9 7 8 6 0 6 5 2 0 1 7 4 3

I S B N 6 0 6 - 5 2 0 - 1 7 4 - X

Anca Mihaela Mocanu Camelia Şoldea

Corina Cernătescu

Universitatea Tehnică Gh. Asachi Iaşi

BIOCHIMIE

- lucrări practice -

Editura PIM

2008

ISBN: 978-606-520-174-3

CUPRINS

I. NORME GENERALE DE LUCRU IN LABORATOR MĂSURI DE PROTECTIA MUNCII....................................................... I.1. Reguli generale.................................................................................... I.2. Manipularea substanţelor toxice, caustice, inflamabile şi explozive......................................................................

I.2.1. Manipularea substanţelor toxice şi caustice............................... I.2.2. Manipularea substanţelor inflamabile şi explozive................... I.3. Manipularea aparatelor de laborator cu acţiune electrică...................

1 1 3 3 4 4

II. PREPARAREA SOLUŢIILOR .............................................................. II.1. Condiţii de preparare şi de păstrare.................................................... II.2. Soluţii tampon...................................................................................

5 5 6

III. METODE CROMATOGRAFICE APLICATE LA PURIFICAREA ŞI IDENTIFICAREA BIOMOLECULELOR............... III.1. Aspecte generale.............................................................................. III.2. Cromatografia pe hârtie şi cromatografia în strat subţire................ III.2.1. Cromatografia pe hârtie....................................................... III.2.2. Cromatografia în strat subţire............................................. III.3. Gaz cromatografia ( GC) ................................................................ III.4. Cromatografia pe coloană................................................................ III.5. Cromatografia pe schimbători de ioni.......................................... III. 6. Cromatografia de excluziune cu gel................................................

8 8 10 10 11 12 14 14 16

IV. AMINOACIZI.......................................................................................... IV.1. Reacţii de recunoaştere.................................................................... IV.2. Titrarea aminoacizilor (Metoda Sörensen)...................................... IV.3. Separarea aminoacizilor prin cromatografie în strat subţire............ IV.4. Separarea aminoacizilor dintr-un amestec prin cromatografie pe hârtie............................................................

18 18 21 24 27

IV.5. Separarea aminoacizilor legaţi din culturile de Mycobacterium tuberculosis şi Mycobacterium paratuberculosis

prin cromatografie descendentă şi circulară.................................... IV.6. Separarea aminoacizilor liberi şi legaţi din plante de cultură.......... IV.7. Obţinerea aminoacizilor prin hidroliza proteinelor..........................

28 30 31

V. PROTEINE................................................................................................ V.1. Reacţii de recunoaştere..................................................................... V.2. Caseina – izolare şi identificare........................................................ V.3. Determinarea proteinelor din plante..................................................

32 32 35 38

VI. ZAHARIDE............................................................................................. VI.1. Monozaharide.................................................................................. VI.1.1. Reacţii de recunoaştere........................................................ VI.1.1.1. Reacţii de culoare.................................................... VI.1.1.2.Acţiunea reducătoare a monozaharidelor................. VI.1.1.3.Reacţia cu fenilhidrazina.......................................... VI.1.2. Oxidarea aldozelor la acizi zaharici..................................... VI.1.3. Esterificarea monozaharidelor............................................. VI. 1.4. Reacţia Salivanov de diferenţiere a cetozelor de aldoze........................................................... VI. 1.5. Dozarea glucidelor reducătoare.......................................... VI.2. Oligo–şi polizaharide............................................................................. VI.2.1. Hidroliza zaharozei............................................................. VI.2.2. Dozarea zaharozei................................................................ VI.2.3. Dozarea zahărului după metoda Bertrand............................ VI.2.4. Determinarea amidonului din plante.................................... VI.2.5. Hidroliza amidonului........................................................... VI.2.6. Zaharificarea amidonului..................................................... VI.2.7. Determinarea celulozei din plante.......................................

42 42 42 42 46 47 48 49 50 51 56 56 57 58 60 60 62 63

VII. LIPIDE, GLICERIDE, ACIZI GRAŞI, SĂPUNURI............................. VII.1. Reacţii caracteristice pentru gliceride........................................... VII.1.1. Punerea în evidentă a glicerinei din grăsimi prin formarea acroleinei........................................................... VII.1.2. Punerea în evidentă a acizilor graşi din grăsimi prin formarea săpunurilor.................................................. VII.2. Obţinerea acizilor graşi din săpunuri........................................... VII.3. Proprietăţile săpunurilor.............................................................. VII.4. Reacţii ale grăsimilor nesaturate.................................................. VII.4.1. Determinarea indicelui de saponificare........................... VII.4.2.Determinarea indicelui de iod...........................................

66 66 66 66 67 68 69 70 70

VII.5. Determinarea indicelui de refracţie al grăsimilor........................ VII.6. Determinarea grăsimii brute din materialul biologic.................. VII.7. Extracţia şi identificarea acizilor graşi din uleiul de porumb................................................................... VII.8. Analiza lipidelor..........................................................................

73 75 76 79

VIII. ACIZI NUCLEICI, NUCLEOTIDE, BAZE AZOTATE...................... VIII.1. Analiza cromatografică a bazelor azotate.............................. VIII.1.1. Separarea bazelor purinice şi pirimidinice din acizii nucleici izolaţi din plantulele de grâu şi porumb....... VIII.2. Hidroliza nucleoproteidelor....................................................... VIII.3. Separarea cafeinei din frunzele de ceai.....................................

83

86 86 89 90

IX. VITAMINE............................................................................................... IX.1. Dozarea vitaminei C din fructe şi legume...................................... IX.2. Dozarea α- şi β-carotinei ( provitamina A) din fructe şi legume....................................................................... IX.3. Analiza vitaminei A din margarină…………………………….... BIBLIOGRAFIE.............................................................................................

93 93

95 96 101