2/ contrÔle qualitÉ des tissus a l’afssaps · penicillium expansum, fusarium solani,...

Responsable : Nathalie DELESALLE

DIRECTION DES LABORATOIRES ET DES CONTROLES

Unité Produits Sanguins et Thérapie Cellulaire

2/ CONTRÔLE QUALITÉ DES TISSUS A L’AFSSAPS

15 novembre 2010

1

Contrôle qualité des tissus

I. Cornées

Choix : 2ème tissu le plus greffé en France, problème de pénurie en partie lié à la qualité.

II. Os (Têtes fémorales, Os massifs)

III. Autres tissus à développer : Membranes amniotiques, Valves, Vaisseaux (Veines et artères), Peau, Parathyroïdes

2

I- CORNÉES

I.1 Généralités

I.2 Bilan de l’inventaireI.2.1 Contrôle endothélial

I.2.2 Contrôle microbiologique

I.2.3 Conclusion de l’inventaire

I.3 Travaux à l’AfssapsI.3.1 Validation du Bact/AlertI.3.2 Etudes collaboratives : Contrôles microbiologiques

I.3.3 Contrôle de qualité externe : Milieux cornéens

I.3.4 Recueil des contaminations sur les contaminations bactériennes et fongiques

I.3.5 Contrôles endothéliaux: Etude multicentrique

I.3.6 Autres travaux et perspectives

3

I- CORNÉESI.1 Généralités

Epithélium

Mb Bowman

Stroma (90%)

Mb de Descemet

Endothélium

4

• PrélèvementDonneurs décédés (prélèvement à la morgue en majorité)

• Indications: – Opacités cornéennes avec baisse d’acuité visuelle:

• Perforation cornéenne (accident domestique, de voiture …)• Brulures chimiques (bases)

• Dégénérescence cornéenne : kératocône

• Kératites infectieuses : kératite herpétique, abcès bactérien, amibes

• Dystrophie bulleuse de la personne âgée : perte de cellules endothéliales cornéennes, elle peut être secondaire à des interventions chirurgicales (glaucome, cataracte) ou à l'altération constitutionnelle des cellules endothéliales


5

•• 11èèrere greffegreffe : Eduard Konrad Zirm (1887-1944) réussit le premier une kératoplastie transfixiante

• 2 principales techniques de greffe :

– Kératoplastie transfixiante : remplacement de toute l’épaisseur de la cornée.

– Kératoplastie lamellaire (greffe partielle) : la cornée est greffée seulement sur sa partie antérieure l’épithélium et le stroma conservant l’endothélium du receveur ou sa partie postérieure

• 20 banques françaises de cornées


6

I - CORNÉESOrganoculture (procédé simplifié)

Prélèvement des cornées :Mise en milieu de transport (Corneaprep, Corneamax)

Mise en milieu de conservation (Corneamax) Contrôle microbiologiqueet contrôle endothélial

Qualification du donneur

Mise en milieu de déturgescence (Corneajet) Contrôle microbiologiqueet contrôle endothélial

Greffe Contrôle microbiologique du milieu de déturgescence post greffe

Transport à la banque

Transport au site greffeur

Si donneur qualifié etContrôles conformes

Si Contrôles conformes

7

I- CORNÉESI.2 Bilan de l’inventaire (2002-2003)

• Envoi d’un questionnaire pour inventorier les pratiques existantes (Fin 2002 - 2003)

• Hétérogénéité au sein des banques :

– Température de conservation des cornées (+31 ou +4°C)

– Durée de conservation (7 à 60 jours)

– Techniques de contrôle qualité du produit : contrôle endothélial (I.2.1 pour info)

– Techniques bactériologiques (milieux, durée d’incubation etc…) (I.2.2 pour info)

• Réel besoin de standardisation

8

I.2 Bilan de l’inventaire (2002-2003)I.2.1 Contrôle endothélial

• Comment ?– technique manuelle (réticule dans l’oculaire)– 45% des banques photographient les cornées lors du

contrôle (5 banques possèdent un analyseur d’image type SAMBA et les autres un capteur d’images ou un appareil photo fixé au microscope)

– étude histologique sur la collerette scléro-cornéenne(réalisée par 2 banques)

Coloration alizarine

9

• Combien ?

95% des banques ⇒⇒⇒⇒ 2 contrôles endothéliaux

5% des banques ⇒⇒⇒⇒ un seul contrôle.1 contrôle peut être ajouté en cas de difficulté de l ecture lors du

premier contrôle ou si la durée de conservation néc essite un changement de milieu

• Quand ?– lors du passage en milieu de conservation

– lors du passage en milieu de déturgescence


10

Critères de qualité du greffon : Kératoplastie transfixante

• Densité cellulaire > 2000 cellules / mm2

≥ 1900 cellules par mm2 pour une banque

• Mortalité cellulaire <2% , <3% ou <10%

• Perte cellulaire après conservation < 20%

• Continuité cellulaire de la mosaïque

• Absence de polymorphisme (taille ou forme)

• Plis de Descemet peu nombreux

• Absence d’œdème


11

I.2 Bilan de l’inventaire (2002-2003)I.2.2 Contrôle microbiologique

• 1 à 5 contrôles selon les banques

– 1: Prélèvement ou Conservation

– 2: Prélèvement et Conservation

Prélèvement et Déturgescence

Conservation et Déturgescence

– 3: Prélèvement, 2 Conservation (J12, J20)

Prélèvement, Conservation, Déturgescence

Prélèvement, Déturgescence, Collerette

– 4: Prélèvement, Conservation, Déturgescence, Collerette

Prélèvement, 2 Conservation, Déturgescence

– 5: Prélèvement, 2 Conservation, Déturgescence, Collerette

Nombre de contrôles microbiologiques effectués

9,118,2

54,5

9,1 9,1

0%

20%

40%

60%

1 2 3 4 5Nombre de contrôles

Banq

ues

12

• Nature du prélèvement effectué :

– 100% des banques contrôlent les milieux de transport, de conservation ou de déturgescence

– En plus, 41% des banques ajoutent un contrôle microbiologique de collerette scléro-cornéenne récupérée lors de la greffe


13

Géloses : chocolat polyvitex, Columbia, Schaedler, VL, TS

Bouillons : schaedler, cœur-cervelle, TGY thioglycolate, glucosé, tryptocaséine soja

Hémocultures : (Vital), Bactec, Bact/alert, BBL septi-chek

Type de milieux utilisés pour le contrôle bactériol ogique

40,9%

4,6%

54,5%

Milieux classiques solides etliquides

Hemoculture seule

Hemoculture associée à unmilieu liquide

45,5%


14

Temps d'incubation des flacons d'hémoculture

20

10

50

20

0%10%20%30%40%50%60%

5 7 10 14Nombre de jours

Banq

ues

Bactec

Bactec et Bact/Alert

1Bactec, 2 Bact/Alert1VITAL, 1BBL


15

• Ces milieux sont incubés : à température ambiante, +20/22°C, +30°C ou +35°C selon les banques

• 59% des laboratoires effectuent une recherche de levures et de

champignons sur milieux spécifiques (Sabouraud ou Bactec Mycosis)

Temps d'incubation des milieux spécifiques pour levures et champignons

8%

15%

8%

23%

0%

5%

10%

15%

20%

25%

2 5 7 8 12 14 21 30

Nombre de jours

Ba

nque

s

2

5

Milieux Sabouraud

Bactec Mycosis


16

I- CORNÉES

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPS

I.3.1 Validation du Bact/Alert

I.3.2 Etudes collaboratives

I.3.3 Contrôle de qualité externe

I.3.4 Recueil des contaminations

I.3.5 Etude multicentrique : contrôles endothéliaux

I.3.6 Autres travaux et perspectives

17

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.1 Validation du Bact/Alert

• Validation de l’automate d’hémoculture BACT ALERT pour le contrôle microbiologique des milieux cornéens (2003-2004)

– 540 essais

– 31 souches bactériennes et fongiques

� Détection rapide de faibles contaminations

� Difficultés avec certaines moisissures : nécessité d’un milieu spécifique en complément

18

• Envoi de milieux cornéens contaminés pour évaluer les performances des méthodes utilisées pour le contrôle microbiologique des milieux de transport, de conservation ou de déturgescence dans le cadre de la greffe de cornée et optimiser les méthodes de contrôle

• 1ère étude en Juin 2004 = Etat des lieux des pratiques et observation de l’hétérogénéité des techniques utilisées.

• Depuis 11 autres études collaboratives avec les 20 banques de cornées (2/an) : 44 échantillons envoyés.

Sphingomonas paucimobilis, Acinetobacter baumanii, St reptococcus pyogenes, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, S tenotrophomonas maltophilia, Ochrobactrum anthropi, Bacteroides fragilis, Brevundi monas vesicularis, Staphylococcushominis, Aerococcus viridans, Wautersia paucula, Rhiz obium radiobacter, Klebsiellapneumoniae, Enterococus faecium …

Candida glabrata, Cryptococcus neoformans, Rhodotoru la rubra, Candida albicans, Penicillium expansum, Fusarium solani, Scedosporium a piospermum, Absidiacorymbyfera, Cladosporium apiospermum, Aspergillus f umigatus, Aspergillus niger …

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.2 Etudes collaboratives

19

Hémoculture : Méthode plus sensible et Délai de dét ection plus rapide pour la cession du greffon grâce à une « quarantaine microbiologique » réduite.

Importance de l’utilisation d’un milieu spécifique à la recherche des champignons et des levures àune température adaptée

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPS I.3.2 Etudes collaboratives

Graphique 1: Evolution des techniques

0

20

40

60

80

100

juin-04

avr-05

sept-05

avr-06

sept-06

avr-07

sept-07

avr-08

sept-08

mai-09

sept-09

avr-10

%

Hémoculture manuelle ou automatisée

Microbiologie conventionnelle (géloses ou milieux liquides)

Milieux spécifiques des champignons toutes méthodes confondues

36% pos

75% pos

20

• Pas de faux positifs sur les 6 échantillons négati fs adressés • 27/48 ont été détectés par l’ensemble des laboratoir es• 5/48 ont permis d’évaluer la sensibilité des techniq ues

d’hémoculture versus les techniques classiques (ino culum faible)• 10/48 montrent la variabilité des résultats : positi vité à l’Afssaps et

en techniques classiques mais pas pour certaines ba nques (inoculum ensemencé faible, pas d’ensemencement de m ilieu SN …).

• Importance de l’utilisation d’un milieu spécifique à la recherche des champignons et des levures à une température adaptée

• Importance de renforcer l’observation des milieux d ’organocultureaprès ensemencement des échantillons

• Délai de détection plus rapide pour la cession du g reffon grâce àune « quarantaine microbiologique » réduite.

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.2 Etudes collaboratives

21

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.3 Contrôle de qualité externe

• Etude pilote avec 4 banques de cornées de Janvier à Mai 2005 : Validation de la faisabilité du contrôle externe des milieux cornéens (transport, organisation et techniques): 231 échantillons.

• Octobre 2005 : 1er tour de contrôle externe de qualité à l’échelon national avec les 21 banques de cornées

• Depuis Janvier 2006 : 3 tours de contrôles par an (20 banques)

22

• Intérêt du contrôle– Observation de la réalisation du procédé de conservation des

cornées– En cas de discordance : interrogation et discussion sur les

problèmes rencontrés : contamination faible, résistance aux ATB, les techniques bactériologiques employées, les méthodes de décongélation …

– But : Standardiser les méthodes en vue d’élaborer des référentiels de contrôle.

• Depuis Janvier 2006 : 3 tours de contrôles par an (20 banques)

• 4% (34/932) contrôles bactériologiques ou fongiques positifs

5 cornées détruites avant greffe (négatif dans les banques)+ 6 déclarations de biovigilance avec suivi du receveur(contrôle positif après greffe)

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPS I.3.3 Contrôle de qualité externe

23


• Bilan 2009

– 231 échantillons réceptionnés

– 53 colis : transport à +4°C.

91% conformes à réception

– Echantillons analysés entre 0 et 26 jours après les banques (Médiane = 2)

185

2917

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

Nom

bres

d'é

chan

tillo

ns0 à 5 > 5 à 10 > 10 à 26

Durée de stockage des échantillons a +4°C ( en jour s)

Durée de stockage des échantillons entre les contrô les bactériologiques réalisés à l'AFSSAPS et dans les b anques

Nombre de milieux cornéens reçus

(134/231), 58%

(3/231), 1%

(94/231), 41%

Milieux de prélèvementMilieux de conservationMilieux de déturgescence

24

• Bilan 2009

– 6% (6/94) des milieux de transport reçus étaient positifs

– Milieux analysés à l’Afssaps entre 2 et 10 jours aprèsles banques


Résultats des contrôles bactériologiques et fongiques obtenus en 2009

Négatifs (225/231) 97%

Positifs (6/231) 3,0%

25


• Bilan 2009

Sur les 6 échantillons contaminés :

- 17% (1/6) ont été retrouvés positifs àl’Afssaps et négatifs dans la banque.

- 83% (5/6) étaient concordants.

Un échantillon négatif à l’Afssaps et positif àla banque

Sur l’ensemble des échantillons reçus :

1% de résultats discordants (2/231)

Aliquote2Positif

(Candida albicans)Positif

(Candida albicans)

CorneamaxMilieu de transport

6

Aliquote4Positif

(Brevundimonasvesicularis)

Positif(Brevundimonas

diminuta/vesiculariset Sphingomonas

paucimobilis)

Corneaprepmilieu de transport

5

Aliquote2Négatif

Positif(Sphingomonas

paucimobiliset Streptococcus

mitis/oralis)


4

Aliquote2Positif

(Brevibacterium spp)

Positif(Sphingomonas

paucimobiliset Streptococcus

mitis/oralis)


3

flacon d’origine5Positif

(Pseudomonasaeruginosa)

Positif(Pseudomonas

aeruginosa)


2

flacon d’origine10Positif

(Agrobacter radiobacter)Positif

(Penicillium)


1

Aliquote ou flacon d’origine

Nombre de jours entre Analyse

Afssaps et banque

Résultats des contrôles bactériologiques en

Banque

Résultats des contrôles bactériologiques à l’Afssaps

Milieux analysés

N°°°°

26

• Bilan 2009

– Pour le positif à l’Afssaps et négatif dans la banque : Résistance connue aux antibiotiques des milieux, contamination faible au départ non détectable par les techniques utilisées par les banques. Et pour le négatif à l’Afssaps et positif à la banque (sensibilité du germe connue à la pénicilline)

• 1 cornée détruite avant greffe.

Importance de réaliser les contrôles en aveugle et impératif d’adresser les milieux à l’Afssaps dans un délai maximum de 5 jours après analyse à la banque


27

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.4 Recueil des contaminations

• Depuis 2005 : Recueil d’information sur les microorganismes identifiés lors du contrôle des cornées

*Fermeture d’une banque en 2006 et regroupement de son activité dans une autre banque.** Une banque ne nous a pas adressée ses données (Bordeaux).*** Quatre banques ne nous ont pas adressée leurs données (Bordeaux, Clermont, Tours, La Réunion).

*Fermeture d’une banque en 2006 et regroupement de son activité dans une autre banque.** Une banque ne nous a pas adressée ses données. 8,3

7493

621

19**

2008

8,9

7776

691

20

2007

7,4

9147

676

17***

2009

10,310,6% de cornées détruites

87498607Cornées analys ées

898910Contaminations observ ées

20*21Nombre de

banques participantes

20062005

28

Nature des produits contaminés en 2009

0 100 200 300 400 500

Effectifs

Collerrettes

Conservation

Deturgescence

Prelevement

I.3 TRAVAUX A L’AFSSAPSI.3.4 Recueil des contaminations

• Nature des produits contaminés de 2005 à 2009

1,4% (9/621)

0,3% (2/621)

35,7% (22/621)**

56,5% (351/621)**

2008

0,1% (1/676)

1,2% (8/676)

28,1% (190/676)**

70,6% (477/676)

2009

4,1% (28/691)

1,3% (9/691)

31,4% (217/691)*

60,2% (416/691)*

2007

2% (17/898)0,2% (2/910)Collerettes

2% (15/898)0,4% (4/910)Milieux de

déturgescence

33% (297/898)

20,4% (186/910)

Milieux de conservation

63% (569/898)79%

(718/910)Milieux de prélèvement

20062005

*Il y a 3% en plus de milieux contaminés qui étaient soit des milieux de prélèvement soit des milieux de conservation (non précisé par la banque).

**Il y a 6% en plus de milieux contaminés qui étaient soit des milieux de prélèvement soit des milieux de conservation (non précisé par les banques).

29


• Taux de contamination par banque :– 2005 : de 1,4% à 16,2%

– 2006 : de 4,1% à 24,1%

– 2007 : de 1,0% à 23,7%– 2008 : de 3,0% à 21,9%

– 2009 : de 1,5% à 17,1%

33%

70%65%

74% 76%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

2005 2006 2007 2008 2009

Banques avec un taux de contamination inférieur ou égal à 10%

30

• INCIDENCE DU NOMBRE DE CONTRÔLES REALISES SUR LES TAUX DE CONTAMINATION PAR BANQUE


Taux de contamination 2009 en fonction du Nombre de contrôles réalisés

Tau

x de

con

tam

inat

ion

2009

0 1 2 3 4 5Nombre de contrôles réalisés

0

3

6

9

12

15

18

Aucune relation statistiquement significative n’a é té mise en évidence entre le taux de contaminations 2009 et le nombre de contrôles réalisés.

31

• INCIDENCE DE L’ACTIVITE DES BANQUES SUR LES TAUX DE CONTAMINATION


Taux de contamination 2009 en fonction de l'activité des banques

Tau

x de

con

tam

inat

ion

2009

Nombre de cornées analysées en 2009

0 500 1000 1500 2000 25000

3

6

9

12

15

18

Aucune relation statistiquement significative entre le taux de contaminations 2009 et l’activité de la banque en 2009.

32

• INCIDENCE DU NOMBRE DE SITE DE PRELEVEMENT SUR LES TAUX DE CONTAMINATION


Taux de contamination 2009 en fonction du nombre de sites de prélèvement

0 5 10 15 20 25 30Sites de prélèvement 2009

0

3

6

9

12

15

18

% d

e co

ntam

inat

ions

200

9

Aucune relation statistiquement significative entr e le taux de contaminations 2009 et le nombre de si tes de prélèvement 2009.

33


*Une banque a effectué en 2007 une recherche d’Herpès et l’a indiquée dans la liste des contaminations (0,1% des contaminations).

17,9%

2,1%

Classification des germes retrouvés en 2009

ClassificationBactériesLevuresMelangesMoisissuresNon identifiés

73,5%

4,3%2,2%

0,022215Non identifiés

0,020714Moisissures

0,042929Mélanges

0,1790121Levures

0,7352497Bactéries

FréquenceEffectifValeur

34

Staphylocoque

Pseudomonas

E coli


0 30 60 90 120 150

Effectifs

Classification des bactéries retrouvées en 2009 par genre

AchromobacterAcinetobacter

AgrobacteriumBacillus

BacteroidesBrevibacterium

BrevundimonasBurkholderia

ChryseobacteriumChryseomonas

CitrobacterCorynebacterium

DelftiaEnterobacter

EnterococcusEscherichiaFlavomonas

HafniaKlebsiella

MethylobacteriumMorganella

Non identifiéesOchrobactrum

PropionibacteriumProteus

ProvidenciaPseudomonas

RalstoniaRoseomonas

RothiaSerratia

ShewanellaSphingobacterium

SphingomonasStaphylococcus

StenotrophomonasStreptococcus

Weeksella1,21%6Proteus

<1%/Autres

1,41%7Corynebacterium

1,41%7Achromobacter

1,61%8Enterococcus

1,61%8Chryseomonas

2,01%10Klebsiella

2,01%10Acinetobacter

4,23%21Non identifiées

4,63%23Stenotrophomonas

6,24%31Escherichia

6,24%31Brevundimonas

11,87%59Sphingomonas

16,30%81Pseudomonas

29,38%146Staphylococcus

% par rapport aux 497 conta.

Nombre de conta.

Genre

Répartition des Bactéries par genre en 2009

35

Candida albicans

Cryptococcus

neoformans


0 20 40 60 80 100

Effectifs

Classification des genres de levures retrouvées 2009

Candida

Non identifiées

Rhodotorula

Saccharomyces

Trischosporon

0,83%1Saccharomyces

0,83%1Rhodotorula

2,48%3Trischosporon


71,90%87Candida

% par rapport aux 121 conta.

LevuresGenre

Répartition des Levures par genre en 2009

36

Aspergillus

Penicillium


0 2 4 6 8

Effectifs

Classification des genres de moisissures retrouvées en 2009

Acremonium

Alternaria

Aspergillus

Non identifiées

Phoma

Scopulariopsis

Scytalidium

7,14%1Scytalidium

7,14%1Scopulariopsis

7,14%1Phoma

7,14%1Alternaria

7,14%1Acremonium

14,29%2Aspergillus


Total en ligneMoisissuresGenre

Répartition des Moisissures par genre en 2009

37


Techniques microbiologiques utilisées en 2009 pour la détection des germes

71,6%

1,3%

Techniques 2009Contrôle visuelHémocultureMéthodes conventionnellesSabouraud

0,9%

26,2%

1,3%9Sabouraud

0,9%6Contrôle visuel

26,2%177Méthodes conventionnelles

71,6%484Hémoculture

38


• Conclusion :– Taux de contamination national s’est amélioré en 2009 :

7,4% (676/9147) versus 8,3% (621/7493) en 2008. (2 banques importantes ne nous ont pas transmis leurs données.)

– Milieux de prélèvement les plus contaminés– 3 contrôles en majorité– Contaminations les plus fréquentes : bactéries (Staph

coag négative, Pseudomonas et Sphingomonas).– Sensibilisation des équipes de prélèvement– Identification des germes importante : origine des

contaminations

• Souchothèque : Conservation des germes détectés dans les produits tissulaires et cellulaires reçus

39

• 5 lames comptées par tous les techniciens des 18 banques françaises et de l’Afssaps (DCE 825 à 2952 EC/mm2) : 72 techniciens, 450 comptages, 70 en manuel et 20 avec analyseur par lame

• Objectif : – Mieux connaître les méthodes de préparation des cornées pour contrôle

endothélial– Comparer les techniques de comptage (analyseur versus manuel)

• Résultats :– 2 banques surestiment entre 30 et 80% les comptages (problème matériel)– Technique analyseur plus proche de la valeur cible et plus reproductible

que la technique manuelle

– Amélioration des comptages entre 2003 et 2009

I.3.5 Etude multicentrique : contrôles endothéliaux

40

I.3.5 Contrôles endothéliauxEtude nationale multicentrique

• 5 lames comptées par tous les techniciens des 18 banques françaises et de l’Afssaps (DCE 825 à 2952 EC/mm2) : 72 techniciens, 450 comptages, 70 en manuel et 20 avec analyseur par lame

• Objectif :– Mieux connaître les méthodes de préparation des

cornées pour contrôle endothélial– Comparer les techniques de comptage (analyseur

versus manuel)

41

Coloration alizarine

I.3.5 Contrôles endothéliauxEtude multicentrique

Densité endothéliale par lame technique manuelle

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

5000

Den

sité

end

othé

liale

cel

lule

s /m

m2

Lame 5825 EC/mm2

Lame 41185 EC/mm2

Lame 1 2047 EC/mm2

Lame 32262 EC/mm2

Lame 2 2952 EC/mm2

Densité endothéliale technique analyseur

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

5000

Den

sité

end

othé

liale

cel

lule

s/m

m2

Lame 5825 EC/mm2

Lame 41185 EC/mm2

Lame 1 2047 EC/mm2

Lame 32262 EC/mm2

Lame 2 2952 EC/mm2

Comptage par analyseur plus reproductible et plus fiable que la technique manuelle (moins de variations intra et inter banques et plus proche de la valeur cible)

MANUEL ANALYSEUR

42


Dispersion des écarts interbanques des techniques d e comptage libérant les cornées

-30,0

-20,0

-10,0

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

50,0

60,0

70,0

80,0

Lame 5825 EC/mm2

Lame 41185 EC/mm2

Lame 12047 EC/mm2

Lame 32262 EC/mm2

Lame 22952 EC/mm2

Var

iatio

n in

tert

echn

icie

n pa

r ra

ppor

t à la

val

eur

cib

le e

n %

A

B

C

D

E

F

G

H

I

J

K

L

M

N

O

P

Q

R

S

Ecart par banque des valeurs libérant les cornées t outes lames confondues

-30,0

-20,0

-10,0

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

50,0

Eca

rt de

s ba

nque

s %

CO

Détermination de la DCE acceptable dans 16/18 banques : 2 banques (C, O) doivent entreprendre des mesures correctives.

Afssaps

Exactitude des 18 banquesVariation inter banque par lame

CO

BA

43


(Thuret et al. Tranplantation 2004;78:1299)

Amélioration des comptages par rapport à 2003

44


• Conclusion de l’étude :

– Nécessité d’élaborer des recommandations pour améliorer la détermination de la qualité endothéliale

• Projets :

– Réalisation d’autres études nationales: suivi de la DCE et morphométrie

– Réalisation d’une étude européenne basée sur le même principe

45

I.3.6 Autres travaux et Perspectives

• En parallèle, surveillance du marché des PTA : contrôle par rapport au certificat d’analyses fabricant.• PTA Cornées : 2 campagnes de contrôles en 2007: 59 produits.

• PTA FIV: 1 campagne en 2009 et une en 2010.

• Etude pilote sur les contrôles endothéliaux avec 5 banques (2008-2010) :• Envoi de 20 cornées par banque à +22°C par transporteur : Cornées

déclassées pour contrôle endothélial limite ou Ac Anti Hbc + couplés à des Ac anti-Hbs

• Comptage au préalable à la banque et comptage manuel et avec analyseur d’image à l’Afssaps

� But : Mise en place en 2011 du contrôle de la DCE au niveau national

46

II- TÊTES FEMORALES

II.1 Généralités

II.2 Bilan de l’inventaire

II.3 Travaux à l’Afssaps

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• Donneur vivant : résidus opératoires lors d’interventions chirurgicales d’arthroplastie de la hanche sauf pour une banque étrangère

• Allogreffes osseuses : Utilisation pour une reconstruction osseuse et des comblements osseux en orthopédie, neurochirurgie, chirurgie maxillofaciale, stomatologie et implantologie orale

• Plusieurs types de procédés appliquées aux allogreffes osseuses– La cryoconservation (-80°C): 33 banques

– La viro-inactivation (solvants chimiques) : 3 BF, 4 BE

– La stérilisation par irradiation (rayon Gamma ou Béta)

II.1 GENERALITES

48

Prélèvement de la tête fémorale

Retrait de tous les tissus mous et du cartilageConditionnement en Cryokit (double emballage stérile)

Qualification du donneurcontrôle microbiologiqueet anatomopathologique

Greffe Contrôle microbiologique du liquide de rinçage ou os

Transport à la banque

Transport au site greffeur

Si donneur qualifié etContrôles conformes

Congélation à – 80°C

Décongélation au blocConservation du greffon en NaCl

II.1 GENERALITES Cryoconservation (Procédé simplifié)

49

II.2 BILAN DE L’INVENTAIREContrôle qualité du produit

Quels contrôles ?

Contrôle de qualité de la tête fémorale

47,0%

17,6%

41,0%

11,8%5,9%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

Contrôles réalisés

Ban

ques

Contrôle anatomopathologique

Aspect macroscopique

Dimensions

Poids

Radiographie

Contrôles physicochimiques

50

II.2 BILAN DE L’INVENTAIRE Contrôle microbiologique

• 78,6% des banques réalisent un seul contrôle au moment du prélèvement (en général).

• 21,4% des banques réalisent 2 contrôles (au moment du prélèvement et à la décongélation pour les os cryoconservés)

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Types de prélèvements effectués pour le contrôle mi crobiologique

14,3%10,7%

3,6%

10,7%

28,6%

60,7%

17,9%

3,6%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

Prélèvements effectués

Ban

ques

Ecouvillonnage de la surfaceosseuseLiquide de trempage

Cartilage

Ligaments

Capsule articulaire et synoviale

Os spongieux

Têtes entières (contrôlesdestructifs)Contrôle indirect

52


Type de milieux utilisés pour le contrôle bactériol ogique

3,6%10,7%

57,1%

10,7%

17,9%Milieu liquide puishémocultureHémoculture seule

Milieu solide et liquide

Milieu solide seul

Milieu liquide seul

• Bouillons : schaedler + vit K3, cœur-cervelle, thioglycolate, glucosé, TGY, tryptocaséine soja etc…

• Hémocultures: Bactec, Bact/alert, BBL septi-chek, Hemoline di phasique

• Géloses : chocolat polyvitex, Columbia + sang, TS + sang etc …

53


• 21,4% des laboratoires effectuent une recherche des mycobactéries sur des milieux spécifiques (Lowenstein-Jensen et Coletsos).

• 17,9% des laboratoires effectuent une recherche de levures sur milieux spécifiques

(Sabouraud, milieu spécifique Candida).

54

• Validation du contrôle microbiologique des os – Préparation de l’échantillon : Broyage – Ensemencement de milieux : TS,TR et Sabouraud +

Bact/Alert PF, SN et MP– Repiquage systématique des TS, TR et Sabouraud sur Géloses

II.3 TRAVAUX A L’AFSSAPS

55

• 135 os analysés dans le cadre d’expertises à la demande de la DIE.

• Contrôle externe de qualité à mettre en œuvre.

II.3 TRAVAUX A L’AFSSAPS

56

IV- AUTRES CONTRÔLES DE TISSUS A DEVELOPPER

• Membranes amniotiques

• Valves

• Vaisseaux : Veines et artères

• Peau

• Parathyroïdes

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CONCLUSION

• Travail de normalisation entrepris par la pharmacopée européenne à l’initiative de la France

• 2 projets de monographies :– Contrôle microbiologique des cornées et/ou tissus – Numération des cellules endothéliales dans les

cornées

• A ce jour, le contrôle des cornées et des os est en place, extension des contrôles aux autres tissus (membranes amniotiques etc…)

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CONCLUSION• Définition de modalités de contrôle adaptées à ces produits (rareté,

spécifications, stabilité, …)

• Suivi des écarts Producteurs-Afssaps, repères de qualité pour les produits cellulaires et tissulaires, et pour les procédés

• Contribution à la standardisation des méthodes

• Exploitation des données du contrôle contribuant à l’amélioration de la qualité des produits

• Forte adhésion des sites

• Publication de recommandations nationales et de référentiels européens pour les CSH, et projet de monographie sur les méthodes de contrôle sur les tissus.

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CONTACTSDirectrice scientifique des laboratoires de St-DenisLaurence Mouillot

Unité Produits Sanguins et Thérapie CellulaireResponsable de l’Unité: Laurent Fleury [email protected]

Responsables Contrôle Qualité:Cellules: Béatrice Panterne Tél: 01 55 87 42 10 [email protected]

Tissus: Nathalie Delesalle Tél: 01 55 87 42 07 [email protected]

Equipe technique:Julien Dubus, Vanessa Duval, Christine Sabatini

Responsable de l’Unité Microbiologie: Gérard Huyghe

2/ contrÔle qualitÉ des tissus a l’afssaps · penicillium expansum, fusarium solani,...

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