kačių kiaušidžių histologiniai tyrimai
Post on 08-Feb-2017
233 Views
Preview:
TRANSCRIPT
LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS
VETERINARIJOS AKADEMIJA
VETERINARIJOS FAKULITETAS
ANATOMIJOS IR FIZIOLOGIJOS KATEDRA
Eugenija Vaičiūnaitė
KAČIŲ KIAUŠIDŽIŲ HISTOLOGINIAI TYRIMAI
Veterinarinės medicinos vientisųjų studijų
MAGISTRO BAIGIAMASIS DARBAS
Darbo vadovas : doc. Dr. Vidmantas Lasys
Kaunas, 2014
DARBAS ATLIKTAS ANATOMIJOS IR FIZIOLOGIJOS KATEDROJE
PATVIRTINIMAS APIE ATLIKTO DARBO SAVARANKIŠKUMĄ
Patvirtinu, kad įteikiamas magistro baigiamasis darbas „KAČIŲ KIAUŠIDŽIŲ HISTOLOGINIAI
TYRIMAI“.
1. Yra atliktas mano paties/pačios;
2. Nebuvo naudotas kitame universitete Lietuvoje ir užsienyje;
3. Nenaudojau šaltinių, kurie nėra nurodyti darbe, ir pateikiu visą panaudotos literatūros
sąrašą.
(data) (autoriaus vardas, pavardė) (parašas)
PATVIRTINIMAS APIE ATSAKOMYBĘ UŽ LIETUVIŲ KALBOS TAISYKLINGUMĄ ATLIKTAME DARBE
Patvirtinu lietuvių kalbos taisyklingumą atliktame darbe.
(data) (autoriaus vardas, pavardė) (parašas)
MAGISTRO BAIGIAMOJO DARBO VADOVO IŠVADOS DĖL DARBO GYNIMO
(data) (darbo vadovo vardas, pavardė) (parašas)
MAGISTRO BAIGIAMASIS DARBAS APROBUOTAS KATEDROJE/KLINIKOJE
(aprobacijos data) (katedros/klinikos vedėjo/jos vardas,
pavardė)
(parašas)
Magistro baigiamojo darbo recenzentas
(vardas, pavardė) (parašas)
Magistro baigiamųjų darbų gynimo komisijos įvertinimas:
(data) (gynimo komisijos sekretorės (-riaus) vardas, pavardė) (parašas)
Magistro baigiamasis darbas yra įdėtas į ETD IS
(gynimo komisijos sekretorės (-riaus) parašas)
TURINYS
2
ĮVADAS
Naminė katė – (lot. Felis catus), viena iš mažesnių katinių šeimos atstovų.Nuo senų senovės iki šių
laikų katės auginamos kaip naminiai augintiniai.
Katėms būdingas rojos sezoniškumas, taip pat rujai labai daug įtakos turi ne tik sezonas, aplinkos
temperatūra, patino buvimas, bet ir šviesa - apšvietimo galingumas bei trukmė.Tai rodo, jog su
kiaušidėmis glaudžiai sąveikauja hipofizė bei pagumburis.Gilinantis į katinių šeimos patelių
reprodukcines savybes bei jas tiriant labai svarbu įvertinti aplinkos veiksnių įtaką, endokrininius
procesus ir jų įtaką kiaušidėse vykstantiems gametogenezės procesams.
Gametogenezės procesus galima įvertinti atliekant histologinius tyrimus: atlikti morfometrinę
kiaušidžių folikulų analizę, taip pat histologiškai diferencijuoti skirtingus folikulus.Labai svarbu dar
3
ir tai, jog histologiniai kiaušidžių tyrimai leidžia pažvelgti į kiaušidžių mikrostruktūras, tiriant
kiaušidės folikulus ir nežinant gyvūno amžiaus, galima apytiksliai jį nusakyti, taip pat įvertinti ar
kiaušidė funkcionavo normaliai, įvertinti folikulogenezę (folikulų augimą).
Kuomet kalbame apie morfometrinę analizę, šis tyrimo metodas leidžia įvertinti įvairių stadijų
kiaušidžių folikulų dydį, tiksliai išmatuoti pačius folikulus ir ovocitus, pagal gautus duomenis
galima diferencijuoti folikulus į grupes, pagal subrendimo lygį.
Panašų tiriamąjį darbą atliko ir japonų mokslininkai, kurie nagrinėjo kiaušidžių folikulų
morfometriją bei vertino subrendimo lygį (The effect of ovarian status and follicular diameter on
maturational ability of domestic cat oocytes,.Uchikura K, Nagano M, Hishinuma M. 2011.
Department of Theriogenology, School of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture,
TottoriUniversity, Japan).
Mikroskopinė bei morfometrinė analizės ypač aktualios pritaikant jas teorijoje, kuomet lyginami
keli tyrimai, atlikti su skirtingo amžiaus, tačiau tos pat rūšies gyvūnais, tuomet galima stebėti, kaip
skiriasi tiek kokybiškai, tiek kiekybiškai kiaušidės sandara ir joje esančių folikulų skaičius bei
klasės, ir kad tarp tos pačios rūšies ir amžiaus grupės individų tų pačių kiaušidžių folikulų klasių
pastebima dydžių ir dažnai kiekio koreliacija.
Darbo tikslas:
Histologiškai ištirti panašaus amžiaus kačių kiaušidžių įvairių stadijų folikulus: atlikti morfometrinę
analizę ir palyginti gautus duomenis.
Darbo uždaviniai :
1. Atlikti morfometrinę analizę: išmatuoti užuomazginius kačių kiaušidžių folikulus ir juose
esančius ovocitus (taip pat ir branduolį).
2. Išmatuoti pirminius kačių kiaušidžių folikulus ir juose esančius ovocitus .
3. Išmatuoti antrinius kačių kiaušidžių folikulus ir juose esančius ovocitus
1. LITERATŪROS APŽVALGA
4
Surinktoje literatūroje nagrinėjama histologinė kačių ir kitų žinduolių patelių bei žmogaus
kiaušidžių struktūra, aprašomas kiaušidžių folikulų vystymasis bei vystymosi stadijos, taip pat
neuroendokrininės reguliacijos įtaka kiaušidžių folikulų vystymuisi ir fiziologiniai lytinio ciklo
dėsningumai kačių organizme.
Žinduolių patelių lytinei sistemai būdinga identiška anatominė sandara : kiaušidės, kiaušintakiai,
gimda, makštis, lytinės lūpos ir varputė.Vienas iš svarbiausių patelių reprodukcinių organų yra
kiaušidės.Jos vykdo keturis svarbius reprodukcijai procesus :
1.Gametogenezę.
2.Steroidinių hormonų sintezę ir sekreciją(estrogeno ir progesterono).
3.Hormoninės reguliacijos funkciją bei postnatalinio augimo skatinimą.
4.Inicijuoja antrinių lytinių požymių pasireiškimą.
(Schatten H., Constantinescu M.G., Comparative reproductive biology ,99 p.)
Kiaušidžių funkcija glaudžiai susijusi su pagumburiu bei hipofize.Pagumburio –hipofizės -
kiaušidžių (angl. hypothalamic-pituitary-gonadal HPG) sistema, kuri reguliuoja reprodukcinę
funkciją („The role of hypothalamic-pituitary-gonadal hormones in the normal structure and
functioning of the brain.“Vadakkadath Meethal S, Atwood C.S.) – tai neuroendokrininė reguliacija.
1.1 Kačių lytinis ciklas
Katės dažniausiai lytinę brandą pasiekia sulaukusios 10 mėnesių, o katinai 9-12 mėnesių amžiaus.
Kačių reprodukcinės fiziologinės savybės įdomios tuo, kad katės yra sezoniškai poliestriniai
gyvūnai („Comparative reproductive biology“ Schatten H., Constantinescu M.G. 103p.).Tai reiškia
jog jos gali periodiškai rujoti viso dauginimosi sezonono metu , jei ciklo nenutraukia nėštumas arba
kiti veiksniai.
Kačių ruja vyksta sezoniškai: šiaurinėse klimato juostose prasideda apytiksliai vasario ir baigiasi
spalio mėnesį.Daug įtakos rujai turi šviesa.Tai įrodo atliktas eksperimentas, kuomet (ne rujos
sezono laikotarpyje) mėnesį laiko 12 valandų per parą katės buvo laikomos 150 lux. šviesoje, po to
14 valandų per parą tokiame pačiame apšvietime ir praėjus 15 dienų, 5 iš 6 kačių pradėjo rujoti.
(„Induction of oestrus in cats by photoperiodic manipulations and social stimuli“ CHANTAL
MICHEL Laboratory Animals 1993.).Todėl katės priskiriamos prie gyvūnų, kurių lytinis aktyvumas
5
padidėja, kuomet šviesusis paros laikotarpis tampa ilgesnis už tamsųjį. Šviesa veikia endokrininę ir
nervų sistemą .Dėl šviesos poveikio kankorežinė liauka (glandulla pinealis) sintetina mažiau
melatonino.Dėl melatonino poveikio kačių lytinis aktyvumas sumažėja ((Goericke-Pesch S (2010)
Reproduction control in cats: new developments in non-surgical methods. J Feline Med. Surg.
12(7):539-546), todėl melatonino implantai naudojami veterinarinėje medicinoje kačių rujos
kontrolės tikslais), o sumažėjus šio hormono kielio lytinis aktyvumas suintensyvėja.
Dar viena kačių reprodukcinė ypatybė yra ta, jog joms būdinga provokacinė ovuliacija (ovulatio
provocata) – tai reiškia, jog ovuliacija įvyksta tik po lytinio akto, paprastai per 27 valandas
(Naminių gyvūnų mikroskopinė anatomija, 2006 Padaiga A., Lasys V., Sederevičius A. 166p.)
Kačių lytinis ciklas - jį sudaro penkios fazės.
1 Lentelė: Lytinio ciklo fazės:
Lytinio ciklas
1.Proestus - Priešrujis
2.Estrus - Ruja
3.Metestrus - Porujis
4.Diestrus - Tarprujis
5.Anestrus – Ramybės fazė
Proestrus ir estrus – šias fazes apima folikulinė stadija.
Proestus – Priešrujis. Tai paruošiamoji fazė prieš rują, pasireiškia lyt. organų hiperemija.Šiso fazės
metu didėja estrogenų koncentracija, auga folikulai, vystosi endometriumas.
Estrus – Ruja. Tai estrogenų koncentracijos piko metas, kai patelė pasiruošusi poruotis su patinu.
Ovuliacija įvyksta, tik po poravimosi su patinu, dažniausiai rujos pabaigoje.Po to estrogeno
koncentracija ima mažėti.
Metestrus – Porujis.Šiuo metu vyksta corpus luteum vystymasis ir progesterono sekrecija.
Diestrus – Tarprujis.Šiuo metu corpus luteum išskiria didelius kiekius progesterono.Jei nėra įvykęs
apsivaisinimas, geltonasis kūnas (corpus luteum) rezorbuojasi – vyksta liuteolizė, dėl
prostaglandino PGF2ά poveikio, kuris sintetinamas gimdoje.Tuomet progesterono koncentracija
mažėja, dėl to gonadotropinų koncentracija padidėja ir taip vėl pradedamas naujas rujos (estrus)
ciklas.
Anestrus – Ramybės fazė.Tai fazė, kurios metu kiaušidės būna neaktyvios. (Schatten H.,
Constantinescu M.G. Comparative reproductive biology.103psl.).Ši fazė trunka iki kito poravimosi
sezono, nes katės yra sezoniškai poliestriniai gyvūnai.
6
1.2. Kačių kiaušidžių struktūra
Kiaušidė gali būti skirstoma į dalis: žievinę dalį (išorinę) bei šerdinę dalį (vidinę).
Kiaušidė yra sudaryta iš dviejų komponentų: stromos ir parenchimos, todėl pagal sandaros pobūdį
kiaušidė priskiriama parenchiminiams organams (1pav.) .
Kiaušidės stromą (stroma ovarii) sudaro intersticinis audinys, kuris suteikia kiaušidei formą, tai
tarsi kiaušidės žievės ir šerdies griaučiai.Stromoje yra kraujagyslių, limfagyslių bei nervų įeinančių
į kiaušidę per kiaušidės vartus (hilus ovarii) (8 pav.)..
Parenchiminė dalis (ypač žievėje) svarbi funkciškai.Šerdinėje dalyje yra įsiterpusios stambios
kraujagyslės, nervai.
1pav.Katės kiaušidė
http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-
_Oogenesis_and_Ovulation
1.2.1.Kiaušidės dangalai
Kiaušidės paviršių dengia paviršinis epitelis (epithelium superficiale), kurį sudaro mikrogaureliniai
kūbiškieji epiteliocitai (2pav.).Kitas kiaušidės dangalas, kuris yra po paviršiniu epiteliu – tai
7
balsganasis dangalas (tunica albuginea), kuris sudarytas iš glaudžiojo netaisyklingojo kolageninio
jungiamojo audinio, kuriame yra negausus kraujagyslių tinklas.
2 pav. Kiaušidės dangalai – histologinė sandara (x 10 padidinimas)
http://www.medicalhistology.us/twiki/bin/view/Main/FemaleReproductiveSystemAtlas16
1.2.2. Kiaušidės žievė
Kiaušidės žievė (cortex ovarii) (3pav.) : kačių kiaušidėms, kaip ir daugelio mėsėdžių būdinga tai,
jog kiaušidės žievėje yra kiaušidės endokrinocitai, folikulai ir geltonasis kūnas (corpus
luteum).Žievės stroma, kuri sudaryta iš puriojo kolageninio jungiamojo audinio, gaubia
parenchimos elementus – endokrinocitų sankaupas, taip pat kiaušidės folikulus ir geltonąjį kūną.
3 pav.Katės kiaušidės žievės histologinė struktūra su žievėje esančiais įvairių stadijų folikulais
http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-
_Oogenesis_and_Ovulation
2013 m. gruodis 22 d. 19:53
1.2.3. Kiaušidės šerdis
8
Kiaušidės šerdį (medulla ovarii) (4pav.) sudaro purusis kolageninis audinys ir neruožuotųjų
miocitų virželiai. Mėsėdžių kiaušidės šerdies sandarai yra būdinga tai, jog joje yra kiaušidės tinklo
(rete ovarii) liekana, kurią sudaro šerdies stygos (chorda medullaris).
4 pav. Kiaušidės šerdis
http://meddic.jp/ovarian_medulla
1.2.2.1 Kačių kiaušidžių folikulai ir jų klasifikacija
Kiaušidžių folikulai, pagal dydį ir juos gaubiančių dangalų išsivystymo lygį, skirstomi į
užuomazginius, pirminius, antrinius, tretinius( pūslinius) kiaušidės folikulus.
Užuomazginis kiaušidės folikulas( folliculus ovaricus primordialis) (5 pav. 9 Pav.) sudarytas iš
pirminio ovocito, kurį gaubia vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių epiteliocitų.Mikroskopu
stebint kiaušidės žievę, galima pastebėti, jog šie folikulai yra po balsganuoju dangalu, kiaušidės
periferijoje.
5 pav.Autorės nuotrauka.Užuomazginis folikulas x40.
Pirminis kiaušidės folikulas (folliculus ovaricus primarius) (6 pav., 7 pav. ) sudarytas iš pirminio
ovocito ir vieno sluoksnio kūbiškųjų arba stulpiškųjų epitelio ląstelių, kurias nuo stromos skiria
pamatinė membrana.
9
6 pav.Autorės nuotrauka. Pirminis folikulas. X40
7 pav. http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf
Antrinis kiaušidės folikulas (folliculus ovaricus secundarius). Pirminis ovocitas auga bei
kinta.Pirmas folikulinių epiteliocitų sluoksnis, gaubiantis ovocitą – tai stulpiškieji epiteliocitai,
kurie formuoja spindulinį vainiką (corona radiata), taip pat šios ląstelės sintetina skaidriąją zoną
(zona pellucida).Kai formuojasi antrinis folikulas, susidaro folikulinė ertmė (antrum folliculare) (11
pav.), kuri formuojantis pūsliniam folikului prisipildo folikulinio skysčio. (10 pav.)
Tretinis arba pūslinis folikulas (folliculus ovaricus vesiculosus) –sudarytas iš pirminio ovocito.Jį
gaubia sienelė, kurią sudaro vidinis folikulinių ląstelių sluoksnis bei išorinis žievės jungiamojo
audinio apvalkalėlis, kuris diferencijuojamas į išorinį apvalkalėlį (theca externa) ir vidinį
apvalkalėlį (theca interna).
Folikulinės ląstelės , supančios pirminį ovocitą skirstomos pagal vietą, kurią užima folikule:
folikulinės ląstelės supančios pirminį ovocitą ir esančios virš zona pellucida yra vadinamos
spindulinio vainiko (corona radiata) ląstelėmis. (Comparative reproductive biology Schatten H.,
Constantinescu M.G.100p).O tos folikulinės ląstelės, kuriso yra atsikišusios nuo vidinės
apvalkalėlio sieneles – tai kiaušialąstės iškylą ( cummulus oophorus ) sudarančios ląstelės.
10
Apvalkalėlis apsuptas endokrinocitų, kurių funkcija yra sintetinti ir išskirti hormonus (estradiolį,
estroną/folikuliną, estriolį).Pūslinis folikulas yra labai didelis palyginti su kitais kiaušidės folikulais,
todėl užma gana daug vietos kiaušidės žievėje.Kačių kiaušidėse susiformuoja net keletas pūslinių
folikulų – tiek, kiek katė atsiveda jauniklių.
Poliovuliacinis folikulas
Atliekant histologinius kiaušidžių tyrimus ir stebint mėginius mikroskopu buvo pastebėtas atipiškas
folikulas : pagal struktūrą buvo galima priskirti antriniams folikulams, tačiau jame buvo ne vienas
pirminis ovocitas, o du, šiek tiek mažesni pirminiai ovocitai.Panašūs atvejai buvo nagrinėti ir
angl.Domestic cat (Felis catus) polyovular follicles (Naminių kačių poliovuliaciniai folikulai)
Miclăus V., I. Groza, L. Oana (2007).
8 pav. Kiaušidė : mažėjančio aktyvumo fazėje
http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf
11
9 Pav. Užuomazginiai folikulai kiaušidėje
http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf
10 pav. Pirminiai folikulai katės kiaušidėje
http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf
12
11 pav. Antrinis folikulas su folikuline ertme
http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf
1.2.2.2 Kačių kiaušidžių folikulų klasifikacija
Kačių kiaušidžių folikulų klasifikavimas daugelyje literatūros šaltinių buvo pagrįstas remiantis
žmogaus bei graužikų kiaušidžių folikulų klasifikacija, mokslinių darbų autoriai klasifikuoja
folikulus skirtingai, priklausomai nuo to, kokie kiaušidžių folikulų tyrimai atliekami.Taip pat
pastebėtina ir tai, jog nėra nustatytos vieningos kačių kiaušidžių įvairių stadijų folikulų
klasifikacijos.
Atliekant histologinius kiaušidžių tyrimus, kurių metu tiriami įvairių stadijų kiaušidžių folikulai
pasitelkiant morfometrinės analizės principus patogiausia suskirstyti kiaušidžių folikulus pagal
išsivystymą ir dydį .Tokį suskirstymą nurodo ir Bristol-Gould S., Woodruff TK. (2006):
Užuomazginiai kiaušidės folikulai - apie ovocitą išsidėstęs vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių
ląstelių.Nurodoma jog užuomazginio folikulo ovocitas gali siekti >25µm.(jei ovocitą supa
plokščiosios folikulinės ląstelės, jis priskiriamas B kategorijai, jei supa kūbiškosios –B/C
kategorijai.
Pirminiai kiaušidės folikulai – ovocitą supa vienas sluoksnis kūbiškųjų arba stulpiškųjų folikulinių
ląstelių.Pirminio ovocito folikulo ovocitas viršija 25µm.
13
Antriniai kiaušidės folikulai – ovocitą supa mažiausiai du, bet dažniausiai daug daugiau sluoksnių
kūbiškųjų epiteliocitų, o juos supa apvalkalėlis (theca).Todėl pagal kūbiškųjų ląstelių sluoksnius
folikulai gali būti vertinamas antrinių folikulų subrendimo lygis.
Tretiniai arba pūsliniai folikulai - įskaitant ir mažus pūslinius folikulus, kurių diametras 300–
1000 µm. Pūsliniai folikulai pasižymi tuo, jog jiems būdingas folikulinė ertmė, pripildyta
folikulinio skysčio. Ši ertmė didėja augant folikului..Kačių subrendusio pūslinio folikulo diametras
gali siekti iki 2 mm.
Ankstesniuose tyrimuose Bristol S.K. and. Woodruff T.K (2003) ( angl. Follicle-restricted
Compartmentalization of TGF-β Superfamily Ligands in the Feline Ovary ) remiasi Gougeon et al.
(angl. Morphometric studies of small follicles in ovaries of women at different ages (1987) –
(Skirtingo amžiaus moterų mažų kiaušidžių folikulų morfometriniai tyrimai )ir Meredith et al.
(angl.Classification of small type B/C follicles as primordial follicles in mature rats (2000)
-Subrendusių žiurkių mažū B/C tipo užuomazginių folikulų klasifikacija) siūloma klasifikacija ,
kuri buvo pritaikyta atliekant tyrimus.
1.2.2.3 ovocitai ir ovuliacija
Užuomazginės lytinės ląstelės kiaušidėse virsta į ovogonijas, o po ovogenezės – į
kiaušialąstes.Skiriamos dvi ovogenezės stadijos : mitozė ir mejozė.Mėsėdžių ovogonijų mitozei
būdinga tai, jog ji trunka ne tik vaisiaus iki atvedimo vystimosi metu, bet ir pirmąsias po atvedimo
savaites. (Naminių gyvūnų mikroskopinė anatomija, 2006 Padaiga A., LasysV., Sederevičius A.
161psl.)
Vėliau įvyksta I mejozė, kurios metu ovogonijos diferencijuojasi į pirminius ovocitus.Antrasis
mejozinis dalijimasi būna tik po ovuliacijos ir sustoja metafazėje, jei įvyksta apsivaisinimas,
baigiamas II mejozinis dalyjimasis http://www.usfca.edu/fac_staff/dever/webmenstruation.pdf .
2.TYRIMO METODIKA
Įsisavintos tyrimų metodikos
Histologinė technika:
1.Histologiniai preparatai paimti operacijos metu fiksuojami 10 proc. formalinu, laikomi
kambario temperatūroje 24 val.
2.Prieš atliekant mėginių pjūvius mikrotomu, jie dehidratuojami 60, 70, 80, 96, 100 proc.
etilo spiritu.Vykdoma laipsninė dehidratacija, tai padeda išvengi audinių struktūros
pokyčių.Mirkoma po 2 val. kiekviename skirtingos koncentracijos spirite.
14
3.Standinimas parafinu.Audiniai apliejami parafinu ir suformuojami parafininiai blokai.
4.Mikrotomu atliekami pjūviai : 10 – 15 vienos kiaušidės pjūvių, 5 µm storio.Pjūviai dedami
ant objektinių stiklelių.Naudojama kas 5 nuopjova. Po to nuopjovos dedamos į 37 °C temperatūros
vandens vonelę, tai padeda išlyginti raukšles, tuomet nuopjovos uždedamos ant stiklelių ir
džiovinamos.
5.Iš pjūvių pašalinamas parafinas.Deparafinavimas : prieš dažant pjūvius, stikleliai su
pjūviais merkiami į ksileną 5 min., nusausinami, tuomet į spiritą 96 proc. 5 min, nusausinami, po to
į distiliuotą vandenį 5 min, nusausinti neliečiant pjūvio.
6.DAŽYMAS HEMATOKSILINU- EOZINU.
1) ant pjūvio užpilama hematoksilino ir laikoma 7 min.;
2)Skalauti vandentiekio vandeniu 5 min.;
3)Eozinas 5 min.;
4)Skalaujama vandeniu 5 min.;
5)Mirkyti spirite : 70, 96 proc. po 4 – 5 s.;
6)Nusausini;
7) 1min. laikyti ksilene;
8)Nuplauti ;
9)Užlašinti Kanados balzamo, uždedamas dengiamasis stiklelis ir prispaudžiamas.
Paruošus kiaušidžių histol. mėginius stebėjimui mikroskopu, vertinami kačių kiaušidžių
folikulai:įvertinama folikulų stadija, dydis (matmenys), gauti duomenys palyginami.
Histologinių preparatų tyrimas
Histologiniai kiaušidžių mėginių tyrimai buvo atliekami OLYMPUS CX 31 mikroskopu,
fotografuojant OLYMPUS N 547 fotoaparatu. Skaitmeninės fotografijos buvo naudojamos
morfometrinei kiaušidžių folikulų analizei atlikti. Pasitelkiant programą UTHSCSA Image tool 3
version for Windows atliekama morfometrinė analizė, esant reikalui vaizdų kokybė bei
kontrastingumas koreguotas pasitelkiant daugiafunkcijinę vaizdų apdorojimo programą GIMP
pagerinant vaizdinę raišką ir siekiant preciziškumo .Statistinė analizė atlikta naudojant programą
MS Excel 2003 bei kompiuterinė programa „Graph Pad QuickCalcs“.
Įvertinus mėginius folikulai sugrupuoti į 3 grupes (klases):
2 Lentelė: folikulų grupės
Nr. Folikulų grupės (klasės)1. Užuomazginiai folikulai .
15
2. Pirminiai folikulai 3. I.Antriniai folikukai – ankstyvojoje stadijoje
Pūslinių folikulų susiformuoja tiek, kiek patelė veda jauniklių : vienvedžių 1, daugiavedžių –
keletas.Katės subrendusio pūslinio folikulo skersmuo esti 2mm.
Tiriamos keturių kačių kiaušidės.Tiriamųjų amžius I - 8mėn., II 1m., III – 1,8 m., IV –
7mėn.Histologinė medžiaga buvo surinkta iš pacientų ovariohisterektomijos metu. Atliekant
procedūrą buvo taikoma sisteminė nejautra.
Atlikti matavimai:
Matuotas užuomazginių, pirminių antrinių ir tretinių folikulų :plotas, diametras.
Skaidriosios zonos storis antriniuose folikuluose.
Ovocitų plotas, diametras.
Ovicituose esančių branduolių plotas, diametras.
Pamatinės membranos storis.
Folikulinių ląstelių diametras.
3.TYRIMŲ REZULTATAI
3.1.Kačių nuo 7mėn. iki 1,8 metų amžiaus užuomazginių folikulų diametrų statistinė bei
morfometrinė analizė, palyginimas.
10
15
20
25
Diametras
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų diametrai
katė I katė II katė III katė IV
3.1 pav.
16
Atlikus matavimus ir statistiškai apdorojus gautus duomenis, rezultatai parodė, jog visų keturių
tiriamų kačių užuomazginių kiaušidės folikulų diametrai yra labai panašūs (pateikiami skaičiavimų
vidurkiai ir standartiniai nuokrypiai):I katė 21,5 ± 1,296 µm, II katė 21,37 ± 0,35µm, IIIkatė 21,19
± 1,04µm, IV katė 22,32 ±0,33µm.
Įvairavimo koeficientas (variacijos koeficientas) 0,04, o išreiškus proc. - 4.Patikimumas p<0,05,
rodo, jog duomenys statistiškai patikimi.
3.2 Kačių nuo 7mėn. iki 1,8 metų amžiaus užuomazginių folikulų plotų statistinė bei
morfometrinė analizė, palyginimas:
300
320
340
360
380
Plotas
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.2 pav.I katė 375,8±16,65 µm², II katė 375,25±14,99 µm², IIIkatė 374,37± 15,7 µm², IV katė 375,3267
±12,4 µm².
Įvairavimo koeficientas 0,034,o proc. 3.Tiriamųjų kačių užuomazginių folikulų plotai labai panašūs,
patikimumas p<0,05, rodo, jog duomenys statidtiškai patikimi.
3.3 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,
palyginimas.
17
10
12
14
16
18
20
Diametras
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų diametrų palyginimas
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.3 pav.I katė 19,63±0,54, IIkatė 19,36±0,53 µm, IIIkatė 19,63±0,84 µm, IVkatė 19,87±1,35
µm.Užuomazginių folikulų ovocitų diametrai yra didesni I katės ir IV katės, tačiau visų keturių
kačių ovocitų diametrai tarpusavyje yra panašūs.Įvairavimo koeficientas yra 0,0395, proc. 4 .
3.4 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas
0
50
100
150
200
250
300
350
Plotai
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.4 pav.
I katė 286,73±2,83 µm², II katė 345,7733±4,31 µm², III katė311,1267±24,77 µm², IV katė
327,98±26,44 µm².Užuomazginių folikulų plotų vidurkiai mažai skiriasi – didesni I ir IV katės.
Įvairavimo koeficientas 0,086, 9%
3.5 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir morfometrinė
analizė, palyginimas.
18
0
1
2
3
4
5
6
Diametras
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.5 pav.
I katė 5,18±0,094 µm, II katė 5,33±0,335 µm, III katė 5,51±0,7 µm, IV katė 5,15±0,6 µm.
Įvairavimo koeficientas 0,084, o proc. 8.Visų keturių kačių užuomazginių folikulų ovocitų
branduolių diametrai labai panašūs.
3.6 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė
analizė, palyginimas.
0
5
10
15
20
25
Plotas
p < 0,05
Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.6pav.
I katė21,23±1,1 µm², II katė 20,21±0,87 µm², III katė 23,4±4,45 µm², IV katė 21,96±3,19 µm².
Įvairavimo koeficientas 0,12, procentinė išraiška : 12%.Užuomazginių folikulų ovocitų branduolių
plotai mažai skiriasi.
19
3.7 Užuomazginių kiaušidės folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė analizė,
palyginimas.
01234567
Matmenys
Katė I Katė II Katė III Katė IV
Užuomazginių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių plotis ir aukštis
plotis aukštis
3.7 pav.
Pločio įvairavimo koeficientas 0,092, procentais - 9%, aukščio - 0,23, procentais- 23%
Pločiai : I katė 6,66±0,54 µm,II katė 6,5±0,61 µm, III katė 6,05±0,62 µm, IV katė 6,49±0,48 µm.
Aukščiai : I katė 1,23±0,29 µm, II katė 1,41±0,50 µm, III katė 0,92±0,349 µm, IV katė 0,93±0,19
µm.Visų keturių kačių užuomazginių folikulų folikulinių ląstelių pločiai tarpusavyje panašūs, tačiau
ženkliai viršija aukščių vidurkius.Kiekvienos katės folikulinių ląstelių aukščių vidurkiai taip pat
panašūs, bet akivaizdžiai mažesni už folikulinių ląstelių plotį.
3.8 Užuomazginių kiaušidės folikulų pamatinės membranos storis
3.8 pav.
I katė 0,70±0,0057 µm,
II katė 0,676±0,041 µm,
III katė 0,69±0,01 µm,
IV katė 0,64±0,173 µm.
Įvairavimo koeficientas
0,04 , o proc. išraiška
4.Visų keturių kačių
užuomazginių folikulų pamatinių membranų storiai labai panašūs.
3.9Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,
palyginimas.
20
p < 0,05
0
0,2
0,4
0,6
0,8
Storis
Užuomazginių folikulų pamatinės membranos storis
Katė I Katė II Katė III Katė IV
0
10
20
30
40
Diametras
p < 0,05
Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.9 pav.
Katė I 36,98±2,62 µm, Katė II 35,04±0,82 µm, Katė III 37,06±0,6 µm, Katė IV 37,33±1,1
µm.Įvairavimo koeficientas 0,043, proc. 4 .Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrai tarpusavyje
mažai skiriasi.
3.10 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
500
1000
1500
Plotas
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.10 pav.
I katė 1005,31±175,132 µm², II katė 937,607±175,13 µm², III katė 1041,08±101,73 µm², IV katė
1086,76±53,29 µm².Įvairavimo koeficientas 0,105, procentais - 10%.Visų tiriamųjų pirminių
kiaušidžių folikulų plotai labai panašūs.
3.11 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,
palyginimas.
21
0
10
20
30
40
Diametras
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.11 pav.
Įvairavimo koeficientas 0,037, proc. 4%.I Katė 35,1±2,5047 µm, II Katė 34,0266±0,861 µm, III
Katė 34,63±0,532 µm, IV Katė 35,246±1,01 µm.Visų keturių kačių pirminių kiaušidžių folikulų
ovocitų diametrai tarpusavyje panašūs.
3.12 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė,
palyginimas.
0
200
400
600
800
1000
Plotas
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.12 pav.
I katė 880,13±70,45 µm², II katė 846,498±23,26 µm² III katė 817,7±31,23 µm²,
IVkatė886,48±108,36 µm².Įvairavimo koeficientas 0,075, procentais 8%.Visų tiriamųjų pirminių
kiaušidžių folikulų ovocitų plotų skaitinės reikšmės labai panašios.
22
3.13 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir
morfometrinė analizė, palyginimas.
0
2
4
6
8
10
Diametras
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.13 pav.
I katė 8,44±0,121 µm, II katė8,43±0,058 µm, III katė 8,646±0,151 µm, IV katė 8,42±0,185 µm.
Visų keturių kačių pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai tarpusavyje labai
panašaus dydžio. Įvairavimo koeficientas 0,000178, procentinė išraiška 0,017%.
3.14 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
20
40
60
Plotas
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.14 pav.I katė 55,213±2,248829 µm², II katė 53,773±3,345106 µm², III katė 59,18± 4,602959 µm², IV katė
54,2± 2,229865 µm².Visų tiriamųjų kačių pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai
dydžiu yra artimi vienas kitam. Įvairavimo koeficientas 0,06, proc. išraiška 6%.
23
3.15 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
1
2
3
4
5
Matmenys
Katė I Katė II Katė III Katė IV
Pirminių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių aukštis ir plotis
Plotis Aukštis
3.15pav.Plotis : I katė 4,336±0,26 µm, II katė 4,35± 0,18 µm, III katė 4,48±0,29 µm,IV katė 4,41±0,26
µm.Įvairavimo koeficientas 0,057, proc. 6.Aukštis : I katė 4,338±0,20 µm, II katė 4,32± 0,21 µm,
III katė 4,49± 0,33 µm, IV katė 4,50±0,40 µm. Įvairavimo koeficientas 0,0683, procentais-
7%.Pirminių kiaušidžių folikulų ląstelių plotis ir aukštis yra panašūs tarpusavyje.
3.16 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storiųstatistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
0,5
1
1,5
Storis
p < 0,05
Pirminių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storis
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.16 pav.I katė 1,166±0,202 µm, II katė 1,003±0,015 µm, IIIkatė 1,046±0,09 µm, IV katė 1,133±0,115 µm.
Įvairavimo koeficientas 0,126, procentinė išraiška 13.Pamatinės membranos storis kiekvienos
tiriamos katės pirminiuose kiaušidžių folikuluose yra labai panašus.
24
3.17 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
70
75
80
85
Diametras
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.17 pav.I katė 83,016±1,63 µm, II katė 82,2±0,91 µm, III katė 81,92±0,32 µm, IV katė 81,97±0,47
µm.Įvairavimo koef. 0,011, proc. 1.Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų diametrai visų tirtų
kačių tarpusavyje yra labai panašūs.
3.18 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
5000
5100
5200
5300
5400
Plotas
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.18 pav.I katė5278,217±101,93 µm², II katė5310,947±22,22 µm², III katė5286,18±22,70 µm², IV
katė5278,433±56,869 µm².Lyginant gautus duomenis diagramoje akivaizdžiai pastebimas
ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotų panašumas. Įvairavimo koeficientas 0,01, proc.1%.
25
3.19 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
20
40
60
Diametras
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų diametras
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.19 pav.I katė 52,94667±1,42 µm, II katė 55,17±1,80 µm, III katė 52,28±0,767 µm, IV katė 53,06±0,728
µm. Ankstyvųjų antrinių ovocitų diametrai yra tarpusavyje panašūs.
Įvairavimo koeficientas 0,0293, procentinė išraiška 3%.
3.20 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
1000
1500
2000
2500
Plotas
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.20pav.I katė 2160,069 ±186,4 µm²,II katė 2467,57±192,5 µm², III katė2161,773±20,939 µm², IV katė
2168,61±25,239 µm². Įvairavimo koeficientas 0,08, procentinė išraiška 8%.
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotai šiek tiek skiriasi, bet tai yra palyginti maži skirtumai,
todėl galima teigti, kad dydžiai panašūs
.
26
3.21 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
5
10
15
Diametras
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.21pav.I katė 10,42±0,746 µm, II katė 10,07±0,676 µm, III katė 9,75±0,279 µm, IV katė
10,01567±0,63 µm. Įvairavimo koeficientas 0,057, procentinė išraiška 6%.Ankstyvųjų antrinių
kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai visų keturių tiriamųjų kačių kiaušidėse labai
panašūs.
3.22 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
50
60
70
80
Plotas
p < 0,05
Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.22 pav.I katė 73,765±1,528 µm², II katė 75,69±1,35 µm², III katė 75,13±0,757 µm², IV katė75,158±1,66
µm².Įvairavimo koeficientas 0,018, procentinė išraiška 2%. Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių
folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė parodė, jog plotai skiriais labai
nedaug.
27
3.23 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.
0
1
2
3
4
Matmenys
Katė I Katė II Katė III Katė IV
Ankstyvųjų antrinių folikulų folikulinių ląstelių plotis ir aukštis
Plotis Aukštis
3.23 pav. Plotis: I katė 3,235±0,247 µm,II katė 2,94±0,247 µm,III katė 3,065±0,285 µm,IV katė
3,29±0,277 µm. Įvairavimo koeficientas 0,09, procentinė išraiška 9 proc..
Aukštis: I katė 3,36±0,25 µm, II katė 3,275±0,275 µm, III katė 3,187±0,21 µm, IV katė 3,36±0,25
µm. Įvairavimo koeficientas 0,075, procentinė išraiška 8proc. Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių
folikulų folikulinių ląstelių matmenų palyginimas rodo, jog tiek plotai , tiek aukščiai yra panašūs.
3.24 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų skaidriosios zonos storis
0
0,5
1
1,5
2
Storis
p < 0,05
Skaidriosios zonos storis
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.24 pav.Skaidriosios zonos storis : I katė 1,5±0,058 µm, II katė 1,7±0,097 µm, III katė 1,6±0,08 µm, IV
katė 1,56±0,062 µm.Visų keturių kačių ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų skaidriosios
zonos storis yra panašus.
Įvairavimo koeficientas 0,059, procentinė išraiška 6 proc.
3.25 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storis
28
0
0,5
1
1,5
2
Storis
p < 0,05
Pamatinės membranos storis
Katė I Katė II Katė III Katė IV
3.25 pav.Pamatinės membranos storis : vidurkiai.
I katė 1,569 µm ,II katė 1,54 µm, III katė 1,58 µm, IV katė 1,56 µm. Įvairavimo koeficientas 0,01,
procentinė išraiška 1proc.Ankstyvųjų antrinių visų tiriamų kačių kiaušidžių folikulų pamatinės
membranos storis buvo panašus.
4.TYRIMO REZULTATŲ APTARIMAS
Kadangi nėra vieningos kačių kiaušidžių folikulų klasifikavimo sistemos ir daugelis skirtingų
autorių pateikia skirtingą klasifikaciją, patogiausia klasifikacija yra tokia, kuri remiasi kiaušidžių
folikulų išsivystimo stadija ir tai stadijai būdingais ovocito arba folikulo matmenimis.Todėl
patogiausia kačių kiaušidžių klasifikacija buvo pasiūlyta Bristol-Gould S., Woodruff TK. (2006):
Užuomazginiai kiaušidės folikulai – mažai išsivysčiusį ovocitą supa vienas sluoksnis plokščiųjų
folikulinių ląstelių.Užuomazginio folikulo ovocitas >25µm.
Pirminiai kiaušidės folikulai – ovocitą supa vienas sluoksnis kūbiškųjų / stulpiškųjų folikulinių
ląstelių. Ovocitas viršija 25µm diametrą.
Antriniai kiaušidės folikulai – ovocitą supa nuo 2 iki daug daugiau sluoksnių kūbiškųjų
epiteliocitų, o juos supa apvalkalėlis (theca).Pagal kūbiškųjų ląstelių sluoksnius gali būti vertinamas
antrinių folikulų subrendimo lygis (ankstyvieji ir vėlyvieji antriniai kiaušidės folikulai).
Tretiniai arba pūsliniai folikulai - taip pat ir maži pūsliniai folikulai, kurių diametras 300–1000
µm. Pūsliniai folikulai turi folikulinę ertmę, kuri pripildyta folikulinio skysčio.Folikulinė ertmė
didėja folikului ir ovocitui augant.Kačių subrendusio pūslinio folikulo diametras gali siekti iki 2
mm.
29
Atlikdama folikulų matavimus vadovavausi šia klasifikacija, pagal kurią suskirsčiau matuojamus
folikulus į užuomazginius, pirminius, antrinius ankstyvuosius.Vėlyvųjų antrinių ir pūslinių folikulų
nepavyko įtraukti į skaičiavimus, nes jų nebuvo pakankamas kiekis kačių kiaušidėse, todėl statistinė
analizė nebūtų buvusi tiksli bei patikima.
Išmatavus kačių nuo 7 mėn. iki 1.8metų amžiaus kiaušidžių užuomazginių folikulų diametrą buvo
gauti duomenys : mažiausias vidurkis 21,19 ± 1,04µm ir didžiausias vidurkis 22,32 ±0,33µm, o
išmatavus užuomazginių folikulų ovocitų diametrą mažiausias vidurkis 19,36±0,53 µm ir
didžiausias vidurkis 19,87±1,35 µm.Šie duomenys panašūs į nurodytus Bristol-Gould S., Woodruff
TK. t.y. neviršija 25µm diametro.
Kadangi vyksta folikulų augimo procesas (ovogenezė), folikulų diametras ir plotas didėja, vyksta
folikulinių ląstelių diferenciacija - plokščiosios folikulinės ląstelės transformuojasi į
kūbiškasias.Užuomazginiai folikulai auga ir virsta pirminiais kiaušidžių folikulais, kurių ovocitų
matmenys yra didesni negu 25µm.Tirtų pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrų vidurkis
variavo nuo35,04±0,82 µm iki 37,33±1,1 µm, pirminių folikulų ovocitų diametrų vidurkis nuo
35,246±1,01 µm iki 34,0266±0,861 µm, o pirminių folikulų ovocitų branduolių diametrų vidurkis
kito nuo 8,42±0,185 µm iki 8,646±0,151 µm.Matmenų skirtumai ir folikulinių ląstelių
diferenciacijos pokyčiai rodo, kad vyksta ovogenezė ir užuomazginiai kiaušidžių folikulai virsta
pirminiais, pirminiai –antriniais, o antriniai tretiniais.
Antriniai kiaušidės folikulai identifikuojami pagal tris pagrindinius požymius : 2 ar daug daugiau
sluoksnių kūbiškųjų epiteliocitų ir juos supantį apvalkalėlį (theca), taip pat galima pastebėti ir
skaidriąją zoną apie ovocitą.
Atlikdama tyrimą pasirinkau tirti ankstyvuosius antrinius folikulus su 2-3 sluoksniais kūbiškųjų
epiteliocitų.Tiriant antrinių folikulų diametrus gauti duomenų vidurkiai nuo 81,92±0,32 µm iki
83,016±1,63 µm., antrinių folikulų ovocitų diametrų vidurkiai nuo 55,17±1,80 µm iki 52,28±0,767
µm. O antrinių folikulų ovocitų branduolių diametrų vidurkiai varijuoja nuo 5,51±0,7 µm iki
5,15±0,6 µm.Gauti vidurkiai atitinka normą.Tai rodo, kad tarp tos pačios amžiaus grupės ir tos
pašios rūšies individų tam tikrų vystymosi stadijų kiaušidžių folikulų, ovocitų ir jų branduolių yra
dydžių ir plotų koreliacija.
30
5.IŠVADOS
1.Atlikus keturių kačių nuo 7 mėn. iki 1,8 m amžiaus užuomazginių kiaušidžių folikulų
mikroskopinę, morfometrinę bei statistinę analizę paaiškėjo, jog jų užuomazginių folikulų diametrai
(21,19 ± 1,04µm - 22,32 ±0,33µm), plotai (375,8±16,65 µm² - 374,37± 15,7) µm², pamatinės
membranos (0,64±0,173 µm-0,70±0,0057 µm) storiai buvo labai panašūs.
1.1Taip pat visų keturių kačių užuomazginių folikulų ovocitų diametrai (35,246±1,01 µm -
34,0266±0,861 µm) tarpusavyje buvo panašūs.Tą patį galima pasakyti ir apie jų plotus
(286,73±2,83 µm² - 345,7733±4,31 µm²).
1.2Užuomazginių folikulų ovocitų branduolių diametrai (5,15±0,6 µm - 5,51±0,7 µm) visų keturių
kačių beveik nesiskyrė tarpusavyje.Plotai taip pat buvo panašūs (20,21±0,87 µm² - III katė
23,4±4,45 µm²).
Pastebėtina tai, jog ovocitą gaubiančių folikulinių ląstelių plotis (6,66±0,54 µm - 6,05±0,62 µm)
yra ženkliai didesnis už aukštį (1,41±0,50 µm - 0,92±0,349 µm). Tai būdinga užuomazginių
folikulų savybė.
2.Taip pat ištyrus visų keturių kačių pirminius kiaušidžių folikulus buvo nustatyta, jog pirminių
folikulų (35,04±0,82 µm - 37,33±1,1 µm), ovocitų (35,246±1,01 µm - 34,63±0,532 µm), ovocitų
31
branduolių diametrai (8,42±0,185 µm - 8,646±0,151 µm) bei ovocitų plotai (937,607±175,13 µm² -
1086,76±53,29 µm²) taip pat yra panašūs, kaip ir užuomazginių folikulų.
2.1Folikulinių ląstelių sluoksnyje pastebėtina tai, jog folikulinių ląstelių aukštis (4,50±0,40 µm -
4,32± 0,21 µm) ir plotis (4,336±0,26 µm - 4,48±0,29 µm) yra panašūs – tai kūbiškieji folikuliniai
epiteliocitai.
3.Tiriant antrinius folikulus taip pat pastebėta, jog folikulinių ląstelių sluoksnis ankstyvuose
antriniuose folikuluose yra panašus (2-3 sl.), folikulinių ląstelių aukštis (3,36±0,25 µm -
3,187±0,21 µm) ir plotis (2,94±0,247 µm - 3,29±0,277 µm) labai mažai skiriasi, panašius ir šių
folikulų diametrai (81,92±0,32 µm - 83,016±1,63 µm).Ankstyvųjų antrinių folikulų ovocitų
diametrai (55,17±1,80 µm - 52,28±0,767 µm) taip pat panašūs, taip pat ir plotai .Ovocitų
branduolių diametrai (9,75±0,279 µm - 10,42±0,746 µm) taip pat panašūs, plotai panašūs.
Skairiosios zonos storis taip pat panašus.Pamatinės membranos storis (1,54 µm - 1,58 µm) panašus.
6.SANTRAUKA
Tiriamojo darbo sritis – histologiniai kačių kiaušidžių tyrimai..
Darbo tikslas buvo ištirti keturių kačių nuo 7 mėn. iki 1,8 metų įvairių stadijų kiaušidžių folikulus
ir juos įvertinti.Kačių kiaušidės buvo paimtos ovariohisterektomijos metu.Kiaušidės supjaustytos į
5µ storio pjūvius, pjūviai dažyti hematoksilino-eozino dažais.
Folikulai suskirstyti pagal išsivystymą ir matmenis į užuomazginius, pirminius, ankstyvuosius
antrinius.
Atlikti matavimai, išmatuoti užuomazginių, pirminių, antrinių folikulų diametrai, plotai, folikulų
ovocitų diametrai, plotai, jų branduolių diametrai, plotai, folikulinės ląstelės – jų aukštis ir plotis,
pamatinė membrana, antrinių folikulų skaidrioji zona.
Ištirta, jog užuomazginių, pirminių bei antrinių folikulų, ovocitų ir jų branduolių diametras, plotas,
pamatinės membranos storis ir antrinių folikulų ovocitų skaidriosios zonos storis yra panašūs.
Užuomazginių folikulų ovocitą gaubia vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių ląsteliu – joms
būdinga tai, jog, jų plotis didesnis už aukštį, o pirminių folikulų ovocitą gaubia kūbiškosios ląstelės,
kurių tiek aukštis, tiek plotis panašūs.Antrinių ankstyvųjų folikulų ovocitų paviršių gaubia 2-3
sluoksnių folikulinių ląstelių, kurių plotis ir aukštis yra panašūs.
Statistinių duomenų patikimumas 95 % arba p<0,05.
32
Raktiniai žodžiai : folikulas, kiaušidė, katė, histologija .
7.SUMMARY Histological analysis of feline ovary
Range of investigation is histological analysis of feline ovary.
The purpose of this scientific research is to explore various stages ovarian follicles in four cats (age
7 months- 1,8 years).Ovaries were cut into 5 µm sections, than sections were stained by eosin-
hematoxylin.
Folicles were classified regarding to their development and dimensions into primordial, primary
and early secoundary follicles.
Were performed measurements.Were measured diameters and areas of primordial, primary and
early secoundary follicles, diameters and areas of oocytes and nucleus of oocytes, heigt and width
of folliculas cells, thickness of basal lamina .Also were measured zona pellucida of secoundary
follicles.
Results revealed that diameter and area of primordial, primary and early secoundary follicles,
oocytes and nucleus were comparable.Basal lamina thickness were simmilar too, the same thing is
about zona pellucida in secoundary follicles.
Primordial follicle is surrounded by one layer of squamous cells - basic feature of these cells is that
their width is much bigger than height meanwhile primary follicle is surrounded by cuboidal one
33
layer cells with almost equal width and height. Cells of early secoundary follicle are surrounding
oocyte at least with two layers and their width and height are almost equal.
Calculated statistical data reliability is 95 % or p<0,05.
Keywords: feline, ovary, ovarian follicle, histology.
8.LITERATŪROS SĄRAŠAS
Literatūros sąrašas :
Alionienė Ingrida. Bendroji histologija su histologinės technikos pagrindais.
Aniulis, E. Znuidauskas B. ir kt.Veterinarinė akušerija ir ginekologija, 1989.
Domestic cat (Felis catus) polyovular follicles Miclăus V., I. Groza, L. Oana 2007.
Don. A. Samuelson Text book of veterinary histology.
E. Aghey, F.L.Frye. Comparative veterinary Histology with clinical correlates.
Elsevier S. Bristol-Gould, TK Woodruff. Theriogenology, 2006.
Jo Ann Aurel, Brien L.Frappier. Dellmann‘s text book of veterinary histology.
Laurinavičienė Aida. Histologinių technologijų vadovas, 2008.
Padaiga Antanas, Lasys Vidmantas, Sederevičius Antanas. Naminių gyvūnų mikroskopinė
anatomija, 2006, P. 158-166.
Reproductive System Images.
Schatten H. Comparative reproductive biology, Constantinescu M.G., P.99-103.
Tufts OpenCourseWare © 2009 Tufts University Collection of Veterinary Female
34
Uchikura K, Nagano M, Hishinuma M. The effect of ovarian status and follicular diameter on
maturational ability ofdomestic cat oocytes, Department of Theriogenology, School of Veterinary
Medicine, Faculty of Agriculture, Tottori University, Japan, 2011.
William J.Bacha, Jr.Linda M.Bacha M. Wood. Color Atlas of Veterinary Histology. Philadelpia,
London, 1990,269 p.
http://ajplegacy.physiology.org/content/189/1/145.short 2013 m. gruodis 1 d. 10:33
http://books.google.lt/books?
id=COV7tAgMaMwC&pg=PA400&lpg=PA400&dq=feline+secondary+follicle&source=bl&ots=r
zRkmIv6fA&sig=jmmClX0RrzEGTO9tJVKf9qaI-
dk&hl=lt&sa=X&ei=V47JUp7nIIfUtQbHm4GYAw&ved=0CE0Q6AEwAw#v=onepage&q=feline
%20secondary%20follicle&f=false 2014 m. sausis 5 d. 18.57
http://europepmc.org/abstract/MED/2621721/reload=0;jsessionid=2oYbe3Z2DGDzC0yyOKVm.58
2013 m. gruodis 1 d. 12:18
http://europepmc.org/abstract/MED/2621721/reload=0;jsessionid=2oYbe3Z2DGDzC0yyOKVm.58
2013 m. gruodis 13 d. 17:00
http://info.visiblebody.com/bid/287220/Anatomy-and-Physiology-Uterine-Anatomy 2013 m.
gruodis 2 d. 19:27
http://jfm.sagepub.com/content/12/7/539.abstract?patientinform-links=yes&legid=spjfm;12/7/539
2013 m. gruodis 15 d. 14.04
http://journals.cambridge.org/download.php?file=%2FBJN
%2FBJN5_01%2FS0007114551000182a.pdf&code=9e5012292ff2bbd7a22b52fd9ff5084a 2013 m.
gruodis 13 d. 17:20
http://lan.sagepub.com/content/27/3/278.full.pdf 2013 m. gruodis 3 d. 22:59
http://meddic.jp/ovarian_medulla 2013 m. gruodis 29 d. 19:37
http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-
_Oogenesis_and_Ovulation 2013 m. gruodis 22 d.
http://web.archive.org/web/20080630205100/http://animal.discovery.com/guides/cats/body/maturit
y.html 2013 m. gruodis 16 d. 12:10
http://www.biolreprod.org/content/28/3/657.short 2013 m. gruodis 1 d. 11:46
http://www.biolreprod.org/content/60/2/522.long 2014 m. sausis 5 d. 19.53
http://www.biolreprod.org/content/early/2003/12/03/biolreprod.103.021857.full.pdf 2014 m. sausis
5 d. 21:11
http://www.britannica.com/EBchecked/topic/193725/estrus#ref5672 2013 m. gruodis 15 d. 14:23
35
http://www.columbia.edu/itc/cerc/danoff-burg/invasion_bio/inv_spp_summ/Felis_catus.html 2013
m. lapkritis 30 d. 13:21.
http://www.glowm.com/resources/glowm/cd/pages/v5/v5c012.html 2013 m. gruodis 3 d. 22:51
http://www.google.lt/books?
hl=lt&lr=&id=zBYi4NgVwCUC&oi=fnd&pg=PR7&dq=domestic+cat&ots=jCrdwYrX1o&sig=tk
MfjF3kZaHn1TmJouBs784JgRQ&redir_esc=y#v=onepage&q=domestic%20cat&f=false 2013 m.
lapkritis 24 d. 19:17
http://www.kaunasvet.lt/kaliu-ir-kaciu-lytinis-ciklas 2013 m. gruodis 16 d. 12:45
http://www.medicalhistology.us/twiki/bin/view/Main/FemaleReproductiveSystemAtlas16 2013 m.
gruodis 16 d. 17:37
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK10008/ 2014 m. sausis 5 d. 18.33
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15723162 2013 m. gruodis 13 d. 17:36
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16620931 2014 m. sausis 4 d. 17:01
http://www.redbiolab.unimi.it/RedBioLab/Publications_files/Reproduction%20in%20Domestic
%20Animals%202012%20Luvoni.pdf 2014 m. sausis 4 d. 17:00
http://www.theriojournal.com/article/S0093-691X%2809%2900168-X/abstract 2013 m. gruodis 1
d. 10:28
http://www.uff.br/gefras/artigo%2049.pdf 2013 m. gruodis 13 d. 20:13
http://www.usfca.edu/fac_staff/dever/webmenstruation.pdf 2014 m. sausis 14 d. 23:44
36
top related