EXTENSIONES O FROTIS SANGUNEO

Consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, de tal manera que las clulas de sta se dispongan formando una sola capa de ellas.

UTILIDAD DE LAS EXTENSIONESEl estudio de las extensiones sanguneas es esencial para:El anlisis morfolgico de las clulas hemticas Realizacin del recuento diferencial leucocitario Distincin de una autntica trombopenia de una pseudotrombopenia producida por agregados plaquetarios. Comprobacin de las alarmas que proporcionan los autoanalizadores hematolgicos

PARTES DE UNA EXTENSINCABEZAEs la zona inicial de la extensin. Es la regin ms gruesa. En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman aglomerados (pilas de monedas).

PARTES DE UNA EXTENSINCUERPOEs la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la cola

PARTES DE UNA EXTENSINCOLA.Es la zona final de la extensin. Suele tener un aspecto redondeado. Es la regin ms fina. En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES.Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes. Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas o destruidas

PARTES DE UNA EXTENSINCOLA.

CARACTERSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIN.La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta. La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a l. El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensin ha de ser fina y homognea.

DEFECTOS DE UNA EXTENSINExcesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo grosor:Inadecuado tamao de la gota de sangre Un error en la velocidad Un fallo en el ngulo de extensin de la misma.Presencia de escalones o estrasFalta de uniformidad en el deslizamiento de la gota.Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de sangrePresencia de restos de grasa o de suciedad en el portaExtremo final excesivamente dentado.

REALIZACIN DE UNA EXTENSIN SANGUNEA

TINCIONES HEMATOLGICAS

Son un conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneasAumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodeaPermite que las clulas sean visualizadas microscpicamente con mayor facilidad

TIPOS DE TINCIONESPueden clasificarse :Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se pretende colorearVitales No vitalesAtendiendo la frecuencia con la que se hacen dividen en:Tinciones tradicionalesTinciones especiales

TINCIONES VITALES Y NO VITALESLas tinciones vitales y supravitales se practican sobre clulas que estn vivas.Las Tinciones Vitales La introduccin de un colorante en la circulacin de un organismo vivo.El verde Jano El azul de metileno.Las Tinciones SupravitalesPracticada en Clulas aislados del organismo del que procedenLas Tinciones no Vitales: Se realizan sobre clulas muertas

TINCIONES TRADICIONALES Y ESPECIALES.Colorantes que derivan de la Anilina. Estos colorantes se renen en 4 grupos:Colorantes cidos: Tienen afinidad por las estructuras alcalinas de las clulasEl principal de ellos es la eosina.Colorantes bsicos: Tienen una especial afinidad por las estructuras cidas de las clulas,Uno de ellos es el Azul de Metileno.

Colorantes neutros: son sales de un cido y de una base coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.

Colorantes indiferentes: Son los que no tienen afinidad por estructuras cidas o bsicas. Son insolubles en el agua Tien a aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del lquido empleado para preparar la solucin colorante. Uno de ellos es el Sudn III

Tambin Hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones Polcromas.

Panptica cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes neutrasPancrmica cuando se aplican todas las sustancias colorantes neutras juntas

ROMANOWSKY:Fue el primero que tuvo la idea de realizar una de estas combinaciones.Constan :Colorante cido (eosina)Colorantes bsicos (tiacinas). Las Tiacinas son el azul de metileno y sus derivados obtenidos por Desmetilacin Oxidatiya (colorantes tipo azul).

Las tinciones realizadas con colorantes de tipo Romanowsky, que ms frecuentemente se emplean en el diagnstico hematolgicoWright Giemsa

DENOMINACIN DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS.Atendiendo a sus apetencias tintoriales. De las clulas Estructuras acidfilas u oxifilas:Fijan colorantes de naturaleza cidaSi captan la eosina, se dice que son eosinfilasAdquieren un color rosado. Estructuras basfllasFijan colorantes de naturaleza alcalinaAdquieren un color azulado

CAUSAS DE ERROR EN LAS TINCIONES REALIZADAS A FROTIS SANGUNEOS

Si la tincin es demasiado RosaUn pH bajo del colorante. Un tiempo de coloracin insuficiente.Un lavado excesivamente prolongadoSi la tincin es demasiado AzulUn grosor excesivo de la extensinUn pH alto del colorante.Una coloracin excesivamente prolongada. Un lavado insuficiente.

Si tras la tincin aparecen artefactos o/y precipitados en la extensin:Un empleo de portaobjetos sucios. Una falta de filtracin del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada.Un secado del colorante durante la tincin. Un lavado insuficiente

TINCIONES TRADICIONALES

TINCIN GIEMSAEs una tincin diferencial:Utilizan azul de metileno y sus productos de oxidacin (azur A, azur B y azur C) como colorantes bsicos, Utiliza eosina como colorante cidoRequiere que la muestra sea fijada previamente con alcohol metilico

TINCIN DE WRIGHT.Es una solucin de: Eosina Una mezcla de:Azul de metileno (del 50 al 75%) Azur B (del 10 al 25%) Alcohol Metlico. No requiere que la muestra sea fijada previamente con alcohol metilico

TINCIN PANPTICO RPIDOEste mtodo de tincin diferencial es un sistema que ana: La policromala calidad que proporcionan los mtodos clsicos (Giemsa y Wright) Rapidez de ejecucin (15 segundos solamente). Es un mtodo de inmersin

Usa:Solucin n 1: Solucin alcohlica de triarilmetano. Solucin n 2: Solucin tamponada de xanteno. Solucin n 3: Solucin tamponada de tiazina.Agua destilada.

Las coloraciones obtenidas en las clulas sanguneas son similares a las de la tincin de Wright y Giemsa.

NOTA:Segn la proporcin de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante tendremos distintos mtodos de tincin. Entre ellos, los ms conocidos son:El de Giemsa, El de Wright, El de Leishman El pan ptico de Pappenheim

TINCIONES ESPECIALES

TINCIONES ESPECIALESPeroxidazaSudan Black BEsteraza EspecificaEsteraza InespecificaFosfataza Alcalina LeucocitariaFosfataza AcidaAcido Periodico de SchiffPerls o Azul de Prusia

PEROXIDAZANeutrofilos y eosinofilos (mieloperoxidaza)Monocitos apenas positivosLifocitos y hematies nucleados negativosSe usa para diferenciar las LL de LMLa enzima es sensible a la luz el calor y el metanolLa peroxidasa no reacciona en cortes parafinados

SUDAN BLACK BDetecta los fosfolopidos y los lipidos intracelularesNeutrofilos y eosinofilos positivoMonocitos apenas positivosLifocitos negativosSe usa para diferenciar las LL de LMSe usa e frotis de sangre periferica y medula osea frescosLa peroxidasa no reacciona en cortes parafinados

ESTERASA ESPECIFICAPermite identifica los granulocitosLos monocitos y linfocitos son negativoReacciona bien en cortes parafinadosSe usa para diferenciar entre el sarcoma granulocitico y el linfoma de celulas grandes (histiocitos) de aspecto similar.Tmb identifica en hematopoyesis extramedularIdentificacion de mastocitos

ESTERASA INESPECIFICAIdentifica monocitosNegativo en neutrofilos y eosinofilosHistiocitos, macrofagos, megacariocitos: positivosAlgunos carcinomas de celulas epiteliales son positivosSe usa para identificar monocitos en LM y de histiocitos tisularesNo reacciona en cortes parafinadosTendria valos en leucemias megacariociticas.

FOSFATASA ALCALINA LEUCOCITARIATiene actividad en los tejidos hematopoyeticos, en el citoplasma de los neutrofilos, los osteoblastos, las celulas endoteliales vasculares, y algunos linfocitos.Presente en patologias como:En los neutrofilos de pacientes con LMCHemoglobiniria paroxistica nocturnaPurpura trombocitopenica idiopaticaMononucleosis infeccionsaLa sarcoidiosisLa anemia pernisiosaSindrome mielodisplasico

FOSFATASA ACIDASe encuentra en todas las clulas hematopoyeticasMayor actividad en los macrofago y osteoclastosIdentifica leucemia de clulas vellosas

Acido Periodico de SchiffDetecta glucgeno intracelularLa mayora de las clulas hematopoyeticas son PAS positivasNo sirve para detectar LLA de la LMAPodra ser til para detectar EritroleucemiaPerls o Azul de PrusiaEl hierro celular se dispone en forma de ferritina y hemosiderina Permite reconocer el hierro en los hemates nucleados (Sideroblastos), los histiocitos y los cuerpos de Pappenheimer eritrocitario.Se aplica a los cortes y extendidos de medula sea

OTRAS TINCIONES

Azul de toluidinaVerde metilo-pironinaDesoxinucleotidil tranferaza terminal.

ESO ES TODO

*