akut lÖsemİlerde gravİn ekspresyonunun prognostİk Önemİ

8/6/2019 AKUT LSEMLERDE GRAVN EKSPRESYONUNUN PROGNOSTK NEM

1/50

T.C.UKUROVA NVERSTES

TIP FAKLTES HASTALIKLARIANABLM DALI

AKUT LSEMLERDE GRAVN EKSPRESYONUNUN

PROGNOSTK NEM

Dr. Mustafa YILDIRIM

UZMANLIK TEZ

TEZ DANIMANIProf. Dr. Semra PAYDA

ADANA-2006


2/50

i

TEEKKR

Hekimlii ve rnek kiilii ile yolumu aydnlatan saygdeer hocam Prof. Dr.

Semra PAYDAa, yetimemde emei olan tm hocalarma, desteklerini benden

esirgemeyen bata eim Evrim YILDIRIM olmak zere aileme, almamda emei

yadsnamayacak olan Laborant Sabahattin ASLANa katklarndan dolay teekkr

ederim.


3/50

ii

NDEKLER

Sayfa No:

TEEKKR....................................................................................................................... i

TABLO LSTES.............................................................................................................iii

EKL LSTES...............................................................................................................iv

ZET ................................................................................................................................ v

ABSTRACT.....................................................................................................................vi

KISALTMALAR LSTES ............................................................................................vii

1. GR ............................................................................................................................ 1

2. GENEL BLGLER ...................................................................................................... 2

2.1. Akut Lsemiler ...................................................................................................... 2

2.1.1. Etyoloji............................................................................................................2

2.1.2. Patogenez........................................................................................................ 4

2.1.3. nsidens ve Snflama......................................................................................5

2.1.4. Klinik ..............................................................................................................6

2.2. cAMP Sinyal leti Sistemi ve A-Kinaz Sabitleyici Sinyal Kompleksi................. 9

2.3. Gravin .................................................................................................................. 11

2.3.1. Gravinin Yaps ............................................................................................. 112.3.2. Gravinin Fonksiyonlar................................................................................. 13

3. GERE VE YNTEM............................................................................................... 16

3.1. rnek Toplama .................................................................................................... 16

3.2. mRNA zolasyonu ............................................................................................... 16

3.3. cDNA Sentezi ...................................................................................................... 17

3.4. Gravin ve Actin Primer Dizini.......................................................................... 18

3.5. Real-Time PCR.................................................................................................... 183.6. Deerlendirme ..................................................................................................... 20

3.7. statistik Analizler................................................................................................ 20

4. BULGULAR...............................................................................................................21

5. TARTIMA................................................................................................................28

6. SONULAR............................................................................................................... 36

KAYNAKLAR...............................................................................................................37

ZGEM ....................................................................................................................41


4/50

iii

TABLO LSTES

Tablo No: Sayfa No:

Tablo 1: Akut Lsemilerde Grlen Kromozamal Translokasyonlar. ............................. 5Tablo 2: Akut Lsemilerde WHO Snflamas. ................................................................6Tablo 3: AMLde Prognostik Faktrler............................................................................ 8Tablo 4: ALL de Prognostik Faktrler. ........................................................................... 8Tablo 5: cDNA Reaksiyonu Protokol........................................................................... 17Tablo 6: Scaklk Dngs Program............................................................................. 17Tablo 7: Real-Time PCR Reaksiyon Protokol..............................................................18Tablo 8: Denatrasyon Program. ...................................................................................19Tablo 9: Amplifikasyon Program. ................................................................................. 19

Tablo 10: Soutma Program. .........................................................................................19Tablo 11: Lsemi Alt Gruplarna Gre Ya ve Cinsiyet zellikleri. ............................. 21Tablo 12: Hastalarn Organomegali zellikleri.............................................................. 21Tablo 13: Periferik Kan Bulgular ve Tmr Yk Gstergeleri. .................................. 22Tablo 14: Akut Lsemili Hastalarn Yzey Antijen Sonular....................................... 23Tablo 15: Hastalara Uygulanan Remisyon ndksiyon Kemoterapileri......................... 24Tablo 16: Hasta Alt Gruplarna Gre Sakalm. ............................................................25Tablo 17: Hasta ve Kontrol Grubunda Actin-Gravin Ct Deerleri. .......................... 25Tablo 18: Gravin Ekspresyonuna Gre Sakalm. ......................................................... 26Tablo 19: Gravin Ekspresyonundaki Deiimdeki Alt Gruplara Gre Sakalm. .........26Tablo 20: Ct Deerlerine Gre Sakalm.....................................................................26Tablo 21: Sakalm Etkileyen Bamsz Faktrler........................................................ 27Tablo 22: Malingnensilerde Gravin ile lgili Yaplan almalar. ................................. 33


5/50

iv

EKL LSTES

ekil No: Sayfa No:

ekil 1. SScCS/Gravinin izoformlar. ............................................................................. 12ekil 2: Ct ile sakalm arasndaki iliki...................................................................... 27


6/50

v

ZET

Akut Lsemilerde Gravin EkspresyonununPrognostik nemi

Lkomogenez ok basamakl bir sretir ve ok sayda faktr bu srete yer alr.Tedavinin planlanmasnda, tedavi hedeflerinin ve prognozu etkileyen faktrlerinbelirlenmesi nemlidir. Prognostik faktrler, hastaya uygulanacak tedavininyounluunun belirlenmesinde nemlidir.

Gravin, A kinaz sabitleyici protein ailesinin yesi bir tmr spresr gendir.Snrl sayda tmrde allm ve ekspresyon dzeyinin azald gsterilmitir. AkutLsemilerde Gravin ekspresyonunun incelendii bir alma vardr ve bu almadagravin ekspresyonunun azald gsterilmitir. Ancak literatrde Gravinekspresyonunun prognozla ilikisini detayl ekilde inceleyen alma yoktur.almamzn amac akut lsemilerde Gravin ekspresyonu ve varsa prognozla ilikisiniortaya koymaktr. Gravin ekspresyonu RT-PCR yntemiyle aratrlmtr. Kontrol genekspresyonu olarak Actin kullanld. Sonular Comperative Ct yntemi iledeerlendirilmitir.

almaya akut lsemili 137 olgu ve 25 salkl gnll dahil edildi. Hastalarn100 (%73) AML, 37si (%27) ALL idi. Hastalarn 70 (%51.1)i erkek, 67 (%48.9) sikadn hastalard. Kontrol grubunda Actin Ct deeri 21.64, Gravin Ct deeri 38.172.5(41-28.6), Gravin- Actin Ct deeri 16.22.5 (19.3-5.2) bulundu. Hasta grubunda

Actin Ct deeri 22.5 2.8 (17.8-35.1), Gravin Ct deeri 42.24.9 (31.2-50), Gravin- Actin Ct deeri 19.64.5 bulundu. Hasta ve kontrol gruplar arasnda Gravin- ActinCt deerleri arasnda istatistiksel olarak anlaml fark bulundu (p deeri


7/50


8/50

vii

KISALTMALAR LSTES

AML : Akut Myeloid Lsemi

ALL : Akut Lenfoid Lsemi

HTLV1 : nsan T Hcreli Lsemi/Lenfoma Virs 1

t-AML : tedavi ilikili AML

MLL : Mixed-Lineage Leukemia

MDS : Myelodisplastik Sendrom

VEGF : Vaskler Endotelyal Byme Faktr

GPCR : G Proteinine Bal Reseptrler

AKAPs : A kinaz demirleyici proteinler

PKA : Protein Kinaz-A

ATP : Adenozin Tri Fosfat

SSeCKS : Src Suppressed C kinase Substrat

RT-PCR : Real-Time Polimerase Chain Reaction

BK : Beyaz kre

Ct : Delta CtLDH : Laktik Dehidrogenaz

Hb : Hemoglobin

Htc : Hematokrit

a : rik Asit

AD : Alt Deer

D : st Deer

Ort : OrtalamaSD : Standart Sapma

ETRB : Endothelin reseptr B

LPL : Lipoprotein Lipaz

Ct : Comperative Ct

FISH : Fluorescent in-situ hybridization

H : mmnohistokimyasal

WB : Western Blot


9/50

viii

NB : Nothern Blot

cDNA : Complementer DNA

ATRA : Al trans retinoik asit

B-KLL : B hcreli Kronik Lenfositik Lsemi

LPL : Lipoprotein Lipaz

cAMP : Siklik Adenozin Monofosfat

PKC : Protein Kinaz-C


10/50

1

1. GR

Gravin A Kinaz sabitleyici protein ailesinin yesi bir tmr spresr gendir.

Sperm geliimi, testis geliimi ve nron geliimi fizyolojisinde rol oynar. Hcre ii

sinyallerin iletiminde ve bu sinyallerin lokalizasyonunda rol oynamaktadr.

Onkogenezdeki rol birok deneysel almada gsterilmitir. Tmr spresr

fonksiyonlarnn kaybnda, onkogenik zellik kazanmasnda Gravin gen blgesinin

metilasyonunun rol olduu dnlmektedir. Gastrik adenokarsinom, prostat

karsinomu, akcier adenokarsinomu, meme kanserinde ekspresyonunun azald

gsterilmitir. Hcre kltr almalarnda demetilasyon yapan ajanlar uygulandnda

onkogenik zelliklerin geriledii gsterilmitir.

Akut lsemiler tedavi edilmediklerinde fatal seyirli hastalklardr. Tan srasnda

saptanan belirli klinik ve laboratuar parametreleri ile hastaln prognozu tahmin

edilebilir. Bylece yksek riskli hastalara daha youn tedaviler verilebilir. Hastalarda

lkomogenezde rol oynayan mekanizmalarn belirlenmesi hedefe ynelik tedavileri

gndeme getirebilir. rnein Akut Promyelositer Lsemide PML/RAR fzyon

proteininin tespit edilmesi, bu proteinin etkilerini engelleyen al trans retinoik asit

(ATRA)in tedavide kullanlmas bu hastalarn sakalmn etkilemitir.

almamzn amac, Gravin gen ekspresyonunun akut lsemilerde durumunun

saptanmas ve varsa prognoz ile ilikisinin aratrlmasdr. Bu amala RT-PCR yntemi

ile Gravin ekspresyonu aratrlm; bavuru anndaki periferik kan bulgular ile tmr

yk belirleyicileri ve tedaviye yant ile toplam sakalm gibi parametrelerle ilikisi

incelenmitir.


11/50

2

2. GENEL BLGLER

2.1. Akut Lsemiler

Lsemiler hemopoetik hcrelerin malign transformasyonu sonucu oluan

heterojen neoplastik hastalklar grubudur. Kken aldklar hcre tipine gre lenfoid,

miyeloid; sakalm ve olgunlama zelliklerine gre de akut ve kronik olarak

snflandrlrlar.

Akut lsemiler immatr miyeloid ya da lenfoid seri hcrelerinin kan, kemik ilii

ve dier dokularn infiltrasyonu ile karakterize bir grup hastalktr. Akut lsemiler Akut

Myeloid Lsemi (AML) ve Akut Lenfoblastik Lsemi (ALL) olmak zere iki ana

kategoriye ayrlr. Akut lsemili hastalarn balang deerlendirmelerinde uzun

dnemli prognoza ve tedavi planna etkisi olabilecek faktrlerin belirlenmesi nemlidir.

Akut lsemilerin prognozunun ve patogenezinin anlalmasnda molekler, sitogenetik

ve immnolojik almalar katkda bulunur.

2.1.1. Etyoloji

Akut lsemili hastalarda birok somatik mutasyonlar oluur ve bu somatik

mutasyonlar hcrelere proliferasyon ve yaam avantaj kazandrrlar. Genetik defekt

veya bilinen evresel ajanlara maruz kalma yks olmayan hastalarda genelde neden

bulunamaz. Genetik predispozisyon, ilalar, evresel ajanlara maruz kalma ve mesleki

faktrler olas lkomojenik ajanlar olarak sulanmtr. Lkomogenezin hassas

hemopoetik nc hcreleri indkleyen ajanlarca oluturulan ok basamakl bir sre

olduu dnlmektedir. Etkiledii herkeste lsemi geliimine neden olan bir faktr

saptanmamtr.

AML patogenezinde eitli evresel ajanlar sulanmtr. yonize radyasyon ve

alkilleyici ajanlar ift sarmall DNAda krlmalara yol aarlar ki bu da genomik

delesyonlar, nokta mutasyonlar ve kromozom translokasyonlarna yol aar. Benzen gibi

organik solventlere ve petrol rnlerine mesleki maruz kalma da AML riskinde arta

neden olur. Kimyasal ajanlara maruz kalm olan AML hastalarnda RAS mutasyonu


12/50

3

saptanmtr. Bu kimyasallarn genetik hasara yol aarak lsemi gelimesine neden

olduu dnlmektedir1.

Hayvan lsemi modellerinde birok retrovirsn lsemi oluturabilecei

gsterilmitir. Bununla birlikte insan lsemilerinde nsan T Hcreli Lsemi/Lenfoma

Virs (HTLV1) dnda etken saptanamamtr. HTLV1 T Hcreli Lsemi ve

lenfoma ile ilikili bulunmutur2.

Malign ve malign olmayan hastalklarda kemoterapotik kullanm da akut lsemi

insidensini artrr. Sekonder ya da tedavi ilikili AML (t-AML) alkilleyici ajanlar ve

Topoizomeraz 2 inhibitrleri kullanmn takiben geliebilmektedir. Alkilleyici ajan

kullanmndan ortalama 3 -5 yl sonra AML grlmektedir, bu olgularda AML

ncesinde miyelodisplastik bozukluklar grlmektedir. Tedavi ilikili AML klonal

sitogenetik anomaliler ile ilikilidir. Bu anomalilerin ounluu kromozom 5 ve/veya

7nin uzun kolunda tam kayp veya ksmi delesyonlardr. kinci grup t-AML

vakalarnda ise 11q23de bulunan Mixed-Lineage Leukemia (MLL) geninde

deiiklikler tespit edilmitir. Bu grup vakalar genelde DNA topoizomeraz 2yi

hedefleyen tedaviler (rnein epipodofilotoksinler, antrasiklinler) sonucu geliir. Tipik

olarak bu vakalarda lsemi geliimi ncesi Myelodisplastik deiiklikler gzlenmez.

Primer malignensiden 12 -18 ay gibi ksa bir sre sonra sekonder malignensi geliir.Hodgkin, Non-Hodgkin lenfoma ve meme kanserli hastalarda otolog kk hcre nakli ile

birlikte yksek doz kemoterapi ve hemopoetik byme faktr destei, Myelodisplastik

Sendrom (MDS) ve AML gelime riskini arttrmaktadr3,4,5,6,7.

Baz hematolojik hastalklar da AMLye nclk etmektedir. rnein MDSli

hastalarn hastalklar sresince %30unda AML geliir. Ayn ekilde Polisitemia Vera,

Esansiyel Trombositopeni, Myeloid Metaplazi gibi myeloproliferatif hastalklarda AML

gelime riski artmtr.Epidemiyolojik ve aile almalarnda lsemi geliiminde genetik

predispozisyonu destekleyen kantlar bulunmutur. Monozigot ikizlerde risk artmtr.

Birok konjenital hastalkta lsemi insidensinde art vardr. Down Sendromu, Blooms

Sendromu, Ataksi Telenjektazi, Fanconi Anemisinde artm AML insidensi vardr8,9.


13/50

4

2.1.2. Patogenez

Lsemi miyeloid veya lenfoid progenitr hcrelerin malign transformasyona

uramas ve bu transforme hcrenin oalarak gittike byyen bir klon oluturmas

sonucu geliir. Akut lsemi hcrelerinin temel karakteristik nitelii diferansiyasyon

yeteneini kaybetmi olmalardr. Lsemiye yol aan malign transformasyonun

mekanizmas net olarak bilinmemekle birlikte temelde genlerdeki defektler sonucu

gelitii dnlmektedir.

Sitogenetik almalar, lsemilerin yaklak yarsnda sk tekrarlayan kromozom

anomalilerinin bulunduunu gstermitir. Bu yapsal kromozom anomalilerinin

translokasyonlar, inversiyonlar ve delesyonlar eklinde olduu ve etkilenen blgelerde

bulunan genlerin de lkomogenezde rol oynadklar gsterilmitir. Bu genler

incelendiinde ayn zamanda hematopoetik sistemin geliimi ve normal fonksiyonu

esnasnda da rol oynadklar ortaya kmaktadr.

Lsemilerde dier tmrlerde olduu gibi tmr spresr gen inaktivasyonu

ve/veya onkogen aktivasyonu gzlenir. Wilms tmr spresr gen, p53, p16INK4

baskland gsterilmi tmr spresr genlerdir. RAS proto onkogenlerinin

aktivasyonlarnda art gsterilmitir10,11.

Kromozomal translokasyonlar lkomogenezde kritik neme sahiptir. Bu

translokasyonlar hcrede balca iki yolla lkomogenezi aktive eder. Birincisi gen

fzyonudur. Gen fzyonu, genellikle bir transkripsiyon faktr ya da reseptr tirozin

kinaz proteinini kodlayan gen blgesi ile bunlarla ilgisi olmayan bir proteini kodlayan

gen blgesinin fzyona urayarak kimerik bir protein oluturmasdr. Bu kimerik

protein hcrenin malign transformasyonuna neden olur. Bir dier mekanizma ise gen

aktivasyonudur. Translokasyonlar sonucunda hcrede normalde transkripsiyonu kontroleden bir gen, uygun olmayan bir biimde baka bir genin aktif promotor ya da

enhansernn kontrolu altna girer ve gen ekspresyon kontrol bozulur. Akut

lsemilerde grlen kromozamal translokasyonlar tablo 1de gsterilmektedir.

Hematopoietik hcrelerin proliferasyonu, farkllamas ve fonksiyonel hale

gelmesi, sitokin ve hormon olarak snflanabilen bir dizi ekstraseller molekl

tarafndan kontrol edilmektedir. Sinyal ileti sisteminin majr yesi bulunmaktadr;

kinazlar, adaptr ya da docking proteinler ve transkripsiyon faktrleri. Sinyal ileti


14/50

5

yollarnda oluan bozukluklar proliferasyon ve farkllamada defektlere yol aar.

rnein lsemik blastlarda sitokin sentezi ve otokrin/parakrin yolla JAK/STAT yolunun

uyarlmas, akut miyeloid lsemide devaml STAT aktivasyonu nedeni olabilecek

mekanizmalar arasnda saylmaktadr. STAT3 aktivitesi Vaskler Endotelyal Byme

Faktr (VEGF) dzeyinin artna yol aarak, tmr anjiyogenezisinde de rol

oynamaktadr. LT3Rlerin kontrolsz ve daimi aktivasyonunun akut myeloid lsemiye

yol at bildirilmitir12,13,14.

Tablo 1: Akut Lsemilerde Grlen Kromozamal Translokasyonlar56.

Hastalk Genetik

Rearrangement

Kromozomal

Deiiklik

Sklk

(%)

Fenotipi Prognoz

E2A-PBX1 t(1;19) 3 CD10+, CD19+, cIg+,pre-B-ALL

iyi

TEL-AML1 t(12;21)2

CD10+, pre-B-ALL iyi

B-ALL

BCR-ABL t(9;22)25

kt

SIL-SCL 1p32 delesyonu 25 ktTCRD-SCL t(1;14) 3

TCR-HOX11t(10;14)t(7;10)

5HOX11 over-

ekpresyonundaiyi

T-ALL

TCRD-HOX11L2 t(5;14) 20 CD3+ CD10+ yiPML-RARA t(15;17) 13 APML yiAML1-ETO t(8;21) 7 Myeloid diferansiasyon iyi

CBFB-MYH11inv(16) veya

t(16;16)5

Eozinofili ile birlikteMyeloid ve

myelomonositikiyi

MOZ-CBP t(8;16)


15/50

6

snflandrmasnda Fransz, Amerikan, ngiliz (FAB) alma grubunun snflandrlmas

kullanlmaktayd. FAB snflandrmasnda AML tans iin periferik kan ve/veya kemik

iliinde blast orannn >%30 olmas gerekli idi. Yeni WHO snflandrmasnda ise bu

oran >%20 olarak belirlenmitir16. Tablo 1de yeni WHO snflamas grlmektedir.

Tablo 2: Akut Lsemilerde WHO Snflamas.

Akut myeloid lsemiler

Yenileyici sitogenetik anomalili AMLlert(8;21) (q22;q22) bulunan AMLlerinv(16) (p13q22) veya t(16;16) (p13;q22) olan AMLlerAkut promyelositik lsemi t(15;17) (q22;q12)(PML/RAR) gsteren AML11q23 anomalili AML

ok dize displazili AML Balangta miyelodisplastik sendromlu olanlar

Balangta miyelodisplastik sendromlu olmayanlar

Tedavi ile ilikili AML veMiyelodisplastik sendrom

Minimal diferansiyonlu AMLOlgunlama gstermeyen AMLOlgunlama gsteren AMLRAR re-aranjman olmayan akut promiyelositer lsemiAkut miyelomonositik lsemiAkut monoblastik ve monositik lsemiAkut eritroid lsemiAkut megakaryoblastik lsemiAkut bazofilik lsemiMiyelofibrozis ile akut panmiyelozMiyeloid sarkom

Baka ekilde snflandrlamayanAML

Minimal diferansiyonlu AMLOlgunlama gstermeyen AMLOlgunlama gsteren AMLRAR re-aranjman olmayan akut promiyelositer lsemiAkut miyelomonositik lsemiAkut monoblastik ve monositik lsemiAkut eritroid lsemiAkut megakaryoblastik lsemiAkut bazofilik lsemiMiyelofibrozis ile akut panmiyelozMiyeloid sarkom

Akut lenfoblastik lsemilerPrekrsr B lenfoblastik lsemi/lenfomaPrekrsr T lenfoblastik lsemi/lenfomaBurkit lsemi/lenfoma

Karmak dizeli akut lsemiler Bifenotipik akut lsemiDiferansiye olmam akut lsemi

2.1.4. Klinik

Akut lsemiye bal semptom ve bulgular nonspesifiktir. Normal hemopoetik

hcre retiminin durmas veya azalmasna bal olarak grlen sitopeniler ve organ

invazyonuna bal semptomlar gzlenir. Hastalar genellikle yorgunluk ve krgnlkla


16/50

7

karakterize viral enfeksiyon benzeri bir tablo ile bavururlar. Anoreksi ve kilo kayb

sklkla grlr. Sternum, kostalarn ve uzun kemiklerin tutulumuna bal olarak diffz

kemik ars hastalarn %25inde grlr. .

Fizik muayenede sitopenilere ait veya lsemik infiltrasyona ait bulgular saptanr.

Anemi, soluklua ve kardiyovaskler semptomlara yol aar. Trombositopeni petei,

ekimoz ve epistaksise neden olan hemostatik defekte neden olur. Splenomegali

hastalarn %50sinde saptanr. ounlukla dalakta hafife bir byme vardr. ok

byk bir dalak lsemiye nclk eden myeloproliferatif bir hastal dndrr.

AMLde ALLye gre lenfadenopati daha az grlr.

Cilt tutulumu Lkemia Kutis olarak adlandrlr. Hastalarn %10unda gzlenir.

Sweet Sendromu olarak adlandrlan Akut Ntrofilik Dermatosis akut lsemiler ve dier

hematolojik hastalklar ile ilikili kutanz paraneoplastik sendromdur. Hassas krmz

plak ve nodller ile karakterizedir17. Kloroma olarak ta adlandrlan Granlositik

Sarkom blastlarn ekstramedller birikimiyle olumakta ve daha ok M1 ve M2

subtipinde grlr. Kt prognozla ilikilidir. Santral sinir sistemi tutulumu ALLde

daha sk grlr AML hastalarnn ise %5-7 sinde asemptomatik tutulum vardr.

Dolamdaki lsemik hcre says 50.000/mm3 olunca kan viskozitesinde arta ve

lkoblastik embolilere bal olarak lkostaz tablosu oluabilir. Hastalarda semptomlaryorgunluk, diffz ba ars ile balayp konfzyon koma ile sonlanabilir19. AML

hastalarnda gzn her tabakas da tutulabilir. Hastalarda eitli pulmoner

komplikasyonlar geliebilir. En sk rastlanan pulmoner problem pnmonidir. Bakteriyel,

viral, fungal nedenlere bal olarak geliebilir. Pulmoner hasar ve buna bal diffz

alveoler hasar geliebilir. Akut lsemilerde kalbin direkt invazyonu klinik olarak

nadiren tan konmasna kar otopsilerde daha sk grlr. Daha ok kemoterapi iliki

toksite grlr. Gastrointestinal problemler akut lsemili hastalarda ska rastlanr.Oral-zofajial kandidiazis ve herpetik zofajit en sk disfaji sebebidir. Gingival

hipertrofiye Monositer AMLde sklkla rastlanr17,18.

Akut lsemi hastalarnda sitotoksik kemoterapiye, organ invazyonuna bal

olarak metabolik ve elektrolit bozukluklar sk grlr. Yksek hcresel dng sonucu

oluan prin katabolizma art hiperrisemiye neden olur. Hipokalemi AMLde

zellikle monositer subtiplerde sk gzlenir. Bu subtiplerde lsemik hcrelerden lizozim

salglanr. Lizozim proksimal renal tbllerde disfonksiyona yol aarak potasyum


17/50

8

kaybna neden olur. Akut lsemi hastalarnda hipokalsemi grlebilecei gibi

hiperkalsemi de grlr. Lsemik hcrelerin hzl lizisine bal olarak tmr lizis

sendromu grlr. Bu sendrom hiperrisemi, hiperkalemi, hiperfosfatemi hipokalsemi

ile karakterizedir. Lsemik hcrelerde aneorobik glikolize bal olarak laktik asidoz

geliebilir19.

Akut lsemili hastalarn ounluunda pansitopeni ve periferik yaymada blastlar

grlr. Beyaz kre says genellikle 1000/mm3 ile 100.000-200.000/mm3 arasndadr.

Hastalarn %10 unda periferde blast olmadan sadece sitopeniler olabilir. Btn

hastalara kemik ilii biyopsi ve aspirasyonu yaplmaldr. mmnhistokimyasal

boyamada myeloperoksidaz, esteraz ve sudan-black myeloid orijini, PAS ve TdT

lenfoid orijini gsterir. Daha ileri inceleme iin immnfenotiplendirme yaplr.

Akut lsemi tans konduunda uzun dnemli prognozu ve tedavi plann

belirlemek iin prognostik faktrler belirlenmelidir. Akut lsemi alt gruplarna ait

prognostik faktrler tablo 3 ve 4de yer almaktadr.

Tablo 3: AMLde Prognostik Faktrler.

Y PROGNOZ KT PROGNOZYA

LKOST 100.000LDH NORMAL ARTMI

PERFORMANS SKORU 0-1 >1MMNFENOTP CD34(-),MDR1(-),CD2(+)

TdT(-),HLA-DR(-)CD34(+),MDR1(+),TdT(+)

HLA-DR(+)STOGENETK t(15;17), t(8;21), inv(16) Del 7q, del5q, 3q21, 3q26

Kompleks karyotipDE NOVO SEKONDER

Tablo 4: ALL de Prognostik Faktrler.

Y PROGNOZ KT PROGNOZYA 30

LKOST 30.000

( T hcreli lsemide>100.000)

MMNFENOTP T hcreli ALLMatr B hcreli ALLErken B hcreli ALL

STOGENETK12 p anormalliit(10;14)(q24q11)

t(9;22) t(1;19)t(4;14) hipodiploidi


18/50

9

2.2. cAMP Sinyal leti Sistemi ve A-Kinaz Sabitleyici Sinyal Kompleksi

Proteinlerin boyutlu uzaysal konfigrasyonlar sabit deildir. Birok

mekanizma ile uzaysal konfigrasyonlar deiir. Bunlarn en nemlisi yaplarna fosfor

eklenmesidir. Proteinlere fosfor eklenmesiyle boyutlu uzaysal konfigrasyonlar

deiir. Bylelikle dier proteinler ile etkileimleri aktive ya da inhibe edilmi olur.

Proteinlerin fosforilasyonunda anahtar rol oynayan enzimler protein

kinazlardr. Protein kinazlarn birok eidi vardr. Siklik Adenozin Monofosfat

(cAMP)a baml Protein Kinazlar (PKA) bunlardan birisidir. PKAlar cAMP

dzeyinin art ile etkinleirler. Hcre bymesi, farkllamas ve iyon kanal

modulasyonunda rol oynarlar.

Yaklak 50 yldan beri bilinen cAMP, ilk olarak hormonlarn intraseller

etkilerine araclk eden haberci proteinler olarak tanmlanmtr. Ancak daha sonra

etkilerinin endokrin sistemle snrl olmad aksine bilinen en yaygn intraseller ikincil

haberci proteinlerden birisi olarak homeostazisin idamesinde kritik neme sahip olduu

bulunmutur20.

cAMPnin sitoplazma iine salnnda G Proteinine Bal Reseptrler (GPCR)

rol oynarlar. GPCR ismi Guanozindifosfat ve Guanozintrifosfat ile altklar iin

verilmitir. Btn GPCRlar hcre zarn 7 kez geen tek bir proteinden oluurlar.

GPCRlar hcre zarnn bir paras deillerdir ve Alfa, Beta, Gama ad verilen birbirine

bal protein alt birimden oluurlar. GPCRlar ilevleri ve yaplar farkl alfa alt

birimlerine gre snflandrlrlar. Beta ve Gama alt birimleri ortaktr.

cAMP birok kritik neme sahip proteini aktifletirebilir. Bununla birlikte

cAMPnin temel intraseller hedefi Protein Kinaz-A (PKA)dr. PKA ilk olarak 1968

de Krebs ve arkadalar tarafndan tanmlanmtr. cAMPnin hcre iinde art PKAy aktifletirir. Aktif hale gelen PKA hedef proteinlerin spesifik serin threoinin

residlerine Adenozin Tri Fosfat (ATP)tan fosfor transferini gerekletirir. Uzaysal

konumu deien proteinlerin aktiviteleri deiir. ntraseller substratlarn PKA baml

fosforilasyonu hcre motilitesi, metabolizmas, farkllamas, sinaptik ileti, iyon kanal

aktiviteleri, byme ve gen transkripsiyonu gibi bir ok hcre fonksiyonunu kontrol

eder 21.


19/50

10

PKA serin-treonin kinaz aktivitesine sahip bir holoenzimdir. Drt alt birimi

vardr. ki alt birimi dzenleyicidir. R sembol ile gsterilir. Dier iki alt birimi ise

katalitiktir. C sembol ile gsterilir. Katalitik alt birimler C alfa, C beta, C gama olmak

zere farkl gen tarafndan eksprese edilirler. Dzenleyici alt birimler ise R1 alfa, R1

beta, R2 alfa, R2 beta olmak zere drt farkl gen tarafndan eksprese edilirler 22.

Protein kinazlar hcre iinde serbest halde bulunmazlar. Sabitleyici proteinlere

bal olarak bulunurlar. Sabitleyici proteinler sadece protein kinazlarn hcre iinde

gereksinim duyulan yerlerde olmasn salamazlar ayn zamanda protein kinazlarn

fonksiyonlarnda dzenlerler. PKAy sabitleyen proteinlere A kinaz sabitleyici

proteinler denir.

A-Kinaz Sabitleyici Protein (AKAP) terimi ilk olarak Rubin ve arkadalar

tarafndan PKA ya balanan inek beyin P75 ve san beyin P150 proteinleri iin

kullanlmtr23. Carr ve arkadalar PKA ve alt birimi R2ye balanan proteinlerin

ilikisinin molekler temellerini ortaya karmlardr24.

AKAPlarn ounluu cDNA ekspresyon ktphanelerinin rekombinant R 2

probu ile taranmas ile bulunmutur. AKAPlarn iki farkl fonksiyonel blgeleri vardr.

Birinci blgeleri R 2 ile kompleks oluturan amfipatik helikal blgeleridir. kinci

blgeleri hcre ii yaplara balanmalarn salayan blgedir.lk bulunan AKAP beyin ekstrelerinden elde edilen tip2 PKA ile ilikili olan

Mikrotbl likili Protein 2 (MAP 2) dir. AKAP ailesi bunu takiben bym 50den

fazla yap olarak farkl fonksiyon olarak benzer proteinler tespit edilmitir. Nematod,

fare, san gibi pek ok canl trnde de AKAP orthologlar tespit edilmitir.

AKAP isimlendirilmesi genel olarak her bir sabitleyici proteinin molekler

arlna gre yaplmaktadr. Bununla birlikte bu snflama metodu farkl molekl

arlndaki benzer AKAP proteinleri iin kullanszdr. Ayrca Gravin, Pericentrinbaz sabitleyici proteinler PKA ile ilikilerinin tespitinden nce isimlendirilmitir.

AKAPlar hcre ii sinyalleri lokalize ederler. Farkl AKAPlar ayn intraseller

kompononente balanabilir. AKAP79/150 plazma membranndaki fosfolipitlere

balanr25. Fosfolipitlere balanmas iin fosfolipid balayc olarak N-terminal

myristoyl gruba ihtiya duyarlar26. Ayn AKAP n farkl izoformlar hcrenin farkl

komponentlerini hedefleyebilir. rnein AKAP18 in ve izoformlar plazma

membrannn farkl komponentlerine balanr. AKAPlar hcrelerin iinde plazma


20/50

11

membran, nkleus, mitokondri, aktin sitoiskeleton ve sarkoplazmik retikulum gibi

eitli yaplara balanrlar. D-AKAP 1 mitokondriye balanr. Pericentrin, AKAP

350/450 ise sentrozoma balanr27.

2.3. Gravin

Gravin ilk defa 1992de miyastenia gravisli hastalarn serumlarnda tespit

edilmitir. Gordon ve arkadalar insan umblikal ven hcre dizisi cDNA ktphanesi

kullanlarak miyastenia gravisli hastalarn serum rneklerini incelemilerdir. Gravin,

intrastoplazmik bir antijen olarak nerilmi ve ilk defa miyastenia gravisli hastalarda

tespit edildiinden Gravin olarak adlandrlmtr28.

Miyastenia gravisli hastalarda tanmlanmasna ramen bu hastalkta patogenez

ve klinik nemi ile ilgili yaplan alma says azdr. Gravinin miyastenia gravisli

hastalarda klinik nemi ile ilgili literatrde 2001 ylnda Sasaki ve arkadalarnn yapt

bir alma vardr. 11 miyastenia gravisli hasta ve 43 salkl gnllden elde edilen

serumlar incelenmitir. Miyastenia gravisli hastalarn ortalama gravin dzeyi ile

salkl gnlllerin ortalama gravin dzeyi arasnda fark bulunmamtr. ki miyastenia

gravisli hastann deerlerini ortalamadan yksek bulmulardr. Bu hastalar 40 yandan

daha gen ve nontimomatz hastalardr. Gen hastalar ve timoma ile ilikisiz miyastenia

gravisli hastalarn prognozu dier hastalara gre daha iyi olduu iin miyastenia gravisli

hastalarda anti-gravin antikor pozitifliinin iyi ynde bir prognostik faktr olabileceini

ileri srlmtr29.

2.3.1. Gravinin Yaps

Gravin/AKAP12 AKAP ailesinin bir yesi olan sabitleyici bir proteini kodlayan

gendir. Gravin gen blgesi Xia ve arkadalar tarafndan 6q24 - 25.2 olarak tespit

edilmitir. Gravin proteinin 305, 287 ve 250kDa olmak zere farkl izoformu tespit

edilmi ve AKAP 12/A, AKAP 12/B, AKAP 12/C olarak adlandrlmtr. Ayrca 43

kDa kk bir izoformuda vardr30.

Gravin ile yaplan almalar 1997de Nauert ve arkadalarnn daha nce

kemirgenlerde tmr spresr gen olarak tespit edilen Src Suppressed C kinase Substrat


21/50

12

(SSeCKS) ile homoloji gsterdii tespit edildikten sonra artmtr. Gravin ve

SSeCKsnin genomik yaps %68 orannda benzerdir. Benzeri fonksiyonlar tespit

edilmitir28. ekil 1de Gravin ve SSeCKsnin isoformlar gsterilmektedir.

ekil 1. SScCS/Gravinin izoformlar.

Gravinin dokulardaki dalm incelendiinde fibroblastlarda, periferik ve santral

sinir sistemi komponentlerinde, adrenal medullada, Bowman kapslnn somatik

tabakasnda, baz organlarn dz kas hcrelerinde tespit edilmitir. Gravin antijenleri

endotel hcrelerinde tespit edilmi, trombositlerde, lkositlerde, insan eritrolsemi

hcrelerinde tespit edilmemitir. nsan eritrolsemi hcreleri phorbol myristate acetate

ile indklendiinde bunlarda da gravin antijenini tespit edilmitir. Gravin hcre iinde

hcrenin daha ok apikalinde yerletii tespit edilmitir. Hcrenin plazma

membrannda, endoplazmik retikulumda yer ald gsterilmitir. Gravin PKA, PKC R2

, PKA, 2 adrenerjik reseptr, arrestin, clatrin, kolmodulin, siklinler ile kompleksler

oluturmaktadr31,32,33.


22/50

13

2.3.2. Gravinin Fonksiyonlar

AKAP ailesinin bir yesi olan gravin PKA ve PKC ile ilikilidir. Hcre ii

sinyallerin lokalizasyonunda grev alr. Gravin endotel hcrelerinin oalmasnda,

hasara kar verdikleri yantta rol oynar. Grove ve arkadalar vaskler endotelyal

hcrelerde gravininin intraseller dalmn ve roln incelemiler. Hcre iskeleti

elementleri Sitokalsin D ve Kolisin ile hasara uratldnda Gravinin hcre ii

dalmnn deimedii gzlenmitir. Oysa lisatlar ile endotel hcre hasar

gerekletirildiinde Gravin miktarnda art gzlenmitir. Hcre btnlnn

korunmasnda Gravinin rol oynadn ne srmlerdir33.

Gravin 2 adrenerjik reseptrlerin fonksiyonlarnn dzenlenmesinde rol

oynamaktadr. Fan ve arkadalar Gravinin bu fonksiyonunu insan epidermoid

karsinoma (A431) hcre kltrnde yaptklar alma ile gstermilerdir. 2 adrenerjik

reseptrlerin uyarlmam durumlarnda reseptr, gravin, PKA ve PKCnin bir

kompleks halinde birlikte bulunduklarn ve 2 adrenerjik reseptrler agonist ile

uyarldklarnda ise gravin, PKC ve PKA bu kompleksten ayrldn ve reseptrn 2

arrestin ile kompleks oluturarak aktivitesinin sonlandn gstermilerdir34.

Gravin nron geliiminde de rol oynamaktadr. Gravin dzeyi santral sinir

sistemi nral progenitr hcre zelliini gsteren NT-2 hcre dizilerinde postmitotik

polar hcereler olan NT-N hcrelerine gre daha fazla bulunmutur. Bu bulguya

dayanlarak nron geliiminde rol oynad ne srlmtr35.

Gravinin hcre biyolojisindeki fonksiyonlar ile ilgili yaplan almalarn ou

kemirgenlerdeki ortholou olan SSeCKS ile yaplmtr. SSeCKS ilk olarak v-scr

transformasyonu ile indklenen onkogenezde downregle olan genlerin taranmasyla

tanmlanmtr ve kemirgenlerde mitojenik reglatuar bir proteindir. Her iki proteindehcre periferi boyunca lokalize olurlar. Hcre adezyon ve gnde rol oynarlar. PKA R

2 ve PKC ye balanrlar36,37.

Lin ve arkadalar scr ve ras onkogenleri transforme edilmi hcrelerde sprese

olan genleri taramlar. Scr ve ras transformasyonu ile onkogenez oluturulmutur.

SSeCKS re-ekspresyonu ile oluan onkogenezin baskland grlm. SSeCKS yi

yeni bir mitojenik reglatuvar gen olarak tanmlamlardr38.


23/50

14

Cohen ve arkadalar bir onkogenik transkripsiyon faktr olan v-Jun transforme

edilen hcrelerde SSeCKS dzeylerini incelemilerdir. Transforme hcrelerde

SSeCKSnin downregle olduu gzlenmitir. SSeCKS re-ekspresyonu salandnda

transforme fenotipin geriye dnd gzlenmitir. Bu deiimle beraber dier tmr

supresr gen rn dzeylerinin de tekrar artt grlmtr39.

Gelman ve arkadalar sitoiskleteal yapnn kontrolnde SSeCKSnin roln

aratrmlardr. NIH3T3 fibroblasts kltrlerinde allm, tavanlardan elde edilen

anti-SSeCKS antikorlar, actin, venikulin, fokal adezyon kinaz ve fosfotirozin

monoklonal antikorlar kullanlmtr. mmn blot, immnfloresan, immn elektron

mikroskop yntemleri kullanlmtr. Tetrasiklin kullanlarak SSeCKS ekspresyonu

salanm. SSeCKS indksiyonu transforme olmayan normal hcrelerde imeye ve

hcrelerde girintilere neden olmutur. SSeCKS over-ekspresyonu aktin, vinculin veya

FAK dzeylerini deitirmemitir. Fakat integrin bamsz FAK tirozin

fosforilasyonunu arttrmtr. Bir mitojenik sinyal yolu olarak SSeCKSnin aktin temelli

sitoiskeletal yapy kontrolnde fonksiyonu olduunu ne srlmtr40.

Gelman ve arkadalar ayrca SSeCKS ekspresyon paternini de aratrmlardr.

Bu ama iin WI-38 fibroblast ve epitelyal hcre kltrleri, primer san hipokampal

nronlar, S24 hcreleri ( tetrasiklinle regle edilmi), fare sperm hcreleri, yetikin veftal fare dokular kullanlmtr. Bu almalarda immnhistokimyasal, immnfloresan

ve real time PCR teknikleri kullanlmtr. Erken ftal dokularda SSeCKS protein

ekspresyonu mezenkimal dokularda, nral tpn luminal yzeyinde, notokordda, kalp

ve perikartda, rogenital dokularda odaklanm bulunmutur. Yetikin farelerde ftal

dnemde olanlara gre daha fazla dokuda SSeCKS protein ekspresyonu tespit

edilmitir. Gonadlarda, dz kas ve kalp kaslarnda, akcier, beyin ve kalpte tespit

edilmitir. San testislerinde puberte ile birlikte SSeCKS dzeylerinin artt ve spermhcrelerinde ekspresyonunun olduunu tespit edilmitir. almaclar bu deneylerle

SSeCKSnin embiryogenezis srasnda hcre gnde, doku mimarisi ve sitoiskeletal

yapnn devamnda ve kontrolnde rol olduunu ileri srmlerdir 41.

Gravinin hcredeki bu fonksiyonlarnn saptanmasndan sonra eitli kanserlerde

gravin ekspresyonu allmtr. Bu almalardan ilki 1995 ylnda prostat kanserinde

comparative genomik hibridizasyon yntemi kullanlarak yaplmtr. Gravin

ekspresyonun prostat kanserinin progresyonunda rol olabilecei ne srlmtr. Daha


24/50

15

sonra 2001 ylnda prostat kanseri metastaznda rol aratrlmtr. Malign hcrelerin

metastatik zellik kazanmasyla Gravin ekspresyonunun azald gsterilmitir. Sonraki

yllarda yaplan almalarda Gravin ekspresyonunun over, tiroid papiller karsinom,

gastrik adenokarsinom ve meme kanserinde azald gsterilmitir. Gravin ekspresyonu

miyeloid malingnensilerde de aratrlmtr. AML, KML ve MDSde Gravin

ekspresyonunun azald gsterilmitir42.


25/50

16

3. GERE VE YNTEM

ukurova niversitesi Tp Fakltesi Dahiliye Anabilim Dal Onkoloji

Bilimdalnda, yk, fizik muayene, sitomorfolojik, immunohistokimyasal ve immn-

fenotipik almalar ve biyokimyasal parameterlerle ile 20002004 yllar arasnda ALL

ve AML tans alan hastalar almaya dahil edilmitir. Histokimyasal olarak akut

lsemilerde Sudan Black, PAS, miyeloperosidaz ve esteraz deerlendirildi.

mmn-fenotipik analiz iin hastalardan 2 ml. periferik kan rnei, EDTA ieren

tplere alnd. rnekler inkbe edilip eritrositler lizise uratldkan sonra akm-sitometri

cihazna uygun hale getirildi. Akm-sitometri (Epics XL Coulter) cihazyla

deerlendirilen rneklerde CD yzey belirleyicilerin lenfosit ve blast hcre populasyonu

ierisindeki yzde oranlar tespit edildi. CD2, 3, 4, 5, 7, 8, 13, 14, 33, 34 incelendi.

%25 zerinde ekspresyon (+) kabul edildi.

Periferik kan rneklerinde blastik hcrenin Gravin ekspresyonu Real-Time

Polimerase Chain Reaction (RT-PCR) yntemi kullanlarak lld.

Gravin mRNA ekspresyonu aada verilen sra ile Real-Time RT-PCR yntemi

kullanlarak yapld. alma LightCycler (Roche Applied Science) ile gerekletirildi.

3.1. rnek Toplama

Hastalardan tan annda, tedavi ncesinde 3 ml periferik kan K3EDTAl tpe

alnd.

3.2. mRNA zolasyonu

Hasta ve kontrollerden alnan kan rneklerinin Beyaz kre (BK) deerleri

Beckman Coulter Gen S System II cihaznda belirlendi.

Toplam 3x106 BK ependorf tpne alnd. zerine 1 ml Red Blood Cell Lysis

Buffer (Roche Applied Science) eklendi. rnek 10 dakika oda snda hafife

alkalanarak bekletildi. 13.000 rpm 15 sn. santrifj edilerek lkositler ktrld.

Paralanm eritrosit artklar uzaklatrld. MagNA Pure LC mRNA Isolation Kit Iin


26/50

17

(Roche Applied Science) Lysis solusyonundan lkositler zerine 300 l eklenerek

hcreler paraland, vorteksle kartrld ve izolasyon yaplana kadar -20 C0de sakland.

zolasyon MagNA Pure LC (Roche Applied Science) cihaznda, MagNA Pure

LC mRNA Isolation Kit I kullanlarak otomatik olarak gerekletirildi. Sistem oligo dT

bal manyetik partikllerle mRNA nn saflatrlmas prensibine dayanmaktayd. zole

edilen m-RNA rnekleri 4 ayr ependorf tpne blnerek -86C 0de sakland.

3.3. cDNA Sentezi

Saklanan mRNA rnekleri First Strand cDNA synthesis kit (Roche Applied

Science) ile cDNA haline getirildi.

Tablo 5: cDNA Reaksiyonu Protokol.

1 Ornek Icin: MKTAR 10 Ornek Icin: MKTARReaction Buffer 2.0 l 10x Reaction Buffer 22 l25 mM MgCl2 4.0 l 25 mM MgCl2 44 l

Deoxynucleotide Mix 2.0 l Deoxynucleotide Mix 22 lRandom Primer p(dN)6 2.0 l Random Primer p(dN)6 22 l

RNase Inhibitor 1.0 l RNase Inhibitor 11 l

AMV ReverseTranscriptase 0.8 l AMV ReverseTranscriptase 8.8 l

Sterile Water 0.2 l Sterile Water 2.2 lToplam 12 l Toplam 132 l

cDNA eldesi iin gereken materyaller miktarlara gre hazrland. Vortekste

hafife alkaland ve spin santrifj edildi. cDNA reaksiyon karm dan her 0.2 ml PCR

tpne 12 l pipetlendi. Daha sonra zerine her RNA rneginden 8 l pipetlendi ve

pipet ucu atlmadan 3-4 kez pipet ile bu cDNA karisimi ve RNA karstrld. Oda

scaklnda (+25C' de) 10 dakika bekletildi. Aada belirtilen programda thermal

cyclerda cDNA reaksiyonu gerekletirildi.

Tablo 6: Scaklk Dngs Program.

Scaklk Sre Dng Says25C 10 dakika 1

42C 60 dakika 1

99C 5 dakika 1

4C 5 dakika 1


27/50

18

3.4. Gravin ve Actin Primer Dizini

Gravin primeri olarak Gravin Probe set (Assay ID: Hs00374507_m1, Applied

Biosystems) kullanld. Actin primeri olarak Beta Actin Probe Set (Assay ID:

Hs99999903_m1, Applied Biosystems) kullanld.

3.5. Real-Time PCR

Gravin ve Actin mRNA dizisine spesifik primerler ile 10 l reaksiyon

hacminde kapiller PCR tplerinin iinde amplifiye edildi. Amplifikasyon iin

LightCycler FastStart DNA MasterPLUS HybProbe (Roche Applied Science) kiti

kullanld. Amplifikasyonlar Real-Time RT-PCR cihaz olan LightCycler cihaznda

gerekletirildi. PCR reaksiyonu srasnda amplifikasyon ilemi gerekletike TaqMan

probdan salnarak serbest kalan FAM boyas Real-Time PCR cihazi tarafindan

kaydedilerek her rnegin baslang konsantrasyonuna gre vermi oldugu Ct degerleri

yine cihaz tarafindan otomatik olarak hesapland. Amplifikasyon LightCycler cihaznn

bilgisayarndan on-line olarak da izlendi.

Tablo 7: Real-Time PCR Reaksiyon Protokol.

15 Ornek (+ 1) Icin (10l): MKTARPCR Grade Water 104.0 lProbe Set 8.0 lMaster Mix 32.0 lToplam 144.0 l / 16 = Her tupe 9 l

almas yaplacak tam olarak 15 adet cDNA rnei belirlenir. Tablo 4dekikarm formlne uyularak iki adet karm hazrland. I. karm Gravin test

karmdr. II. karm ise Beta Actin referans karmdr. I. karm hazrlarken probe

seti olarak Gravin probe setinden, II. karm hazrlarken de probe seti olarak Beta

Actin probe setinden konuldu. Her iki karsmda hazr oldugunda. I. Karsm (Gravin) 1-

16 numaral kapiler tplerine 9 ar l pipetlenir. II. Karisim (Beta Actin) 17-32 numarali

kapiler tuplerine 9 ar l pipetlendi. 1-15 nolu kapilerlere ornek 1den 15 e kadar olacak

sekilde 1 l cDNA srayla pipetlendi. 17-31 nolu kapilerlere ornek 1den 15 e kadar


28/50

19

olacak sekilde 1 l cDNA srayla pipetlendi. cDNAlarda pipetlendikten donra

kapilerler kapatld. 3000 rpm de 30 saniye santrifuj edildi ve Ligtcycler carauseline

yerlestirildi. Aadaki programa gre Real-Time PCR ilemi gerekletirildi. (Tablo 8,

9, 10)

Tablo 8: Denatrasyon Program.

Dng Program Verileri DeerDng Says 1Analiz Modu YOKScaklk Hedefi Segment 1Hedef Scaklk (oC) 95nkbasyon Zaman 10:00

Scaklk Deiim Hz (o

C

/saniye) 20.0Basamak ls 0Basmak Gecikmesi (Dnglerde) 0Kazanm Modu YOK

Tablo 9: Amplifikasyon Program.

Dng Program Verileri DeerDng Says 45Analiz Modu LMEScaklk Hedefleri Segment 1 Segment 2Hedef Scaklk(oC ) 95 60

nkbasyon Zaman 0 20Scaklk Deiim Hz (oC /saniye) 20.0 10.0kinci Hedef Scaklk( oC) 0 0Basamak ls 0 0Basmak Gecikmesi (Dnglerde) 0 0

Tablo 10: Soutma Program.

Dng Program Verileri DeerDng Says 1Analiz Modu YOKScaklk Hedefleri Segment 1

Hedef Scaklk( oC) 40nkbasyon Zaman 30Scaklk Deiim Hz (oC/saniye) 20.0kinci Hedef Scaklk(oC) 0Basamak ls 0.0Basmak Gecikmesi (Dnglerde) 0

Floresans kanal ayarlar, F1/1 olarak kullanld. Sonular LigtCycler Software ile

analiz edilerek deerlendirildi.


29/50

20

3.6. Deerlendirme

Sonular Comperative Ct yntemi ile hesapland. Bu yntemde nce hasta ve

kontrol grubu rneklerinin ortalama Ct deerleri hem Beta Actin hem de Gravin iin

ayr ayr hesapland. Daha sonra Gravin ortalama deerinden Beta Actin ortalama

deeri karlarak ayr ayr hasta ve kontrol gruplarnn Ct (Delta Ct) degerleri ve

bunlara ait standart sapma deerleri hesapland. Daha sonra kontrol grubu Ct deeri

hasta grubu Ct deerinden karlarak Ct degeri bulundu. Bu deer 2 -Ct

formlne uygulanarak hasta grubunun gravin ekspresyonun kontrol grubuna gre ka

kez artm yada azalm olduu Beta Actin gen ekspresyonu internal kontrol olarak

kullanlarak relatif olarak belirlendi43.

3.7. statistik Analizler

Kesikli deikenlerin karlatrlmasnda Ki-kare testi, Srekli deikenlerin

kullanlmasnda Mann-Whitney-U testi kullanlmtr. p


30/50

21

4. BULGULAR

Lsemili olgulara ait kan rnekleri tan annda alnarak gerekli ilemler

sonrasnda uygun koullarda sakland. Demografik ve laboratuar verileri hasta

dosyalarndan elde edildi. Toplam hasta says 137 olup bunlarn 100 (%73) AML,

37si (%27) ALL idi. 67 kadn ve 70 erkekten oluan alma grubunda ya dalmlar

AML iin 42.114.3 (1677), ALL iin 30.514.8 (1573) idi. almaya dahil edilen

hastalara ait demografik veriler Tablo 11da zetlenmitir.

Tablo 11: Lsemi Alt Gruplarna Gre Ya ve Cinsiyet zellikleri.

TANI ToplamAML

(n=100)ALL

(n=37) (n=137)

Ya(OrtalamaSS)

Ortanca(AD-UD)

42.114.342.5

(16-77)

30.514.825.0

(15-73)

39.015.339.0

(15-77)

Erkek49

(%49)21

(%56.8)70

(%51.1)Cinsiyet(n, %)

Kadn51

(%51)16

(%43.2)67

(%48.9)

Hastalarn 133nde (%97) de novo lsemisi, 4nde (%3) sekonder lsemi

vard. Ekstra medller tutulum 12 hastada ( %8.8) tespit edildi. En sk ekstra medller

tutulum %1.9 ile karacier tutulumu olarak bulundu. Hastalarn 39unda (%28.5)

lenfadenopati tespit edilirken 98 hastada (%71.5) tespit edilmedi. 11 hastada (%8)

yalnzca hepatomegali, 27 hastada (%19.7) yalnzca splenomegali, 29 hastada (%21.2)

hepatosplenomegali tespit edildi. Hastalarn 70inde (%51.1) organomegali tespit

edilmedi. Hastalarn organomegali zellikleri tablo 12de zetlenmitir.

Tablo 12: Hastalarn Organomegali zellikleri.

AML ALL TOPLAM9 2 11

HEPATOMEGAL(%9) (%5.4) (%8)

20 7 27SPLENOMEGAL

(%20) (%18.9) (%19.7)16 13 29

HEPATOSPLENOMEGAL(%16) (%35.1) (%21.2)

21 18 39LENFADENOPAT

(%21) (%48.6) (%28.5)


31/50

22

Her iki grupta tan anndaki lkosit, hemoglobin, hematokrit, trombosit, rik asit

ve Laktik Dehidrogenaz (LDH) dzeyleri deerlendirildi. AML grubunda beyaz kre

(Bk) 43057.5 56213.2 /mm3, hemoglobin (Hb) 7.92.2 g/dl, hematokrit (Htc) %

22.9 6.5, trombosit 56459.1 88646.1 /mm3, LDH 2036.3 3301.2 IU/dl, rik Asit

(a) 6.22.9 mg/dl bulundu. ALL grubunda lkosit 33161.650485.3/mm3, hemoglobin

8.5 2.9 gr/dl, hematokrit % 25 9.0, trombosit 80140.515128.8/mm3, LDH 2144.5

3066.1 IU/dl, rik Asit 6.2 3.2 mg/dl bulundu. AML ve ALL olgular arasnda

periferik kan bulgular ve tmr yk gstergeleri ynnden anlaml fark bulunmad. P

deerleri srasyla 0.349, 0.196, 0.127, 0.199, 0.863, 0.961 olarak bulundu.Tablo13de

periferik kan bulgular ve tmr yk gstergeleri grlmektedir.

Tablo 13: Periferik Kan Bulgular ve Tmr Yk Gstergeleri.

AML ALLOrtS D OrtS D P deeriOrtanca OrtancaAD-D AD-D

43057.5 56213.2 /mm3 33161.650485.3/mm3Lkosit /mm3 (18700) (17900) .349

36-337000.0 1600-250000

7.9 2.2 g/dl 8.5 2.9 gr/dl

Hemoglobin gr/dl (7.7 ) (9) .1962.2 -15 2.8-15

% 22.9 6.5 % 25 9.0Hematokrit % (22.2) (26.2) .127

7.4 -45 8.9-42

56459.1 88646.1 /mm3 80140.515128.8/mm3Trombosit /mm3 (31750) (33000) .199

190-747000 8000-434000Laktik Dehidrogenaz 2036.3 3301.2 IU/dl 2144.5 3066.1 IU/dl

IU/dl (1234.5) (1520) .863203-20870 178-18756

6.2 2.9 mg/dl 6.2 3.2 mg/dlrik Asit (5.6) (6.2) .961mg/dl 1.4-15.5 2.0 -15.8

Hasta gruplar deerlendirildiinde Ct deeri ile lkosit, hemoglobin,

hemotokrit, trombosit, laktik dehidrogenaz, rik asit deerleri arasnda istatistiksel

olarak anlaml iliki saptanmad. P deerleri srasyla 0.672, 0.963, 0.943, 0.841,

0.825, 0.740 olarak bulundu. Lkosit says ile hermoglobin, LDH, rik asit deerleri

arasnda istatistiksel olarak anlaml iliki saptand. P deerleri srasyla 0.043, 0.000,


32/50

23

0.035 olarak saptand. LDH ile lkosit, rik asit, AST, ALT deerleri arasnda anlaml

fark saptand. P deerleri srasyla 0.000, 0.000, 0.000 olarak bulundu. rik asit

dzeyleri ile lkosit, LDH, AST, creatin deerleri arasnda istatistiksel olarak anlaml

iliki saptand. P deerleri srasyla 0.035, 0.000, 0.005, 0.001 olarak bulundu.

Tablo 14de AML ve ALL hastalarnn yzey antijeni sonular zetlenmektedir.

Tablo 14: Akut Lsemili Hastalarn Yzey Antijen Sonular.

AML ALLCD2

OrtS D(Ortanca) AD-UD

17.825.6(4.7)

0.5- 96

30.4 297(21)

0.3 -96CD3


20.325.7

(5.1)0-84

19.1 23.4

( 9.8)0.3- 89CD7


24.127.3(7.7)

0- 91.3

37.5 36(20)

0.5- 95CD13

OrtS D(Ortanca)AD-UD

42.1 28.3(42.1 )0.6-93.5

24 21.7( 20.1)0.1- 74

CD19OrtS D

(Ortanca) AD-UD

24.5 29.2(10)

0 - 95

31.6 32.2( 15.1)1.1 -95

CD20OrtS D

(Ortanca) AD-UD

5.3 14.6(0.4 )

0 95

15.9 24.8(4.5)

0.2 95CD10


7.9 16.8(3.3)0 -98

38.9 36.6( 24.5)

0.4- 93.3CD33


29,7 29.2(17.2)0.1 -98

7.5 14.1( 2.1)

0 60.0

AML grubunda 8, ALL grubunda 2 hasta remisyon indksiyon kemoterapisi

alamadan kaybedildi. 126 hastaya remisyon indksiyon kemoterapisi uyguland. AML

olgularndan 80 hastaya (%80) 7+3 protokol (Cytosine Arabinozid 200 mg/m2 7gn ve

antrasiklin (Daunorubicin 45 mg/m2 veya darubicin 12mg/m2) 3 gn), 11 hastaya

(%11) ADA protokol (ATRA 45 mg/m2 ve darubicin 12mg/m2), 1 hastaya (%1) 5+2

protokol (Cytosine Arabinozid 100 mg/m2 5 gn, darubicin 12mg/m2 2 gn)

uyguland. ALL grubunda 29 hastaya TLG-ALL (Siklofosfamid 1000mg/m2 1. gn,

Daunarubisin 45mg/m2 1,2,3.gnler, Vincristin 2mg/gn 1,8,15,22. gnler, Prednizolon

60mg/m2 1.gnden 28.gne kadar, L-asparaginaz 6000U/m2/gn 5.gnde balayarak

haftada 2 kez toplam 6 doz), 3 hastaya CODOX-M (Siklofosfamid 800 mg/m2 1. gn,


33/50

24

200 mg/m2 2 ve 5. gnler, Vincristin 1.5 mg/m2 1. gn, Doxorubicin 40 mg/m2 1,8,15.

gnler, Methotrexate 1200 mg/m2 yklemeden sonra 240 mg/m2 23 saat infzyon 10.

gnde, folinik asit 192 mg/m2 11. gnde yklemeden sonra 6 saatte bir 12 mg/m2

Methotrexate dzeyine gre devam edilir) protokol, 2 hastaya genel durumlar ve

yalar nedeniyle steroid ve vincristin ieren kemoterapi, 2 hastaya Hyper-CVAD

protokol (1,3,5,7. krlerde Siklofosfamid 300 mg/m2 1-3gnler, Vincristin 2 mg 4 ve

14. gn, Doxorubicin 50 mg/m2 4. gn, 40 mg 1-4.gn ve11-14. gn, 2,4,6,8. krlerde

methotrexate 1000 mg/m2 1. gn, Cytosine Arabinozid 3000 mg/m2 2ve 3. gnler)

uyguland. Hastalara uygulanan remisyon indksiyon kemoterapileri tablo 15de

zetlenmitir.

Tablo 15: Hastalara Uygulanan Remisyon ndksiyon Kemoterapileri.

Kemotrapi Protokol AML ALL

7+380

(%80)YOK

YALI1

(%1)YOK

CODOX-M YOK3

(%8.1)

TLG/ALL YOK29

(%78.3)

HyperCVAD YOK 2(%5.4)

VID YOK1

(%2.8)

ADA11

(%11)YOK

KT ALMADAN LM8

(%8)2

(%5.4)

Yirmi alt hasta remisyon indksiyon kemoterapisi sras/sonras kaybedildi.

Remisyon indksiyon tedavisini tam dozda alan 101 hastada yant deerlendirildi. Tm

hasta grublarnda 79 hastada (%78.2) tam remisyon elde edilirken 22 hasta (21.8)

yantszd. AML grubunda 55 hastada (%77.5), ALL grubunda 24 hastada (%80) tam

remisyon elde edildi.

Takip edilen hastalarda 3 hastaya otolog 4 hastaya allogeneik kemik ilii

transplantasyonu yapld. Hastalarn 104 (%77) ortalama 71.7 hafta takip sresinde

kaybedildi, 2 hasta ise takipten kt. 32 hasta halen yaamaktadr. Hasta alt gruplarna

gre sakalmlar tablo 16da gsterilmektedir.


34/50

25

Tablo 16: Hasta Alt Gruplarna Gre Sakalm.

YANITDURUMU

AML ALL

HASTASAYISI

MEDANSAKALIM

HASTASAYISI

MEDANSAKALIM

55 24TAMREMSYON (%77.5)

60 HAFTA(%80)

56 HAFTA

PARSYELYANIT

1 40 HAFTA YOK YOK

REFRAKTER 15 12 HAFTA 6 6 HAFTA

Toplam 71 68 HAFTA 30 80 HAFTA

Bu almann konusu olan Gravin gen ekspresyonu RT-PCR Yntemi ilesaptand. 137 olgudan oluan hasta grubunda Actin Ct deeri 22.5 2.8 (17.8-35.1),

Gravin Ct deeri 42.24.9 (31.2-50), Gravin- Actin Ct deeri 19.64.5 bulundu. 25

salkl kontrolden alnan kan rneklerinde ise Actin Ct deeri 21.64, Gravin Ct

deeri 38.172.5 (41-28.6), Gravin- Actin Ct deeri 16.22.5 (19.3-5.2) bulundu.

ki grup arasnda istatiksel olarak anlaml fark bulundu (p deeri


35/50

26

Hasta grubunun ortalama Gravin gen ekspresyon fold change deeri 11

olarak bulundu. Baka bir ifadeyle hasta grubunda kontrol grubuna gre Gravin gen

ekspresyonu 11 kat azalm olarak bulundu. Hastalarn bireysel fold change

deerleri hesaplandnda kontrol grubuna Gravin gen ekspresyonu 19 hastada (%13.9)

artm, 106 hastada (%77.5) azalm, 12 hastada(%8.8) kontrol grubuyla benzer

bulundu. Olgular Gravin gen ekspresyonundaki azalmalar ve artmalara gre 100 ve 10

kat art ve azallara gre gruplandrld. 80 olguda (%58.4) Gravin gen dzeyi 100

kattan az azalma, 26 olguda (%19) 100 kattan fazla azalma, 14 olguda (%10.2) 10

kattan az artma, 5olguda (%3.6) 10 kattan fazla artma 5 hastada (%3.6) tespit edildi.

Gravin gen ekspresyonunun deiimine gre sakalmlar tablo18de gsterilmitir.

Tablo 18: Gravin Ekspresyonuna Gre Sakalm.

EKSPRESYON ORTALAMA YAAM SRESNORMAL 8 HAFTAAZALMI 32 HAFTAARTMI 24 HAFTA

Tablo 19: Gravin Ekspresyonundaki Deiimdeki Alt Gruplara Gre Sakalm.

EKSPRESYON ORTALAMA YAAM SRES

NORMAL 8 HAFTA100 KATTAN AZ AZALMI 28 HAFTA100 KATTAN FAZLA AZALMI 48 HAFTA10 KATTAN AZ ARTMI 24 HAFTA10 KATTAN FAZLA ARTMI 14 HAFTA

Hastalar Ct deerlerine gre gre kontrollerde saptanan deerlere gre

kyaslama yapmak zere alt gruplara ayrlarak sakalm asndan deerlendirildi. Ct

deerlerine gre sakalm tablo 20de gsterilmektedir.

Tablo 20: Ct Deerlerine Gre Sakalm.

DELTA CT ORTALAMA YAAM SRES0-16 17 HAFTA16-20 24 HAFTA20 + 48 HAFTA

Tablodan da grld gibi Ct deeri arttka sakalm artmaktadr. Yani

Gravin ekspresyonu azaldka sakalm sresi uzamaktadr (ekil 2).


36/50

27

p=0.134

Zaman (hafta)

5004003002001000

Y

lmlSakalm

1,0

,9

,8

,7

,6

,5

,4

,3

,2

,1

0,0

-,1

DELTA CT

20,03+

16,3-20,02

0-16,2

ekil 2:Ct ile sakalm arasndaki iliki.

Sakalm etkileyen bamsz faktrler deerlendirildiinde, LDH, Bk, ya ve

tanya gre kyaslamada lkosit ve Ct deeri bamsz faktrler olarak tespit edildi. P

deerleri srasyla 0.003, 0.058 olarak bulundu. Tedaviye yant da bu parametrelere

katldnda indksiyon kemoterapisine yant tek bamsz parametre olarak bulundu (p

deeri 0.000). Sakalm etkileyen bamsz faktrler tablo 21de gsterilmektedir.

Tablo 21: Sakalm Etkileyen Bamsz Faktrler.

%95 GVENLKARALII

BSTANDART

HATAP DEER

ODDRATO

(OR) ALTDEGER

STDEER

LDH 0.000 0.000 0.170 1,000 1,000 1,000LKOST 0.000 0.000 0.003 1,000 1,000 1,000YA 0.005 0.007 0.518 1,000 ,990 1,019TANI -0.169 0.241 0.483 ,845 527 1,354DELTA CT 0.043 0.023 0.058 ,958 ,916 1,001


37/50

28

5. TARTIMA

Lsemi patobiolojisin anlalmas ve elde edilen bilgi birikimi fatal seyirli olan

bu hastalk grubun doal seyrini deitirmitir. Hcre ii sinyal yollarnda oluabilen

bozukluklar hcrelerin kontrolsz oalmalarna ve apopitoza direnli olmalarna neden

olabilmektedir. Sinyal ileti yollarndaki bozukluklar hedefleyen tedaviler youn olarak

aratrlmakta ve klinik kullanma girmektedir.

cAMP sinyal ileti yollarnn nemli olanlarndandr. cAMP yolu hcre ii

etkilerini protein kinazlar araclyla gerekletirir. A kinaz sabitleyici protein ailesi

protein kinazlarn hcre ii lokalizasyon ve fonksiyonlarn dzenler. Gravin AKAP

ailesinin bir yesidir. Gravin gen ekspresyonu tmr hcrelerinde azalmaktadr. Gravin

gen ekspresyon dzeyinin tmr hcrelerinde azalmas ile metastaz yapma yetenei

artmaktadr. Bu nedenle bir tmr spresr gen olarak tanmlanmaktadr. Ancak

tmrlerde gravin ekspresyonu grece snrl sayda tmr grubunda allm olduu

iin tmr davran ile Gravin ekpresyonu arasndaki iliki henz netlememitir.

Gravinin onkogenezle ilikisini ne sren ilk alma Frankfort ve Gelman

tarafndan yaplmtr. Bu almada v-src onkogeni transforme edilen NIH3T3

fibroblast hcre kltr kullanlmtr. PCR-temelli eksiltici hibridizasyon teknii ile v-

src transformasyonu ile hcre iinde dzeyi azalan 9 cDNA tespit edilmitir. cDNA

daha nce tanmland ve bunlarn Tip I kollagen, Gravin ve parsiyel human cDNA

(clone A7C09) olduu tespit edilmitir. Bunlarn dzeyinin HMG-Co-A-Redktaza gre

315 kat azald gsterilmitir. Dzeyi azalan bu genlerin v-srcnin indkledii

onkogenezde rol oynayabilecei ne srlmtr44. Bu almalardan sonra gravinin

kanserlerle ilikisi incelenmi, bu amala prostat, akcier, mide, melanom ve meme

kanserlerinde tmr hcre dizileri ve/veya tmr rnekleri ve ilaveten bazlarndatransgenik fare modellerinde Gravin ekspresyonu allmtr. Ayrca 2 almada da

lsemilerde gravin ekspresyonu aratrlmtr. Bu almalarda temel olarak FISH,

Nothern Bloot, Western Bloot, immn floresan analiz, immnhistokimyasal yntemler

kullanlmtr.

Visakorpi ve arkadalar prostat kanserinde oluan genetik deiiklikleri

aratrmlardr. Gravinin ileri prostat kanserinde delesyon iin scak bir nokta tespit

etmilerdir

45

. Xia ve arkadalar ise Gravin ve SSeCKSnin prostat kanseri geliiminde


38/50

29

ve metastaz yeteneindeki roln aratrmlardr. Bu alma iin fare ve insan prostat

epitelyal hcre dizileri, fare ve insan prostat kanseri hcre dizileri ve hiperplazi zellii

gsteren hcreler kullanlmtr. Hcre dizilerinde Gravin re-ekspresyonunu indklemek

iin tetrasiklin kullanlmtr. Gravin ve SSeCKSnin ortholog olduu ve gravin geninin

6q24 lokalizasyonunda olduu gsterilmitir. nsan ve fare prostat kanseri hcre

dizilerinde Gravin ve SSeCKS ekspresyonunun normal prostat hcre dizilerine gre

azalm olduu gsterilmitir. nsan prostat epiteli, prostat hiperplazili hcreler ve

prostat kanseri hcrelerinde deiik miktarlarda Gravin ekspresyonu saptanmasna

karn andiferansiye prostat kanseri hcrelerinde Gravin ekspresyonu gsterilememitir.

Kontak inhibisyonun kaybolduu hcre dizilerinde Gravin ekspresyonun azald tespit

edilmitir. MLL hcre dizilerine tetrasiklin uygulanmtr. Bu hcre dizilerinde

onkogenik zelliklerin kaybolduu gsterilmitir. MLL hcre dizisinde en az bir Ha-ras

alleli olduundan Gravin/SSeCKSnin ras ilikili tmr geliimini basklad ne

srlmtr. Bu bulgularla prostat kanseri geliiminde ve metastatik yetenek

kazanmasnda Gravin ekspresyon dzeyinin azalmasnn rol olduu ne srlmtr.

Gravin gen re-ekspresyonunun prostat kanseri progresyonunu engelleyebilecei ne

srlmtr46. Gelman ve arkadalar SSeCKnin metastaz inhibisyonu yolunu

aratrmlardr. SSeCKSnin RhoA- vec42- baml yollarla podozom formasyonunuinhibe ederek metastaz supresyonu yaptn ne srmlerdir47.

Wikman ve arkadalar akcier adenokarsinomlu hastalarda gen

ekspresyonlarndaki deiiklikleri aratrmlardr. alma grubu 18 hasta ve 4

kontrolden oluturulmutur. Hasta ve kontrol grubunun tmoral ve salam dokular

incelenmitir. almada semi kantitatif real time PCR ve cDNA array yntemleri

kullanlmtr. CCNB1, PLK, tenascin, KRT8, KRT19 ve TOP2Ann ekspresyonunun

artt gsterilmitir. Caveolin 12, TIMP3, SOCS 23, DOC2 ve Gravinekspresyonunun azald gsterilmitir. Gravin gen ekspresyonun tm hasta

rneklerinde azald gsterilmitir. Kontrol grupta ise gravin ekspresyonu

gsterilmitir. Bu almada gen ekspresyonu ile klinik gstergeler arasndaki iliki

incelenmemitir. almada aratrlan 10 genin de akcier adanokarsinomunda

diagnostik ve prognostik marker olarak kullanlabilinecei ne srlmtr48.

Wasenius ve arkadalar papiller tiroid karsinomlu hastalarda gen

ekspresyonlarndaki deiiklikleri aratrmlardr. alma grubu 18 hasta ve 3


39/50

30

kontrolden oluturulmutur. Hasta ve kontrol grubunun tmoral ve salam dokular

incelenmitir. c-MET ve matrix metalloproteinase (MMP)-11 yalnzca tmr dokusunda

gsterilmitir. Makrofaj inhibitr sitokin-1, CGD, fibronektin (FN), hipoksinin

indkleyebildii faktr 1, Fc--reseptr -chain, laktat dehidrogenaz A, HLA-DBP1,

AH reseptr, metalloproteinaz doku inhibitr (TIMP-1), ve glycyl-tRNA-synthetase

ekspresyonlarnn artt gsterilmitir. GADD153, PKD-1, CYR61, DPC4, HBA1,

DLG3, protein tirozin fosfataz , heterokromatin protein 1 homolog- ve Gravin

ekspresyonlarnn azald gsterilmitir49.

Choi ve arkadalar gastrik karsinom geliiminde Gravinin roln

aratrmlardr. almada SNU-1, -5, -16, -484, -601, -620, -638, -668 -719, MKN28,

AGS ve HepG2 hcre kltrleri kullanlmtr. Gastrik karsinom nedeniyle opere edilen

18 hastann tmoral dokular ve normal dokular analiz edilmitir. 5-aza-20-

deoxycytidine (5-Aza-dC) DNA methiltransferaz inhibitr olarak kullanlmtr.

Kontrol gen olarak - Actin kullanlmtr. Drt hcre dizisinde Gravin ekspresyonu

tespit edilirken dierlerinde ekspresyon tespit edilememitir. Gravin ekspresyonu tespit

edilmeyen hcre dizileri Southern blot ve FISH yntemleri ile incelendiinde Gravin

DNA lokusunda genetik defekt tespit edilememitir. Gravin proteinin 305 (AKAP

12/A), 287 (AKAP 12/B) ve 250kDa (AKAP 12/C) olmak zere farkl izoformuhcre dizilerinde, tmoral dokularda ve normal dokularda aratrlmtr. Gravin

ekspresyonu tespit edilen hcre dizilerinin ikisinde izoformlarn de tespit edilmitir.

Dier iki hcre dizisinde iki izoform tespit edilmitir. 250kDaluk izoform tm hcre

dizilerinde tespit edilen izoformdur. AKAP12A normal gastrik dokularda eksprese

olduu fakat gastrik karsinomlu dokularda ekspresyonunun belirgin olarak downregle

olduu gsterilmitir. Bilindii gibi genomik DNAda Sitozin-Guanin (CpG)

dinkleotitlerinin metilasyonu gen susturmayla karlkl olarak ilikilidir. Metilasyon,epigenetik durumlarda son derece nemlidir. zellikle baz genlerin promotor

blgesindeki CpG metilasyonu tmr basklaycnn inaktivasyonuyla oluan baz

kanserlerde erken dnemlerde gzlenmitir. AKAP 12/A ve AKAP 12/Bnin gen

blgelerinde CpG adacklar tespit edilmi. Metilasyon spesifik PCR ile yaplan

taramalarda gastrik kanser hcre dizilerinin bir ksmnda AKAP 12/A da metilasyon

tespit edilirken metilasyon tespit edilemeyen grupta AKAP 12/Bde metilasyon tespit

edilmitir. 18 gastrik kanserli hastann dokularnda metilasyona baklmtr ve


40/50

31

AKAP12Ann rneklerin 10unda (56%) AKAP12B ise rneklerin 2sinde (11%)

metile bulunmutur. Hcre dizilerine 5-Aza-dC uygulanmas ile gravin ekspresyonun

olutuu gzlenmitir. Gravin ekspresyonun hi olmad hcre dizilerine 5-Aza-dC ile

birlikte histon deasetilaz inhibitr trichostatin A (TSA) uygulanmtr. AKAP 12/B

ekspresyonunun olutuu gzlenmitir. Plasmid containing wild-type AKAP12A

(pAKAP12A) vektr kullanlarak gastrik kanser hcre dizilerine gen transferi

yaplm. AKAP12A re-ekspresyonu gsterilmitir. Transgenik hcre dizisinde TUNEL

assay ve Annexin V staining kullanlarak AKAP12A re-ekspresyonun apopitozu

indkledii gsterilmitir. almaclar bu bulgularla AKAP12A restorasyonunun

gastrik kanser hcrelerinde apoptozisi indkleyerek hcre oalmasn baskladn

ileri srmlerdir. Sonu olarak da AKAP 12/A ve AKAP 12/Bnin kaybnn gastrik

karsinom geliiminde nemli olabilecei ne srlmtr. Gravinin bir tedavi hedefi

olabilecei, gastrik kanser ve dier malingnensiler iin biyomarker olabilecei iddia

edilmitir50.

Huang ve arkadalar MMTV-Wnt-1 transgenik fare meme kanseri modelinde

deien gen ekspresyonlarn aratrmlardr. Meme kanseri geliiminin deiik

evrelerinde gen ekspresyonlar incelenmitir. Gravinin de meme kanseri geliiminde

ekspresyonunun azald gsterilmitir51

.Lahav ve arkadalar melanom hcre dizilerinde Endothelin reseptr B

(ETRB)nin inhibisyonunun etkilerini incelemilerdir. ETRB inhibisyonu iin BQ788

kulanmlardr. ETRB inhibisyonu ile hcre dizilerinde apoptozun indklendiini

gstermilerdir. ETRB inhibisyonun hcrelerde oluturduu gen ekspresyonu

deiiklikleri incelenmitir. Vaskler Endotelyal Byme Faktr ve Hipoksinin

ndkledii Faktr-1 (HIF-1) nn ekspresyonunun artt gsterilmitir. Gravin

ekspresyonun ise VEGFnin ekspresyonunun artt hcre dizilerinde azaldgsterilmitir. Gravinin melanom geliiminde rol olabilecei ne srlmtr52. Ancak

ilgin olarak bu almalarn ounda gravin ekspresyon azalmas, kayb ya da

metilasyonu ile klinik arasnda ciddi balantlar incelenmemitir.

Bilban ve arkadalar B hcreli Kronik Lenfositik Lsemi (B-KLL)de

Lipoprotein Lipaz ( LPL) ekspresyonuyla ilikili gen ekspresyonlarn aratrmlardr.

42 B-KLL tanl hastann incelendii bu almada RT-PCR ve cDNA array yntemleri

kullanlmtr. LPL ekspresyonu olan grupta belirgin olarak Gravin, Septin10 ve DMD


41/50

32

ekspresyonlarnn artt gsterilmitir. LPL (+) ve (-) gruplar arasnda 14 farkl gen

ekspresyonu tespit edilmitir. Bu gen setlerinin tedavinin planlanmasnda ve prognozun

belirlenmesinde nemli nemli olabilecei teorik olarak ne srlmtr53.

Boultwood ve arkadalar AML, KML ve MDSden oluan hemopoetik

neoplazili hasta rneklerinde Gravin gen ekspresyonunu aratrmlardr. Bu almada

41 AML, 10 MDS (5 refrakter anemi, 2 refrakter anemi ring sideroblast, 3 refrakter

anemi excess blast), 33 KML (7 kronik faz, 2 akselere faz, 24 blastik kriz) ve 3 imitanib

mesilat kullanan sitogenetik remisyonda olan hasta rnekleri kullanlmtr. Kronik faz,

akselere fazdaki KML tanl hastalardan ve MDS tanl hastalardan kemik ilii rnekleri

alnmtr. Kala eklemi replasman yaplan 10 gnllden kemik ilii rnekleri de

kontrol olarak kullanlmtr. Dier hastalarn periferik kan rnekleri incelenmitir.

CD34 (+) hcreler tespit edilip RT-PCR ile Gravin gen ekspresyonunu incelenmitir. 5

MDS tanl, 16 AML tanl hasta ve 50 salkl gnllden periferik kan rneklerinde

mutasyon analizi yaplmtr. RT-PCR yntemi ile elde edilen sonular bizim

almamzda olduu gibi Comperative Ct yntemi ile deerlendirilmitir. AML tanl

hastalarn tmnde Gravin ekspresyonunun azald gsterilmitir. Bir blmnde

Gravin ekspresyonu tespit edilememitir. MDS tanl 10 hastann 9unda Gravin

ekspresyonu azalm olarak bulunmutur. Kronik faz, akselere faz ve blastik krizdekiKML hastalarnda Gravin ekspresyonu azalmakla birlikte blastik krizdeki hastalarda

dier gruplardakine gre ekspresyon daha belirgin basklanm bulunmutur. Buna

karn sitogenetik remisyondaki hastalarda, salkl kontrollerle kyaslandnda daha

fazla gravin ekspresyonu tespit edilmitir. Mutasyon analizlerinde nokta mutasyonlar

tespit edilmemitir. Gravinin MDS ve KMLde prognostik bir marker olabilecei ne

srlmtr42.

eitli neoplazilerde gravin ekspresyonu ile ilgili olup yukarda zetlenenalmalar Tablo22 de zetlenmektedir.


42/50

33

Tablo 22: Malingnensilerde Gravin ile lgili Yaplan almalar.

almac Tmr Tipi Materyal Yntem SonuKaynak

No

Frankfortv-src onkogen

transformasyonu

NIH3T3 fibroblast hcrekltr

PCR Ekspresyon azalm 44

Xia prostat kanseriHcre kltr

Normal ve hiperplazikprostat doku rnekleri

FISHNBWBF

Metastaz geliiminderol gsterilmi 46

Wikmanakcier

adenokarsinomu18 hasta ve 4 kontroln

doku rnekleri

cDNA-Array

RT-PCREkspresyonu azalm 48

Waseniuspapiller tiroid

karsinomu18 hasta ve 3 kontroln

doku rnekleri

RT-PCRcDNA array

HEkspresyonu azalm 49

Choi gastrik karsinomHcre kltr 18

hastann normal vetmral dokular

NBWB

RT- PCRMSP-PCR

Gravin geni metilasyonuekspresyon azalm

50

Huang Meme kanseriMMTV-Wnt-1

transgenik fare memekanseri modeli

WBH

Ekspresyon azalm 51

LahavMaling

MelanomMelanom hcre kltr

RT-PCRcDNA array

ETRB inhibisyonu ileGravin ekspresyonu

artm52

Bilban B-KLL 42 B-KLL tanl hastaRT-PCR

cDNA arrayLPL (+) Gravin

ekspresyonu artm53

BoultwoodAML, KML ve

MDS41 AML,36 KML, 10

MDSRT-PCR

Myeloidmalingnensilerde Gravin

ekspresyonu azalm42

almamza akut lsemili 137 hasta dahil edildi. Bunlarn 100 AML, 37si

ALL idi. AML ve ALL hastalar arasnda BK, Htc, LDH, rik asit dzeyleri arasnda

fark bulunmad. AML veALL li hastalar arasnda Ct deerleri arasnda istatistiksel

anlam fark bulunmad.

BK, Htc, LDH, rik asit dzeyleri ile Ct deerleri arasnda istatistiksel olarak

anlaml iliki saptanmad. Lkosit says ile hermoglobin, LDH, rik asit deerleri

arasnda ve LDH ile lkosit, rik asit, AST, ALT deerleri arasnda istatistiksel olarak

anlaml iliki saptand ki bu bulgular literatr ile uyumludur.

Kontrol grubu 25 salkl gnllden oluturuldu. Hasta ve kontrol grubu

arasnda Ct deeri belirgin olarak farkl bulundu (p deeri


43/50

34

sonular ile uyumlu olarak tm hasta grubu ele alndnda Gravin ekspresyonunun

azald grlmektedir. Hastalar tek tek incelendiinde ise hem AML hem de ALL

olgularnda Gravin ekspresyonunun normal ve artm olduu hastalar bulunmaktadr.

12 hastada (%8.8) kontrol grubuyla benzer 19 hastada (%13.9) artm Gravin

ekspresyonu saptanmtr. Boultwood ve arkadalarnn yapm olduu almann

verileri incelendiinde de bizim almamzda olduu gibi AML grubunda kontrol

grubunun deerlerine yakn Gravin ekspresyonu gsteren hastalar grlmektedir. Bu

grubun yapm olduu almada AML tanl hasta says 41 iken almamzda AML

says 100dr ve grece daha yksek hasta says nedeniyle sonu daha fazla bilgi

verici olabilir. Ayrca Boultwoodun almasnda yalnzca gravin ekspresyonunun

dzeyi saptanm, klinik ve/veya laboratuvar verileri ile ilintisi ve prognostik deeri

belirlenmemitir.

Bilindii gibi akut lsemilerde sakalma etki eden faktrler ya, BK says,

LDH, performans skoru, indksiyon kemoterapisine yant ve immnfenotipdir.

Bunlardan en nemlileri sitogenetik anormallikler ile balangtaki BK saylar ve

indksiyon kemoterapisine yanttr. Akut lsemilerde yeni prognostik belirleyiciler

deerlendirilirken bu parametrelerle kyaslama ve ilikilendirme yaplmaktadr. Bu

almada da sakalma etki eden bamsz faktrler olarak indksiyon kemoterapisineyant, lkosit ve Ct deeri tespit edildi ve kemoterapiye yant en gl belirleyici

olarak bulundu. Ct deeri ile sakalm arasnda pozitif bir korelasyon bulundu. fold

change deerlerine gre hastalar Gravin ekspresyonunun azalma ve artma deerlerine

gre gruplandrld. Ekspresyonun en fazla azald grup sakalmn en uzun olduu

grup olarak tespit edildi. Baka bir ifadeyle Gravin ekspresyonu artka sakalmn

azald saptand.

Gravin ekspresyonu eitli tmrlerde allm olmakla birlikte ekspresyon ilesakalm ilikisine aratrdmz ya da ulaabildiimiz literatrde rastlamadk. Ayn

ekilde akut lsemi olgularnda da yukarda da iaret edildii gibi gravin ekspresyonu

ile sakalm ilikisi incelenmemitir. Boultwood ve arkadalarnn yapm olduu

almada KML alt grubundan sitogenetik remisyonda olan hastalarda Gravin

ekspresyonu kontrollerden yksek bulunmutur. Dier bir ifadeyle Gravin ekspresyonu

sitogenetik remisyonu dolaysyla iyi prognozu gsteren bir marker gibi durmaktadr.

Yalnzca 3 olgunun deerlendirildii bu grup da olgu saysnn azl nedeniyle bir


44/50

35

genellemeyi olanakl klmamaktadr ve byle bir ilikiyi tanmlayabilmek veya ileri

srebilmek iin daha fazla veriye ihtiya vardr.

B-KLLli olgularn kapsand bir almada lipoprotein lipaz (LPL) mRNA

ekspresyonu iyi prognostik bir belirleyici olarak bulunmu ve uzun sakalmla ilikili

gsterilmitir. LPL pozitif hastalarda Gravin ekspresyonu da artm olarak

saptanmtr53. Dolayl bir iliki de olsa Gravin ekspresyonunun uzun sakalmla ilikisi

olduu sylenebilir ancak veriler bu yorumu yapmak iin henz yetersizdir.

BCL-2 anti-apopitotik bir proteindir ve tmr hcrelerinde ekspresyonunun

artt bulunmutur. Bcl2 ekspresyonu baz tmrlerde iyi prognozla ilikilidir. Bunun

mekanizmasnn Bcl-2nin genetik stabiliteyi salayarak p53 mutasyonunun neden

olabildii ek mutasyonlar nledii dnlmektedir. Tersi dnldnde de Gravin

kt prognostik faktrlerin etkilerini artryor olabilir54.

Bir tmr spresr gen olan Gravin dzeyinin artmas ile sakalmn azalmas,

paradoksal bir durum olarak gzkmektedir. Literatrde de tmr spresr genlerin

paradoksal davranlar bildirilmitir. CDKN2A CDK/CCND1 (cyclin D1)RB1

yolanda rol oynayan bir tmr spresr gendir. Birok tmrde ekspresyon dzeyi

azalmaktadr. Nroblastomlu evre 34 hastalarda ekspresyonunun artt gsterilmitir.

Bu hastalarda aktive olan dier faktrlerin RB1 inaktive ettii bu inaktivasyona karRB1 tarafndan CDKN2Ann kompansatuar nonfonksiyonel overekspresyonunun

olduu spekle edilmitir55. Gravin de siklinlerle ilikili bir gendir. Benzeri mekanizma

Gravin ekspresyon artnn kt prognozla ilikisini aklyabilir. Ancak bu iddia daha

fazla sayda olgu ve gzlem ile desteklenmedii srece byle iddia edilmesi doru

deildir.

Sonu olarak bu almada akut lsemi olgularnda bir tmr spresr gen olan

Gravinin ekspresyonun artnn prognozu olumsuz ynde etkiledii saptanmtr. Budurum genel olarak tmr spresr genlerin fonksiyonu asndan paradoksal bir

durumdur. Prognozla ve Gravin ekspresyonuyla ilikili dier gen ekspresyonlarnn

aratrlmas, varsa, bu paradoksal durumun nedenini ortaya koyabilir.


45/50

36

6. SONULAR

1- 137 akut lsemili hasta almaya dahil edildi.

2- AML ve ALLli hastalarn Gravin ekspresyonlar arasnda fark saptanmad.

3- Tm hastalar genel olarak incelendiinde Gravin ekspresyonunun kontrol

grubuna gre 11 kat azald bulundu.

4- Gravin gen ekspresyonu 19 hastada (%13.9) artm, 106 hastada (%77.5)

azalm, 12 hastada (%8.8) kontrol grubuyla benzer bulundu.

5- Hastalar gravin gen rn miktarndaki artma azalmalara gre gruplandrld.

80 olguda (%58.4) Gravin gen dzeyi 100 kattan az azalma, 26 olguda (%19) 100

kattan fazla azalma, 14 olguda (%10.2) 10 kattan az artma, 5 olguda (%3.6) 10 kattan

fazla artma tespit edildi.

6- Gravin ekspresyonunun artmas ile sakalm sresinin ksald bulundu.

7- Sakalma etki eden bamsz faktrler olarak lkosit says ve Ct deeri

tespit edildi. Ancak indksiyon tedavisine yant da deerlendirildiinde tek bamsz

faktr tedaviye tam yant olarak saptand ki bu bulgu da akut lsemilerde indksiyon

tedavisine yantn halen en nemli prognsotik belirleyici olduunu gstermektedir.

Sonu olarak Gravin ekspresyonu akut lsemilerde azalmaktadr ve gravin

dzeyi artan olgularda sakalm olumsuz ynde etkilenmektedir. Ancak bu almada

gravin subgruplar ayr ayr allmad iin bu konuda net yorum yaplmadan nce

daha fazla sayda olguda gravin izoformlarnn allmas daha uygun olacaktr.


46/50

37

KAYNAKLAR

1. Levine EG, Bloomfield CD. Leukemias and myelodysplastic syndromes secondary to drug,radiation, and environmental exposure. Semin Oncol 1992; 19:4784

2. Poiesz et al. Detection and isolation of type C retrovirus particles from fresh and culturedlymphocytes of a patient with cutaneous T-cell lymphoma. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 1980;77:7415

3. Le Beau et al: Clinical and cytogenetic correlations in 63 patients with therapy-relatedmyelodysplastic syndromes and acute nonlymphocytic leukemia: Further evidence for characteristicabnormalities of chromosomes no. 5 and 7. J.Clin. Oncol. 1986;4:325345

4. Thirman et al. Rearrangement of the MLL gene in acute lymphoblastic and acute myeloidleukemias with 11q23 chromosomal translocations. N Engl J Med 1993; 329:909914

5. Super et al: Rearrangements of the MLL gene in therapy-related acute myeloid leukemia in patientspreviously treated with agents targeting DNA-topoisomerase II. Blood 1993; 82:37053711

6. Miller et al: Myelodysplastic syndrome after autologous bone marrow transplantation: Anadditional late complication of curative cancer therapy. Blood 1994; 83:37803786

7. Stone et al: Myelodysplastic syndrome as a late complication following autologous bone marrowtransplantation for non-Hodgkin's lymphoma. J Clin Oncol 1994; 12:25352542

8. German et al; Wahrman Bloom's syndrome. VI. The disorder in Israel and an estimation of thegene frequency in the Ashkenazim Am J Hum Genet 1977; 29(6):553-62

9. Butturini et al Hematologic abnormalities in Fanconi anemia: an International Fanconi AnemiaRegistry study. Blood 1994; Sep 1;84(5):1650-5

10. Inoue et al. WT1 as a new prognostic factor and a new marker for the detection of minimal reidualdisease in acute leukemia. Blood 1994; 84:3071

11. Neubauer et al. Prognostic importance of mutations in the ras proto-oncogenes in de novo acutemyeloid leukemia. Blood 1994; 83:1603

12. Benekli et al. Signal Transducer and activator of transcription proteins in leukemias. Blood 2003;101:2940-54

13. Niu et al. Constitutive STAT3 activity upregulates VEGF expression and tumor angiogenesis.Oncogene 2002; 21:2000-8

14. Bienz et al. Risk assessment in patients with acute myeloid leukemia and a normal karyotype. ClinCancer Res 2005; 11:1416

15. Jemal A, Thomas A, Murray T, Thun M: Cancer statistics 2002. CA Cancer J Clin 2002; 52:2316. Vardiman et al. The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms.

Blood 2002; 100:2292

17. Von den Driesch, P. Sweet's syndrome (acute febrile neutrophilic dermatosis). J Am Acad Dermatol1994; 31:535.


47/50

38

18. Dutcher te al. Hyperleukocytosis in adult acute nonlymphocytic leukemia: Impact on remission rateand duration, and survival. J Clin Oncol 1987; 5:1364

19. Flombaum, CD. Metabolic emergencies in the cancer patient. Semin Oncol 2000; 27:32220. Meinkoth et al. Signal transduction trought the cAMP dependet protein kinase. Mol. Cell Biochem.

1993; 127-128: 179-86

21. Pierce et al. Seventransmembrane receptors. Nature Rev. Mol. Cell Biol. 2002; 3, 63965022. Corbin, J. D, Keely, S. L. Characterization and regulation of heart adenosine 3:5- monophosphate-

dependent protein kinase isozymes. J. Biol. Chem. 1977 252, 910918

23. Lohmann et al. High-affinity binding of the regulatory subunit (RII) of cAMPdependent proteinkinase to microtubule-associated and other cellular proteins. Proc. Natl Acad. Sci. USA 1984 81,67236727

24. Carr et al. Association of the type II cAMP-dependent protein kinase with a human thyroid RII-anchoring protein. Cloning and characterization of the RII-binding domain. J. Biol. Chem 1992; 267,1337613382

25. DellAcqua et al. Membrane-targeting sequences on AKAP79 bind phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate. EMBO J. 1998;17,22462260

26. Malbon et al. AKAPs (A-kinaseanchoring proteins) and molecules that compose their G-protein-coupled receptor signalling complexes. Biochem. J. 2004 ; 379, 19

27. Dario Diviani, John D. Scott AKAP signaling complexes at the cytoskeleton Journal of CellScience 2004; 114, 1431-1437

28.

Nauert et al. Gravin,an autoantigen recognized by serum from myasthenia gravis patients, is akinase scaffold protein. Current Biology, 1997; 7, 5262

29. Sasaki et all. Autoantibody to Gravin is Expressed More Strongly in Younger and NonthymomatousPatients with Myasthenia Gravis Surg Today 2001; 31:10361037

30. Gelman I. H. The role of SSeCKS/gravin/AKAP12 scaffolding proteins in the spaciotemporalcontrol of signaling pathways in oncogenesis and development . Front. Biosci, 2002; 7;1782-1797

31. Jack Erlichman et all. Developmental expression of the protein kinase C substrate/binding protein(clone 72/SSeCKS) in rat testis Eur. J. Biochem . 1999; 263, 797-805

32. Streb et all. Multiple Promoters Direct Expression of Three AKAP12 Isoforms with DistinctSubcellular and Tissue Distribution Profiles Journal Of Biological Chemistry , 2004 Vol. 279, No.53, 5601456023

33. Bryon D. Grove, Aleksandra K. Bruchey Intracellular Distribution of Gravin, a PKA and PKCBinding Protein, in Vascular Endothelial Cells Journal of Vascular Research 2001;38:163-175

34. Fan et al. The scaffold protein gravin (cAMP-dependent protein kinase-anchoring protein 250) bindsthe 2-adrenergic receptor via the receptor cytoplasmic Arg-329 to Leu-413 domain and provides amobile scaffold during desensitization. J. Biol.Chem. 2001; 276, 2400524014.

35. Jrg Piontek, Roland Brandt Differential and Regulated Binding of cAMP-dependent ProteinKinase and Protein Kinase C Isoenzymes to Gravin inHuman Model Neurons The Journal OfBiological Chemistry 2003; Vol. 278, No. 40, pp. 3897038979


48/50

39

36. Chapline et al. Identification of a major protein kinase C-binding protein and substrate in rat embryofibroblasts decreased expression in transformed cells. J. Biol. Chem.1996;271:64176422

37. Gelman et al. Control of cytoskeletal architecture by the src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS.Cell Motil. Cytoskeleton 1998; 41:117

38. Lin, X. , Gelman, I.H. Reexpression of the major protein kinase C substrate, SSeCKS, suppresses v-src-induced morphological transformation and tumorigenesis. Cancer Research, 1997; 57, 23042312

39. Cohen et al. Expression of a down regulated target, SSeCKS, reverses v-Jun_ inducedtransformation of 10T1/2 murine fibroblast. Oncogene, 2001; 20:141-6

40. Gelman et all Control of Cytoskeletal Architecture by the src-Suppressed C Kinase Substrate,SSeCKS Cell Motility and the Cytoskeleton 1998; 41:117

41. Gelman et all. A role for SSeCKS, a major protein kinase C substrate with tumour suppressoractivity, in cytoskeletal architecture, formation of migratory processes, and cell migration duringembryogenesis The Histochemical Journal 2000; 32: 1326

42. Boultwood et all. Low expression of the putative tumour suppressor gene Gravin in chronic myeloidleukaemia, myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukaemia British Journal ofHaematology, 2004; 126, 50851

43. ABI PRISM 7700 User Bulletin No. 2. Sequence Detection System, Revision A, pp. 1113, 1997(updated 10/2001).

44. Frankfort B. J., Gelman I. H. Identification of Novel Cellular Genes Transcriptionally Suppressedby v-src Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995; 206(3), 916-926

45. Visakorpi et all Genetic changes in primary and recurrent prostate cancer by comparative genomichybridization. Cancer Res1995; 55:342347

46. Xia P et al. The Src-suppressed C kinase substrate, SSeCKS, is a potential metastasis inhibitor inprostate cancer. Cancer Res 2001; 61:56445651

47. Irwin H. Gelman ve Lingqiu Gao SSeCKS/Gravin/AKAP12 Metastasis Suppressor InhibitsPodosome Formation via RhoA- and Cdc42-Dependent Pathways Mol Cancer Res 2006;4(3), 151-158

48. Wikman et al. Identification of differentially expressed genes in pulmonary adenocarcinoma byusing cDNA array. Oncogene, 2002; 21, 58045813

49. Wasenius et all. Hepatocyte Growth Factor Receptor, Matrix Metalloproteinase-11, Tissue Inhibitorof Metalloproteinase-1,and Fibronectin Are Up-Regulated in Papillary Thyroid Carcinoma: A cDNAand Tissue Microarray Study Clinical Cancer Research 2003;Vol. 9, 6875

50. Choi et al. AKAP12/Gravin is inactivated by epigenetic mechanism in human gastric carcinoma andshows growth suppressor activity Oncogene, 2004; 23: 70957103

51. Huang et al. Changes in gene expression during the development of mammary tumors in MMTV-Wnt-1 transgenic mice Genome Biology 2005; 6:R84

52. Lahav et all. Endothelin Receptor B Inhibition Triggers A

akut lÖsemİlerde gravİn ekspresyonunun prognostİk Önemİ

Documents