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7/26/2019 BIOCEL FINAL.pdf

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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREALFACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA

GUIAS DE EXPERIMENTACIN DEBIOLOGA CELULAR

2016


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GUIA DE PRCTICA BIO LOGA CELULAR

CONTENIDOPgina

1. EL MICROSCOP IO ........................................................................................................................ 82. CO LORANTES EN B IO LO GIA ............ ............... ............ ............ ............ ............ ............ ............ 1 73. ES TUDIO DE LAS BACTERIAS .................................................................................................. 214. ES TUDIO DE LOS HO NGOS ....................................................................................................... 235. DIVERS IDAD CELULAR ............................................................................................................. 266. OBS ERVACI N DE O RGANELOS CEL ULARES, P LAS TOS Y ES TO MAS ........................297. CENTRIFUGACI N DIFER ENCIAL DE O RGANELOS CELULARES ...............................348. S MOS IS Y DIFUS I N .................................................................................................................37EXAMEN PRACT ICO 19. PLAS MO LIS IS Y TURGENCIA ................................................................................................... .3910. P ERMEAB ILIDAD CELULAR .................................................................................................. .4111. AISLAMIENTO DEL ADN ......................................................................................................... .4412. MITOS IS .................................................................................................................................... . 4813. TINCI N DE NUCLE LOS .................................................................................................... ... .5114. MEIOS IS ............................................................................................................................. ........ 5215. CRO MATINA S EXUAL O CORPSCULO DE B ARR ........................................................ ....5516. CARIO TIPO - SNDRO MES CRO MOS MICOS ....................................................................58EXAMEN PRACT ICO 2PREPARACI N DE REACTIVOS Y CO LORANTES .................................................................. 65GLOSARIO .............................................................................................................................. .............69


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1. PROFES ORES DE PRCTICA:

BLGO. MARGARITA ROBLES ROMAN BLGO. CES AR A. ZAA BLGO. GLORIA SAEZ BLGO. VANIA MALLQUI

2. GRUPOS DE PRCTICA MARTES : 08.00-11.20 AM MARTES : 11.20-14.40 PM JUEVES : 08.00-11.20 AM JUEVES : 11.20-14.40 PM JUEVES : 14.40-18.00 PM

3. SISTEMA DE EVALUACIN PRCTICA (40% DEL CURSO)

PROMEDIO:(EX. PRCTICO 1) + (EX. PRCTICO 2 ) + (GUIA y PASITOS)

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4. INSTRUCCION ES GENERALES DEL CURSOa. La asistencia a las sesiones de laboratorio es obligatoria, el alumno con 30 % deinasistencia no tiene opcin a la evaluacin prctica.b. La fecha de examen prctico es nica para todos los grupos.c. Cada grupo de prctica es responsable de traer el material biolgico necesario para larealizacin de la misma. Coordinar con los profesores de prctica.d. No se permite el uso del telfono celular en el laboratorio.


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PRES ENTACIN

La presente Gua de experimentacin de Biologa Celular , tiene como objetivo facilitaral estudiante la realizacin de las prcticas de laboratorio, que les permita afianzar elaprendizaje terico que reciben.La gua contiene una serie de temas prcticos, con una contribucin valiosa deinformacin. En cada prctica se indican: el objetivo perseguido, una informacin terica,que s in pretender ser muy amplia es bsica para el estudiante, la relacin de materiales

requeridos, el procedimiento a seguir, un cuestionario y algunos esquemas. En la mayorade las prcticas, el estudiante habr resuelto las preguntas planteadas, durante al mismoprocedimiento; por lo que constituye un instrumento dinmico y adems mantiene alestudiante en constante observacin de lo que experimenta. Se ha considerado necesario,incluir la preparacin de algunos reactivos y colorantes de mayor uso en biologa, as comoun glosario de trminos utilizados en Biologa Celular. Se aceptar y agradecer cualquiersugerencia que tienda a mejorar y/o incrementar los contenidos de la presente gua de

prcticas.

LOS AUTOR ES


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RECOMENDACIONES GENER ALES

El laboratorio es el lugar de trabajo para la experimentacin y por lo tanto, se requierencondiciones fundamentales como: disciplina, orden y limpieza; ya que con frecuencia se

trabaja con microorganismos o productos que los contienen y que son capaces de producirenfermedades. En otras ocasiones, se utilizan reactivos corrosivos que pueden causar daoa la piel o a la ropa, por tales motivos la disciplina, el orden y la limpieza ofrecen mayores

posibilidades de xito en la experimentacin.

Por lo que es necesario cumplir con ciertos requisitos particulares:

1. Leer cuidadosamente el procedimiento a seguir y analizar cada uno de los pasos, antesde iniciar la prctica.2. Usar mandil de laboratorio durante el desarrollo de la prctica.3. Poseer la gua de prcticas.

4. Llevar una franela por equipo para secar inmediatamente cualquier salpicadura desustancias que se derramen.5. Cerciorarse de tener el material completo para la experimentac in, en caso de material

biolgico perecedero, llevarlo el da que se va a llevar a cabo la prctica, previa indicacindel profesor.6. Antes de usar los materiales y aparatos, deben limpiarse y secarse con cuidado. Alfinalizar la prctica, deben entregarse limpios, secos y ordenados.7. Llevar en forma individual un cuaderno pequeo de hojas blancas para las anotacionesdurante el desarrollo de la prctica, una caja de colores para iluminar las observaciones, yaque lo observado es a color y no en blanco y negro.8. Abstenerse de ingerir alimentos, bebidas y fumar dentro del laboratorio; chuparse los

dedos o morderse las uas.9. No jugar con el instrumental y aparatos usados en el laboratorio, por que ciertosinstrumentos no estn esterilizados y los apa ratos (como el microscopio) son instrumentosdelicados y de precisin.10. No conversar en voz alta, porque cualquier distraccin ocasionar accidentes.11. Si no sabes utilizar algn aparato o instrumento, consulta con el profesor.


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NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Introduccin

La bioseguridad se define como un conjunto de normas diseadas para laproteccin del individuo, de la comunidad as como del medio ambiente contra elcontacto accidental con patgenos biolgicos, agentes fsicos o qumicos. El personal delaboratorio debe cumplir con las normas de bioseguridad y los directivos de lainstitucin deben cumplir con brindar las facilidades para que stas sean aplicadas.

Objetivo

Conocer las principales normas para proteger la salud de las personas que puedanestar expuestas a riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos,qumicos, fsicos y otros en los laboratorios de ensayos biomdicos y clnicos.

Agentes de riesgo

- Agentes biolgicos; transmitidos por ingestin, inhalacin, inoculacin y porcontacto directo a travs de piel o mucosas.

- Agentes fsicos y mecnicos; como las temperaturas extremas,radiaciones ionizantes, contactos elctricos o conexiones defectuosas y vidriosresquebrajados de recipientes daados.

- Agentes qumicos; que pueden ser corrosivos, txicos, carcingenos,inflamables o explosivos.

Niveles de contencin

Cuando las prcticas de laboratorio no son suficientes para controlar los riesgosasociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, es necesarioaplicar medidas adicionales. Estas medidas corresponden a los equipos de seguridaddiseados para la proteccin del personal y prcticas de manejo adecuado (barrera

primaria), diseo de la instalacin y caractersticas de la infraestructura de los locales(barrera secundaria).

1. Contencin primaria:

- Equipos de proteccin personal.- Tcnicas de laboratorio estndar y normas de higiene personal.- Inmunizacin.- Esterilizacin y desinfeccin de instrumentos y superficies.

2. Contencin secundaria

Se refiere al diseo y construccin de un laboratorio, contribuye a la proteccin delpersonal de laboratorio. Los modos de transmisin en el laboratorio pueden


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ser insidiosos y algunas veces complicados, debido a que los vehculos y rutas de transmisindifieren de los modos clsicos.

Tipos de laboratorio con relacin al nivel de bioseguridad (NBS)

NBS 1: Microorganismos con muy pocas probabilidades de causar enfermedad humana o animal,agentes biolgicos del grupo 1, ejemplo: virus de vegetales, Saccharomyces cerevisiae.

NBS 2: Riesgo individual moderado y riesgo limitado para la comunidad, agentes de riesgotipo 2, ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp.

NBS 3: Riesgo individual alto y moderado para la comunidad, agentes de riesgo tipo 3,ejemplo:M. tuberculosis, Brucella sp, Influenza AN1H1.

NBS 4: Alto riesgo individual como comunitario, agentes peligrosos y exticos. El laboratoriotiene caractersticas especiales de ingeniera y diseo para evitar la diseminacin de losmicroorganismos en el medio ambiente. Agentes biolgicos del grupo 4. Ejemplo:Arenavirus

como el que produce la fiebre deLassa,Machupo, Ebola, Hantavirus y el VIH.Conceptos bsicos en Bioseguridad:

LIMPIEZA.- Es la eliminacin fsica de sangre, fluidos corporales o cualquier materialextrao visible de la piel u objetos inanimados.

DESINFECCIN.- Es la destruccin de la infectividad potencial de un material determinado.Es til con la aplicacin de desinfectantes sobre superficies, ejemplo: Hipoclorito de sodio 10%,glutaraldehido 2%, cido paractico o fenol10%. Para la desinfeccin de manos y piel, se utilizan productos menos txicosque los anteriores, ejemplo: alcohol yodado 2%, clorheximida 1% o etanol al

70%. Puede hacerse tambin por ebullicin.

ESTERILIZACIN.- Se define como la ausencia total de microorganismos viables,incluyendo las esporas fngicas o bacterianas. Se puede lograr por mtodos fsicos como latemperatura: por calor seco (horno) calor hmedo (autoclave) y; en fro por filtracin ycentrifugacin. Las radiaciones mtodos fsicos tiles para la esterilizacin de plsticos, sondas yalimentos. La esterilizacin por mtodos qumicos se puede hacer con xido de etileno o

perxido de hidrgeno


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PRCTICA 1. EL MICROSCOPIO

OBJETIVOIdentificar las partes del microscopio y usarlas adecuadamente.

MICROSCOPIO DE LUZ (OPTICO): Permite la amplificacin por medio de un sistemade lentes.Un microscopio simple: consta de una sola lente biconvexa que proporciona una imagenreal, derecha y aumentada de la muestra observada.Un microscopio compuesto: Q ue consta de dos o ms lentes, proporcionan una imagenvirtual, invertida y aumentada de la muestra en estudio.Por lo general el microscopio ptico da aumentos de unos 100 dimetros, el cual puedeincrementarse dos o tres veces con el uso de oculares ms poderosos u otrasmodificaciones.El lmite til de aumento obtenible es de 1000 a 2000 dimetros que determina el poder deresolucin, amplificaciones mayores producen imgenes borrosas.

PODER DE RESOLUCION: Es la capacidad de distinguir dos puntos situados muy cercael uno del otro, como distintos y separados. Depende de: la longitud de onda, de la luz quese usa y de la apertura numrica del objetivo.

LIMITE DE RESOLUC ION: Es la inversa del poder de resolucin, es decir, cuanto mayorsea el poder de resolucin, el lmite de resolucin ser menor. Es la distancia mnima a laque deben situarse dos puntos para su perfecta individualizacin. Con la luz blanca, el

poder de resolucin es de 0.8 um; la nica manera de incrementar el poder resolutivo esutilizando longitudes de onda menores, la apertura numrica tiene un lmite.

Sistema de soporte:P ie o base: la funcin de esta pieza es dar estabilidad al microscopio y soporte a

las dems partes que lo integran.

P latina: es una pieza metlica cuadrada con un orificio en el centro por el cual pasa laluz, posee a su vez un carro mvil con una pinza que sujeta la muestra permitiendo sumovilizacin para la observacin.

Brazo: es el soporte que va desde la base hasta el sistema ptico, es el sostn de dicho

sistema.

Sistema ptico:Oculares: son lentes que se encuentran en el cabezal del microscopio, separados por un

diafragma que permite el movimiento de estos para obtener una imagen con mejor calidady comodidad de visin.

Objetivos (seco dbil 10X, seco fuerte 40X e inmersin 100X): es la parte ms

importante del microscopio, se conforman por varias lentes que corrigen las aberraciones,se encuentran en la parte baja del cabezal sujetos a un carrusel o revolver que permite el cambio de un objetivo a otro.


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Sistema de iluminacin:

Fuente luminosa: es la luz proporcionada por una lmpara ub icada en la base delmicroscopio, la cual pasa a travs de la platina proporcionando iluminacin a lamuestra.

Condensador: es un sistema de lentes con gran abertura, que se encuentra entre laplatina y la fuente de iluminacin; puede subir o bajar dependiendo del objetivo que se estutilizando.

Diafragma: se encuentra situado debajo de la platina y permite regular la cantidad deluz que pasa por el condensador.

Sistema de ajuste:

Tornillo macromtrico o de enfoque rpido: se utiliza para conseguir un ajuste

aproximado de la imagen a observar.

Tornillo micromtrico o de enfoque fino: su desplazamiento es mucho ms lento y

permite enfocar claramente nuestra imagen.Tornillo de carro mvil: se utiliza para desplazar la laminilla sobre la platina hacia los

lados, hacia atrs y hacia delante

A) Objetivos de menor aumento (5X Y 10X): descender el condensador a fondo, bajar elobjetivo sobre la preparacin (sin tocarla), subir el objetivo con el tornillo macromtricohasta ver la imagen a travs de los oculares. S uba un poco el condensador en caso de que lailuminacin sea insuficiente.

B) Objetivo de gran aumento (40X): Colocar el condensador a la mitad de la distancia,

bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla). S ubir el objetivo con el tornillomacromtrico muy lentamente hasta ver la imagen en el campo y perfeccionar el enfoquecon el tornillo micromtrico. Mover el condensador hasta obtener iluminacin suficiente.

C) Objetivo de inmersin (100X): Colocar la preparac in, poner una pequea gota deaceite de inmersin sobre la parte a examinar, subir el condensador a tope. Observa por losoculares y enfoca con el tornillo micromtrico.

ABERTURA NUMRICA.La abertura numrica (A.N.) de un objetivo es una cifra exacta calculada matemticamente

a partir de su dimetro y su longitud focal equivalente, pero a pesar de ser unacaracterstica importante, slo es necesario saber que la abertura numrica se encuentramarcada sobre la lente, que expresa el tamao del cono de la luz y que de ella depende lacantidad que atraviesa la lente y en particular su poder de resolucin y su mximaamplificacin til.

CUIDADOS PARA UN MICROSCOPIO


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El microscopio deber guardarse en un lugar seco y cubierto del polvo, ya que ste

adems de dificultar la observacin, daa las lentes cuando se frotan sin que stas se hayanlimpiado.

Al trasladarlo de un lugar a otro debe tomarse del brazo con una mano y con la otra

sostenerlo de la base.

Coloque el microscopio aproximadamente a 10 cm. del borde de la mesa.

Debers de cerciorarte que las lentes se encuentran limpias de polvo antes de utilizarlo,

de no ser as, deben limpiarse cuidadosamente utilizando para ello un papel especial paralentes, el cual se obtiene en las pticas o en las tiendas de artculos fotogrficos.

Las lentes no debern quitarse del sitio que les corresponde para que no se llene depolvo el interior del equipo, adems es necesario desmontar partes internas para limpiarlo.

Cuando emplees aceite de inmersin debers limpiar las lentes una vez terminada la

observacin, ya que si llegara a secarse sera difcil de limpiarse, esto puedes hacerlo conel mismo papel para las lentes.

Nunca debers desarmar un microscopio, ya que si lo llegaras a hacer sin tenerconocimientos de ello, podrs desajustarlo o daarlo de sus partes. Es por ello que existe

B

personal espe

I

cializado

O

.

CEL

Las lentes podrn limpiarse con agua destilada, partes metlicas o plsticas delmicroscopio debern limpiarse con un trapo de algodn y se les da brillo con aceitemineral.

Todas las preparaciones que se hagan y se tengan que teir, limpiarlas del reverso para

Todas las preparaciones que se hagan y se tengan que teir, limpiarlas del reverso paraque no pierdan nitidez.

Al terminar la observacin, debers limpiar perfectamente las lentes.

En caso de tener alguna duda en el cuidado del equipo o alguna falla mecnica o

elctrica, debers de dar aviso al encargado del laboratorio.

FACTORES QUE DAAN AL MICROSCOPIO.

1. Lavar las lentes con alcohol.2. Mojar los objetivos con xilol o alcohol, o bien con alguna otra sustancia.

3. Usar papel ordinario para limpiar las lentes.4. Poner los dedos sobre las lentes.5. Limpiar el soporte o la platina con xilol.6. Limpiar el interior de las lentes con tela o papel, en caso de que sea completamentenecesario, utiliza un pincel de cerdas muy pequeas y/o utiliza papel seda.7. Dejar el microscopio s in oculares.8. Guardar el microscopio con aceite de inmersin en el objetivo.9. Transportar el microscopio con una sola mano.


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OTROS TIPOS DE MICROS COPIOS:

Microscopio de Contraste de Fases.

o Su sistema est compuesto por lente ocular, anillo de fases, lente del objetivo, lente del

condensador y diafragma anular. Tiene una amplificacin de 1,000 a 2,000 nm. Permiteobservar estructuras que no requiere de una tincin.

Microscopio de F luorescencia.

o Se compone de un primer filtro de corte o filtro de excitacin, espejo dicroico, segundofiltro de corte o filtro de emisin, fuente de iluminacin y condensador. Se observanmuestras teidas, inmunofluorescencia directa o indirecta.

Microscopio de Interferencia.

o Es un instrumento que permite la medida de la masa de regiones pequeas y

transparentes de clulas vivas, obtenindose datos de tipo cualitativo y cuantitativo. S uscomponentes son un analizador rotable, un cuarto de longitud de onda, objetivo deinterferencia, condensador, polarizador y filtro de interferencia.

Microscopio Confocal

o La microscopia confocal es una tcnica que elimina la luz fuera de foco en losespecmenes y permite obtener imgenes 3D de especmenes gruesos. Emplea un sistemalser que aplica el haz de luz en forma de barrido, en una pequea parte del espcimen. Ellser aplicado a una longitud de onda determinada en la muestra, hace que molculasexcitadas de la misma, emitan fluorescencia a una longitud de onda mayor a la aplicada

Microscopio Electrnico de Barrido.

o Est compuesto por un can de electrones (nodo, ctodo y electroimn), sistema debarrido y de lentes. Su resolucin depende de la cantidad de electrones emitidos, contandoas con un lmite de resolucin. Tiene una amplificacin de 100,000 a 200,000 veces y unaalta resolucin en 3D.

Microscopio Electrnico de Transmisin.

Microscopio Electrnico de Transmisin

o Est compuesto por can electrnico, lente condensadora, cmara de muestra, lente

objetiva, lente intermedia, proyector, pantalla fluorescente y cmara (placa fotogrfica).Utiliza electrones con una longitud de onda de 0.5 . Proporciona un aumento de lasclulas de 100,000 veces aproximadamente.

FUNCION DEL ACEITE DE INMERSION: Se coloca sobre la laminilla cubre objeto.Se usa con el objetivo de inmersin y ste debe tener el mismo ndice de refraccin. Alcolocarse el aceite sobre la laminilla se evita que los rayos de luz cuando pasan de ste alaceite se dispersen antes de llegar al objetivo permitiendo que penetre de esta manera ungran cono de luz.

Describe las partes del microscopio. Anota las observaciones realizadas durante eldesarrollo de la prctica.


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MICROSCOPIO

MATERIAL QUE SE REQUERE:

Microscopio compuesto Lminas porta objeto

Lminas cubre objetos. Goteros

Letras de en papel

PROCEDIMIENTO :1. Colocar una gota de agua en la parte central de un porta objeto2. Con la ayuda de una pinza colocar en la gota, un recorte de papel con la letra: A, V, E,etc. en posicin derecha.3. Cubrir el preparado, con un cubre objeto. Apoya un lado del cubre objeto sobre unextremo de la gota y deja caer con una inclinacin aproximada de 45. Para evitar laformacin de burbujas de aire.4. Coloque la lmina sobre la platina, centre la muestra, sujete con las pinzas.5. Observe a menor aumento.6. Esquema de las observaciones.


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PREP ARACION DE REACTIVOS (VER AN EXO)

Cuestionario.1. Establezca diferencias entre microscopio ptico y microscopio electrnico.

2. Cul es el lmite de resolucin del ojo humano?3. Cul es el lmite de resolucin del microscopio compuesto y del microscopioelectrnico?4. Representa esquemticamente la marcha de los rayos luminosos en el microscopioptico.5. Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?6. Qu importancia tiene el uso del microscopio en la Biologa Celular?7. Por qu es necesario utilizar aceite de inmersin al utilizar el objetivo del mismonombre?8. Qu significa resolucin, poder de resolucin y amplificacin, as mismo de qufactores depende cada uno de ellos? Presenta tus respuestas a manera de tabla.

9. Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo: fuente deiluminacin, condensador, longitud de onda, tipo de tincin, resolucin, amplificacin, tipode lentes, etc.


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MEDICIN DE OBJETOS CON EL MICROSCOPIO

OBJETIVOS :- Calcular la magnificacin total de una imagen a travs del microscopio- Estimar el dimetro del campo visual para distintas magnificaciones

- Determinar el tamao aproximado de objetos bajo el microscopio

GENERALID ADESUn microscopio es usado para observar objetos demasiados pequeos para ser resueltos ovistos con la simple visin, pero tambin para medir sus tamaos

MAGNIFICACIN. La magnificacin de una imagen ocurre por la curvatura de la luz atravs de una serie de lentes, es la imagen la que se magnifica no el espcimen. Lamagnificacin total de la imagen se obtiene por el producto de la magnificacin de loslentes objetivo con la magnificacin del lentes ocular. Est dada por la siguiente relacin:

Magnificacin Total = Magnificacin del lentes objetivo x Magnificacin del lentesocular

CAMPO VIS UAL. El campo visual se refiere al rea total que es visible a travs delmicroscop io. El campo visua l es circular y tiende a reducirse cuando la magnificacin seincrementa. Es posible medir el dimetro del campo visual y a partir de sta medicinobtener estimados razonables para el tamao de algn espcimen contenido dentro delcampo visual. Al determinar el dimetro del campo visual a un determinado aumento enmilmetros (mm), ste debe ser convertido en micrmetros (um), as:

Si el dimetro del campo visual a 40x (bajo aumento) es 5 mm, su dimetro enmicrmetros ser5 mm x 1000 um = 5 000 um

1mm

Existe una relacin inversa entre la magnificacin total y el dimetro del campo visual. Eltamao del campo visual bajo el microscopio disminuye proporcionalmente cuando lamagnificacin se incrementa. Debido a ello el dimetro del campo visual de otramagnificacin puede ser calculado de acuerdo a :

Dimetro del campo visual de B = mag nificac i n de A x dimetro de Amagnificacin de B

Ejemplo 1: S i el dimetro del campo visual a 40X es 4 500um, cul ser el dimetro delcampo visual a 100X?Respuesta:De la relacin anterior: Dimetro del campo visual a 100X = 40X x 4 500um = 1800um

100XPor lo tanto, el dimetro del campo visual a 100X es 1800um


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MIDIENDO OBJETOS CON EL MICROS COPIO

Desde que el dimetro del campo visual en micrmetros es conocido, es posible estimar eltamao de un objeto por comparacin de su tamao con el dimetro del campo visual

utilizado. Entonces seguiremos los siguientes pasos:

PASO 1: enfocar el objeto a una cierta magnificacin y anotar el dimetro del campovisual en aquella magnificacinPASO 2: determinar (aproximado) el dimetro del campo visual ocupado por el objeto(imagen)PASO 3: usar la frmula, Tamao del objeto = Po rce nta je x dimetro del campo visual

100

Por lo tanto, el tamao de un espcimen puede ser estimado por comparacin de ste con eldimetro del campo visual de alguna magnificacin, en donde primero se estimar q u

porcentaje del objeto est ocupando el dimetro del campo visual del microscopio. Larespuesta obtenida ser un aproximado y se expresar en micrmetros.

Figura 1. Se observa la proporcin del tamao de unespcimen respecto al dimetro del campo visual .

Ejemplo 2: Dada una cierta magnificacin, se tiene que el dimetro del campo visual es 4000um y un espcimen (una pulga) ocupa aproximadamente el 40% del campo visual,cul es el tamao del espcimen?, cul es el tamao del ojo, s i ste es aproximadamenteel 5% del campo visual?Respuesta:Usando la frmula del PASO 3, tenemos:

Tamao del espcimen ( pulga) = 40 x 4 000um = 1 600um100


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MAGNIFIC ACIN DIMETRO DEL CAMPO VIS UAL

40X 4 500 um100X400X1 000X

Tamao del ojo = 5 x 4 000um = 200um100

CUESTIONARIO

1. Si el dimetro del campo visual de un microscopio de luz a 40x de magnificacin es 6000um, cul ser el campo visual a 400x de magnificacin?

2. Una clula e lodea fue encontrada ocupando el 40% del dimetro del campo visual a unamagnificacin de 400X. a sta magnificacin, el dimetro del campo visual delmicroscopio es 200um. Cul es el tamao de la clula elodea?

3. Considerando la relacin dimetro del campo visual magnificacin, completar lasiguiente tabla:


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PRCTICA 2. COLORANTES ENBIOLOGIA

OBJETIVO:Realizar coloraciones que permitan visualizar detalles estructurales al microscopio.

GENERALIDADES:El uso de colorantes en las observaciones microscpicas se hace indispensablemente; porque permiten diferenciar estructuras biolgicas, sin los cuales se hace muy difcil suobservacin, si se tiene en cuenta que las estructuras biolgicas no son coloreadas.

COLORANTE, es una sustancia que transmite su color a las estructuras con las cuales sepone en contacto, actan selectivamente y no se pierde al ser lavadas con agua.

CLASIFIC ACIN DE COLORANTES :

1. Naturales: De origen animal ejemplo el carmn. De origen vegetal ejemplo la orcena,azafrn, hematoxilina.

2. Artificiales:a. cidos: Tienen afinidad por las estructuras citoplasmticas. Son sales cuyo cido escoloreado y la base es incolora ejemplo eosina, Fucsina cida etc.

b. Bsicos: Tienen afinidad por estructuras nucleares. Son sales cuya base es coloreada y elcido incoloro, ejemplo el Azul de metileno, Hematoxilina.c. Neutros: Son sales con cido y base coloreados, tien estructuras citoplasmticas ynucleares, ejemplo Giemsa, Wright, Leishmans.

COLORACIN: Es el proceso por el cual una materia toma el color del colorante y puedeser:

1. Simple: Hace uso de un solo colorante y se colorean slo algunos elementos.2. Compuesta: Se hace uso de dos colorantes, cido y bsico, que contrasten en colorantes.Una coloracin de uso frecuente es Hematoxilina- Eosina.3. Neutra: Hace uso de colorantes neutros.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN :

Microscopios Goteros y pipetasLminas porta objetos (4) Alcohol ter

Lminas cubre objetos (4) Hematoxilina

Palitos de dientes Eosina

Lanceta hematolgica Azul de metileno

Alcohol Wright

Algodn Leishmans

Aceite de inmersin Agua destilad


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Safranina

PROCEDIMIENTO :

A. COLORACIN SIMP LE: EN MUCOSA LABIAL1. Con un palito de dientes raspe ligeramente la parte interna del labio.2. Divida el porta objeto en tres partes imaginariamente, extiende la mucosa obtenida en e ltercio medio de la lmina.3. Secar el preparado al medio ambiente, o con la ayuda de un mechero.4. Fijar la lmina con dos gotas de alcohol - ter, durante 2 minutos.5. Agregar dos gotas de colorante cido o bsico sobre el preparado y esperar de 2 a 3minutos.6. Lavar con agua de cao, a chorro fino, hasta que ya no arrastre colorante.7. Secar la lmina al medio ambiente o al mechero.8. Observar al microscopio a 10X, 40X, y 100X.( Use aceite de inmersin )

9. Esquemas de las observaciones.

B. COLORAC IN COMPUESTA: EN MUCOSA LABIAL1. Proceda como en el caso anterior, hasta el paso nmero 7.2. Agregar colorante de contraste ( 2 gotas durante 2 a 3 minutos )3. Lavar con agua de cao4. Secar la lmina al mechero o al medio ambiente.5. Observar al microscopio a 10X, 40X y 100X.6. Esquema de las observaciones.

C. COLORACIN NEUTRA: EN EXTENSIN SANGUNEA1. Desinfectar con alcohol, la yema del dedo mayor.

2. Mediante una lanceta extraiga una gota de sangre y colquela en el extremo de un portaobjeto limpio.3. Con la ayuda de otro porta objeto, colocado sobre la gota de sangre y con unainclinacin aproximada de 45. Proceda a extender la sangre hacia adelante, conmovimiento continuo.4. Secar la lmina al medio ambiente.5. Cubrir el extendido con 2 3 gotas del colorante Leishmans o Wright, durante 1 a 2minutos.6. Sobre la lmina con el colorante, agregar agua destilada, hasta cubrir la lmina y esperar7 minutos.7. Lavar con agua de cao.

8. Secar al medio ambiente o al mechero.9. Observar al microscopio a 40X y 100X.10. Esquema de las observaciones.

D. COLORACIN DE MUES TRAS VEGETALES1. Con la ayuda de una navaja realizar el corte transversal de un tallo de geranio, casuarinau otra planta dicotilednea (se debern realizar varios cortes los que se depositan en una

placa petri con agua destilada, se realizan los cortes hasta obtener uno que sea sumamentedelgado).


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2. Colocar una gota de agua sobre el portaobjeto3. Colocar la muestra ms delgada de la placa petri4. Aadir una gota de safranina5. Observar a 100X y a 400X

6. Esquema de las observaciones

ESQUEMASGranulocitos neutrfilos.

Observaremos ahora un neutrfilo y un eosinfilo en la misma imagen (figura 9)

Ahora pasamos a ver los leucocitos sin grnulos. Comenzaremos con los linfocitos (figuras

11-13).


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Finalizaremos los agranulocitos con las imgenes de monocitos (figuras 14-16):

Un granulocito basfilo

Tejidos vegetales coloreados (Haces conductores)


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PRCTICA 3. ESTUDIO DE LAS BACTERIAS

OBJETIVO :Identificar bacterias mediante la coloracin de GRAM.

GEN ERALIDADES :BAC TERIAS, Son seres procariticos, unicelulares, carecen de envoltura nuclear, enalgunas circunstancias forman esporas para protegerse del medio. Presentan formasesfricas, alargadas o espiraladas. P ueden presentarse aisladas o agrupadas y tiene comomedio de locomocin, flagelos en nmero variable.Hay bacterias que son patgenas para el hombre, animales y plantas; otras son saprfitas,se las encuentra en materias en descomposicin y otras son inocuas y benficas, tales comolas bacterias nitrificantes. Se las encuentra en diversos medios como, el agua, el aire, latierra y otros.

COLORACION DE GRAM: Es de amplia utilidad para clasificar a las bacterias en Grampositivo y Gram negativo. Las primeras toman el violeta de genciana, y se tien de colorviolceo, y las segundas pierden el violeta de genciana al ser lavadas con alcohol oacetona, y es necesario agregarles un colorante de contraste para ser observadas con elcual se tien de rojo (Colorante de contraste como fucsina o safranina).

Las clulas procariticas, se caracterizan por su estructura muy sencilla, no presentanenvoltura nuclear y ningn tipo de endomembranas, pertenecen a este grupo las bacterias ylas algas azul - verdosas. Algunas bacterias son dainas al organismo, otras son benficas yson usadas en la industria, tal es el caso de aquellas que acidifican la leche y permiten la

produccin del yogurt.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN :

Microscopios Mechero de alcohol o de Bunsen

Aceite de inmersin Palitos de d ientes

Violeta de genciana Muestra en estudio (sarro dentario)

Fucsina fenicada o safranina Lminas porta objetos (4)

Lugol Lminas cubre objetos (4)

Agua destilada Alcohol

Yogurt

Alcohol Cloroformo (1:1)

Azul de metileno

PROCEDIMIENTO :COLORACION DE GRAM:1, Hacer una extensin de la muestra en estudio (sarro dentario), sobre una lmina portaobjeto.2. Fijar el preparado a la llama de un mechero.

3. Cubrir con la solucin de violeta de genciana, por un minuto.4. Lavar con agua corriente.


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GUIA DE PRCTICA BIO LOGA CELULAR5. Cubrir la preparacin con Lugol, durante 30 segundos a un minuto.6. Lavar con alcohol, hasta que ste no arrastre colorante.7. Lavar con agua corriente.8. Agregar F ucsina fenicada por 30 segundos a un minuto.9. Secar al ambiente o con ayuda del mechero.10. Colocar una gota de aceite de inmersin y observar al microscopio, con la lente deinmersin.11. Esquemas de las observaciones.

BAC TERIAS DEL YOGURT:PROCEDIMIENTO :1. Hacer una extensin de yogurt, lo ms fino posible, sobre un porta objeto.2. Secar al mechero (procurar no quemar).3. Agregar 1 2 gotas de a lcohol - cloroformo y esperar que evapore.4. Agregar 1 2 gotas de azul de metileno, esperar de 3 a 5 minutos.5. Lavar con agua de cao6. Secar la lmina, al mechero o al medio ambiente.7. Agregar una gota de aceite de inmersin.8. Observar a 100X.9. Hacer esquemas de las observaciones.10. Identificar:Bacilos:Lactobacillus bulgaricus (alargados, dan consistencia al yogurt).Streptococo: Streptococcus lcticus (cadena de cocos, acidifica la leche).

CUES TIONARIO

1. Qu funcin cumple el lugol en la coloracin de Gram?

2. A que deben su color las bacterias Gram negativas?

3. Qu forma presentan los Streptococcus? Por qu?

4. Qu forma presentan los Staphylococcus? Por qu?

5. Cul es la composicin de la pared celular bacteriana?

6. Cul es e l fundamento de la coloracin de Gram?

7. Por qu se usa alcohol - cloroformo, en la preparacin?

8. Por qu la observacin se hace a 100X?


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PRCTICA 4. ESTUDIO DE LOS HONGOS

OBJETIVO :Realizar observaciones de algunos hongos ms frecuentes.

GEN ERALIDADES :Los hongos constituyen un grupo de seres eucariticos, que tienen diversasmanifestaciones morfolgicas; se les puede observar por el color azul y verde en lasuperficie de las naranjas, limones y quesos; blanco y gris negruzco en el pan o en formade setas en el campo. No poseen clorofila ni otro pigmento fotosintetizante, porconsiguiente son hetertrofos, se alimentan por absorcin de sustancias del medio en quese encuentran algunos son saprfitos se alimenta n de materia orgnica muerta, otros son

parsitos que se alimentan de huspedes vivos, en quienes producen enfermedades.

En su mayora crecen en forma de filamentos tubulares llamados hifas, cuya masa

constituye el micelio. Las paredes de las hifas estn cubiertas de quitina. Algunos hongosson importantes en la industria de fermentacin y panificacin, otros son productores deantibiticos (ejemplo la penicilina), vitaminas y cidos orgnicos.

B

MATERIALE

I

S Q UE S

O

E REQ UIEREN:

CELMicroscopios Lminas porta objeto (4)

Frutas enmohecidas Pan enmohecido

P inzas de metal Lminas cubre objeto (4)

Pinzas de metal Lminas cubre objeto (4)

Goteros Gasa

Agua destilada.

OBTENCION DE PAN ENMOHECIDO (o fruta)

Colocar un pedazo de pan en un recipiente y agregarle agua hasta que se humedezca.

Exponerlo al medio ambiente por espacio de 2 horas. Tapar el recipiente y guardarlo enoscuridad por 1 semana. Observar la presencia de moho (sustancia negruzca) en lasuperficie del pan.

PROCEDIMIENTO:

A. OBSERVAR HONGO DE P AN (Rhizopus sp )1. Haciendo uso de una pinza, desprender una pequea porcin de la sustancia negruzcaque se ha formado en el pan y colquelo en un porta objeto, haciendo una ligera extensin.2. Agregar una gota de agua destilada sobre la muestra3. Cubrir la lmina con un cubre objeto4. Secar la parte inferior de la lmina, con una gasa5. Observar al microscopio a 10X y 40X6. Esquema de las observaciones

B. OBS ERVAR HONGOS DE F RUTAS:1. Proceder como en el caso anterior


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2. Esquema de lo observado a 10X y 40X

C. ESQUEMAS DE LOS HONGOS FRECUENTES EN PAN Y FRUTAS

Rhiozopus Penicillium Aspergillus

CUESTIONARIO

1. Cmo se reproducen los hongos?2. Cul es el polisacrido que almacenan los hongos?


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AISLAMIENTO Y MICROCULTIVO DE HONGOSObjetivo: Aislamiento de hongos ambientales. Microcultivos de los hongos aislados y suidentificacin. Al finalizar la prctica el alumno entregara lminas del hongo aislado eidentificado.

Materiales:

Muestras biolgicas: frutas, pan, tierra con hongos

Medios de cultivo: Agar Sabouraud Glucosado (AS G)

Asas de siembra.

Lminas portaobjeto y laminillas estriles.

Tubos de ensayo para cultivo (16 x 150 mm).P ipetas de 1, 2, 5,10 ml

Solucin salina 0.9%

Placas petri, Algodn, Esptulas de drigalski.

Procedimiento:Exposicin al medio ambiente: exponer una placa de ASG al flujo de corriente, zona demayor trabajo o algn punto de mayor trnsito por 15 - 20 minutos, incubar la placa por 3-5 das a temperatura ambiente.

OBTENCIN DE CULTIVO PUROTranscurrido el tiempo de incubacin, proceder a observar macroscpicamente elcrecimiento de los hongos considerando los siguientes puntos: aspecto, superficie, color,

pigmento, velocidad de crecimiento.Escoger el hongo segn lo mencionado anteriormente, y con ayuda de una asa de siembracoger esporas de los extremos del hongo y colocarlo en un tubo con 3 ml de solucin salinao agua destilada estril. Proceder a hacer diluciones hasta 10 3, tomar 1ml de cada diluciny colocarlo en placas de ASG, dispersar y dejar incubar por 3- 4 das a temperaturaambiente.

MICROCULTIVOSMateriales:

Lminas y laminillas estriles

Placas petri

P inzas

Algodn

Agua destilada estril

Placa con ASG, cortada en cuadraditos de 1 cm por lado


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IOCE

Procedimiento:Una vez obtenido el hongo aislado, con ayuda del asa de siembra en ngulo de 90 grados,coger una porcin del micelio y sembrarlo en los cubitos de AS G cortado (superf ic ie = de la del cubreobjetos), colocado sobre una lmina portaobjeto, por los costados de arriba

hacia abajo en cada lado. Con ayuda de una pinza, coger una laminilla, flamearlalevemente y colocarla sobre el cubito de ASG sembrado con el hongo. Colocar un algodnhmedo estril. Incubar a temperatura ambiente por 4 7 das. Observar diariamente que lahumedad se mantenga.

Para el montaje, colocar en una lmina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, retirar lalaminilla con el hongo en crecimiento y colocarlo en el colorante. Secar el exceso decolorante con papel secante y sellar con esmalte el borde de la laminilla. Proceder aidentificar al hongo con ayuda de un manual.

Consultar:http://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico- micro/mam- i-3-metodos.htm
http://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico-%20micro/mam-%20i-3-metodos.htmhttp://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico-%20micro/mam-%20i-3-metodos.htmhttp://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico-%20micro/mam-%20i-3-metodos.htmhttp://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico-%20micro/mam-%20i-3-metodos.htm


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PRCTICA 5. DIVERSIDAD CELULAR

OBJETIVO:Establecer las semejanzas y diferencias entre las clulas vegetales y animales.

GENERALID ADES:Las unidades bsicas de todos los organismos tienen muchas caractersticas en comn,

pero no todas poseen todo el conjunto de componentes. Las clulas animales se puedendistinguir fcilmente de las vegeta les en virtud de marcadas diferencias. Los animales

poseen ciertos sistemas organizados caractersticos, son capaces de moverse por s mismosy dependen completamente de sustancias preformadas para obtener energa y carbono;stas son nicamente algunas de sus caractersticas ms notorias. Las plantas superiorescontienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que les permite efectuar la fotosntesis,son generalmente inmviles y tienen sistemas organizados de manera peculiar.

La organizacin de la clula vegetal, es bsicamente anloga a la de la clula animal. S inembargo algunas estructuras son exclusivas de la clula vegetal, tales como: la paredcelular y plastidios. La pared celular es una membrana rgida, de situacin externa a lamembrana plasmtica, est constituido por un retculo de microfibrillas, incluidas en unamatriz gelatinosa de molculas unidas entre s. Contiene polisacridos estructurales, talescomo la celulosa, que forma la lmina interna, pectina que conforma la lmina externa, lacapa media, est constituido por una mezcla de polisacridos. Los plasmodesmos permitenla comunicacin entre clulas adyacentes, la circulacin de lquidos y probablemente

permite el intercambio de sustancias. Proporciona proteccin y sostn mecnico a la clulay determina en gran parte la forma de la clula. La pared celular puede sufrirmodificaciones tales como: la lignificacin, pectinizacin, suberificacin, pueden cubrirsede una capa de cera, para evitar la excesiva evaporacin.

MATERIAL:

Microscopio compuesto.

Porta y cubreobjetos.

Gotero con bulbo.

Corcho de botella.

Hoja de afeitar nueva.

Pinzas.

Hisopos estriles.

Frascos de boca ancha limpios y secos.

MATERIAL BIOLGICO:

Mucosa labial

Polen de helecho.

Catfila de cebolla

REACTIVOS :


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Solucin salina isotnica.

Azul de metileno al 1%.

Verde de metilo actico

CLULAS DEL CORCHO:

1. Toma el corcho con la mano izquierda, sujeta firmemente y corta una rebanada muy finacolocando la navaja un poco oblicua a la superficie.2. Cuando se haya obtenido el corte lo suficientemente delgado, se coloca en un

portaobjetos y se le agrega una gota de agua y se cubre.3. Debe evitarse las burbujas de aire.4. Obsrvese con menor aumento sobre todo las orillas del corte donde habitualmente esms delgado.5. Dibuja una pequea porcin de este material e indica la forma y el tamao de las clulas.6. Responde lo siguiente:a) Qu estructura se ve dentro de ella?

b) Qu parte de la clula es la que evita que el agua penetre en las clulas?

CLULAS DE CEBOLLA:

1. Corta un bulbo de cebolla en 4 partes, se observar que cada parte se separa por s solaen capas llamadas envolturas u hojas.2. Toma una de estas escamas con la superficie cncava y rmpela. Entonces observarsque se desprende con facilidad una capa muy delgada y transparente que es la epidermis.3. Toma un fragmento y colcalo sobre un portaobjetos con una gota de agua de modo quela superficie que estaba en contacto con la escama quede hacia arriba. Usa un fragmento de

epidermis de no ms de 1 cm2 y cbrelo con un cubreobjetos.4. Observa con menor aumento y contesta lo siguiente:a) Cmo se aprecia la morfologa de las clulas y sus paredes?5. Retira la preparacin de la platina del microscopio y coloca una gota de azul de metilenode un lado de la preparacin, en el borde del cubreobjeto para que la solucin entre porcapilaridad. Observa con un menor aumento.6. Contesta lo siguiente:a) Cul es el color y la forma del ncleo? Observa los ncleos con mayor aumento

b) Cul es la ubicacin de este organelo en la clula?7. Alrededor del ncleo se encuentra una sustancia granular que se ha teido ligeramenteque es el citoplasma, descrbelo. Compara las clulas de la cebolla con las del corcho.

a) En qu difieren?b) En qu se asemejan?c) Consideras que las formas y tamaos celulares estn relacionados con las funciones delas mismas?


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POLEN:1. Colocar unas partculas de polen de helecho sobre un portaobjetos.2. Agregar una gota de agua y colocarle un cubreobjetos cuidando de no dejar burbujas deaire.

3. Observar la morfologa al microscopio con el objetivo de menor aumento.

CLULAS ANIMALES:1. Coloca una gota de solucin salina isotnica en un portaobjetos limpio, con un hisopofrota ligeramente la cara interna de la mejilla y el material que obtengas mzclalo conmovimientos rotatorios junto con la solucin salina isotnica hasta obtener un material conaspecto lechoso homogneo. Agre ga una gota de azul de metileno y cubre la preparacincon un cubreobjetos.2. Con el objetivo de 10X, localiza las clulas y compralas con las de las plantas. Vas aencontrar algunas clulas asociadas, otras dobladas o rotas. Busca una o dos que estnco mpletas con el objetivo 40X. El ncleo es claramente visible si se ajusta la luzconvenientemente, tambin se podr observar e l citoplasma.

ESQUEMAS DE S US OBSERVACIONES:


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PRCTICA 6. OBSERVACIN DE ORGANELOS CELULARES,PLASTOS Y ESTOMAS

OBJETIVOS. Conocer algunos de los principales constituyentes de los organismos eucariontes a travsde la observacin de preparaciones celulares.. Identificar, con ayuda de algunas tcnicas de coloracin, los principales or ganelos de lasclulas eucariticas.- Observar los diferentes plstidos que integran a las clulas vegetales, as como tambinidentificar los estomas presentes en las clulas de origen vegetal.

GEN ERALIDADES :Las clulas epidrmicas estn bien adaptadas para proteger las clulas subyacentes ydisminuir las prdidas de agua, pero sin impedir del paso de la luz. Sobre toda la superficieepidrmica hay repartidos poros pequeos llamados estomas, cada uno rodeado por dosclulas de proteccin (Ver F ig.1). Es tas clulas, al cambiar su forma, pueden modificar eltamao de la abertura y regular as la salida de agua y el intercambio de gases. A diferenciade otras clulas epidrmicas, las clulas de proteccin contienen cloroplastos. Hay de 50 a500 estomas por mm2 de hoja; son mucho ms numerosos en la superficie inferior, en lashojas de casi todas las especies.

Estomas: Las clulas de proteccin en forma de haba, poseen paredes ms gruesas hacia ellado del estoma que hacia los otros. En general, los estomas se abren en presencia de luz yse cierran en la oscuridad, la abertura y cierre son regulados por cambios de la presin deturgencia en el interior de las clulas de proteccin.

Mitocondrias: Las mitocondrias pueden ser observadas en clulas vivas, con e l colorante

verde de Jano, con el cual toma un color azul verdosa, debido al sistema de citocromooxidasa, en el que el colorante se mantiene en su forma oxidada, mientras que en elcitoplasma el colorante es reducido a su forma incolora.

Lisosomas: Son organoides citoplasmticos, que contiene alrededor de 50 enzimashidrolticas, que son los centros de la digestin celular, digieren materiales incorporados

por fagocitosis y pinocitosis, sustancias extra celulares y partes de la misma clula(Autofagia). Presentan polimorfismo, son compartimentos rodeados de una membrana, sucontenido es de pH cido. La enzima que la caracteriza es la fosfatasa cida. P uedeobservarse lisosomas en clulas vivas utilizando sustancias que se acumula en ellas, es elcaso del rojo neutro.


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Figura 1. Movimiento del estoma

Plastos: estn agrupados generalmente en dos clases: los incoloros o leucoplastos y lospigmentados o cromoplastos. Los primeros se encuentran a menudo en las plantas que noestn expuestas a la luz e intervienen en la formacin y almacenamiento de grnulos dealmidn y gotas de grasa.

Cloroplastos: son estructuras aplanadas cuya longitud promedio alcanza 7 m y 3-4 m deancho. Cada cloroplasto est rodeado por una me mbrana lisa. Dentro de la membranaexterior se halla una segunda membrana interior y una matriz lquida denominada estroma.La membrana interior se pliega de acuerdo con un patrn intrincado. Prolongaciones de la

membrana interior se pliegan y unen en pare s denominados lamelas. Peridicamente, laslamelas se dilatan y forman vesculas aplanadas membranosas denominadas tilacoides.Estas se amontonan a manera de apilamientos de monedas. Tales apilamientos oconglomerados de tilacoides reciben el nombre de gra na.

MATERIAL:

Portaobjetos.

Cubreobjetos.

Frasco gotero con agua.

Microscopio compuesto.

Navaja de un solo filo o de doble filo.

MATERIAL BIOLGICO:

Tomate y zanahoria

Hojas de Setzcreasea purpurea.

Papa.

Hojas de elodea


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Cultivo deParamecium

REACTIVOS :

Lugol de gram.

Rojo neutro.

Solucin salina

TCNICA:

1. Realizar un corte en la epidermis de Setzcreasea purpurea procurando que sea lo msdelgado posible y hacer lo mismo con el resto de las muestras.2. Colocar el corte sobre un portaobjetos y agrgale una gota de lugol procediendo

posteriormente a colocarle el cubreobjetos.3. Observar al microscopio la preparacin y realiza dibujos de lo que observes. Identificarsi se trata de estomas, c loroplastos, leucoplastos o cromoplastos.4. Realizar dibujos de lo observado.

APERTURA Y CIERRE DE ES TOMAS

1. Introducir las hojas de Setzcreasea purpurea en las soluciones indicadas. Esperar 10minutos.2. Realizar corte superficial de la hoja de Setzcreasea purpurea.3. Incluir una muestra en una solucin 30% de sacarosa (o alguna otra azcar)4. Incluir otra muestra en una solucin 15% de sacarosa

5. Incluir otra en una solucin al 0,05% de sacarosa6. Montar cubrir con cubreobjetos7. Observar a 100X8. Esquematizar

Observacin de Mitocondrias:1. Raspar suavemente la parte interna del labio, con un porta objeto.2. Hacer un frotis de la mucosa extrada con solucin salina isotnica.3. Agregar Verde de Jano, hasta cubrir la lmina, esperara aproximadamente de 1 a 5minutos.4. Cubrir con una laminilla

5. Eliminar el exceso de colorante.6. Observar al microscopio a 40X y 100X.7. Esquema de las observaciones.

Observacin de Lisosomas:1. Preparar el cultivo de Paramecium (Colocar paja en un frasco, agregar agua hastacubrirlo, tapar el frasco y colocarlo en lugar poco iluminado durante 15 das).2. A un frasco que contiene cultivo deParamecium, agregar solucin rojo neutro.3. Esperar de 1 a 2 horas a 25C, y dejar en un lugar oscuro.4. Coloca r una gota del preparado, sobre el portaobjeto.5. Cubrir con la laminilla.

6. Observar a 10X y 40X.7. Esquema de las observaciones.


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Observacin de C loroplastos:1. Colocar una hoja de Elodea en un porta objeto2. Agregar una gota de agua destilada sobre el preparado.3. Colocar el cubre objeto.4. Observar al microscopio a 10X, 40X.5. Esquema de sus observaciones.

Observacin de amiloplastos1- Con una hoja de afeitar ensaya cortes muy finos de papa y camote.2- Coloca un corte de papa sobre una lmina porta objeto3- Adiciona una gota de lugol sobre el corte4- Cubre el preparado con una laminilla cubre objetos.5- Observa al microscopio a 10X y 40X.6- Cmo se observan los granos de almidn?7- Repite lo anterior con corte de camote8- Observas diferencias entre los granos de almidn de papa y de camote?9- Haz esquemas de tus observaciones.

Observacin de cromoplastos1. Utilizando un escalpelo, corta en dos mitades el tomate, zanahoria.2. Obtn, ayudndote de unas pinzas, un trozo de pulpa de tomate de unos 2mm de grosor.3. Depostalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua.4. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener uncompleto aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate.5. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una observacin con

pequeos aumentos.6. Identifica los distintos orgnulos celulares visibles y dibuja lo que observes.

CUES TIONARIO

1, Establecer la diferencia que existe e ntre la pared celular vegetal y la pared celularbacteriana.2. Defina los siguientes trminos:

Suberificacin

Cutinizacin

3. Qu es ciclosis?4. Cmo se originan los Lisosomas?

5. Por qu se usa verde de Jano, para identificar mitocondrias?6. Qu color toman los cloroplastos con el lugol y por qu?7. Cmo regulan las clulas protectoras las aberturas y los cierres de los estomas?8. Existe alguna relacin entre la apertura y cierre de los estomas con la fotosntesis?9. Realiza un dibujo de un estoma poniendo en evidencia la circulacin de agua y dixidode carbono.10. Qu es un ostiolo?


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ESQUEMAS DE S US OBSERVACIONES :


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PRCTICA 7. CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL DEORGANELOS CELULARES

OBJETIVO :Realizar un fraccionamiento celular e identificar en ste los organelos de clulas

animales.

GEN ERALIDADES :Las clulas eucariontes tienen organelos celulares delimitados por una sola membrana.Todos ellos pueden ser separados utilizando mtodos de centrifugacin diferencial y porgradientes de densidad. Dado que la mayora de los organelos tienen diferente pesomolecular, viscosidad o densidad.

Existen diversos tipos de purificacin de organelos, uno de ellos es la ultracentrifugacin,que consiste en separar las clulas u organelos presentes en una mezcla celularsometindola a una fuerza centrfuga. Mediante una ultracentrfuga se alcanzan

velocidades de ms de 100 000 rpm, para generar una fuerza centrfuga de 500 000 G; conlo cual se logra separar a la mezcla en dos porciones.

Los procedimientos de fraccionamiento celular son mtodos de purificacin de organelos.En general, se fraccionan las clulas con la mayor suavidad posible y la mezcla, llamadaextracto celular, se somete a fuerza centrfuga para hacerla girar en un dispositivo llamadocentrfuga (Ver F ig.2.). Tal fuerza separa el extracto en dos fracciones: un comprimido yun sobrenadante. El comprimido, que contiene los materiales ms pesados densamentecompactados, se forma en el fondo del tubo. El sobrenadante, o sea el lquido que quedaencima del comprimido, contiene las partculas ms ligeras, molculas disueltas, e iones.

Figura 2. Ultracentrifugacin


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MATERIAL:

Centrifuga.

Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.

Pipetas graduadas.

Vasos de precipitado.

Mortero.

Pipeta pasteur.

Microscopio

Licuadora

Portaobjetos

Cubreobjetos

MATERIAL BIOLGICO:

Hgado de pollo fresco.

Hojas de Elodea

REACTIVOS:

Buffer de separacin (buffer de fosfatos 10mM y de cloruro de sodio 0.15 M, KCl 3.3mM y MgC l 2.6 mM a pH 7.4)

Azul de metileno

Azul de bromotimol

TCNICA:Tcnica para centrifugacin celular. Fraccionamiento celular.

1. El hgado se enjuaga con agua de cao y se coloca en un vaso de precipitado, quecontenga 20 ml del medio de extraccin o Buffer de separacin, se desmenuzacon las tijeras con 2 a 3 veces el Buffer de separacin.2. Se vierte el contenido del vaso en una licuadora y se lica. Pasar a los tubos ycentrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos, retirar el sobrenadante y guardarlo.3. A la fraccin obtenida, se le agrega buffer en proporcin 1:4 (colocar 4 veces elvolumen de la fraccin obtenida de buffer) y se procede hacer las observaciones.

Aplicar e l mismo procedimiento para los vegetales.


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ESQUEMAS DE S US OBSERVACIONES:CUESTIONARIO:1) Para la separacin de organelos celulares, Q u otras tcnicas existen?2) Cules son los principios de la centrifugacin diferencial o ultracentrifugacin3) Cules son las ventajas y las desventajas de trabajar con clulas enteras o

fraccionadas?


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PRCTICA 8. SMOSIS Y DIFUSIN

OBJETIVO :Observar el paso del agua a travs de una membrana.

GENERALIDADES :La membrana celular, regula el paso de sustancias hacia dentro y fuera de las clulas,actuando selectivamente de modo que permite un equilibrio qumico, con el medio que lorodea; a travs del proceso de difusin. Se entiende por smosis, el paso de agua, de unmedio de menor concentracin de solutos hacia el medio de mayor concentracin desolutos, a travs de una membrana de permeabilidad selectiva, como son las membranascelulares. La e ntrada de agua por smosis, se denomina Endsmosis y la salida del agua dela clula se denomina Exsmosis. Cabe mencionar que las soluciones biolgicas se puedenclasificar, segn la cantidad de solutos que contienen en:

1. Hipotnicas: Contienen concent racin de solutos, menor en disolucin, que en lquidointracelular. Ejemplo: agua destilada, cloruro de sodio 0.5 %.2. Isotnicas: Contienen igual cantidad de solutos en disolucin, que en el mediointracelular. Ejemplo: cloruro de sodio 0.9 %, suero fis iolgico.3. Hipertnicas: Soluciones con mayor cantidad de solutos en disolucin, comparado conel medio intracelular. Ejemplo: cloruro de sodio concentrado, cloruro de sodio 5%.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN :Soporte universal Agua destiladaBeaker de 100 ml. C loruro de sodio 25 %, 50 ml.Embudo P robeta de 100 ml.

Azcar Hilo fuerte (pabilo)Azul de metileno.Papel celofn

PROCEDIMIENTO:1. Colocar 50 ml. de solucin de cloruro de sodio al 25 %, con una gota de azul demetileno, en un embudo (figura 1).2. Cubrir la boca del embudo con papel celofn y amarrarlo.3. Sumergir el embudo, en el vaso de precipitado, que contiene agua destilada (10 0 ml).4. Suspender el embudo del soporte universal, de modo que pueda sumergirse, en elvaso de precipitado que contiene agua destilada, como se muestra en la figura 2.


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Figura 1 Figura 2

CUESTIONARIO

1. Qu se observa al cabo de una hora con al solucin dentro del embudo? Q u seobserva en el vaso de precipitado?2. Qu tipo de membrana es el papel celofn? Por qu?

3. Qu es difusin?4. Qu factores influyen en la difusin?5. Es la Osmosis, una difusin? Por qu?


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PRCTICA 9. PLASMOLISIS Y TURGENCIA

OBJETIVO:Comprobar la capacidad de la membrana celular, para el paso del agua; en soluciones

hipertnicas o hipotnicas respecto al citoplasma.

GEN ERALIDADES :Las clulas son muy sensibles a los cambios que sufre el medio en que se encuentran. Alcolocar clulas en soluciones hipotnicas, el agua ingresa en las clulas, permitiendo elaumento de volumen, proceso conocido como Turgencia. Por el contrario si las clulas soncolocadas en solucin hipertnica, el agua sale de la clula, permitiendo, la disminucin devolumen, proceso llamado P lasmlisis.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN:Microscopios Lminas porta objeto (6)

Lanceta hematolgica Lminas cubre objeto (6)Cloruro de sodio 0.9 %, 5 %. GoterosAlcohol Agua destiladaAlgodn Catfila coloreada de cebolla.Hojas de Elodea (planta acutica)PROCEDIMIENTO:A. Turgencia y plasmlisis en clulas vegetales: Catfila de cebolla y hojas de Elodea.1. Desprender la catfila coloreada de la cebolla. De igual manera una hoja deElodea.2. Colocar un fragmento en tres lminas porta objetos, previamente enumeradas.

3. Agregar a la lmina No.1, 1 2 gotas de cloruro de sodio al 0.9 %, a la lminaNo.2, cloruro de sodio 5 %, y a la tercera lmina agregar 1 2 gotas de aguadestilada. C ubrir los p reparados con el cubre objeto.4. Observar al microscopio a 40X5. Cmo se observan las clulas en la solucin de cloruro de sodio al 0.9 %?

----------------------------------------------------------------------------------------------------------6. Qu tipo de solucin es el cloruro de sodio al 0.9 %, respecto a la solucin delcitoplasma?

-----------------------------------------------------------------------------------

7. Qu ocurre con las vacuolas en la solucin de cloruro de sodio al 5 %?

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------8. Qu cambios se observan en las clulas, en agua destilada?

Por qu?--------------------------------------------------------------------------------------------------


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B. Turgencia y P lasmlisis en clula animal: Glbulos rojos.1. Mediante una aguja hipodrmica o lanceta hematolgica, hacer una puncin en layema del dedo, previa limpieza con alcohol.2. Colocar 1 gota de sangre en cada una de las tres lminas, previamente enumeradas.

3. Agregar a cada lmina 1 2 gotas de solucin de cloruro de sodio al 0.9 %, 5 % yagua destilada respectivamente.4. Cubrir con cubre objetos.5. Observar al microscopio a 40X.6. En qu solucin se observa la hemlisis?

7. Cmo se llama el proceso que se muestra en la solucin de cloruro de sodio al 5%?

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CUES TIONARIO1. Los fenmenos de turgencia y plasmlisis, se manifiestan en la misma forma, en la

clula vegetal y animal?2. A qu se debe?


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PRCTICA 10. PERMEABILIDAD CELULAR

OBJETIVO:Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs de la difusin en

una membrana celular por medio de la hemlisis.

FUNDAMENTO:Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor parte son fsicos.Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria como al celofn, por lo quees conveniente comparar los anteriores modelos utilizando clulas vivas, como en este casosern glbulos rojos.

GEN ERALIDADES:El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las clulas est influido por lasemipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidad de permitir el paso de

ciertas molculas o bien impedrselo (Ver F ig. 3)

Hipotnica Isotnica Hipertnica

Figura 3. Perm eabili dad de la membrana

El trmino smosis se deriva de la palabra griega que significa empujar. La tendencia deempujar sus molculas desde la porcin ms concentrada hacia la menos concentrada,

puede ser el resultado de una fuerza que llamamos presin osmtica. P uesto que la presinosmtica depende de la concentracin de los materiales en suspensin, mientras msgrande es la concentracin mayor es la presin osmtica y, el objetivo de esta es igualar la

concentracin de las molculas de agua en ambos lados (Ver F ig.4)


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Figura 4.Mecanismos de transporte

MATERIAL:

5 tubos de ensayo 13 x100 mm.

1 gradilla.

2 pipetas graduadas de 5 ml.

1 cronmetro.

1 cronmetro.

Equipo para venopuncin.

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre.

REACTIVOS :

Glicerol 0.5 M.

Glucosa 0.5 M.

Solucin de urea 0.5 M.

Solucin de etilenglicol 0.5 M.


DETERMINAR PERMEABILIDAD CELULAR:1. Preparar una serie de 4 tubos marcados con las sustancias que se indican.2. Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para cada sustancia.3. Preparar una suspensin de glbulos rojos al 0.85%.


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4. Agregar 2-5 gotas de la suspensin de glbulos rojos preparada a cada tubo.3. Calcular el peso molecular (P M) de cada sustancia.4. Determinar el tiempo de hemolisis.5. Graficar PM vs Tiempo de hemolisis.

ESQUEMAS DE S US OBSERVACIONES :

CUESTIONARIO:1) Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?

2) Por qu se dice que la bicapa de la membra na constituye una barrera natural?3) Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs de la membranacelular?4) Cmo est constituida la membrana celular de tal manera que permite la

permeabilidad?


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PRCTICA 11. AISLAMIENTO DEL ADN

INTRODUCCINEl aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos usados en la ingeniera

gentica, como la transformacin, secuenciacin, mapeo fsico, mutagnesis sitio dirigidas,etc. El aislamiento de los cidos nucleicos implica la destruccin de la clula por choqueosmtico; homogeneizacin, digestin enzimtica o tratamiento mecnico suave.

OBJETIVOEl alumno aislar y observar al ADN extrado de forma rudimentaria.

PROCEDIMIENTO EXTRACCIN DE CLULAS VEGETAL1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baode hielo triturado:

120 ml de agua destilada. No usar agua del grifo.

1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

5 g de b icarbonato sdico.

5 ml de detergente lquido o champ.

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber enla cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas aimpulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a laaccin del detergente.4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro yagitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales msgrandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideales centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.

5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml dealcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara


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interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre eltampn.6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre elalcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irnenrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varillaatravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con elaspecto de un copo de algodn mojado.

PROCEDIMIENTO EXTR ACCIN DE CLULAS ANIMALMATERIAL:

Microscopio

Cubreobjetos

Portaobjetos

P ipetas

Probetas

Varilla de vidrio.

Mortero

Vasos de precipitado

Arena

Trozos de tela para filtrar o gasa.

Colador

MATERIAL BIOLGICO:

Hgado de pollo.

REACTIVOS :

Alcohol de 96

Cloruro sdico 2M

Dodecilsulfato de sodio. (SDS )

TCNICA:1. Triturar un fragmento pequeo de hgado de po llo en un mortero. Aadir arena para queal triturar se puedan romper las membranas y se liberen los ncleos sueltos.2. Aadir al triturado, 50 ml de agua destilada. Remover hasta hacer una especie de papillao pur.3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado

por romper.


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4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.5. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con esto conseguimos

producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina.

6. A continuacin se aade 1 g de S DS. As nos quedar el ADN libre de las protenas quetiene asociadas.7. Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que hacerlo de forma que elalcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita elADN (Ver F ig.5).

Figura 5. Interfase con ADN

8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. Sobre la varillase van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de laagrupacin de muchas fibras de ADN.


CUESTIONARIO:

1. Qu dificultades se presentaron para la realizacin de la prctica?2. Qu observaste en las fibras?3. Cul es la funcin del detergente y agentes quelantes en la purificacin del ADN?4. Por qu se dice que las protenas contaminan al ADN purificado?5. Por qu es til el estudiar y analizar al ADN de una clula?6. S i todos los organismos vivos tienen ADN en sus clulas, qu es lo que hace a losorganismos diferentes de otros?


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7. Cmo se compone un nucletido? Dibuja su estructura.8. En que difieren el ADN y el ARN?9. Elabora una tabla comparativa entre ADN y ARN.


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PRCTICA 12. MITOSIS

OBJETIVO:Estudiar las fases de la mitosis en clulas de raz de cebolla (A llium cepa)

GENERALIDADES:Toda clula durante su ciclo de vida, pasa por dos perodos fundamentales:1. la interfase (No hay divisin celular)2. La mitosis o divisin celular.El ciclo celular comprende procesos que tienen lugar desde la formacin de una clula,hasta su divisin en dos clulas.

La mitosis, es una forma de divisin celular, que se realiza en todos los organismos yconsiste en la distribucin del material celular duplicado en una interfase, en dos clulashijas idnticas entre s y a su antecesora en cuanto a su constitucin cromosmica. Existenclulas que se dividen rpidamente, as como otras que no se dividen como: las clulas

nerviosas.

La mitosis es un proceso continuo, pero por motivos de estudio citolgico y didctico seconsideran 4 fases: Profase, metafase, anafase, telofase.

1. Profase: L a cromatina se condensa formando bastones, llamados cromosomas.Desaparecen los ncleos, se forma el huso acromtico, finalmente desaparece lamembrana nuclear.2. Metafase: Los cromosomas se disponen en la placa ecuatorial de la clula, se unen alaparato mittico. Cada cromosoma est formado por dos mitades longitudinales.3. Anafase: Se dividen los centrmeros y los cromosomas hijos se dirigen uno a cada polo

de la clula.4. Telofase: Se inicia con la llegada de los cromosomas, hacia los respectivos polos, hayreconstruccin de ncleos, la cromatina se des condensa, se reconstruyen los ncleos,desaparece el aparato mittico, se forma la membrana nuclear.

Termina con la citocinesis o divisin citoplasmtica y la formacin de dos clulas hijasidnticas entre s y a su antecesora.

La citocinesis en clula animal: se hace por una constriccin a nivel de la zona ecuatorialde la clula, que termina con la estrangulacin del citoplasma, en dos porcionesaparentemente iguales.

La citocinesis en clula vegetal: se hace por la aparicin de un tabique central, llamadaplaca celular, que resulta de la unin de vesculas del aparato de Golgi, que da lugar a lamembrana plasmtica y a la pared celular.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN:Microscopios Orcena actica clorhdricaCajas petri Lunas de reloj.Hojas de afeitar Porta objetos (4)

Pinzas C ubre objetos (4)

Mecheros Hielo secoPapel de filtro Esmalte de uas transparenteRaces de cebolla Blsamo de Canad


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Alcohol: cido actico (3:1) (Carnoy). GoterosCafena al 0.1 % Colchicina al 0.1 %

PROCEDIMIENTO:A. Cultivo de races de cebolla: Escoger un bulbo de cebolla fresca, quitar las raicillassecas, de la base de la cebolla. S uspender la cebolla en un vaso con agua u otro recipiente

con agua, de manera que la base de la cebolla haga contacto con la superficie del agua.Dejar dura nte 3 a 5 das y cambiar de agua, todos los das.

B. Preparacin de lminas de mitosis:1. Arrancar las raicillas y cortar 1 cm. del extremo de la raz.2. Introducir en Carnoy y dejar 5 a minutos.3. Pasar las raicillas a una luna de reloj o caja petri, con orcena actica ms 3 a 5 gotas decido clorhdrico diluido.4. Calentar hasta que emita vapores y dejar enfriar durante 5 minutos. Tres veces.5. Dejar enfriar y esperar 15 minutos.

6. Colocar una raicilla sobre un porta objeto y cortar aprox. 2 a 3 mm. de la punta. El resto

se descarta.7. Aadir una gota de orcena actica, colocar el cubre objeto y golpear con lpiz de puntaroma, para una mejor extensin.8. Eliminar el exceso de colorante con un papel de filtro y hacer presin con el dedo pulgarsobre el cubre objeto, a travs del papel de filtro.9. Observar al microscopio a 40X y 100X.10. Hacer esquemas de las fases observadas.11. Sellar la lmina con esmalte de uas transparente o blsamo de Canad.

C. Preparacin de lminas de bimitosis en cebolla tratadas con colchicina y cafena:1. Un bulbo de cebolla, previamente cultivada en agua, colocarlo en solucin de colchicinaal 0.1 %, durante 3 horas y otra en solucin de cafena al 0.1 % durante 1 hora y lavar estaltima en agua de cao.2. Para la preparacin de las lminas, proceder como en el caso B.


CUES TIONARIO1. Qu efecto tiene la colchicina en la mitosis?2. Qu efecto tiene la cafena en la mitosis?3. Cundo se producen las clulas binucleadas?

4. Cul es la diferencia entre mitosis en clula animal y mitosis en clula vegetal?Determinacin del ndice mittico en una poblacin celular

1. Seleccione una regin del meristema y cuente en ella por lo menos 100 clulas totales,clasificndolas en interfsicas y mitticas.2. Determine los porcentajes de clulas en cada fase.3. Construya un diagrama de todas las etapas de la mitosis de acuerdo a SUS resultadosexperimentales.4. Calcule: el ndice mittico de la poblacin celular del meristema de raz de A. cepa(cebolla):5. Complete el siguiente cuadro con los datos que obtuvo:


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6. - Indique la duracin total del ciclo y la duracin de la metafase, suponiendo que lamitosis durante 1 hora.


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PRCTICA 13. TINCIN DE NUCLELOS

OBJETIVO :Observar nucleolos en clulas meristemticas.

GEN ERALIDADES :Los nucleolos, son estructuras que pueden ser observadas, con tinciones especiales, es elcaso del nitrato de plata. En el ncleo de clulas interfsicas, se pueden identificar dos oms nucleolos esfricos, en las clulas profsicas, los nucleolos se observan de formasestrelladas aproximadamente.

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN :Formol al 10 % Hidroquinona al 1 %

Nitrato de plata al 2 % Estufa a 70.

cido actico al 50 % Lminas porta objetos

Pinzas Lminas cubre objetos

Papel secante o de filtro Esmalte de uas transparente.

PROCEDIMIENTO:

1. Fijacin de races de cebolla, en una mezcla 1:1 de formol 10 % e hidroquinona 1 %.Durante 1 a 2 horas. A temperatura ambiente.2. Lavar tres veces con agua destilada. 10 minutos cada vez.3. Introducir las races en nitrato de plata al 2 %, colocarlo en oscuridad y a 70C, durante10 a 15 horas, o dejarlo toda la noche.4. Lavar nuevamente tres veces con agua destilada, de 10 minutos cada vez.5. Reduccin a temperatura ambiente, colocar en la mezcla de formol - hidroquinona de 1 a2 horas.6. Se coloca una raz en el porta objeto, agregar 2 a 3 gotas de cido actico al 50 %.7. Hacer el squash.8. Observar al microscopio.9. Identificar:

Nucleolo: teido de marrn oscuroNcleo: color amarillo ocreCitoplasma: amarillo claro

CUES TIONARIO1. Qu forma tienen los nuclolos en metafase y anafase?2. Cmo se observan los nuclolos en telofase?


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PRCTICA 14. MEIOSIS

OBJETIVO :Identificar las fases de la meiosis en animales y plantas.

GEN ERALIDADES :Los organismos con reproduccin sexual, presentan una forma especial de divisin celularllamada Meiosis que ocurre durante la gametognesis. La meiosis es el proceso que tienelugar en las clulas germinales; consiste en dos divisiones celulares sucesivas con laduplicacin nica de los cromosomas; dando como resultado la formacin de 4 clulashaploides a partir de una clula diploide, por reduccin del nmero de cromosomas a lamitad.Los procesos esenciales de la meiosis son:1- Apareamiento a sinapsis de los cromosomas homlogos2- Formacin de quiasmas e intercambio de material gentico

3- Separacin de los cromosomas homlogosDESC RIPCIN DE LA MEIOSIS :

PRIMERA DIVISIN:1- PROFASE I: Es muy larga y compleja. Comprende los siguientes perodos.A- Leptonena: el ncleo aumenta de tamao, los cromosomas se hacen visibles.B- Zygonena: ocurre el apareamie nto de cromosomas homlogos o sinapsisC- Paquinema: se completa el apareamiento de cromosomas homlogosD- Diplone ma: se produce el crossing-over o sobrecruzamiento. Hay separacin de loscromosomas apareados. La separacin de los cromosomas no es total, permanecen unidos

por puntos llamados quiasmas que corresponden al crossingover. P uede durar meses o

aos.E- Diacinesis: hay reduccin del nmero de quiasmas. El nucleolo desaparece.Ttradas situadas ms homogeneamente en el ncleo.

2- METAF ASE I: Los cromosomas bivalentes se sitan en el plano ecuatorial, con loscentrmeros orientados hacia cada polo. Los cromosomas homlogos del bivalente estnunidos slo por quiasmas.

3- ANAFASE I: No hay divisin de centrmeros a diferencia de la anafase de la mitosis.Los cromosomas con sus dos cromtides unidas por el centrmero se dirigen hacia los

polos. Hay reduccin del nmero de cromosomas por lo que cada clula tendr n

cromosomas y contenido diploide de ADN (2C).

4- TELOFAS E I: Los cromosomas llegan a los polos. Se forman dos nuevas clulas (en elanimal macho se llama espermatocito II y el animal hembra ovocito II) y cuerpo corto

perodo de interfase, en esta etapa ya no hay duplicacin de cromosomas ni sntesis deADN.


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SEGUNDA DIVIS IN:Es similar a la mitosis.

1- PROFASE II: Es corta.

2- METAF ASE II: Se forma el huso acromt ico. Cromosomas situados en el planoecuatorial.3- ANAFASE II: Las cromtides se separan y se dirigen a los polos respectivos4- TELOFAS E II: Las cromtides llegan a los polos. Se produce la citocinesis. Resultan 4clulas haploides.

IMPORTANCIA DE LA MEIOSIS:1- La reduccin del nmero de cromosomas permite que al unirse los gametos en lafecundacin se conserve le nmero de cromosomas que corresponde a la especie.2- Permite mediante la recombinacin la variacin gentica

MATERIALES Q UE S E REQ UIEREN :Microscopio estereoscpico Goteros

Microscopio compuesto Papel de filtro

Estiletes saltamontes

Mecheros y alcohol Hojas de afeitar

Grillos machos S uero fisiolgico

Alcohol actico (3:1) Caja petri

Alcohol actico (3:1) Caja petri

Alcohol 70% Lminas portaobjetos

Orcena actica Lminas cubre objetos

Carmn propinico ter

Aceite de inmersin Algodn, gasa.

Botones de flores inmad uros

PROCEDIMIENTO:

MEIOSIS EN GRILLOS:1. Colocar grillos machos en un frasco que contenga ter o cloroformo.2. Colocar un grillo en una tabla de diseccin y cortar a nivel del abdomen.3. Los testculos del grillo son de color blanco, a manera de ovillo.4. Extraer las gnadas, colocarlas en una placa petri que contenga suero fisiolgico.Observar al estereoscopio.5. Se fijan en una mezcla de cido actico y etanol en proporcin 3:1 al menos una semanaantes.6. Con la ayuda de un estilete coloque una de las fibras o tbulos seminferos desprendidascon suero fisiolgico, sobre un porta objeto.


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7. Agregar una gota de carmn propinico sobre el preparado anterior, cubrir con elcubreobjeto.8. Observar al microscopio a 10X, 40X

9. Hacer esquemas de sus observaciones, identificando las diferentes etapas de laespermatogenesis a lo largo de la fibra desprendida.http://www.uam.es /de partame ntos /ciencias /biologia/citologia/Descargas /guion_practica1.pdf
http://www.uam.es/departamentos/ciencias/biologia/citologia/Descargas/guion_practica1.pdfhttp://www.uam.es/departamentos/ciencias/biologia/citologia/Descargas/guion_practica1.pdfhttp://www.uam.es/departamentos/ciencias/biologia/citologia/Descargas/guion_practica1.pdf


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PRCTICA 15. CROMATINA SEXUAL OCORPSCULO DE BARR

OBJETIVO:Observar el corpsculo de Barr en clulas de epitelio bucal de mujeres y contrastando con

clulas de epitelio bucal de varones.

FUNDAMENTO:Barr y Bertrn descubrieron en 1949 un diminuto cuerpo cromtico en las clulas nerviosasde un gato hembra, el cual, no estaba presente en las clulas de los machos. Dado que laobservacin se repiti en otros tejidos y en otros animales incluyendo el ser humano.

Actualmente la tcnica se utiliza en la determinacin del sexo, (en atletas que participan enpruebas olmpicas y otras de carcter internacional), en la investigacin de estadosintersexuales y en algunos de aberraciones cromosmicas.

GEN ERALIDADES:El cromosoma X contiene numerosos genes requeridos por ambos sexos, aunque unahembra normal tiene dos copias de cada locus, en tanto que un macho normal tiene solouna. La compensacin de dosis es un mecanismo que hace equivalentes las dosis de lahembra y la dosis nica del macho. En la mayor parte de los tejidos, el cromosoma Xmasculino es tan activo como los dos cromosomas X presentes en la hembra.En los mamferos, la compensacin de dosis por lo general implica la desactivacin de unode los cromosomas X de la hembra. Durante la interfase, en el borde del ncleo de cadaclula femenina de los mamferos es visible una mancha oscura de cromatina, llamadacuerpo o corpsculo de Barr (Ver F ig.6). Se ha observado que el cuerpo de Barr representauno de los dos cromosomas X, que se ha hecho denso.

Figura 6. Observacin del corpsculo de Barr

Se tie de color oscuro y es metablicamente inactivo. El otro cromosoma X se parece alos autosomas metablicamente activos por el hecho de que durante la interfase es un largofilamento no visible al microscopio ptico. A partir de stos y otros datos, se sugiri que encualquier clula de una hembra mamfero slo uno de los cromosomas X es activo; el otroes inactivo y se observa como un cuerpo de Barr.

Cuando se tien clulas con colorantes bsicos, sus ncleos presentan zonas msdensamente teidas como las observadas alrededor del nucleolo, correspondientes a la


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heterocromatina y, zonas con coloracin ligera, la eucromatina.

M.L. Barr encontr cuerpos cromatnicos en clulas nerviosas de gatas que no estabanpresentes en el macho. Observ adems, que en diferentes clases de tejidos, incluyendo el

epitelio de mucosa bucal, se presentan esos cuerpos heterocromatnicos, en el se r humanose presentan solo en la mujer, por lo cual tambin se les ha denominado cromatina sexual.

Cuando en una clula existen dos cromosomas X, uno de ellos se vuelve relativamenteinactivo y se hace heterocromtico (el cuerpo de Barr). Se ha descubierto que el nmero decorpsculo de Barr es igual al nmero de cromosomas X menos uno. Entonces, el cuerpode Barr proviene de un cromosoma X que se conserva enrollado fuertemente en casi todasu longitud o todo en l durante la interfase. A consecuencia de tal enrollamiento apretado,tiene densidad suficiente para que, al teirse constituya un cuerpo visible.

Los cuerpos de Barr en las clulas de las hembras se observan de preferencia en los

ncleos. Un cuerpo de Barr se observa como una pequea masa oscura, frecuentemente deforma planoconvexa, comprimida contra la superficie interna de la membrana nuclear.Suele tener una micra aproximadamente de dimetro, de manera que resulta netamentevisible si el plano de seccin la atraviesa en la periferia. El nmero de corpsculos de Barr,se determina con la siguiente frmula:

Xn - 1

n = N de cromosomas X

MATERIAL:

Microscopio.

Baja lengua.

Porta y cubreobjetos.

Portaobjetos.

Cubreobjetos.

Etiquetas.

MATERIAL BIOLGICO :

Clulas del epitelio bucal de mujeres y hombres.

REACTIVOS :

Barniz o parafina.

Agua destilada.



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Colorante de acetorcena.

cido clorhdrico 0.1 M.

Acetorcena al 2%.

Mezcla de cido actico al 45% y alcohol etlico (3:1).

TCNICA:

Enjuagar la boca con agua de cao 1 2 veces. Se obtuvieron clulas de la mucosa bucalmediante raspado con esptula; las clulas fueron transferidas a una lmina porta-objetos yfijadas en una mezcla de etanolter (1:1), durante no menos de una hora.

Las lminas fueron sumergidas en etanol 70% durante 10 a 15 minutos, tenidas con una

solucin alcohlica de carbolfucsina bsica al 3% durante 15 minutos, pasadas por unabatera de alcoholes de etanol de 70%, 95% y 100% y luego dejadas en xilol durante 10minutos.

El recuento se realiz en no menos d

biocel final.pdf

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