VPLYV SELEGILÍNU (DEPRENYLU) NA VZNIK OXIDAČNÉHO STRESU

RNDr. Mašlanková Jana PhD. a kol.

Ústav lekárskej a klinickej biochémie UPJŠ LF a LABMED, a.s., Univerzita Pavla Jozefa Šafárika v Košiciach, Slovenská republika

Parkinsonová choroba• Parkinsonová choroba – 2 najčastejšie neurodegeneratívne

ochorenie (1 – 2 % populácie nad 65 rokov)• Za väčšinu symptómov zodpovedá predčasný zánik

(neurodegenerácia) nigrostriatálnych neurónov v substantia nigra (pars compacta) s následným nedostatkom dopamínu

• V posledných rokoch sa detekovalo veľa možných príčin zániku neurónov, medzi ktorými dominuje oxidačný stres

Liečba Parkinsonovej choroby• Základným a najúčinnejším liekom je L-DOPA (levodopa)

• L-DOPA prechádza do mozgu, kde sa mení na dopamín, ktorého nedostatok chorobu spôsobuje.

• L-DOPA sa vyznačuje krátkym časom pôsobenia v mozgu a rýchlym odbúravaním ( do 1,5 hod. sa vylúči asi polovica podaného množstva), preto sa hľadajú viaceré spôsoby ako dosiahnuť jej stabilnejšie pôsobenie.

Liečba Parkinsonovej choroby

• L-DOPA, MAO inhibítory, COMT inhibítory a pod.• Moderná koncepcia liečby vo včasných štádiách

uprednostňuje používanie liekov s miernym antiparkinsonským účinkom a potenciálom ochrany nervových buniek pred degeneráciou tzv. neuroprotektívnym efektom: selegilín, amantadín, ktoré nepodliehajú enzymatickej premene a degradujú sa zreteľne pomalšie ako L-DOPA.

Selegilín• je selektívny irerverzibilný inhibítor MAO-B– do dennej dávky 10 mg. – antidepresívny efekt sa dosahuje až pri dávke 20 – 60

mg/denne u 50 – 70 % liečených

• nežiadúce účinky:− poruchy sebaovládania -

patologické hráčstvo, chorobné nakupovanie, záchvatove prejedanie sa a hypersexualita.

− psychiatrické poruchy a ochorenia (zmeny nálady)

Parkinsonová choroba a vznik kyslíkových radikálov

• Associácia s dysfunkciou mitochondrií (redukcia produkcie ATP v mitochondriách a zvýšenie tvorby kyslíkových radikálov (ROS)

Metódy• 15 samcov potkanov kmeňa

Wistar (390 g, 8-9 týž.)

3 skupiny

Intraperitoneálne - 30 dní, podávaný deprenyl

kontrola nízka dávka 0,0025 mg/kg

vysoká dávka 0,25 mg/kg

• Po poslednej dávke, boli samce usmrtené letálnou dávkou tiopentalu• Vzorky pečene boli odobraté a vložene do izolačného roztoku (sacharoza,

tris-HCl, EDTA). Nasledne z nich boli vyizolované mitochondrie a stanovený RKP (kontrolný respiračný pomer).

• Súčasne bolo odobrané sérum na stanovenie hladiny antioxidačných enzýmov a testosterónu.

Stanovenie respiračného kontrolného pomeru (RKP)

Respiračná kontrola je mechanizmus, pomocou ktorého je proces spriahnutia oxidácie a fosforylácie riadený/ kontrolovaný mitochondriálnou koncentráciou ADPRespiračný kontrolný pomer – závislosť spotreby kyslíka v mitochondrii od prísunu ADP

Stanovenie respiračného kontrolného pomeru (RCP)

Resp

iračn

ý ko

ntro

lný

pom

er

Antioxidačné enzýmy

Aktivita superoxiddizmutázy (SOD) v semeníkoch potkanov

Aktivita katalázy (CAT) v semeníkoch potkanov

Závery1. Pri podávaní nízkych dávok selegilínu sa RKP zvýšil o 29 % 2. Pri podávaní vysokých dávok sa RKP znížil o 31 %3. Podávanie selegilínu zvyšuje produkciu antioxidačných

enzýmov (SOD a CAT) v semeníkoch – ochrana buniek pred apoptózou

4. Vysoké dávky selegilínu (0,25mg/kg) sa spájajú s nepriaznivými vedľajšími účinkami. Bolo by vhodné klinicky otestovať liečebný účinok nízkych dávok selegilínu (0,0025mg/kg) u ľudí trpiacich Parkinsonovou chorobou, kedže u potkanov sa potvrdil ich pozitivny efekt na respiračny kontrolny pomer mitochondrii.

Ďalšie ciele

1. Stanovenie počtu spermií konfokálnym mikroskopom

2. Stanovenie hladiny hormónov LH, FSH a testosterónu ELISA metódou

3. Stanovenie antioxidačných enzýmov SOD, CAT, GSH v mitochondriach pečene ELISA metódou a porovnanie s koncentráciami týchto enzýmov v semeníkoch

Ďakujem za pozornosť!