced unloaded shortening

velocity (Vmax), presumably indicative of crossbridge cycling rate, and reduced myosin light chain phosphorylation (pMLC). In this study we aim to assess this phenomenon in human airway smooth muscle (hASM).methods: hASM tissues were dissected from trachea procured from the International Institute for the Advancement of Medicine. Force-velocity curves and pMLC measurements were performed at several time points in multiple prolonged methacholine 10-6 M contractions. Rat ASM strips were tested with the same protocol. A mathematical model was developed to explain the findings.results: Despite a 40% drop in pMLC between the 1st to the 20th min after the peak contraction, hASM Vmax did not show any change. Conversely, rat ASM Vmax decreased by 50%. A mathematical model of the cross-bridge cycle, combining strain-dependent ADP affinity of myosin with actin regulated binding of dephosphorylated myosin heads, was capa-ble of reproducing our findings.conclusIon: As our results contradict the classical latch-bridge the-ory, we suggest an alternative model. We propose that Vmax, as calculated from standard force-velocity curves, is not indicative of the crossbridge cycling rate during latch. Instead, Vmax is reduced due to drag caused by dephosphorylated myosin heads binding to actin, with their binding force regulated by actin regulatory proteins and their activation state. The increase in dephosphorylated myosin late in contraction decreases the mea-sured Vmax, unless its binding force is down-regulated by regulatory pro-teins. Our modelling further shows that force maintenance can be explained by phosphorylated myosin heads remaining attached to actin in a locked configuration, unable to release ADP because of strain dependence of the ADP affinity of myosin.

33RÔLE DU CD103 DANS LA MIGRATION DES CELLULES DENDRITIQUESJ Brassard, E Bernatchez, A Langlois, D Marsolais, M-R BlanchetInstitut Universitaire de Cardiologie et Pneumologie de Québec, Québec, QCIntroductIon : L’asthme est une maladie caractérisée par une inflam-mation pulmonaire en réponse à certains antigènes inoffensifs (allergènes). Ces allergènes sont captés par les cellules dendritiques (DCs) qui migrent aux ganglions en réponse à des chimiokines, telles que le SDF-1 et le CCL19. Certaines DCs expriment le CD103, une molécule d’adhésion jouant un rôle dans la régulation de l’inflammation. Notre laboratoire a démontré que l’in-flammation pulmonaire dans l’asthme est augmentée dans les souris Cd103-/-. Cependant, les mécanismes via lesquels le CD103 influence l’inflammation, tels que son rôle dans la migration des DCs, restent inconnus. méthodes : In vitro, des DCs ont été dérivées de la moelle osseuse de souris WT et Cd103-/-. Le pourcentage de migration de ces DCs en réponse à des doses croissantes de CCL19 et de SDF-1 a été calculé. In vivo, les souris WT et Cd103-/- ont reçu des instillations intranasales (i.n.) de saline ou de l’allergène «House Dust Mite» (HDM) 1 fois par jour durant 5 jours. Au jour 5, elles ont reçu une i.n. d’allergène fluorescent (OVA-APC), 18h après l’i.n., le nombre de DCs ayant capté l’OVA (OVA+) dans le poumon et les ganglions a été évalué par cytométrie de flux. résultAts : In vitro, il n’y a pas de différence de migration entre les DCs de souris WT et Cd103-/- en réponse au SDF-1 et au CCL19. In vivo, il n’y a pas de différence de rétention au poumon entre les souris WT et Cd103-/- autant dans le contexte basal qu’inflammatoire. Dans les gan-glions en contexte basal, il n’y a pas de différence de migration entre les souris WT et Cd103-/-. Cependant, en contexte inflammatoire, il y a plus de DCs OVA+ dans les ganglions des souris Cd103-/- par rapport aux WT. conclusIon : Les DCs de souris Cd103-/- n’ont pas de défaut de migration intrinsèque in vitro et en contexte basal in vivo. Toutefois, en contexte inflammatoire in vivo, la différence de migration observée pour-rait expliquer le phénotype d’inflammation exacerbée des souris Cd103-/-.

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34LE TRIGGER PNEUMATIQUE EN MODE NAVA : SOLLICITATION DES MUSCLES ACCESSOIRES OU LIMITE TECHNOLOGIQUE?C Nuncio-Naud1, S Essouri1,2, F Beaudin 1, P Jouvet 1, G Emeriaud11Soins intensifs Pédiatriques, CHU Sainte Justine, Université de Montréal, Montréal, QC; 2CHU Kremlin Bicêtre, FranceIntroductIon : Le mode NAVA permet de délivrer un support ven-tilatoire synchronisé sur l’activité électrique du diaphragme (AEdi). En pédiatrie, près de 30% des cycles sont déclenchés via le trigger pneumatique lors de la ventilation NAVA. Cette étude vise à comprendre pourquoi le trigger pneumatique peut précéder le signal AEdi et à en évaluer l’impact.méthodes : Cette étude prospective incluait 14 enfants d’âge médian de 6 (interquartile 2-13) mois en phase de sevrage de la ventilation méca-nique. L’AEdi, la pression oesophagienne (Peso), et la pression ventilatoire (Pvent) étaient enregistrées simultanément pendant 30 minutes au moyen d’une sonde gastrique et d’un ballonnet oesophagien, sous 2 modes : en mode NAVA et en mode Aide inspiratoire (AI) en ordre aléatoire, puis après extubation. Les temps inspiratoires sur les 3 signaux étaient identifiés sur 100 cycles dans les 3 conditions.résultAts : Dans 15% (5-32) des respirations, l’AEdi survenait après la baisse de Peso, avec un retard de 50 ms, et sans différence entre les 3 périodes ventilatoires. Par rapport aux cycles où l’AEdi précédait la Peso, les cycles où l’AEdi suivait la Peso s’accompagnaient d’une amplitude d’AEdi et d’un swing de Peso similaires. Par contre, l’effort nécessaire au déclenchement du ventilateur était plus grand lorsque l’AEdi était en retard (p

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est passé de 11 à 10 et le nombre d’hospitalisations de 5 à 4. Le nombre total de traitements par antibiotiques pour infections respiratoires est passé de 112 dans l’année précédant la visite initiale à 33 après un an de suivi et le nombre total de traitements de prednisone de 26 à 8. conclusIon : Les interventions effectuées permettent de réduire la consommation de soins.

38MODALITÉS ALTERNATIVES D’ENTRAÎNEMENT CARDIOVASCULAIRE CHEZ LES PATIENTS PORTEURS D’OBÉSITÉ ET DU SYNDROME D’APNÉE OBSTRUCTIVE DU SOMMEILM Croteau1, I Vivodtzev2, F Sériès1, S Provencher1, P LeBlanc1, C Minville1, A Grangier3, R Tamisier2, JL Pépin2, F Maltais11Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QC; 2Univ Grenoble Alpes, Laboratoire HP2, Inserm U1042; 3Pole Locomotion, Rééducation et Physiologie, Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble, Grenoble, FranceIntroductIon : Les sujets obèses et porteurs du syndrome d’apnée obstructive du sommeil (SAOS) se plaignent régulièrement d’intolérance à l’effort. Nous investiguons des méthodes alternatives, soit avec application de ventilation non-invasive (VNI) ou entraînement des muscles respiratoires.méthodoloGIe : Quarante-trois patients SAOS ont fait un entraîne-ment de 12 semaines à raison de 3x/semaine. Ils ont été randomisés parmi 3 groupes faisant un entraînement sur ergocycle débutant à 60% du VO2pic et augmenté selon la tolérance. Les groupes étaient : l’ergocycle seul, ergo-cycle avec application de VNI et ergocycle et un entraînement des muscles respiratoires complémentaire. Le test à l’effort consistait en un test maximal sur ergocycle et avec mesure des échanges gazeux.résultAts : Le VO2pic des 43 participants s’est amélioré sans distinc-tion par rapport au groupe en moyenne de 0,206L/min ou 8% (p

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Database for clinical exploitation of genomics data which will be support-ive to CF patients; molecular epidemiology for surveillance and outbreak investigation in cystic fibrosis. This project has the potential for future genotypic antimicrobial susceptibility testing for P. aeruginosa, as well as the identification of novel therapeutic targets and prognostic markers.

41L’IMPORTANCE DU CD103 DANS LA RÉGULATION DE L’INFLAMMATION PULMONAIREE Bernatchez, J Brassard, A Langlois, MR BlanchetInstitut Universitaire en cardiologie et pneumologie de Québec, Québec, QCIntroductIon : Les mécanismes de régulation de l’inflammation pulmonaire sont peu connus. Le CD103 est une molécule d’adhésion expri-mée par les cellules dendritiques (DCs) et les lymphocytes T et a été associée à la régulation de l’inflammation dans les intestins. Toutefois, le rôle de l’expression du CD103 dans la régulation de l’inflammation dans l’asthme est encore inconnu. méthodes : L’asthme expérimental a été induit chez des souris C57Bl/6 (wild-type; WT) et Cd103-/- via instillation intranasale d’extrait d’acarien (House Dust Mite; HDM) une fois par jour pendant 10 jours. Les souris ont été euthanasiées soit en phase aiguë d’inflammation ou en phase de résolu-tion. Les lavages broncho alvéolaires (LBA) et le poumon ont été récoltés. L’expression du CD103 a été analysée par cytométrie de flux et la sévérité de l’inflammation a été analysée via les comptes totaux et différentiels des LBA. résultAts : Le nombre de DCs CD103+ et de lymphocytes T CD4+ CD103+ est augmenté chez les souris WT exposées au HDM, et ce, autant en phase aiguë que de résolution. De plus, en phase aiguë, les souris Cd103-/- ont un nombre de cellules inflammatoires augmenté dans les LBA après exposition au HDM comparativement aux souris WT (cellules totales: 1.0x106±4.9×105 chez les souris WT vs 1.9x106±4.5×105 chez les souris Cd103-/-; p = 0.03 n= 4-5 souris/groupe). In vitro, les résultats prélimi-naires suggèrent que l’exacerbation de l’inflammation chez les souris Cd103-/- n’est pas causée par une migration accrue de leurs DCs dans les ganglions lymphatiques. Finalement, nos résultats suggèrent que la résolu-tion de l’inflammation est initié plus tardivement chez les souris Cd103-/-. conclusIon : L’expression du CD103 est importante dans la régula-tion de l’inflammation pulmonaire dans l’asthme expérimental en réponse au HDM en permettant l’initiation de la résolution de l’inflammation.

42DÉVELOPPEMENT D’UN MODÈLE EXPÉRIMENTAL MURIN POUR L’ÉTUDE DES DIFFÉRENCES SEXUELLES RELIÉES À LA DYSPLASIE BRONCHOPULMONAIRE DU NOUVEAU-NÉC Sallon, D Soulet, PR Provost, Y TremblayCentre de recherche du CHU de Québec, Québec, QCLes grands prématurés naissent de plus en plus pré-termes, et par consé-quent nécessitent plusieurs interventions néonatales, notamment, l’admi-nistration de surfactant exogène jumelée à différents protocoles de ventilation. Ces traitements sauvent des vies mais ne sont pas sans consé-quence pulmonaire. Notamment dans le cas de la très grande prématurité nous assistons à une nouvelle forme de dysplasie bronchopulmonaire (DBP) caractérisée par une simplification alvéolaire. Les rapports cliniques montrent une différence associée au sexe biologique avec un plus grand indice de DBP chez les nouveau-nés masculins. L’objectif de cette étude est de démontrer qu’une différence sexuelle existe chez un modèle animal DBP par une analyse morphométrique automatisée afin d’étudier cette différence sexuelle et ses conséquences sur le devenir alvéolaire. Pour atteindre notre objectif, nous avons exposé des nouveau-nés souris avant le début de l’al-véolisation à différentes doses d’oxygène entre 50 et 80%, ce qui est un modèle reconnu de DBP. Nous avons fait varier les paramètres expérimen-taux tels que la concentration d’oxygène (50, 60 et 80%), le temps d’expo-sition à l’hyperoxygénation (PND 1 à PND 4, PND 3 à PND 6 et PND 4 à PND 9; PND : post-natal day), et le moment du sacrifice après hyperoxygé-nation (PND 6, PND 9 et PND 14) afin de déterminer les conditions don-nant la plus grande différence sexuelle pour certains paramètres morphométriques. Ces paramètres morphométriques ont été mesurés de

façon totalement automatisée grâce à un outil informatique unique que nous avons développé en laboratoire. Nous observons une différence sexuelle chez un modèle murin DBP (80% d’oxygène de PND1 à PND 4 et sacrifice à PND9) grâce à notre logiciel d’analyse morphométrique pulmo-naire automatisée à haut débit et haute résolution. Le but à plus long terme de cette étude est d’expliquer l’origine de la différence sexuelle reliée à la DBP afin de trouver de nouvelles cibles pour un traitement.

43INFLUENCE DES ANDROGÈNES SUR LE PROFIL D’EXPRESSION DES MICROARNS : MODÈLE DU SYNDROME DE LA DÉTRESSE RESPIRATOIRE (SDR) DU NOUVEAU-NÉW Bouhaddioui, M Hamel-Auger, P Provost, Y TremblayCentre de recherche du CHU de Québec, département de santé périnatale et santé de l’enfant – CRBR, Québec, QCobjectIf : Les bébés nés prématurés ont 60% de risque de développer le SDR. La cause majeure de cette pathologie est un retard dans la synthèse et libération du surfactant par les cellules épithéliales de Type 2 (PTII). Il a été démontré que les androgènes présents dans le poumon retardent la maturation pulmonaire et la production du surfactant. Également les microARNs jouent un rôle important dans le développement pulmonaire. Le but de ce projet est d’analyser l’effet des androgènes sur l’expression des microARNs pulmonaires pendant la transition du stade canaliculaire au stade sacculaire. Actuellement, il existe peu de données à propos de l’implication des microARNs dans le SDR.méthodes : Deux groupes de souris Balb/c gestantes ont été traités au flutamide ou au véhicule, les foetus ont été prélevés aux âges gestationnels 17 et 18. Le profil d’expression des microARNs a été étudié par micro-puces à ADN. L’expression de certains microARNs a été confirmée par qPCR et la stabilité de cinq gènes de normalisation a été étudiée dans les différentes conditions de traitement. résultAts : L’analyse des résultats a montré une différence dans le profil d’expression de certains micro-ARNs, cette différence est flutamide dépendante et âge gestationnel dépendant. Des gènes impliqués dans la différenciation des PTII ainsi que les micro-ARNs correspondants montrent un profil d’expression différent en présence de flutamide.conclusIon : Les résultats obtenus supportent le rôle important des androgènes dans la régulation des micro-ARNs ainsi que leurs gènes cibles impliqués dans le développement du syndrome de détresse respiratoire chez les bébés nés prématurés.

44LE CD34 DANS LA CONTRACTILITÉ DU MUSCLE LISSE DANS L’ASTHMEK Lortie1, A Langlois1, M-J Beaulieu1, D Patoine1, Y Bossé1, K McNagny 2, M-R Blanchet11CRIUCPQ, Québec, QC; 2The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, Vancouver, BCIntroductIon : Les mécanismes de l’hyperréactivité bronchique (HB) associés à l’asthme allergique sont méconnus. On sait qu’un remode-lage du muscle lisse bronchique entraîne une bronchoconstriction exagérée. Dans un modèle murin à l’ovalbumine, on observe une HB chez les WT en réponse à l’allergène alors que les souris Cd34-/- ont moins de réactivité en réponse à l’allergène que les souris Cd34-/- naïves. Comme le CD34 est exprimé chez les précurseurs des myofibroblastes, nous avons étudié son expression et sa possible implication dans la contractilité du muscle lisse. objectIfs : Nos objectifs étaient de vérifier 1) l’expression du CD34 à la surface des cellules musculaires lisses (CML) trachéales, 2) le rôle de l’ex-pression du CD34 dans la contractilité ex-vivo du muscle lisse trachéal et 3) l’impact du CD34 sur la résistance pulmonaire. méthodes : L’expression du CD34 a été vérifiée par qPCR chez des cultures primaires de CML trachéales de souris. La colocalisation du CD34 et du muscle lisse a été effectuée par immunofluorescence. Un modèle murin (WT et Cd34-/-) d’asthme allergique au House Dust Mite (HDM) avec remodelage (3 instillations/semaines sur 5 semaines) a été utilisé. La contractilité du muscle lisse a été mesurée en bains d’organes et par mobili-sation de Ca2+. La résistance pulmonaire à la métacholine a été mesurée à l’aide du Flexivent.

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résultAts : Il y a présence d’ARNm du CD34 chez les CML cultivées en prolifération. Toutefois, il n’y a pas de colocalisation entre le muscle lisse mature et le CD34. De façon intéressante, les trachées de souris Cd34-/- ont démontré une capacité contractile ex-vivo plus élevée que les trachées de souris WT, indépendante de la mobilisation de calcium. Finalement, on a confirmé une perte de réactivité chez les souris Cd34-/- exposées au HDM de façon chronique. conclusIon : Le rôle exact du CD34 dans la réactivité in vivo reste toujours à être élucidé, mais cette molécule joue sans doute un rôle impor-tant dans ce phénomène.

45L’AIR : UN NOUVEAU MODE DE TRANSMISSION POUR LES NOROVIRUSL Bonifait 1, R Charlebois1, A Vimont 2, N Turgen1, M Veillette1, Y Longtin 3, J Jean2, C Duchaine11Centre de recherche de l’institut universitaire de cardiologie et de pneumologie; 2Institut sur la nutrition et les aliments fonctionnels, Université Laval, Québec, QC; 3Lady Davis Institute of Medical Research at the Jewish General Hospital, Université McGill, Montréal, QCLes norovirus sont des virus à ARN simple brin, non enveloppés, apparte-nant à la famille des Caliciviridae. Plus de 50% des gastroentérites chez l’homme seraient causée par les norovirus, principalement des génogroupes I et II. Les infections se traduisent généralement par des diarrhées et des vomissements soudains. Les norovirus peuvent infecter les humains de plu-sieurs manières: 1) par contact direct avec une personne infectée, 2) par contact direct avec des matières fécales ou avec des gouttelettes de vomis-sures de personnes infectées et 3) par contact indirect avec des aliments ou des surfaces contaminés. Bien que les norovirus soient des agents patho-gènes intestinaux, les vomissements et les diarrhées sont propices à produire des aérosols qui pourraient être inhalés et déglutis. L’objectif de ce projet était d’étudier la présence de norovirus GII dans l’air pendant une épidémie de gastroentérite dans différents centres de soins. Dans ce but, 48 échantillons d’air ont été prélevés dans 8 centres. La résistance au stress de l’aérosolisa-tion et de l’échantillonnage des bioaérosols de norovirus a également été étudiée in vitro en utilisant un modèle de norovirus murin MNV-1. Les auteurs ont constaté pour la première fois la présence dans l’air des bioaéro-sols de norovirus dans 75% des centres de soins. Précisément, la présence dans l’air des bioaérosols de norovirus a été démontrée dans 54% des chambres de patients symptomatiques, 25% des couloirs des centres de soins infectés et dans 33% des postes d’infirmières échantillonnés. La dose infec-tieuse de ce virus étant très faible, les doses détectées dans l’air pourraient être suffisamment élevées pour engendrer la maladie. De plus les auteurs ont démontré la résistance du norovirus aux stress induits par l’aérosolisation et l’échantillonnage. Ainsi la détection des norovirus dans l’air suggère une voie de transmission supplémentaire à ne pas négliger dans la lutte contre la propagation des virus de gastroentérite.

46LE RÔLE DE MIR-1 ET DE MIR-206 DANS LES MUSCLES LOCOMOTEURS DE PATIENTS ATTEINTS DE LA MALADIE PULMONAIRE OBSTRUCTIVE CHRONIQUEA Porlier, A Dubé, D Patoine, R Debigaré, F MaltaisCentre de recherche de l’Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, Québec, QCIntroductIon : La dysfonction des muscles locomoteurs contribue à l’intolérance à l’exercice dans la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC). L’angiogenèse et la myogenèse semblent être modifiées dans les muscles locomoteurs des patients atteints d’une MPOC. Ces changements entraînent une dysfonction des muscles locomoteurs et pourraient être causés par une modification dans l’expression d’un microARN (miR). Le rôle des miR est d’inhiber la synthèse des protéines. MiR-1 et miR-206 seraient impliqués dans la régulation de VEGF-A, un facteur de croissance reliée à l’angiogenèse et celle d’IGF-1 et d’HDAC4, deux protéines impliquées dans la régulation de la myogenèse. Nous émettons l’hypothèse que les niveaux de miR-1 et miR-206 augmentent avec le stade de la maladie ayant pour effet de

modifier la régulation de l’angiogenèse et de la myogenèse.objectIfs : Mesurer les niveaux de miR-1, miR-206, de VEGF-A, d’IGF-1 et d’HDAC4 à partir de biopsies musculaires faites dans le vastus lateralis de sujets ayant ou non une MPOC.méthodes : Une biopsie musculaire du vastus lateralis a été obtenue chez les patients ayant une MPOC GOLD I (n = 27), GOLD II-III (n = 9) et des témoins ex-fumeurs (n=13). Les niveaux de miR-1, miR-206 et l’ARNm de VEGF-A, d’IGF-1 et d’HDAC4 ont été mesurés par RT-qPCR.résultAts : Les niveaux de miR-1 et de miR-206 sont diminués de 69% (p < 0.001) et de 40% (p = 0.004) dans le vastus lateralis de patients ayant une MPOC GOLD I comparativement aux patients ayant une MPOC GOLD II-III. Le niveau de mir-1 est négativement associé au niveau d’ARNm de VEGF-A (r = −0.467; p < 0.001).conclusIon : Les niveaux d’expression de miR-1 et miR-206 suggèrent que des changements dans la régulation de l’angiogenèse et de la myogenèse peuvent apparaître de façon précoce dans la maladie. Ces miR seront carac-térisés dans un modèle de culture de cellules primaires afin de mieux com-prendre leur rôle sur l’angiogenèse et la myogenèse dans la MPOC.

47RÔLE DES COMPOSANTS NON-CELLULAIRES DANS LA RÉPONSE ALLERGÉNIQUE RETARDÉEM-E Côté, M-E Boulay, LP BouletCentre de Recherche de l’Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, Québec, QCIntroductIon : Le modèle de bronchoprovocation allergénique (BPA) a permis de mieux comprendre les mécanismes de développement des réactions allergiques chez des sujets asthmatiques. Dans l’asthme, la transsudation plasmatique permet l’entrée de plasma dans la lamina propria et la lumière bronchique suite à l’inflammation des voies aériennes. Ce phénomène est cependant encore mal étudié dans la réponse allergénique.objectIf : Mesurer la concentration de marqueurs de transsudation plasmatique suite à une BPA. Méthodes : Vingt sujets avec asthme léger (9F/11H), utilisant un bronchodilatateur au besoin et âgés de (moyenne ± ÉT) 35±14 ans ont subi une BPA induisant une réponse asthmatique immé-diate et retardée. Une expectoration induite a été obtenue à la visite initiale (pré) ainsi qu’à 7h et 24h post provocation. L’alpha 2-macroglobuline (A2M), la tryptase et le fibrinogène ont été dosés par méthode ELISA dans le surnageant d’expectoration. résultAts : Une augmentation significative des concentrations d’A2M (pré : 3866±3955, 7h : 5130±4560 et 24h : 6123±6287 µg/ml, p=0.01) et de tryptase (pré : 3405±1088, 7h : 4015±1582 et 24h : 4177±1293 pg/ml, p=0.04) a été observée 7h et 24h post-BPA comparativement aux valeurs pré-BPA . Aucune différence significative n’a été observée dans la concen-tration de fibrinogène (pré : 434±489, 7h : 442±547 et 24h : 490±608 µg/ml, p=0.26) entre les différents temps. conclusIon : Nous avons observé une augmentation des concentra-tions de protéines plasmatiques dans la lumière bronchique lors de la réponse allergénique retardée. La transsudation plasmatique observée lors de la réponse retardée pourrait jouer un rôle dans la détérioration de l’asthme suite à une exposition allergénique.

48MODULATION DE LA RÉPONSE AUX ANALOGUES DE LA SPHINGOSINE CHEZ LES FIBROBLASTES PULMONAIRES PRIMAIRESV Perreault-Vallières, A-M Lemay, C-A Huppé, P Joubert, G Dion, D MarsolaisCentre de recherche de l’Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, Québec, QCProblémAtIQue : La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie sévère caractérisée par de la toux et une dyspnée progressive menant éventuellement au décès. Les fibroblastes pulmonaires de patients atteints de FPI démontrent des altérations phénotypiques comparativement aux fibroblastes normaux. La sphingosine-1-phosphate (S1P) est un phos-pholipide bioactif ayant des effets pléiotropiques, modulant plusieurs aspects de la biologie des fibroblastes, dont la différenciation en

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myofibroblastes. Notre hypothèse est qu’une dérégulation de la voie de signalisation de la S1P pourrait expliquer certaines des altérations phénoty-piques observées chez les fibroblastes dans la FPI. méthodes : Une lignée primaire de fibroblastes pulmonaires provenant d’un patient atteint de FPI et trois lignées primaires de fibroblastes pulmo-naires provenant de parenchyme pulmonaire sain dans le cadre d’une résec-tion chirurgicale pour un cancer ont été stimulées avec du transforming growth factor-b1 (TGF-b1) (1 ng/ml) ainsi qu’avec différents analogues de la sphingosine (FTY720, FTY720-P, AAL-R, AAL-S et AFD-R) (1 uM) pendant 72 heures. Suite à la stimulation, l’expression du marqueur de dif-férenciation en myofibroblastes a-smooth-muscle-actin (a-SMA) a été évaluée par cytométrie de flux. résultAts : Nous avons observé une diminution significative du pour-centage de fibroblastes pulmonaires exprimant le marqueur de différencia-tion a-SMA suite à un traitement simultané avec du TGF-b1 et les analogues FTY720, FTY720-P, AAL-R et AAL- S chez les cellules obtenues du parenchyme sain. Cette diminution n’est pas significative chez les fibro-blastes pulmonaires obtenus du patient atteint de FPI. conclusIon : Nos résultats préliminaires supportent une dérégulation de la voie de la S1P chez les fibroblastes pulmonaires dans la FPI. De plus, le mécanisme impliqué dans la diminution de la différenciation chez les fibroblastes pulmonaires non-FPI semble être indépendant des récepteurs de la S1P.

49ÉTUDE PANGÉNOMIQUE DES GÈNES EXPRIMÉS PAR LES CELLULES ÉPITHÉLIALES PULMONAIRES EN RÉPONSE À UNE INFECTION PAR PSEUDOMONAS AERUGINOSAG Martel, S RousseauUniversité McGill, Montréal, QCLa fibrose kystique (FK) est une maladie génétique causée par la mutation du gène du régulateur transmembranaire de la fibrose kystique (CFTR). La perte de l’activité de CFTR amène une hypersécrétion de mucus, une inflammation excessive du tissu pulmonaire, une diminution de la capacité pulmonaire ainsi qu’une infection à Pseudomonas aeruginosa (Psa). Notre groupe a montré que la perte de CFTR amplifie la réponse immunitaire des cellules épithéliales pulmonaires (AEC) lors de l’incubation avec du maté-riel diffusible de Psa (PsaDM). Cette augmentation est causée par l’hyper-activation de la voie des MAP kinases, causant une hausse de la production des cytokines. Nous avons démontré le rôle central de la kinase TPL2 dans le mécanisme d’activation lors de stimulation des ACE FK et non-FK par PsaDM. De plus, dans la FK, l’activation du récepteur du facteur de crois-sance épidermique (EGFR) contribue à l’hyper-activation de la voie des MAPK et pourrait conduire à l’inflammation pulmonaire excessive des patients FK. L’activation de ERK1/2 est un événement majeur lors de la stimulation des AEC par PsaDM et les effets globaux de la stimulation sur cette voie sont encore mal compris. Nous avons examiné le profil d’expres-sion génique de cellules non-FK à l’aide de la puce GeneChip Human Transcriptome Array 2.0 (Affimetrix). Des cellules non-FK ont été pré-trai-tées ou non avec des inhibiteurs de la voie TLR-ERK1/2, puis exposées au PsaDM. Le traitement par PsaDM module l’expression de 170 gènes au seuil ±1.5. La chemokine CCL20 et le récepteur NR4A2 comptent parmi les 10 gènes les plus induits. De plus, l’augmentation en réponse à PsaDM est plus importante dans les cellules FK que non-FK. Nos résultats suggèrent que l’induction des gènes suite à l’exposition à PsaDM est beaucoup plus complexe qu’initialement imaginer et que générer un portrait précis du profil d’expression génique est essentiel à la compréhension de la réponse des cellules face a Pseudomonas aeruginosa.

50DÉVELOPPEMENT ET VALIDATION DU QUESTIONNAIRE DE CONNAISSANCES SUR L’ASTHME DESTINÉ AUX PATIENTS ADULTES (QCA-PA)D Beaurivage1, M-E Boulay1, L Ringuette1, É Frenette2, LP Boulet11Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec; 2Faculté des sciences de l’éducation, Département des fondements et pratiques en éducation, Université Laval, Québec, QCIntroductIon : L’asthme est une maladie souvent mal contrôlée et ce mauvais contrôle semble souvent attribuable à une mauvaise connais-sance de la maladie. De plus, l’évaluation des connaissances des patients permet aux professionnels de la santé d’orienter leurs interventions. Cependant, peu d’outils d’évaluation des connaissances en français ont été validés, et ceux qui le sont s’avèrent souvent complexes ou destinés à des populations précises.but : Développer un Questionnaire de Connaissances sur l’Asthme des-tiné aux Patients Adultes (QCA-PA) en français, valide, fiable, simple et généralisable.méthodes : Le QCA-PA a été développé et validé suivant les étapes d’élaboration de questionnaire proposées par DeVellis, soit (1) revue de lit-térature, (2) génération d’items, (3) sélection d’un format de mesure, (4) validité apparente et de contenu, (5) pré-test, (6) analyses d’items et de fiabilité, (7) analyses de validité. La version finale du QCA-PA a été vali-dée auprès de 101 asthmatiques âgés de 19 à 73 ans lors de trois rencontres, incluant une session d’éducation. Elle comporte 54 items répartis en quatre thèmes (biomédical, facteurs