-genotipado de proteínas lácteas -sexaje de embriones aplicaciÓn de la pcr a la tipificaciÓn de...
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-Genotipado de proteínas lácteas
-Sexaje de embriones
APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL
Universidad de Zaragoza
PRODUCCIÓN LÁCTEA:
- Existían grandes desequilibrios en la producción.
- Incapacidad de absorber los excedentes.
- Necesidad de derivar la producción hacia derivados lácteos.
Universidad de Zaragoza
- Genotipado de proteínas lácteas con influenciaen producción (calidad y cantidad) láctea.
- Elección del sexo en embriones antes de transferencia.
-Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones.
- Detección de hembras Free-Martin
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS
BB Kappa Casein
Universidad de Zaragoza
P.C.R.P.C.R.
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS
PROTEÍNAS DEL CUAJO
- CASK
- CASB
-CASA1
-CASA2
PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO
- LGBB- LAA
Universidad de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK)
Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)
Universidad de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)
Exón VIIIIntrón VIIIIntrón VII
Oli 31 Oli 32
Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG
CASA2D TGT ACT GAT GTAAG
Mnl-1
Universidad de Zaragoza
396 bpPCR
396 bpCASA2A
396 bpCASA2B
Mnl-I
272 bp 124 bp
Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG
CASA2D TGT ACT GAT GTAAG
Mnl-1
-
+
DD AA AD
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)Universidad
de Zaragoza
CASKB/CASBB/LGBB
1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEASUniversidad
de Zaragoza
DETECCIÓN DE PROTEÍNASLÁCTEAS
SEXAJE DE EMBRIONES
PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA
ELECCIÓN DELSEXO
DETECCIÓN DE GENES DE INTERÉS
TIPIFICACION DE EMBRIONESUniversidad de Zaragoza
““Sistema XY”Sistema XY”XX -XX - XY - XY -
““Sistema ZW”Sistema ZW”
ZW -ZW - ZZ -ZZ -
X - X - ““Sistema X: A”Sistema X: A”XX -XX -
Universidad de Zaragoza
SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO
Sexaje de embriones antes de la implantación.
- Citómetro de flujo
- Cromatografía
Separación de espermatozoides X e Y
- Métodos No invasivos- Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad)- Detección Ag HY (Falsos positivos)
- Métodos invasivos: Biopsia embrionaria
(basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie)
Separación de espermatozoides X e Y
- Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen distinta velocidad de sedimentación
- Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X
- Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos
- Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo tienen los espermatozoides Y
Manipulación de embriones
Métodos invasivos : - obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino a los 7 días).- la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg)
Análisis de cariotipoAnálisis de regiones de DNAdel cromosoma Y
XY
XX
ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZONAS REPETIDAS
+ -
SEXAJE DE EMBRIONES(Análisis de zonas de DNA del Cr Y)
AMPLIFICADOEN Y
MENOR SENSIBILIDAD
SÓLO AMPLIFICADO
EN
MAYOR SENSIBILIDAD
Universidad de Zaragoza
ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZONAS REPETIDAS
+ -
2. SEXAJE DE EMBRIONES
ZFX/ZFY
BRY4a
Universidad de Zaragoza
SEXAJE DE EMBRIONES
ZFX
ZFXZFXZFY
ZONAS DE COPIA ÚNICA
100%
75%
50%
25%
250 ng 250 pg 80 pg 20 pg
Pst-1
Universidad de Zaragoza
Universidad de Zaragoza
Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el
embrión
SEXO/CASK
ABAA BB
AA
TIPAJE DE EMBRIONES(Zona BRY 4a)
SEXO/CASB
ABAA AA AA
Universidad de Zaragoza
DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN
FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de loscoriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamentea las caracteristicas reproductivas de las hembras.
ZFY/ZFXZFY/ZFX
BRY4a/CASKBRY4a/CASK
Diluciones detectadas
l / 20
l / 50
Universidad de Zaragoza