bd leucocount kit - bdbiosciences.comРеагенси и материјали који су...

1

Becton, Dickinson and CompanyBD Biosciences2350 Qume DriveSan Jose, CA 95131 USA

Benex LimitedPottery Road, Dun Laoghaire,Co. Dublin, IrelandTel +353.1.202.5222Fax +353.1.202.5388

BD BiosciencesEuropean Customer SupportTel +32.2.400.98.95Fax [email protected]

Becton Dickinson Pty Ltd,4 Research Park Drive,Macquarie University Research Park,North Ryde NSW 2113, Australia

Becton Dickinson Limited,8 Pacific Rise, Mt. Wellington,Auckland, New Zealand

BD, BD логотип и други жигови су власништво компаније Becton, Dickinson and Company. © 2015 BD

IVD

06/2015 23-19063-08

[email protected]

BD Leucocount™ KitЗа бројање резидуалних леукоцита у леукоредукованим крвним производима

50 тестова – каталошки број 340523

1. НАМЕНА

НАПОМЕНА По Директиви 98/79/EC за медицинске уређаје који се користе за in vitro дијагностику (IVD), овај производ има ознаку CE и доступан је у Европи за употребу на систему BD FACSVia™ и проточном цитометру BD FACSCalibur™. Систем BD FACSVia није доступан у САД.

Намена проточног цитометра BD FACSCaliburКомплет BD Leucocount™ kit је намењен за бројање резидуалних леукоцита (rWBC) у леукоредукованим крвним производима.

Намена система BD FACSVia (CE-IVD)Комплет BD Leucocount kit је намењен за in vitro дијагностичку употребу на систему BD FACSVia помоћу клиничког софтвера BD FACSVia™. Комплет је намењен за бројање резидуалних леукоцита (rWBC) у леукоредукованим крвним производима.

2. РЕЗИМЕ И ОБЈАШЊЕЊЕ

Присуство леукоцита (WBC) у крвним и тромбоцитним продуктима се повезује са повећаном учесталошћу фебрилних реакција на трансфузију, преносом цитомегаловируса и алоимунизацијом на HLA антигене код прималаца трансфузије.1-3 Леукоредукција, прикупљање тромбоцита путем аперезе или обрада након прикупљања помоћу специјалних филтера може да смањи број WBC на 5 х 106 по јединици или мање, што смањује компликације повезане са трансфузијом.4,5 Комплет BD Leucocount kit је осмишљен да обезбеди ефикасан, осетљиви метод за бројање rWBC-а помоћу проточне цитометрије уз истовремену елиминацију ограничења везаних за друге методе.6,7 Тест BD Leucocount садржи епрувете

2

BD Trucount™ tubes за одређивање апсолутног броја ћелија за rWBC у једној епрувети. Америчка управа за храну и лекове (FDA) је препоручила употребу проточне цитометрије као метод бројања за процену леукоредукованих крвних производа.8

3. ПРИНЦИПИ ПОСТУПКА

Реагенс BD Leucocount садржи пропидијум јодид (PI). PI је боја за нуклеинску киселину која, када се користи са рибонуклеазом, боји само ћелијску ДНК. Бела крвна зрнца су ћелије са једром које садржи ДНК и зато су обојена бојом. Честице без језгра (укључујући тромбоците и црвена крвна зрнца) се не бојe овим реагенсом. Епрувете BD Trucount™ tubes садрже грануле које делују као унутрашња референца за прецизно одређивање апсолутног броја резидуалних леукоцита. Одговарајући узорци се комбинују са лиофилизованим талогом гранула у епруветама BD Trucount tubes пре бојења. Након бојења rWBC, узорци се прикупљају на проточном цитометру. Апсолутни бројеви rWBC се одређују употребом једноставног израчунавања на основу броја гранула и запремине узорка.

4. РЕАГЕНСИ

Комплет BD Leucocount kit садржи реагенс BD Leucocount и епрувете BD Trucount tubes, довољно за 50 тестова. Реагенс BD Leucocount садржи:

• PI, боја за нуклеинску киселину

• 0,1% натријум азида

• рибонуклеазу, за ензимску разградњу РНК на тромбоците и ретиколуците

• детерџент, који чини пропустљивом ћелијску мембрану како би омогућио продор пропидијум јодида (PI)

• пуфере, за стабилизацију обојеног узорка

Епрувете BD Trucount tubes садрже лиофилизовани талог флуоресцентно обојених гранула од 4,2 µm који се користи као интерни стандард за израчунавање апсолутног броја.

Мере опреза

• За in vitro дијагностичку употребу.

• Додавање прецизне запремине узорка је од кључног значаја. Пипете морају да буду калибрисане тако да могу да испуштају тачно 100 µl узорка. Ако је неопходно, обавите поступак инверзног пипетирања према упутствима произвођача пипете.

• Треба да водите рачуна да избегнете контаминацију реагенса, јер у том случају можете да добијете абнормалне резултате.

• Не користите реагенсе ако приметите било какву промену у изгледу. Таложење или губитак боје указује на нестабилност или кварење.

• Пре употребе прегледајте епрувету BD Trucount tube како бисте се уверили да је талог нетакнут и да се налази испод држача.

• Број гранула се разликује у зависности од серије епрувета BD Trucount tubes. Приликом израчунавања апсолутних бројева ћелија, од пресудног је значаја да користите број гранула који је приказан на серији епрувета BD Trucount tubes које тренутно користите. Не мешајте различите серије епрувета у истом тесту.

3

УПОЗОРЕЊЕ Сви биолошки узорци и материјали који дођу у контакт са њима сматрају се биолошки опасним. Рукујте њима као да могу да пренесу инфекције9,10 и одлажите их имајући у виду одговарајуће мере опреза које су у складу са федералним, државним и локалним прописима. Никада не користите пипету устима. Носите одговарајућу заштитну одећу, наочаре и рукавице.

Складиштење и руковање

• Чувајте реагенс BD Leucocount на температури од 2°C до 8°C. Не користите га након истека рока трајања назначеног на налепници.

• Избегавајте непотребно излагање реагенса светлости.

• Немојте да замрзавате реагенсе нити да их излажете директној светлости током складиштења или инкубације са ћелијама. Чувајте бочице са реагенсом сувим.

• Чувајте епрувете BD Trucount tubes у оригиналној кесици са фолијом на температури од 2°C до 25°C. Да бисте избегли могућу кондензацију, отворите кесицу тек након што достигн е собну температуру и пажљиво је поново залепите одмах након узимања епрувете. Проверите десикант приликом сваког отварања кесице. Ако је десикант променио боју из плаве у љубичасту, баците преостале епрувете. Епрувете употребите у року од једног сата од уклањања из кесице са фолијом. Када се кесица отвори, епрувете су стабилне наредних месец дана. Не користите након истека рока трајања назначеног на амбалажи.

5. ИНСТРУМЕНТ

Комплет BD Leucocount kit је намењен за употребу на проточном цитометру који је опремљен одговарајућим хардвером и софтвером. Цитометар мора да има ласер од 488-nm способан да детектује предње расипање (FSC) и бочно расипање (SSC) и најмање двобојну флуоресценцију. Он мора да буде способан и да одреди праг или дискриминацију помоћу канала FL2.

Можете да користите софтвер BD CellQuest™ Pro за прикупљање и анализу података на цитометру марке BD FACS™, као што је проточни цитометар BD FACSCalibur са опционалним уређајем BD FACS™ Loader. За ове цитометре користите грануле BD Calibrite™ beads за подешавање напона фотомултипликаторске цеви (PMT), компензацију флуоресценције и за проверу осетљивости инструмента пре употребе.

Можете да користите и клинички софтвер BD FACSVia на проточном цитометру BD FACSVia са опционалним уређајем BD FACSVia Loader. За овај цитометар користите грануле BD™ CS&T beads за контролу квалитета инструмента, да бисте проверили мерења и перформансе инструмента.

Резултате можете да добијете употребом проточних цитометара које није произвела компанија BD Biosciences. Конфигуришите цитометар за двобојну обраду пратећи препопруке произвођача.

6. ПРИКУПЉАЊЕ И ПРИПРЕМА УЗОРКА

За овај поступак потребно је најмање 100 µl узорка. Можете да користите узорке који садрже адитиве. За свеже прикупљене узорке без адитива:

4

1. Прикупите узорке еритроцита (RBC) и тромбоцита према упутствима произвођача.

2. Припремите и обрадите узорке у року од 48 сати након леукоредукције.

Чувајте узорке RBC-а на температури од 2°C до 8°C док не буде спремни за бојење. Чувајте узорке тромбоцита на собној температури (од 20°C до 25°C) док не буде спремни за бојење.

Услови који утичу на резултате

• Присуство EDTA-е у узорку може да утиче на резултате.

• Не користите претходно фиксиране и складиштене узорке.

• Узорци без адитива који се пре третирања бојом чувају у фрижидеру могу да дају абнормалне резултате.

7. ПОСТУПАК

Обезбеђени реагенсиРеагенс BD Leucocount, довољан за 50 тестова и епрувете BD Trucount tubes.

Реагенси и материјали који су потребни, али нису обезбеђени

• BD Leucocount контроле (каталошки број 341001, 341002, 341003) или еквивалентне. Можете да користите друге контролне материјале, али ће за то бити потребна потврда корисника.

• Falcon®* полипропиленске тест епрувете од 12 x 75 mm за једнократну употребу или еквивалентне

• Вртложна мешалица

• Микропипета са наставцима

За цитометре марке BD FACS са инсталираним софтвером BD FACSComp™:

• Грануле BD Calibrite™ beads (каталошки бројеви 349502 или 340486)

За цитометре BD FACSVia:

• Грануле BD CS&T beads (каталошки бројеви 656504 и 656505)

Поступак бојења

ОПРЕЗ Пипетом нанесите узорак и реагенсе низ зидове сваке епрувете, непосредно изнад металног држача. Ако узорак остане по зидовима епрувете, неће се обојити овим реагенсом. Не додирујте талог гранула.

1. Пажљиво поделите 200–400 µl добро измешаних узорака еритроцита или тромбоцита у чисту полипропиленску епрувету димензија 12 х 75 mm.

НАПОМЕНА Користите полипропиленске епрувете за чување узорака, не за бројање леукоцита у узорцима еритроцита или тромбоцита.

2. Извадите епрувете BD Trucount tubes из кесице са фолијом и одмах поново затворите кесицу.

3. Означите сваку епрувету. Припремите узорке у року од 1 сата.

НАПОМЕНА Пре употребе проверите да ли је талог гранула нетакнут и испод металног држача на дну епрувете BD Trucount tube. Уколико није, баците епрувету и узмите другу.

4. Додајте 100 µl добро измешаног узорка (тромбоцита, еритроцита, контролних гранула) у означену епрувету BD Trucount tube.

5. Додајте 400 µl реагенса BD Leucocount у сваку епрувету.* Falcon је регистровани жиг компаније Corning

Incorporated.

5

6. Затворите епрувете и лагано их измешајте. Не мешајте их дуже од 15 секунди.

7. Инкубирајте епрувете 5 минута у мраку на собној температури.

8. Чувајте епрувете на тамном месту док не буду спремне за прикупљање. Узорци могу да се прикупе до 24 сата након бојења.

Контрола квалитетаПрепоручујемо обраду контрола BD Leucocount сваког дана употребе да бисте обезбедили апсолутне бројеве резидуалних леукоцита око кључних граничних вредности ваше лабораторије. Осим тога, препоручује се обрада контрола у свакој смени.

1. Обојите контроле као узорке.

2. Прикупите контролне узорке користећи поступке описане у одељку Прикупљање узорака.

Интензитет флуоресценције контролних ћелија BD Leucocount може незнатно да се разликује од леукоцита без конзерванса. Погледајте Слику 1, Слику 2 и Слику 6.

Ако користите проточни цитометар марке BD FACS са инсталираним софтвером BD FACSComp и, ако је неопходно, креирајте и сачувајте шаблон за прикупљање/анализу контролних узорака, са исправно прилагођеном облашћу R2. Узорак са помоћним границама може да буде користан у дефинисању очекиваног интензитета флуоресценције леукоцита присутних у крвним продуктима. Погледајте одељак Помоћно одређивање граница (опционално) за више информација. За цитометре BD FACSVia, границе окружују нормалне и контролне ћелије.

Спроведене контроле квалитета требало би да дају резултате еквивалентне очекиваним вредностима.

Слика 1 Контролни узорци високог нивоа

Слика 2 Контролни узорци ниског нивоа

Област Јављања

R1 10.000

R2 320


R1 10.000

R2 34

0 FL1-H 10000

FL2-

H10

00

0 FL1-H 1000

0FL

2-H

1000

6

Подешавање инструментаОвај одељак пружа смернице за подешавање инструмента.

Подешавање није потребно за проточни цитометар BD FACSVia зато што дефиниције теста за свако одређивање дефинишу подразумевана подешавања за прикупљање и границу обраде. Упутства за обраду узорка на овом цитометру погледајте у приручнику Упутство за употребу система BD FACSVia.

Корисници цитометара марке BD FACS који захтевају подешавање инструмента морају да потврде перформансе инструмента помоћу гранула BD Calibrite beads или еквивалентних. Корисници проточних цитометара који нису марке BD морају да прате препоруке произвођача за потврду перформанси.

Упутства о аутоматском обављању подешавања за BD Leucocount помоћу софтвера BD FACSComp (верзија 4.1 или новији) потражите у упутству BD FACSComp Software User’s Guide (Кориснички приручник за софтвер BD FACSComp).

Да бисте обавили ручно подешавање:

1. Припремите епрувету за подешавање инструмента тако што ћете додати 500 µl физиолошког раствора са фосфатним пуфером (PBS) у означену епрувету BD Trucount tube.

2. Обрадите епрувету за подешавање инструмента у режиму Setup (Подешавање) и извршите следећа подешавања:

• Поставите све поставке компензације на 0,0%.

• Подесите FSC на појачање LINEAR.

• Подесите FL1, FL2 и SSC на појачање LOG. Користите вредности канала.

• Подесите FL2 праг на приближно 300 како бисте елиминисали отпад.

• У оквиру Acquisition and Storage (Прикупљање и складиштење) потврдите да је резолуција инструмента 1024.

3. Прилагодите напоне фотомултипликаторске цеви (PMT) за SSC, FL1 и FL2 да бисте поставили грануле BD Trucount на одговарајуће средње вредности канала како је описано у наставку.

• Док приказујете SSC хистограм (Слика 1), прилагодите напон PMT-а за SSC да бисте поставили грануле на канал 700 ± 20.

Слика 3 SSC хистограм

• Док приказујете FL1 хистограм (Слика 2), прилагодите напон PMT-а за FL1 да бисте поставили грануле на канал 800 ± 20.

Маркер ЈављањаСредња вредност

Сви 8340 696,54

M1 8249 695,38

SSC-H 10000

020

0

7

Слика 4 FL1 хистограм

• Док приказујете FL2 хистограм (Слика 5), прилагодите напон PMT-а за FL2 да су грануле на каналу 700 ± 20.

Слика 5 FL2 хистограм

4. Сачувајте подешавања инструмента.

Прикупљање узоракаОвај одељак пружа упутства за прикупљање узорка помоћу цитометра марке BD FACS са инсталираним софтвером BD FACSComp. Упутства о прикупљању узорака помоћу других цитометара погледајте у приложеном упутству за употребу.

1. Креирајте тачкасти дијаграм који приказује FL1 у односу на FL2.

2. Започните прикупљање података о припремљеном узорку. Ако користите уређај BD FACS Loader, препоручује се почетно мешање од 10 секунди и међумешање од 3 секунде након сваке епрувете. Измешајте садржај епрувета непосредно пре него што их ставите у држаче уређаја BD FACS Loader. Комплетна упутства за коришћење уређаја BD FACS Loader потражите у документу BD FACS Loader User’s Guide (Водич за кориснике уређаја BD FACS Loader).

3. Без чувања података креирајте области R1 и R2 које садрже грануле BD Trucount и rWBC-е, тим редом (Слика 6).


Сви 8340 799,46

M1 8203 797,95


Сви 8340 701,04

M1 8121 698,72

200

0

0

1000FL1-H

0

350

1000

0

FL2-H

8

Слика 6 Тачкасти дијаграм који приказује FL1 у односу на FL2 са подацима из леукоредуковане јединице тромбоцита

4. Потврдите да је праг за FL2 исправно подешен.

5. Прикупите и сачувајте сва јављања. Зауставите прикупљање након прикупљених 10.000 јављања у области R1 (области гранула).

Анализа податакаОвај одељак пружа упутства за анализу података помоћу цитометра марке BD FACS са инсталираним софтвером BD FACSComp. Упутства о анализи података помоћу других цитометара погледајте у приложеном упутству за употребу.

1. Да бисте започели анализу, креирајте тачкасти дијаграм који приказује FL1 у односу на FL2 са статистичким подацима и областима R1 и R2 (Слика 6).

2. Прибавите статистичке податке о области за податке из узорка.

3. Обавите израчунавања како је описано у одељку Резултати.

Помоћно одређивање граница (опционално)

НАПОМЕНА Проточни цитометар BD FACSVia не користи помоћно одређивање граница.

Узорак за помоћно одређивање граница можете да припремите тако што ћете у размери 1:100 разредити ABO типизирани сегмент еритроцита (RBC) који није леукоредукован, користећи филтриране еритроците, плазму, PBS са 2% серума говеђег фетуса (FBS) или течни преносник BD FACSFlow™ sheath fluid као разређивач. (Препоручујемо ABO типизацију како бисте избегли аглутинацију еритроцита.)

1. Пратите поступак бојења за BD Leucocount да бисте припремили узорак за помоћно одређивање граница.

2. Поставите узорак за помоћно одређивање граница на порт за убризгавање узорка.

3. Прикупите податке о узорку за помоћно одређивање граница у режиму подешавања.

4. Како се јављања приказују, прилагодите области R1 и R2, по потреби.


R1 10.000

R2 83

0

0 FL1-H

FL2-

H10

00

1000

9

8. РЕЗУЛТАТИ

Апсолутни број rWBC-а (А) у узорку се одређује следећим израчунавањем:

A = (B/C) x (D/E)

где је:

A= апсолутни број rWBC/µl

B = број јављања WBC у области R2

C = број јављања гранула у области R1

D = број гранула по епрувети†

E = обојена запремина узорка

Множењем овог резултата са запремином паковања (у µl) добија се укупан број WBC-а у целом паковању.

Неки системи, попут система BD FACSVia, аутоматски обављају ово израчунавање. У систему BD FACSVia, област R2 садржи јављања леукоцита, а област R1 садржи јављања гранула.

9. ОГРАНИЧЕЊА

• Додавање прецизне запремине крви је од кључног значаја када се користе епрувете BD Trucount tubes. Пипете које се користе треба да буду калибрисане тако да могу да испуштају тачно 100 µl узорка.

• Лагано измешајте узорке непосредно пре њихове обраде на проточном цитометру да бисте обезбедили темељну поновну суспензију ћелија и гранула.

• Еритроцити са једром садрже нуклеинску киселину и могу да се детектују као rWBC-и у овом тесту. Еритроцити са једром нису, међутим, присутни у количинама које се могу детектовати у крви здравих појединаца.11

• Не препоручује се употреба EDTA са реагенсом BD Leucocount.

• За САД:

ОПРЕЗ Савезни закон ограничава да продаја овог уређаја може да се обави само од стране лиценцираног стручњака или по његовом налогу.

10. ФУНКЦИОНАЛНЕ КАРАКТЕРИСТИКЕ

Прецизност проточних цитометара BD FACSCaliburУ две клинике спроведено је истраживање да би се проценила прецизност између два бојења. Припремљени су узорци еритроцита и узорци тромбоцита, а затим су прикупљени подаци о њима. Резултати су приказани у Табели 1.

† Број гранула специфичан за серију је назначен на кесици са фолијом BD Trucount епрувета.

Табела 1 Прецизност између два бојења за комплет BD Leucocount kit у узорцима

еритроцита и тромбоцита

Тип узорка

Опсег WBC/µl

Број узорака

Сре-дња вре-дност SDa

a. SD = стандардно одступање

%CVb

b. CV = коефицијент варијације

Ери-троцити (RBC)

0–1 15 0,4 0,17 43

1–5 22 2,2 0,4 19

5–25 13 9,5 1,1 11

25–300 19 97,0 5,6 6

Тром-боцити

0–1 21 0,4 0,13 34

1–5 13 2,4 0,35 14

5–25 13 11,0 0,87 8

25–300 16 96,0 4,96 5

10

Стабилност проточних цитометара BD FACSCaliburСпроведено је истраживање на једној клиници да би се проценила стабилност узорка и бојења. Стабилност узорка је процењена поређењем основног узорка (обојеног и анализираног у року од 1 сата након леукоредукције) са аликвотом узорка који је чуван 24 или 48 сати (обојен и анализиран у року од 5 минута). Ови резултати су приказани у Табели 2.

Стабилност обојеног узорка је процењена поређењем основног узорка (обојеног и анализираног у року од 1 сата након леукоредукције) са обојеним узорцима након 24 сата, а затим чуваним 24 сата пре прикупљања података (Табела 3).

Узорци тромбоцита и еритроцита могу да се тестирају до 48 сати након леукоредукције. Тромбоците треба да чувате на собној температури, а еритроците у фрижидеру. Свежи узорци и они стари 24 сата могу да се прикупе до 24 сата након бојења. Поред тога, узорци који су чувани 48 сати, а затим обојени, стабилни су најмање 60 минута.

Тачност проточних цитометара BD FACSCaliburТест BD Leucocount и метод Nageotte су упоређени према тачности израчунавања резидуалних леукоцита. Ово поређење је обављено помоћу узорака еритроцита и узорака тромбоцита у три различите банке крви. Резултати су приказани на Слици 7, где је n = 226 за еритроците и Слици 8 где је n = 217 за тромбоците.

Слика 7 Тачност теста BD Leucocount у односу на метод Nageotte у еритроцитном продукту

Табела 2 Промена основних узорака обојених у року од 48 сати након леукоредукције

Тип узорка n

Средња вредност

WBC/µl основног узорка

Промена средње

вредности (WBC/µl)

при старости узорка од

24 сата


вредности (WBC/µl)

при старости узорка од

48 сати

Еритроц-ити (RBC)

7 15,5 –0,45 –0,8

Тром-боцити

7 14,8 0,71 0,53

Табела 3 Промена основних узорака обојених у року од 48 сати након леукоредукције


Средња вредност

WBC/µl основног узорка


вредности (WBC/µl) при старости бојења од

24 сата

Еритроцити (RBC)

7 15,5 –0,25

Тромбоцити 7 14,8 0,53

Нагиб 0,993

Пресек 5,364

R2 0,942

-50

-50

250

250

Средња вредност WBC/µl методе Nageotte

WB

C/µ

l BD

Leu

coco

un

t

11

Слика 8 Тачност теста BD Leucocount у односу на метод Nageotte у тромбоцитном продукту

Упоређивање проточних цитометара

Проточни цитометар BD FACSCaliburНа једној клиници спроведено је истраживање у којем су упоређене перформансе комплета BD Leucocount kit на проточним цитометрима два различита произвођача. По тридесет узорака еритроцита и тромбоцита су процењени регресионом анализом. Табела 4 приказује резултате тих анализа.

Линеарност проточних цитометара BD FACSCaliburКомплет BD Leucocount kit даје линеарне резултате од 1 до 350 WBC/µl.

Стабилност проточних цитометара BD FACSViaСпроведено је истраживање на једној клиници да би се проценила стабилност леукоредукованог узорка и обојеног узорка. Стабилност узорка и стабилност обојеног узорка су процењене поређењем основног узорка (обојеног у року од 6 сати након леукоредукције и обрађеног у року од 30 минута након бојења) са аликвотом узорка који је чуван 24 или 48 сати, како је приказано у Табели 5.

Ови резултати стабилности су приказани у Табели 6 и Табели 7.

Нагиб 1,044

Пресек 2,433

R2 0,940

Табела 4 Поређење резултата за BD Leucocount тест на проточном цитометру BD FACSCalibur у односу на други проточни

цитометар на тржишту

Тип узорка n Нагиб Пресек Корелација


30 1,06 –5,65 0,998

Тромбоцити 30 0,99 –0,28 0,999

-50

-50

250

250

WB

C/µ

l BD

Leu

coco

un

t

Средња вредност WBC/µl методе Nageotte

Табела 5 Временске тачке за тромбоците и еритроците

Старост узорака Старост бојења

У року од 24 сата 24 сата + 15 минута

У року од 48 сати 1 сат + 15 минута

Табела 6 Промена основних узорака чуваних до 24 сата након леукоредукције


Средња вредност rWBC/µl основног узорка

Промена средње вредности (rWBC/µl)

при старости обојеног узорка од

24 сата


50 57,3 -0,3

Тромбоцити 48 60,1 1,8

12

Узорци тромбоцита и еритроцита могу да се тестирају до 48 сати након леукоредукције. Тромбоците треба да чувате на собној температури (од 20°C до 24°C), а еритроците на температури од 1°C до 6°C. Свежи узорци и они стари 24 сата могу да се прикупе до 24 сата након бојења. Поред тога, узорци који су чувани до 48 сати, а затим обојени, стабилни су најмање 60 минута након бојења.

Тачност проточних цитометара BD FACSViaТестови BD Leucocount на проточним цитометрима BD FACSVia и BD FACSCalibur су упоређени према тачности израчунавања резидуалних леукоцита. Ово поређење је обављено помоћу узорака еритроцита и узорака тромбоцита у четири различите клинике. Резултати су приказани на Слици 9 за RBC узорке (n = 278) и Слици 10 за узорке тромбоцита (n = 252).

Слика 9 Тачност комплета BD Leucocount Kit на цитометру BD FACSVia у односу на BD FACSCalibur за RBC

Табела 7 Промена основних узорака чуваних до 48 сати након леукоредукције


Средња вредност rWBC/µl основног узорка

Промена средње вредности (rWBC/µl) при старости обојеног узорка од 1 сата


50 57,3 0,8

Тромбоцити 48 60,1 -0,3

Статистика Вредност

r2 0,99

Нагиб 1,01

Пресек 0,13

BD

FA

CS

Via

rWB

C (ћ

елиј

е/μl

)BD FACSCalibur rWBC (ћелије/μl)

350

300

250

200

150

100

50

00 100 200 300

13

Слика 10 Тачност комплета BD Leucocount Kit на цитометру BD FACSVia у односу на BD FACSCalibur за тромбоците

Линеарност проточних цитометара BD FACSViaЛинеарност комплета BD Leucocount Kit је одређена троструким мерењем 11 равномерно распоређених концентрација аутологних резидуалних леукоцита додатих у леукоредуковане тромбоците и еритроците. Комплет BD Leucocount Kit даје линеарне резултате од 0–350 WBC/µl (тромбоцити) и 0–350 WBC/µl (еритроцити).

Прецизност проточних цитометара BD FACSVia унутар једне локацијеСпроведено је 20 дневно истраживање на једној клиници компаније BD Biosciences, како би се проценила прецизност унутар једне локације. Перформансе за израчунавање апсолутних бројева резидуалних леукоцита су одређене за три проточна цитометра BD FACSVia (два са

аутоматизованим уређајем за учитавање и једним ручним) и три руковаоца прикупљањем података за два нивоа ћелија BD Leucocount RBC Control којима је манипулисано и ћелија BD Leucocount PLT Control као двоструко обојених тест узорака са две серије реагенса BD Leucocount.

Прецизност између клиника проточних цитометара BD FACSViaСпроведено је 20 дневно истраживање на три клинике (две екстерне и једној клиници компаније BD Biosciences) како би се проценила прецизност између клиника. Два нивоа контрола BD Leucocount RBC Control и BD Leucocount PLT Control којима је руковано двоструко су обојене, а затим су сваког дана прикупљани подаци о њима на проточном цитометру BD FACSVia. Два руковаоца су била укључена у

Статистика Вредност

r2 1,00

Нагиб 1,01

Пресек 0,09

BD

FA

CS

Via

rWB

C (ћ

елиј

е/μl

)

BD FACSCalibur rWBC (ћелије/μl)

350

300

250

200

150

100

50

00 50 100 150 200 250 300 350

Tабела 8 Резидуални леукоцити у леукоредукованим тромбоцитима

Ниво узорка

Средња вредност SDa


%CVb


Низак ниво тромбоцита

7,32 0,58 7,96

Висок ниво тромбоцита

15,11 0,92 6,12

Tабела 9 rWBC у леукоредукованим RBC




%CVb


Низак ниво RBC-а

7,58 0,68 9,03

Висок ниво RBC-а

16,50 1,12 6,81

14

истраживање на свакој клиници. Резултати су приказани у Табели 10 и Табели 11.

ГАРАНЦИЈА

Уколико није другачије наведено у било којим важећим општим условима продаје компаније BD за купце изван САД, на куповину ових производа примењује се следећа гаранција.

ГАРАНЦИЈА КОЈА СЕ ИЗДАЈЕ ПРИ ПРОДАЈИ ОВИХ ПРОИЗВОДА ВАЖИ САМО ЗА КОЛИЧИНУ И САДРЖАЈЕ НАВЕДЕНЕ НА НАЛЕПНИЦИ ИЛИ НА ПРОИЗВОДУ У ВРЕМЕ ИСПОРУКЕ КУПЦУ. КОМПАНИЈА BD СЕ ОВИМ ОДРИЧЕ СВИХ ДРУГИХ ГАРАНЦИЈА, ИЗРЕЧЕНИХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАНИХ, УКЉУЧУЈУЋИ ГАРАНЦИЈЕ О ПОДЕСНОСТИ ЗА ПРОДАЈУ И ОДРЕЂЕНУ НАМЕНУ И НЕКРШЕЊЕ ТУЂИХ ПРАВА. ЈЕДИНА ОДГОВОРНОСТ КОМПАНИЈЕ BD ОГРАНИЧЕНА ЈЕ НА ЗАМЕНУ ПРОИЗВОДА ИЛИ ПОВРАЋАЈ НОВЦА У ИЗНОСУ ПРОДАЈНЕ ЦЕНЕ. КОМПАНИЈА BD НЕ СНОСИ ОДГОВОРНОСТ ЗА МАТЕРИЈАЛНУ ШТЕТУ ИЛИ БИЛО КАКВЕ ДРУГЕ СЛУЧАЈНЕ ИЛИ НАКНАДНЕ ШТЕТЕ, УКЉУЧУЈУЋИ ПОВРЕДЕ ИЛИ ФИНАНСИЈСКЕ ГУБИТКЕ КОЈЕ ПРОУЗРОКУЈЕ ПРОИЗВОД.

РЕФЕРЕНЦЕ

1. Wenz B, Gurtlinger K, O'Toole A, Dugan E. Preparation of granulocyte-poor red blood cells by microaggregate filtration. A simplified method to minimize febrile transfusion reactions. Vox Sang. 1980;39:282-287.

2. de Graan-Hentzen YCE, Gratama JW, Mudde GC, et al. Prevention of primary cytomegalovirus infection in patients with hematologic malignancies by intensive white cell depletion of blood products. Transfusion. 1989;29:757-760.

3. Sniecinski I, O'Donnell MR, Nowicki B, Hill LR. Prevention of refractoriness and HLA-alloimmunization using filtered blood products. Blood. 1988;71:1402-1407.

4. Venglen-Tyler V, ed. Leukoreduction of RBC and platelet units. American Association of Blood Banks; 1996:722-725.

5. Dumont LJ, Dzik WH, Rebulla P, Brandwein H. Practical guidelines for process validation and process control of white cell-reduced blood components: report of the Biomedical Excellence for Safer Transfusion (BEST) Working Party of the International Society of Blood Transfusion (ISBT). Transfusion. 1996;36:11-20.

6. Rebulla P, Porretti L, Bertolini F, et al. White cell-reduced red cells prepared by filtration: a critical evaluation of current filters and methods for counting residual white blood cells. Transfusion. 1993;33:128-133.

7. Vachula M, Simpson SJ, Martinson JA, et al. A flow cytometric method for counting very low levels of white cells in blood and blood components. Transfusion. 1993;33:262-267.

8. Center for Biologics Evaluation and Research. Recommendations and Licensure Requirements for Leukocyte-Reduced Blood Products. Rockville, MD: Food and Drug Administration; 1996.

9. Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline—Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2005. CLSI document M29-A3.

10. Centers for Disease Control. Perspectives in disease prevention and health promotion update: universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus, and other bloodborne pathogens in health-care settings. MMWR. 1988;37:377-388.

11. Bull BS, Breton-Corius J. Morphology of the erythron. In: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kripps TJ, eds. Williams Hematology. 5th ed. New York, NY: McGraw-Hill, Inc; 1995:349.

Tабела 10 rWBC у леукоредукованим тромбоцитима




%CVb


Низак ниво тромбоцита

7,30 0,69 9,49

Висок ниво тромбоцита

16,49 1,07 6,46

Табела 11 rWBC у леукоредукованим еритроцитима




%CVb


Низак ниво RBC-а

6,76 0,73 10,76

Висок ниво RBC-а

17,10 1,28 7,51

bd leucocount kit - bdbiosciences.comРеагенси и материјали који су...

Documents