PELAKSANAAN PENELITIAN LANJUTAN TAHUN KE-2 DAN KE-3

Hasil penelitian tahun pertama menunjukkan bahwa ekstrak daun sirsak secara in

vivo mampu menghambat pertumbuhan sel kanker payudara secara efektif pada dosis

300 mg/KgBB. Oleh karena itu diperlukan penelitian lanjutan mengenai keamanan

penggunaan ekstrak daun sirsak untuk terapi. Metode yang digunakan untuk

mendapatkan dosis aman yaitu dengan uji toksisitas akut dan uji toksisitas subkronik.

Kemudian tahun selanjutnya diperlukan penelitian tentang pembuatan formula ekstrak

daun sirsak yang terstandart yang dapat digunakan untuk terapi kanker payudara.

Berikut adalah tahap-tahap penelitian tahun ke-2 dan tahun ke-3.

1.1 Tujuan Khusus

Tahun ke-2

1. Mengetahui efek toksisitas akut ekstrak daun sirsak terhadap hewan uji.

2. Mengetahui efek toksisitas sub kronik ekstrak daun sirsak terhadap hewan uji.

Tahun ke-3

1. Menetapkan standardisasi mutu ekstrak daun sirsak berdasarkan parameter kadar

senyawa aktif asetogenin.

2. Membuat formula obat antikanker payudara yang berdasarkan kategori obat

herbal terstandart

1.2 Roadmap penelitian Penelitian terhadap ekstrak daun sirsak diawali dengan menguji toksisitas

ekstrak tersebut.Ekstrak yang bersifat toksik terhadap sel (uji Brine shrimp letality test/

uji BST) diharapkan bersifat toksik juga pada sel kanker.Uji BST ekstrak daun sirsak

menunjukkan bahwa ekstrak daun sirsak bersifat toksik (Rachmani, 2010).Uji awal

potensi ekstrak daun sirsak pada sel kanker dilakukan dengan metode peredaman radikal

bebas.Salah satu aktivitas antikanker sangat terkait dengan adanya senyawa yang dapat

meredam radikal bebas.Hasil penelitian ini membuktikan bahwa ekstrak daun sirsak

memiliki sifat toksik dan mampu meredam radikal bebas (Rachmani, 2011). Hal ini

menunjukkan bahwa ekstrak daun sirsak memiliki potensi sebagai antikanker.

Peneliti selanjutnya dan telah dilakukan adalah penelitian mengenai aktivitas

antikanker payudara secara in vitro pada sel kanker T47D. Hasil penelitian tersebut

membuktikan bahwa ekstrak daun sirsak memiliki aktivitas antikanker payudara dengan

nilai IC50 34 ppm (Rachmani, 2012). Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun sirsak

memiliki potensi yang tinggi untuk pengobatan kanker payudara. Rachmani dan

Sulistyoningrum telah melakukan penelitian antikanker payudara dari ekstrak daun

sirsak secara in vivo (penelitian tahun ke-1). Hasil penelitian menunjukkan bahwa

ekstrak daun sirsak yang mampu menghambat proliferasi sel kanker payudara secara in

vivo pada tikus pada dosis 300 mg/KgBB. Hasil tahun pertama ini menjadi dasar

penelitian pada tahun ke-2, yaitu uji toksisitas akut dan subkronik ekstrak daun sirsak

pada hewan uji dengan pengamatan toksisitas pada organ hati dan ginjal, secara

histologi dan imunohistokimia.

Penelitian yang diusulkan pada skim hibah bersaing ini yaitu akan dilakukan

formulasi terhadap ekstrak daun sirsak untuk terapi kanker payudara. Adapun tahap-

tahap penelitian yang diusulkan adalah :

1. Aktivitas antikanker payudara dari ekstrak daun sirsak pada hewan uji (secara in

vivo) untuk mengetahui dosis optimal sehingga nantinya dapat diperoleh dosis

efektif terapi pada manusia.

2. Uji keamanan penggunaan ekstrak daun sirsak sehingga selain memiliki efek

terapi,ekstrak tersebut juga aman dikonsumsi penderita.

3. Standardisasi mutu ekstrak untuk menjamin kualitas ekstrak yang digunakan dan

formulasi ekstrak daun sirsak untuk medapatkan formula optimaluntuk

pengobatan antikanker.

Pada penelitian ini akan diperoleh produk komersial obat herbal terstandart dari

ekstrak daun sirsak untuk terapi kanker payudara. Kategori obat herbal terstandart ini

merupakan produk obat tradisional yang telah dibuktikan secara ilmiah berdasarkan uji

pre klinik terhadap hewan uji mengenai uji efektifitas dan keamanannya. Penelitian ini

diusulkan dilakukan selama tiga tahun.

Penelitian selanjutnya setelah penelitian ini berhasil dilakukan, yaitu

direncanakan diusulkan pada skim penelitian yang lain (Skim penelitian Riset dan

Tekhnologi) mengenai uji klinik pada manusia. Obat herbal terstandart ekstrak daun

sirsak diujikan pada manusia. Uji klinik dilakukan beberapa tahap yaitu :

a. Fase I , calon obat diuji pada sukarelawan sehat untuk mengetahui apakah sifat

yang diamati pada hewan percobaan juga terlihat pada manusia. Pada fase ini

ditentukan hubungan dosis dengan efek yang ditimbulkannya dan profil

farmakokinetik obat pada manusia.

b. Fase II,calon obat diuji pada pasien tertentu, diamati efikasi pada penyakit yang

diobati. Diharapkan dari obat adalah mempunyai efek yang potensial dengan

efek samping rendah atau tidak toksik. Pada fase ini mulai dilakukan

pengembangan dan uji stabilitas bentuk sediaan obat.

c. Fase III melibatkan kelompok besar pasien, dan lokasi uji diperluas. Obat yang

diteliti dibandingkan dengan inovator, obat yang sudah terbukti klaim khasiat

dan keamanannya.

d. Fase IV, setelah obat dipasarkan masih dilakukan studi pasca pemasaran (post

marketing surveillance) yang diamati pada pasien dengan berbagai kondisi,

berbagai usia dan ras, studi ini dilakukan dalam jangka waktu lama untuk

melihat nilai terapeutik dan pengalaman jangka panjang dalam menggunakan

obat.

Uji klinik merupakan uji untuk meningkatkan kategori obat herbal terstandart

menjadi fitofarmaka, dimana obat tersebut terbukti berkasiat dan aman digunakan pada

manusia. Hal ini merupakan upaya agar obat tradisional ekstrak daun sirsak masuk pada

sistem pengobatan formal.

Roadmap penelitian dapat dilihat pada skema berikut ini :

Produk obat herbal terstandart

Publikasi 2

Publikasi 1

Upaya agar obat herbal masuk pada sistem pengobatan formal

Uji toksisitas akut dan subkronik secara in vivo

Uji klinik formula obat herbal terstandart

Produk Fitofarmaka

Formulasi obat herbal terstandart ekstrak daun sirsak

Dosis optimal ekstrak daun sirsak untuk terapi kanker payudara secara in vivo

(Sumber dana Hibah Bersaing Tahun ke-1)

Aktivitas ekstrak daun sirsak untuk terapi kanker payudara secara in vitro

(Sumber dana Riset Institusional 2011)

Ekstrak daun sirsak memiliki aktivitas antioksidan (Sumber dana Pemula 2010)

Ekstrak daun sirsak memiliki aktivitas toksisitas terhadap larva udang

( Sumber dana mandiri)

D I U S U L K A N 2013

2014

2015

TE LAH DI LA KU KAN

2011

2010

2009

OUT PUT

1.3 Rancangan Penelitian Rancangan penelitian yang diusulkan selama tiga tahun untuk mendapatkan

produk obat herbal terstandart. Penelitian tahun pertama sedang dilakukan yaitu uji

aktivitas antikanker payudara dari ekstrak daun sirsak pada tikus (secara in vivo). Tikus

yang diinduksi kanker payudara kemudian diberi terapi dengan ekstrak daun sirsak

dengan beberapa konsentrasi sehingga akan diperoleh dosis terapi yang efektif

digunakan untuk mengobati kanker payudara. Penelitian akan dilanjutkan pada tahun

ke-2 dan ke-3 sebagai berikut :

Tahun ke-2 : Uji toksisitas akut dan sub kronik ekstrak daun sirsak pada hewan

uji

Tahun ke-3 : Standardisasi ekstrak daun sirsak dan formulasi sediaannya untuk

terapi kanker payudara

1.4 Cara Kerja Penelitian Tahun ke-2:

Penelitian ini dirancang berdasarkan pada hasil penelitian tahun ke-1. Uji

toksisitas akut dan toksisitas kronik ekstrak daun sirsak pada hewan uji. Tujuan dari

penelitian tahap ini adalah untuk mendapatkan informasi dosis ekstrak daun sirsak yang

memberikan efek toksik baik secara akut maupun kronis.

A. Preparasi pembuatan ekstrak Bahan yang diambil adalah daun sirsak. Bahan dicuci dengan air yang

mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel, kemudian dikeringkan

dengan dioven pada suhu 501C. Simplisia daun sirsak kemudian diserbuk

menggunakan grinder.

Serbuk diekstraksi dengan teknik maserasi menggunakan penyari etanol 96%.

Ekstraksi dilakukan selama 3x 24 jam dengan mengganti penyari yang baru setiap

kali menyaring hasil filtratnya. Masing-masing filtrat kemudian dijadikan satu dan

diuapkan hingga diperoleh ekstrak kental etanol.

B. Uji Toksisitas Akut a. Perlakuan uji toksisitas akut pada mencit

Hewan uji yang digunakan adalah mencit jantan dan betina galur Balb/C

berumur 2-3 bulan dengan bobot 20-30 gram. Makanan dalam bentuk pellet dan

minuman berupa aquades yang diberikan ad libitum. Hewan diadaptasikan

dalam kandang selama selama 7-14 hari sebelum pemberian dosis untuk

memungkinkan aklimatisasi terhadap kondisi laboratorium (OECD, 2001).

Mencit sebanyak 50 ekor dibagi dalam 5 kelompok, masing-masing

kelompok berjumlah 10 ekor terdiri dari 5 ekor mencit jantan dan 5 ekor mencit

betina. Mencit dipuasakan selama 3-4 jam sebelum diberi perlakuan dan 1-2 jam

setelah diberi perlakuan dengan tetap diberi air minum (OECD, 2001). Adapun

pembagian kelompok sebagai berikut:

Kelompok I : kontrol, diberi Na-CMC 0,5% secara oral dosis tunggal

(kelompok kontrol negatif )

Kelompok II : diberi ekstrak daun sirsak peroral dosis 750 mg/kg BB

Kelompok III : diberi ekstrak daun sirsak peroral dosis 1500 mg/kg BB

Kelompok IV : diberi ekstrak daun sirsak peroral dosis 3000 mg/kg BB

Kelompok V : diberi ekstrak daun sirsak peroral dosis 6000 mg/kg BB

Hewan diamati secara individual setelah pemberian dosis pada 30 menit

pertama, selama 24 jam pertama dan setiap hari setelah perlakuan selama 14

hari.

Ketika hewan dinekropsi atau ditemukan mati akibat perlakuan, waktu

kematian harus dicatat setepat mungkin. Bobot individu hewan harus ditimbang

dan dicatat sesaat sebelum substansi uji diberikan dan setidaknya setiap minggu

(OECD, 2001). Pada akhir tes hewan hidup ditimbang dan dinekropsi untuk uji

histopatologi.

b. Pengamatan gejala toksik

Masa pengamatan dilakukan selama 24 jam dan pada 3 jam pertama

setelah pemberian sediaan uji pengamatan dilakukan intensif. Kriteria

pengamatan meliputi : pengamatan fisik, jumlah hewan yang mati dan

pemeriksaan histopatologi organ hati (Donatus, 2005).

Pengamatan meliputi evaluasi perubahan kulit, bulu, mata dan selaput

lendir (hidung), laju pernapasan, efek otonom (keringat, salivasi, lakrimasi,

urinasi, dan defekasi), perubahan sistem saraf pusat (mengantuk, cara berjalan,

tremor, dan kejang), perubahan berat badan, serta kematian.

c. Pemeriksaan biokimia

Pemeriksaan kadar SGPT, SGOT dan kreatinin serum dilakukan dengan

menggunakan pereaksi enzimatik dan diukur dengan menggunakan

spektrofotometer.

d. Pemeriksaan histopatologi

Pemeriksaan histopatologi dilakukan pada hari ke-14 setelah pemberian

sediaan uji.Sebanyak 3 ekor mencit betina dari tiap kelompok dikorbankan

dengan cara dislokasi leher. Preparat sediaan permanen dibuat dengan

mengambil hati mencit bagian lobus besar kemudian dipotong kecil-kecil untuk

difiksasi ke dalam larutan Boang.Hasil fiksasi kemudian dicuci dengan NaCl

fisiologis dan alkohol seri dengan konsentrasi naik berturut-turut 60%, 70%,

80%, 96% dan alkohol absolut masing-masing selama 30 menit.Potongan hati

ditanam pada parafin keras yang dilakukan dalam inkubator. Penyayatan hati

dilakukan dengan mikrotom putar dengan ketebalan 0,8 mm dan penempelan

menggunakan perekat meyer albumin yang direntangkan pada hot plate.

Kaca obyek yang sudah ditempeli sayatan direndam berturut-turut dalam

xilol dan alkohol seri dengan konsentrasi turun yaitu alkohol absolut, alkohol

96%, 80% dan 70% masing-masing selama 5 menit. Pewarnaan dengan

haematoksilin selama 10 menit kemudian dicuci dengan air hingga sayatan

tampak menjadi biru. Pewarnaan eosin dilakukan dengan terlebih dahulu dicuci

dengan air dan direndam dalam alkohol selama 3 menit.Setelah itu direndam

eosin 1% selama 5 menit dan dicuci lagi dengan alkohol selama 5 menit.

Preparat jaringan hati diamati pada mikroskop cahaya. Jaringan hati dan

ginjal yang diamati adalah pada preparat berupa inflamasi, degenerasi, dan

nekrosis pada sel dan mengamati kerusakan pada vena sentralis, susunan sel, inti

sel dan sinusoid.

e. Analisis data

Nilai LD50 dihitung dengan menggunakan metode Thomson and Weil.

Tabel metode ini dihitung dengan rumus sebagai berikut:

Log LD50= Log D + d (f + 1) Keterangan : D = dosis terkecil yang digunakan d = logaritma kelipatan f = suatu faktor pada tabel perhitungan LD50 Weil (1952), dimana:

r adalah jumlah kematian hewan dalam satu kelompok uji n adalah jumlah hewan percobaan per kelompok k adalah jumlah hewan percobaan -1

Kisaran nilai LD50 dihitung dengan rumus sebagai berikut.

Log kisaran = Log LD50 2df

Keterangan :

f = suatu nilai pada tabel yang tergantung pada nilai n dan k

Perubahan berat organ, kadar SGOT, SGPT dan kreatinin serum yang

diperoleh dianalisis dengan menggunakan uji satu arah (one way) ANOVA. Data

hasil histopatologi di analisis secara deskriptif.

C. Uji Toksisitas Sub Kronik a. Perlakuan uji toksisitas sub kronik pada tikus

Pengujian toksisitas sub kronik dilakukan dengan menggunakan hewan uji

tikus jantan dan betina galur Wistar berumur 2-3 bulan dengan berat 150-200 g.

Tikus diadaptasikan selama 7 hari sebelum pemberian dosis untuk aklimatisasi

terhadap kondisi laboratorium (OECD, 2008). Selama penelitian tikus diberi

pakan berbentuk pelet dan pemberian minum tikus dilakukan secara ad libitum.

Lima puluh ekor tikus jantan dan betina galur dibagi menjadi lima

kelompok uji dan dibagi secara acak. Masing-masing kelompok terdiri 5 jantan

dan 5 betina (OECD, 1998). Pengelompokan tersebut adalah sebagai berikut

(WHO, 2000) :

Kelompok I : diberi larutan Na-CMC 1%.

Kelompok II : diberi ekstrak uji konsentrasi 62,5 mg/kg BB

Kelompok III : diberi ekstrak uji konsentrasi 125 mg/kg BB

Kelompok IV : diberi ekstrak uji konsentrasi 250 mg/kg BB

Kelompok V : diberi ekstrak uji konsentrasi 500 mg/kg BB

b. Pengamatan gejala toksik dan biokimia

Pengamatan dan pemeriksaan gejala toksik dilakukan setiap hari sampai

hari ke 30 yaitu meliputi kondisi tinja, angka kematian dan perubahan berat

badan (Mukinda and Syce, 2007). Pengambilan sampel darah dilakukan dengan

membius hewan terlebih dahulu menggunakan fenobarbital 6% (40 mg/kg BB)

secara intraperitoneal. Darah hewan uji diambil melalui kardiak punctur

sebanyak lebih kurang 3 ml untuk dilakukan pengukuran kadar ureum dan

kreatinin dilakukan pada hari ke 30.

Setelah itu dilakukan autopsi pada hewan dan dilakukan pemeriksaan

pada hematologi (Mukinda and Syce, 2007). Bobot individu hewan harus

ditentukan sesaat sebelum substansi uji diberikan dan setidaknya setiap minggu.

Perubahan berat badan harus dihitung dan dicatat.

c. Pemeriksaan histopatologi

Pada akhir tes hewan hidup ditimbang dan dinekropsi (OECD, 2002).

Pengamatan secara histopatologi dilakukan pada organ hati dan ginjal tikus.

Sebanyak 3 ekor tikus jantan dan betina dari tiap kelompok dikorbankan dengan

cara dislokasi leher. Hewan uji kemudian dibedah dan diambil organ hati dan

ginjalnya untuk ditimbang bobotnya. Organ kemudian dicuci dengan NaCl

fisiologis dan difiksasi dengan formalin 10% selama 24 jam lalu dipotong

setebal 3-5 mm. Potongan organ dimasukkan ke dalam tissue cassete dan

dilanjutkan dengan dehidrasi, penjernihan, penembusan, dan bloking dengan

parafin.

Tahapan proses dehidrasi jaringan dilakukan dengan perendaman secara

bergantian dalam etanol 80% selama 2 jam, etanol 90% sebanyak dua kali

masing-masing selama 2 jam, dan etanol 100% sebanyak tiga kali masing-

masing selama 1 jam. Setelah itu penjernihan dilakukan dengan perendaman

dalam xylen sebanyak tiga kali masing-masing selama 1 jam lalu direndam

dalam parafin sebanyak tiga kali masing-masing selama 2 jam. Preparat

kemudian dibloking pada parafin beku lalu diletakkan di atas embedding center

untuk penyempurnaan pembekuan. Jaringan dipotong dengan rotary microtome

setebal 4 m dan diapungkan di permukaan waterbath selanjutnya diapungkan

pada gelas obyek.

Preparat direndam dalam xylen selama 5 menit, etanol 100% sebanyak

dua kali masing-masing selama 1 menit, akuabides selama 1 menit, Harris

hematoksilin selama 20 menit, akuabides selama 1 menit, acid alkohol dengan 2-

3 celupan, akuabides selama 1 menit, eosin selama 2 menit, etanol 95%

sebanyak dua kali masing-masing selama 3 menit, xylen sebanyak tiga kali

masing-masing selama 5 menit, penutupan preparat dengan 1 tetes entellan dan

ditutup dengan penutup gelas obyek. Parameter yang diamati adalah kerusakan

hati dan ginjal pada preparat berupa inflamasi, degenerasi, dan nekrosis.

d. Analisis data

Data yang dihasilkan berupa jumlah sel darah putih dan sel darah merah.

Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan one way ANOVA.

Rencana Penelitian Tahun ke-3

Judul : Penetapan standardisasi mutu ekstrak daun sirsak dan formulasi sediaan obat

herbal terstandart untuk terapi kanker payudara.

A. Standardisasi mutu ekstrak daun sirsak berdasar kandungan asetogenin Penetapan kadar asetogenin secara spektrofotometri UV-Vis berdasarkan

metode yang dilakukan oleh Chang et al. (2002) dengan mengukur serapannya pada

panjang gelombang maksimum dengan menggunakan kuersetin sebagai standar

(Kumar et al., 2008).

a. Penetapan panjang gelombang

Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan setelah pereaksi

AlCl3 dan kalium asetat ditambahkan pada larutan kuersetin dalam metanol

dengan konsentrasi 10 g/mL. Setelah dilakukan pengukuran dengan

spektrofotometri UV-Vis, akan didapat panjang gelombang maksimum untuk

gugus sinamoil dan gugus benzoil. Pengukuran dilakukan pada gugus yang

memiliki panjang gelombang terbesar.

b. Penetapan operating time

Operating time ditentukan dengan mengukur serapan larutan kuersetin

dengan konsentrasi 10 g/mL pada panjang gelombang maksimum setiap lima

menit, pada menit ke 0, 5 ,10, 15, 20, 25, 30, 35,40 dan 45 hingga didapat nilai

serapan yang stabil.

c. Penetapan kadar asetogenin

Ditimbang 10 mg ekstrak daun sirsak dan dilarutkan dalam metanol hingga

10 mL kemudian diencerkan sedemikian rupa hingga diperoleh konsentrasi 400

g/mL. Diambil 0,5 mL larutan ekstrak daun sirsak kemudian ditambah 1,5 mL

metanol; 0,1 mL AlCl3 10 % b/v; 0,1 mL kalium asetat 1 M dan 2,8 mL akuades.

Setelah didiamkan 30 menit pada suhu ruang, diukur serapannya pada panjang

gelombang maksimum.

B. Formulasi sediaan obat herbal terstandart Formulasi obat herbal dilakukan untuk sediaan dalam bentuk kapsul. Ekstrak

daun sirsak yang telah diperoleh dilakukan pencampuran dengan bahan tambahan yang

berbeda. Dibuat tiga kelompok uji formulasi sebagai berikut :

Kelompok I : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

avicel 5%

Kelompok II : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

avicel 10%

Kelompok III : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

avicel 15%

Kelompok IV : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum 5%

Kelompok V : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum 10%

Kelompok VI : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum 15%

Kelompok VII : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum dan talk 5% (1 : 1)

Kelompok VIII : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum dan talk 10% (1 : 1)

Kelompok IV : formulasi ekstrak daun sirsak dengan penambahan

amylum dan talk 15% (1 : 1)

Pengujian sediaan kapsul dilakukan dengan pemeriksaan fisik yaitu :

1. PH

2. Daya larut

3. Waktu alir

c. Analisis Data

Pengamatan pada uji standardisasi dengan parameter non spesifik maupun

parameter dilakukan secara deskriptif. Uji analisis formulasi sediaan kapsul ekstrak

daun sirsak dilakukan dengan uji ANOVA.

1.5 Bagan Alir Penelitian Penelitian ini dilakukan selama tiga tahun. Penelitian tahun ke-1 sedang

dilakukan untuk mendapatkan dosis terapi yang efektif digunakan untuk pengobatan

kanker payudara. Berikut ini adalah bagan alir penelitian pada tahun ke-2 dan ke-3.

Pengelompokan hewan uji dan persiapannya dengan memberi perlakuan yang sama

Uji toksisitas akut pada mencit selama 14 hari

Dosis yang menimbulkantoksik akut pada mencit

Tahun ke-2

Kelompok kontrol positif

Kelompok Ekstrak aktif dosis 1

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 2

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 3

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 4

Hewan Uji

Ekstrak daun sirsak

a. Uji toksisitas akut pada hewan uji selama 14 hari

Tahun ke-1

Pengelompokan hewan uji dan persiapannya dengan memberi perlakuan yang sama

Uji toksisitas sub kronik pada tikus selama 30 hari

Dosis yang menimbulkan toksik sub kronis pada tikus

Kelompok kontrol positif

Kelompok Ekstrak aktif dosis 1

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 2

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 3

Kelompok Ekstrak aktif

dosis 4

Hewan Uji

Ekstrak daun sirsak

Tahun ke-2 b.Uji toksisitas sub kronik menggunakan hewan uji tikus selama 30 hari

Tahun ke-3

Uji non parameter spesifik : a. Uji kadar air b. Uji kadar abu

Ekstrak daun sirsak

Tahun ke-3

Uji parameter spesifik : a. Uji kadar senyawa

asetogenin

c.Uji penetapan mutu ekstrak 1.Uji berdasarkan kadar asetogenin

Tahun ke-2

2. Uji formulasi ekstrak daun sirsak

Ekstrak daun sirsak + avicel

Ekstrak daun sirsak

Optimasi formula kapsul daun sirsak

Ekstrak daun sirsak + amylum

Ekstrak daun sirsak + avicel + talk

Uji stabilitas formula ekstrak daun sirsak pada kapsul

Dari bagan alir penelitian diatas, akan diperoleh luaran dan indikator capaian

pada tahun ke-2 dan tahun ke-3. Hal ini dijelaskan pada tabel berikut :

Tahun Tujuan Luaran Indikator

II 1.Mengetahui toksisitas akut ekstrak daun sirsak pada hewan uji

1.Diketahui dosis toksik secara akut ekstrak daun sirsak

1.Diperoleh dosis ekstrak daun sirsak yang aman bagi tubuh

2.Mengetahui toksisitas sub kronik ekstrak daun sirsak pada hewan uji

2.Diketahui dosis toksik secara sub kronik ekstrak daun sirsak

2.Diperoleh dosis ekstrak daun sirsak yang aman bagi tubuh

III 1.Membuat standardisasi mutu ekstrak daun sirsak

1.Mendapatkan mutu ekstrak terstandart

1.Diperoleh mutu ekstrak daun sirsak terstandart

2.Membuat formula obat herbal terstandart dari ekstrak daun sirsak untuk terapi antikanker

2. Diperoleh formula obat herbal terstandar untuk terapi kanker payudara

2. Diperoleh formula obat herbal terstandart untuk terapi kanker payudara

Lampiran 1. Foto-foto pelaksanaan penelitian

a. Kandang perlakuan tikus antikanker (khusus untuk penelitian antikanker)

b. Perlakuan penelitian yang dilakukan selama 2 bulan

c. Perlakuan oral pada hewan uji tikus.