chromatografické metody
DESCRIPTION
Chromatografické metody. Podstata. „Při chromatografii dochází k neustálému vytváření rovnovážných stavů separované látky mezi dvě fáze – stacionární a mobilní.“. Chromatografie. Mobilní fáze - kapalina – LC plyn – GC - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/1.jpg)
Chromatografické metody
![Page 2: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/2.jpg)
Podstata
„Při chromatografii dochází k neustálému vytváření
rovnovážných stavů separované látky mezi dvě fáze – stacionární a
mobilní.“
![Page 3: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/3.jpg)
Chromatografie
• Mobilní fáze - kapalina – LC
plyn – GC
• Eluce - Izokratická – stejná eluční síla
Gradientová – rostoucí eluční síla
• Použití - analytická
preparativní
![Page 4: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/4.jpg)
Kapalinová chromatografieLC|
• Mobilní fáze - kapalina
• Stacionární fáze - pevná fáze,
kapalina
![Page 5: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/5.jpg)
Provedení LC
• Papírová PC
• Tenkovrstvá TLC
• Kolonová CC
![Page 6: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/6.jpg)
Teoretické aspekty chromatografie
![Page 7: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/7.jpg)
Chromatografie
![Page 8: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/8.jpg)
Chromatogram
Vm
Vr’
Vr
![Page 9: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/9.jpg)
Retenční – eluční čas tr
• Doba od nástřiku vzorku po dosažení maxima eluční křuvky
Retenční – eluční objem Vr
• Objem mobilní fáze proteklý od nástřiku vzorku po dosažení maxima eluční křuvky
mrr FtV
Fm – objemová rychlost mobilní fáze
![Page 10: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/10.jpg)
Mrtvý objem
'rmr VVV
Vr – zdánlivý retenční objem
Vr’- redukovaný (skutečný) retenční objem
Vm- mrtvý objem – mimokolonové příspěvky
+ mimočásticový objem kolony
![Page 11: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/11.jpg)
Kapacitní faktor k’
M
S
D
m
r
m
mr
V
VK
V
V
V
VVk
'
'
M
S
D
c
cK
Vs – objem stacionární fáze
VM – objem mobilní fáze
cs – rovnovážná koncentrace látky ve stacionární fázi
cM – rovnovážná koncentrace látky ve mobilní fázi
Distribuční koeficient
k’= 1 – 10
![Page 12: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/12.jpg)
Účinnost kolonypočet teoretických pater N
Yr
½Yr
2
16
r
r
Y
tN
2
545.5
r
r
Y
tN
1/2
![Page 13: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/13.jpg)
Účinnost kolonyvýškový ekvivalent teoretického
patra H
l
NH
l – délka kolony
![Page 14: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/14.jpg)
Účinnost kolony
![Page 15: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/15.jpg)
Rozlišenítr1 tr1
Yr1 Yr2
21
12
12
)(2
rr
rr
YY
ttR
R12=1.5 – nulové překrytí
R12=1.0 – překrytí 2 %
Yr1 Yr2
![Page 16: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/16.jpg)
Síly a efekty využívané při separaci
• Iontové síly
• Polární síly
• Nepolární síly
• Sterické interakce
• Efekt velikosti molekul
![Page 17: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/17.jpg)
Rozdělovací chromatografie
![Page 18: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/18.jpg)
Rozdělovací chromatografie
cS
cM
M
S
D
c
cK
Použití – analytická PC, TLC
![Page 19: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/19.jpg)
Adsorpční chromatografie
![Page 20: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/20.jpg)
Adsorpční chromatografie
cS
cM
M
M
S
ca
cac
1
1Mca1Mca
![Page 21: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/21.jpg)
Adsorpční chromatografie
• Stacionární fáze – polární
Silikagel SiO2 . n H2O
Oxid hlinitý Al2O3, AlO(OH), Al(OH)3
Hydroxyapatit [Ca5(PO4)3OH]
![Page 22: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/22.jpg)
Adsorpční chromatografie
• Mobilní fáze – nepolární
• Eluce - zvyšováním polarity mobilní fáze
Eluotropická řada:
uhlovodíky<subst.uhlovodíky<ketony<
aldehydy<alkoholy<voda
![Page 23: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/23.jpg)
Reverzně fázová chromatografie
• Stacionární fáze – nepolární
C8, C18
• Mobilní fáze – polární – vodné roztoky
pH potlačit disociaci
• Eluce – snižováním polarity mobilní fáze
ACN, MetOH,
![Page 24: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/24.jpg)
Reverzně fázová chromatografie
H2O
Použití : analytické – až 90 % analýz
Kartáčový typ stacionární fáze
![Page 25: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/25.jpg)
Iontově párová chromatografie
analytiontově párující činidlo
+ - SDS, HClO4
- - tetrabutylamonium
![Page 26: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/26.jpg)
Iontově párová chromatografie
sorbent C18 iontový pár
Stacionární, mobilní faze, eluce – RPC
pH plná ionizace analytu
![Page 27: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/27.jpg)
Hydrofobní chromatografie
• Stacionární fáze – - C8, -fenyl
• Mobilní fáze – vodné roztoky
1.7 M (NH4)2SO4
• Eluce – snižováním iontové síly
Použití : purifikace bílkovin
![Page 28: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/28.jpg)
Ionexová chromatografie
![Page 29: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/29.jpg)
Ionexová chromatografie
+
elektrostatická interakce
+ +
Vazba
Eluce
![Page 30: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/30.jpg)
Ionexy
• Katexy - - vazba kationtů
silné - sulfo(S), sulfopropyl(SP) OSO3-
slabé - karboxy(C), karboxymetyl(CM) COO-
• Anexy - + vazba aniontů
silné - dietylaminoetyl(DEAE)slabé – trietylaminoetyl(TEAE)
![Page 31: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/31.jpg)
Slabý ionex
• Vykazuje změny vazebné kapacity v závislosti na pH
• Má pufrační kapacitu
pH
%
COO-
COOH
![Page 32: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/32.jpg)
Ionexová chromatografie
cS
cM
kapacita
ionexu
![Page 33: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/33.jpg)
Donanův efekt
OH-
H3O+ H3O+
OH-
zvyšování pH snižování pH
![Page 34: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/34.jpg)
Ionexová chromatografie
• Nanášení vzorku – nízká iontová síla
• Eluce – gradientová• Zvyšováním iontové síly • Změnou pH• Afinitní eluce
Použití – purifikace, zakoncentrování, výměna pufru
![Page 35: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/35.jpg)
Chromatofokusaceděj na koloně
N
R
R
N
R
RH N
R
RH
N
R
RH
pH = 9 pH = 4
![Page 36: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/36.jpg)
Chromatofokusacechování vzorku
-+
pIpH pIpH pIpH
![Page 37: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/37.jpg)
Chromatofokusacechování vzorku
pH9
4
pI
Použití : analytické – stanovení pI
preparativní – purifikace bílkovin
![Page 38: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/38.jpg)
Afinitní chromatografie
![Page 39: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/39.jpg)
Afinitní interakce
![Page 40: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/40.jpg)
Interakce mezi DNA a endonukleasou
![Page 41: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/41.jpg)
Afinitní páry
![Page 42: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/42.jpg)
Afinitní chromatografienanesení vzorku
![Page 43: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/43.jpg)
Afinitní chromatografievznik interakce
![Page 44: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/44.jpg)
Afinitní chromatografievymytí balastů
![Page 45: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/45.jpg)
Afinitní chromatografieeluce
![Page 46: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/46.jpg)
Předpoklady pro vznik komplexu
• Sterické – použití raménka (spacer)
• Optimální pH, iontová síla
![Page 47: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/47.jpg)
Předpoklady pro vznik komplexu
• Vazebné
• Konformační
![Page 48: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/48.jpg)
Provedení
• Nanesení vzorku – nízká iontová síla
• Eluce – selektivní - volným ligandem
– neselektivní - změna pH, iontové
síly, polarity
Použítí : analytické (stanoveni K), purifikace
![Page 49: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/49.jpg)
Gelová permeační chromatografie
![Page 50: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/50.jpg)
Gelová permeační chromatografie
![Page 51: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/51.jpg)
Gelová permeační chromatografie
Princip - stérická exkluse
- omezená difuse
Pořadí eluce :
MrA>MrB>MrC
![Page 52: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/52.jpg)
Gelová permeační chromatografie
Totální exkluse
Totální permeace
Selektivní permeace
![Page 53: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/53.jpg)
Gelová permeační chromatografie
• Nanášení vzorku – objem vzorku < 2%
objemu kolony
• Eluce – izokratická
Použití : stanovení Mr, odsolování, purifikace
![Page 54: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/54.jpg)
PC a TLC
![Page 55: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/55.jpg)
PC a TLC
• 1944 – Martin, Snyge - PC aminokyselin
(Nobelova cena)
• 1952 – TLC nahrazuje PC
![Page 56: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/56.jpg)
Instrumentace PC a TLC
![Page 57: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/57.jpg)
Chromatografický papír
• Nemodifikovaný
• Modifikovaný – ionexy, acylace
f. Watman (Anglie)
Schleicher-Schüll (Německo)
![Page 58: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/58.jpg)
TLC
• Vlastní příprava - sypané, nalévané
• Komerčně dostupné - Siluful (Cz)
Watman
![Page 59: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/59.jpg)
PC a TLC - mody
• rozdělovací
• adsorpční
• ionexová
• hydrofobní – RP a HIC
• gelová permeační
![Page 60: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/60.jpg)
Nanášení vzorku
• Pipety
• Kapiláry
![Page 61: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/61.jpg)
Provedení
• Vzestupné
• Sestupné
• Kruhové
• Dvojrozměrné
![Page 62: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/62.jpg)
Vzestupné
![Page 63: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/63.jpg)
Sestupné
![Page 64: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/64.jpg)
Kruhové
![Page 65: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/65.jpg)
Vyvíjení
![Page 66: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/66.jpg)
Dvojrozměrné
![Page 67: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/67.jpg)
Provedení
• Analytické
• Preparativní
![Page 68: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/68.jpg)
Analýza kvalitativní
standardy vzorky
larozpouštědčelo
skvrnystřed
fR
![Page 69: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/69.jpg)
Analýza kvantitativní
• Planimetrie
• Denzitometrie
Plocha
skvrn
![Page 70: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/70.jpg)
Denzitometrie
![Page 71: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/71.jpg)
Denzitometrie
![Page 72: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/72.jpg)
Preparace
• PC – vystřižení a eluce skvrny
• TLC – vyškrábání a eluce skvrny
– odsání a eluce skvrny
![Page 73: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/73.jpg)
Chromatografie
![Page 74: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/74.jpg)
Chromatografie
• Cvet – separace chlorofylů na CaCO3 1906
![Page 75: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/75.jpg)
Kapalinová chromatografierozdělení
• Nízkotlaká (atmosferický tlak) – LPC
• Střednětlaká (4 Mpa) – FPLC
• Vysokotlaká (40 Mpa) – HPLC
![Page 76: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/76.jpg)
Kapalinová chromatografievyužití
• LPC – semipreparativní
• FPLC – semipreparativní a analytická
• HPLC – analytická
![Page 77: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/77.jpg)
Kapalinová chromatografiedoba trvání
• LPC – hodiny
• FPLC – desítky minut
• HPLC – minuty
![Page 78: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/78.jpg)
Zařízení pro LPC
![Page 79: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/79.jpg)
Instrumentace pro LPC
• Pumpa – peristaltická nebo gravitace
• Gradient – mísič gradientu
• Dávkování – přímo pumpou na kolonu
• Kolony – skleněné
• Detekce – spektrofotometrická 254, 280 nm
• Vyhodnocování – zapisovač
• Sběrač frakcí – programovatelný
![Page 80: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/80.jpg)
Instrumentace pro FPLC a HPLC
![Page 81: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/81.jpg)
Zařízení pro HPLC
![Page 82: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/82.jpg)
Pumpy
![Page 83: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/83.jpg)
Tlaková pumpa
![Page 84: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/84.jpg)
Lineární dávkovače
![Page 85: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/85.jpg)
Pumpa jednopístová
![Page 86: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/86.jpg)
Pumpa dvoupístová
![Page 87: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/87.jpg)
Pumpa dvoupístová
![Page 88: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/88.jpg)
Pumpa dvoupístová
![Page 89: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/89.jpg)
Tlumení pulsů
![Page 90: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/90.jpg)
Tlumení pulsů
![Page 91: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/91.jpg)
Gradient nízkotlaký
![Page 92: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/92.jpg)
Gradient vysokotlaký
![Page 93: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/93.jpg)
Dávkování – dávkovací ventil
![Page 94: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/94.jpg)
Dávkovací ventil – „Load“
![Page 95: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/95.jpg)
Dávkovací ventil – „Inject“
![Page 96: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/96.jpg)
Kolona
![Page 97: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/97.jpg)
Částice sorbentu
![Page 98: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/98.jpg)
Detektory
![Page 99: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/99.jpg)
Refraktometrický detektor
![Page 100: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/100.jpg)
Refraktometrický detektor
![Page 101: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/101.jpg)
Refraktometrický detektor
![Page 102: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/102.jpg)
UV – VIS detektordetekční cela
![Page 103: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/103.jpg)
UV – VIS detektors fixní vlnovou délkou
![Page 104: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/104.jpg)
UV – VIS detektors proměnlivou vlnovou délkou
![Page 105: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/105.jpg)
UV – VIS detektors diodovým polem
![Page 106: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/106.jpg)
Fluorescenční detektor
![Page 107: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/107.jpg)
Elektrochemický detektor
![Page 108: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/108.jpg)
Konduktometrický detektor
![Page 109: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/109.jpg)
LC-MS
![Page 110: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/110.jpg)
„Termospray“
![Page 111: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/111.jpg)
„Electrospray“
![Page 112: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/112.jpg)
Ionizace
![Page 113: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/113.jpg)
Derivatizace
• „pre-column“ - před vlastní analýzou
• „post-column“ – za kolonou po analýze
![Page 114: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/114.jpg)
Šum a drift detektoru
Mez detekce S/N > 2-3
Mez stanovitelnosti S/N > 10
![Page 115: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/115.jpg)
Vyhodnocení
• Zapisovače
• Integratory
• Integrační software + PC
![Page 116: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/116.jpg)
Provedení
• Analytické
• Preparativní
![Page 117: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/117.jpg)
Analýza kvalitativní
• Srovnání retenčních časů (objemů) píků u vzorku a standardů
• „spiking“ – přidání standardu do vzoru nárůst výšky píků• Specifická detekce – UV-VIS, fluorescence,
elektrochemická• MS
![Page 118: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/118.jpg)
Analýza kvantitativní
Plocha (výška) píku
• Metoda externího standardu
• Metoda vnitřního standardu
• Metoda standardního přídavku
![Page 119: Chromatografické metody](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081418/56814d52550346895dba8cb0/html5/thumbnails/119.jpg)
LC analýza