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Exame parasitológico de fezes
Patologia Clínica IDepto. Propedêutica ComplementarFaculdade de Medicina - UFMG
Parasitoses intestinais – Relevância
10% população mundial
Giardíase Ascaridíase
3,5 milhões pessoas
200 milhões pessoas
1,2 bilhão pessoas
Estrongiloidíase
Amebíase
http://www.cdc.gov/parasites
Parasitoses intestinais
Importância do conhecimento dos ciclos dos parasitas
Avaliação das manifestações clínicas
Parasitas com ciclo pulmonar (Ascaris, Ancilostomideos, Strongyloides)
Parasitas com penetração cutânea (Ancilostomideos, Strongyloides, Schistosoma)
Solicitação adequada dos exames laboratoriais
Exame parasitológico de fezes
Detecção de trofozoítos e cistos de protozoários, ovos, larvas e vermes adultos de helmintos
Helmintos intestinais (principais)
Nematelmintos Ascaris lumbricoidesAncilóstomosStrongyloides stercoralisTricocephalus trichiuraEnterobius vermiculares
Platelmintos cestoda Taenia
Hymenolepis
trematodaSchistosoma
Exame parasitológico de fezes Detecção de trofozoítos e cistos de protozoários,
ovos, larvas e vermes adultos de helmintos
Protozoários intestinais (principais)
Sarcomastigophora Giardia lamblia
Amebas
Apicomplexa Cryptosporidium parvum
Cyclospora cayetanensis
Isospora belli
Ciliophora Balantidium coli
Microscopora Microsporídeos
Exame parasitológico de fezes
Fase pré-analítica
1) Solicitação do exame Indicar método (s) a ser realizado Indicar parasita (s) a ser pesquisado
2) Coleta da amostra/orientações Procedimento para coleta Número de amostras Uso de conservantes, etc
3) Transporte da amostra para o laboratório Envio imediato x armazenamento
geladeira Coleta no laboratório
Coleta da amostra Cuidados com a coleta da amostra
Antibióticos, antidiarréicos, antiácidos, derivados de bismuto e do bário, laxantes e óleos minerais podem interferir no exame, levando a resultados falso- negativos
Uso de antibióticos ou contraste - diminuição do número de protozoários (por semanas)
Coleta da amostra
Material contaminado com urina - destruição de trofozoítos
Material contaminado com solo ou água - presença de organismos de vida livre
O pote deve estar livre de anti-sépticos, agentes germicidas, gotas de óleo e de urina para evitar a destruição de formas vegetativas
Calor - destruição dos parasitas
Frascos – boca larga, capacidade 50 mL, limpos e vedados; acondicionar em plástico transparente
Coleta da amostra
Tipos de amostras Amostra recentemente colhida
Enviar rapidamente ao laboratório (2h) ou
Manter amostra entre 2–8 °C (12h) Amostra de fezes diarréicas
Não refrigerar Exame em 30 minutos (pesquisa de
trofozoítos) Ovos e larvas - diluídos pelo volume
maior de água Amostra em conservantes (MIF)
Exame pode ser realizado até 30 dias após a coleta
Coleta da amostra
Uso de solução conservante Colher 3 amostras em dias alternados (ou de 2/2 dias ou 3
amostras em 10 dias)
Solução mais comum: MIF (mercúrio, iodo, formol)
Mistura vigorosa da amostra com a solução logo após a coleta ( uma colher de chá por coleta, em 30 mL de solução conservadora)
Liberação intermitente de formas infectantes - E. histolytica - picos de liberação de cistos entre 7 e 10
dias - Giardia lamblia - picos de 2 a 8 dias
Coleta da amostra
Fezes colhidas em conservantes não são adequadas para a realização do método Baermann-Moraes
Coleta da amostra
Exame parasitológico de fezes
Fase analítica
Exame macroscópico
Exame microscópico
Exame parasitológico de fezesAspectos macroscópicos
Cor Odor Consistência Presença de:
Muco Sangue Pus Larvas, vermes adultos
ou fragmentos de vermes
Exame parasitológico de fezesAspectos macroscópicos Consistência
Exame parasitológico de fezes Microscopia
Pesquisa de ovos e larvas de helmintos; trofozoítos e cistos de protozoários
Uso de processos de enriquecimento e coloração
Métodos gerais (sedimentação espontânea e centrifugação)
“Nenhum dos métodos é capaz de diagnosticar todas as formas parasitárias simultaneamente”
Exame parasitológico de fezes Microscopia
Métodos Qualitativos Exame direto sem coloração Exame direto com coloração (lugol e colorações
específicas) Concentração por sedimentação espontânea Concentração por centrifugação Concentração por centrífugo-flutuação Exames baseados em hidrotropismo das larvas
Métodos Quantitativos Kato-Katz
Exame direto
Amostra recentemente colhida, fezes líquidas, amostra de aspirado duodenal – exame até 30 min após coleta
Pesquisa de trofozoítos, cistos de protozoários, ovos e larvas de helmintos
Observação direta ao microscópio do material fecal:
- diluído com solução NaCl 0,85% - motilidade de trofozoítos e refração citoplasma dos cistos
- com lugol – melhor definição da estrutura nuclear dos cistos
Presença de detritos fecais, revela poucos detalhes estruturais
Cisto E. hystolitica/ E. dispar
Trofozoíto E. hystolitica/E. dispar
Exame com colorações específicas
Hematoxilina férrica ou tricrômico - cistos e trofozoítos de amebas e Giardia lamblia
(*exame direto com coloração ou coloração após método de concentração das fezes)
Trofozoíto Entamoeba hystolitica
Cisto e trofozoíto Entamoeba coli
Cisto e trofozoíto Giardia lamblia
Exame com colorações específicasZiehl Neelsen - oocisto de Cyclospora cayetanensis,
Cryptosporidium e Isospora belli
Benavides et al. Rev Costarricencis Ciências Médicas 2007;28
(*Coloração após concentração das fezes por centrifugação - 10 min)
Colorações específicas
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/morphcomp.html
Métodos com concentração por sedimentação
Pesquisa de cistos de protozoários, ovos e larvas de helmintos
Amostra recentemente colhida ou em conservantes
Concentração por sedimentação espontânea - a amostra de fezes é misturada com água, filtrada e colocada em repouso por 2 horas. O exame microscópico do sedimento obtido por ação da gravidade, corado com lugol, permite a observação de cistos, ovos e larvas
Utilizado na rotina do EPF
Método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ) ou Lutz
Método de Hoffman, Pons e Janer
http://slideplayer.com.br/slide/49554/
Métodos com concentração por centrifugação
Pesquisa de cistos de protozoários, ovos e larvas de helmintos
Amostra recentemente colhida (Blagg e cols.) ou com conservante (MIFc)
Concentração por centrifugação - a mistura de fezes e solução conservante é filtrada, misturada com éter sulfúrico e submetida a centrifugação. O exame microscópico do sedimento obtido, corado com lugol, permite a observação de cistos, ovos e larvas
Utilizado na rotina do EPF
Método de Blagg e cols. ou MIFc
Método de Blagg e cols. ou MIFc
http://slideplayer.com.br/slide/83362/
Método de Faust e cols. Pesquisa de cistos e oocistos de protozoários, ovos
leves de helmintos Amostra recentemente colhida ou em conservante Concentração por centrífugo-flutuação no sulfato
de zinco - a mistura de água e fezes é filtrada e lavada através de centrifugação e ressuspensão com água. O sedimento é ressuspendido em solução de sulfato de zinco (densidade 1.18) e centrifugado.
Exame microscópico da película flutuante permite a observação dos cistos.
Vantagens: maior sensibilidade para a detecção de cistos Desvantagens: procedimento mais complexo, requer
reagentes específicos
Métodos com concentração por centrifugação
http://slideplayer.com.br/slide/49554/
Método Kato-Katz Pesquisa quantitativa de ovos de helmintos
(especialmente S. mansoni) Amostra de fezes de consistência normal, sem
conservantes Quantidade determinada de fezes (40 – 60
mg), corada com verde malaquita, é observada ao microscópio, permitindo a determinação do número de ovos por grama de fezes
Vantagens: método quantitativo; maior sensibilidade para a detecção de ovos de S. mansoni
Desvantagens: tempo do procedimento (1 – 2 horas), requer materiais especiais
Método Kato-Katz
http://slideplayer.com.br/slide/49554/
http://pt-br.aia1317.wikia.com/wiki/Arquivo:Kato-katz.png
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/morphcomp.html
Ovos de nematelmintos e cestodas em fezes humanas
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/morphcomp.html
Comparação entre o tamanho de ovos de helmintos
µm
Método de Baermann e Moraes ou Rugai
Fezes sem conservantes, de preferência não armazenadas em geladeira
Amostra colocada em contato com água a 45 °C para onde as larvas migram. O exame microscópio do sedimento permite a observação de larvas S. stercoralis Ancilostomídeos
Maior sensibilidade para a detecção de larvas, simplicidade de execução
Métodos baseados em hidrotropismo das larvas
Método de Baermann e Moraes e Método de Rugai
Método de Baermann e Moraes
Método de Rugai
Fezes recentemente colhidas - larvas Strongyloides stercoralis mais frequentesLarva rabditoide de S. stercoralis - 180-380µm x 14-20µm, vestíbulo bucal curto (2-3µm), primórdio genital ovóide, grande e nítido. Cauda afilada.
Larvas de nematelmintos
Em fezes com mais tempo de coleta, ou de constipação intestinal, as larvas podem ser de Strongyloides stercoralis ou de Ancilostomídeos que eclodiram dos ovos eliminados nas fezes
Strongyloides
Ancilostomídeos
Filarióide Maior, cauda bifurcada, esôgado cilíndrico e reto
Filarióide Vestíbulo bucal longo, cauda pontiaguda, bainha, esôfago 1/3 comprimento
Rabditóide Vestíbulo bucal longo, genital pequeno
Método da fita gomada (fita adesiva, Graham)
Pesquisa de ovos de Enterobius vermicularis e Taenia sp que, se presentes na região perianal, aderem à fita gomada e podem ser observados ao microscópio
Realizado pela manhã, ao acordar, antes de higienização da região perianal
Rápido e de fácil execução
Enterobius vermiculares
Taenia sp (positividade 85%)
Método da fita gomada
Outros métodos - tamização
Todo o conteúdo de uma evacuação é passado em uma tela de metal fina sob água corrente (peneirado). As proglotes de Taenia ficam retidas e são examinadas após clarificação com ácido acétido.
T. solium – ramificações largas, irregulares e dendríticas
T. saginata – ramificações estreitas
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/antigendetection.html
Outros métodos - detecção de antígeno nas fezes
Esquistossomose - diagnóstico
o Exame parasitológico de fezes
• Positivo após 45º dia de infecção• Sensibilidade depende da carga parasitária e do tempo de infecção• Métodos:
• Kato-Katz (quantitativo)• Métodos de concentração(identificação dos ovos e avaliação de viabilidade)
• Avaliar amostras múltiplas
Esquistossomose - diagnósticoo Biópsia retal – pesquisa de ovos• Maior sensibilidade• Controle de cura
o Pesquisa de anticorpos séricos (IgM, IgG, IgA)• Positividade a partir do 25º dia de infecção
• Métodos:ELISA – antígenos de vermes adultos ou de ovosIFI (imunofluorescência indireta) – substrato de cercária ou vermes adultos
• Não diferenciam infecção ativa, prévia ou reinfecção• Não são úteis para monitorização do tratamento
• Aplicabilidade:Estudos epidemiológiosDiagnóstico em indivíduos com baixa carga parasitária
Esquistossomose - diagnóstico
o Pesquisa de antígenos séricoso Não disponíveis comercialmente
o Intradermo reação (Shistotest) Inoculação intradérmica de antígeno de vermes
adultos e cercárias. O resultado é considerado positivo quando se observa pápula >10mm após 15’. Pode ser positivo após 48 h.
Sensibilidade: 85% Indica contato prévio com S. mansoni, não negativa
após tratamento (utilizada para inquéritos epidemiológicos). Não autoriza o tto (MS)
Esquistossomose - diagnóstico
Ovos fertilizados (exame direto) - Fêmea adulta
http://www.cdc.gov/parasites
Ascaris lumbricoides
Larvas filarióide e rabditóide (exame direto)
Ancilostomídeos
http://www.cdc.gov/parasites
Fêmea adulta - Larva filarióide (exame direto)
Strongyloides stercoralis
http://www.cdc.gov/parasites
Ovo (exame direto com lugol)
Fêmea adulta (4 cm) micrografia
Ovo (exame direto sem lugol)
Tricocephalus trichiuris
http://www.cdc.gov/parasites
Enterobius vermiculares
http://www.cdc.gov/parasites
Taenia sp
Taenia solium
Taenia saginata
Credit: DPDx http://www.cdc.gov/parasites
Hymenolepis nana
Ovo (exame direto) - Vermes adultos - escólex (exame direto, com aumento).
http://www.cdc.gov/parasites
H. nana x H. diminuta
Esféricos, castanho amarelado, dupla membrana, ausência filamentos polares entre membranas.Parasita do rato, rara em humanos
Esféricos, claro e transparente, dupla membrana, material granuloso entre membranas. Membrana interna com saliências de onde saem filamentos
http://www.parasitologiaclinica.ufsc.br/index.php/info/conteudo/fotografias/ovos-hnana/
Trofozoítos e cisto corados - cultura
Giardia lamblia
http://www.cdc.gov/parasites
Giardia lamblia
Cistos 8-20 µm x 7-10 µm, ovais ou elipsóides. Dois ou quatro núcleos
próximos aos pólos, axonemas, número variável de fibrilas. Nítida retração do
citoplasma qdo corados. Coloração esverdeada ou castanho–amarelado (lugol)
Trofozoítos 10-20µm x 5-15µm. Forma de pêra, dois núcleos redondos ou ovóides, cariossoma grande,
redondo e central. Na superfície ventral encontra-se de cada lado o disco suctorial. Axonemas dividem o
parasito ao meio; corpos parabasais cruzam axonema. Oito flagelos, não visíveis nas preparações coradas.
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/morphcomp.html
Amebas em fezes humanas
Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods
Amebas em fezes humanas
http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/morphcomp.html
Entamoeba histolytica/E. dispar x E. coli
http://www.cdc.gov/parasites
Pesquisa de sangue oculto nas fezes
Pesquisa de sangue oculto nas fezes Sangramento gastrointestinal crônico, não observado
pelo paciente (não visível a olho nu) Neoplasias Pólipos Úlceras Hemorróidas Doença diverticular Doença inflamatória intestinal Esofagite, gastrite, sangramento gengival ...
Pesquisa de sangue oculto nas fezes
Indicações:
Rastreamento do câncer colo-retal Em associação a exames endoscópicos –
retossigmoidoscopia e/ou colonoscopia (1ª escolha) A partir de 50 anos de idade ou mais precocemente, se
paciente com risco elevado (história familiar positiva, polipose adenomatosa familiar, doença inflamatória intestinal...)
Avaliação etiológica da anemia ferropriva
Pesquisa de sangue oculto nas fezes Vantagens:
Fácil realização Não-invasivo Baixo custo
Desvantagens: Possibilidade de resultados falso-positivos ou falso-
negativos Não define a origem do sangramento Resultados positivos habitualmente demandam realização
de colonoscopia
Pesquisa de sangue oculto nas fezes Métodos
Químicos (Reagentes: guaiaco, orthotoluidina) Baseiam-se na atividade de pseudoperoxidase do
grupo heme da hemoglobina
Resina de guaiaco + H2O2(incolor) Atividade
peroxidase da Hb
Guaiaco oxidado + H2O (azul)
Pesquisa de sangue oculto nas fezes Métodos químicos
Interferentes Alimentos - carne, brócolis, nabo, banana, uva, ameixa Medicamentos (aspirina, AINES) Vitamina C em excesso
Requer preparo com dieta específica (3 dias antes do coleta)
* Indicado análise em 3 amostras de fezes
Pesquisa de sangue oculto nas fezes Métodos
Imunoquímicos Anticorpo reagente liga-se à
hemoglobina humana (cadeias globina)
Melhor performance (sensibilidade e especificidade)
Menor probabilidade de detecção de sangramento alto (cadeias globina são destruídas no intestino delgado)
Sem necessidade de restrição dietética como preparo para coleta
* Indicado análise em 3 amostras de fezes
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