volatile flavour compounds in suspension culture of agastache rugosa kuntze (korean mint)
TRANSCRIPT
����� �� ��� ������� �� ���� ��� ������� � ��� ���� ���� 5%A.�59.8. ��� ��A �66&�
Volatile flavour compounds in suspensionculture of ��������� ���� Kuntze (Koreanmint)Tae Hwan Kim,1 Joong Han Shin,1 Hyung Hee Baek2 and Hyong Joo Lee1�1Department of Food Science and Technology and School of Agricultural Biotechnology, Seoul National University, Suwon 441-744, Korea2Department of Food Engineering, Dankook University, Chunan 330-714, Korea
(Rec
� CoContCont
� �
��������� � ��� ������� � ������� ����� �� ���� ��� ��������� ���� ������ ������
����� ��� ����� �������� ������ ��� ������� ��� ��� ������ � � ����� ���� ����� � � ����
��� ����� ������� ��� �� ���� ���� ����� ���� ���������� �� �������� ��� !"� ������
�� �������� ���� #$� ��% ������ ��� %�� ��% &�'(������ ���)*������ ����� +������� ���� ���������� � %#(��*(�� ��� ����� ������� �* ��,���-��,��� �������� �)������� ��� ������.�� �* ���
��������� �*/���� � ��������*� 0(1*��)*(&(������� ��� ��� ��� �������� �� ����
������ �* &�'�#(�������*�(0()������� %�&�'(�������*�������� ��� %�0(���������� 1������ ���
������� �.�� � ��� ��� ����� ������� ��� �����* ��������� ��� ���� � ��� ������ ����� ������
����(������ �� ���� ���� �������� �* ���� �)����� ������� ����*���� 2�� ��� ���� ����(
������ �� ���� �� ��������� �������������� ���� � � ���� ��� ����� ������� ���� &�0(
���������� �������*/�������� �� ��(&�3(��������� ���������/����� ��� �� ��(&�3(�������(%(�
���������/������� !�� ������ ��� ��"��� �� ���� ��� ������ � ��������� � ��� ����(��"�
���� ��������������� � � ���� ��� ����� �������� 2����� � ���� ����� ����*� � ����
��� ����� ������� ��� �������� � ���� �� ������� ���������� ������� ���� ����� ��� �����
��������
� &$$% !����* � �������� 4������*
��*����� ��������� ���� ������� �������� �� ����� �� �� � ������ ��������� ����� ������� � ������� ���� ��������������� �� ���������������
INTRODUCTION�������� �� ���������� � ���� ���� ���������
��� !�� � ���� ���" ��"��� �� �����# $�!�����
��� �������� ��� ���������"�� ���� �� %�� �� ��
����"����� ��� ��������� �� �����������
����"��#& ' ��� �� �� ����� �� ��� ����� �����
������� � ��������� �� � � �� ����%�� �� �����
������ �� ���� ��� �� � ��� �� �� ������ � �����
��� ���(�� ��������#� )���" ��� ��� ��������
��� �� �� ���� ��� ���� ���� �� ��� �������� �
��������� ������ ��� ���� �� �� ������� ��������
���������� ��� ����������� �#� *���" ������
������ �������� ��� ���� ������������ � ������
�� ���#+
��������� ���� ������ ������� ����� �� �������
��� ����� �� ������ ,��� ��� -���� ��� ���� ����
�� � ��� ��� ��� � ������ �� �� ��#. /� ������ � ���
���� ���� �� �������� (��� ����� ��� (�� ��
���!�# *�� ��� 0��"� ��� ���� ��� ������� � � ����� �� "�� ��������"����1���� �����������
�2,134� ��� ������� ����� ������ ��567��
������ �6#89+#87� ��� ��"��� �&#+99� �� ���
��:�� �� �� � ���������# ,��� �� �� ��8 ����(��
����� ������ �..#595�#87�� ������ ��#659
eived 22 June 2000; accepted 10 January 2001�
rrespondence to: Hyong Joo Lee, Department of Food Science and Tract/grant sponsor: Korean Science and Engineering Foundationract/grant sponsor: Korean Ministry of Education
66& 4����� � ,����� /�������# � ��� ���� ���� 66��9.&+�1�
&6#�7� ��� ��������� ��� �6#889&7� �� ���
��:�� �� �� �� � � ���� �����# ; ��� �� ��<
������� ���� ����� ������ !�� ��� ���������
�� �� � � ��� �������� � ������������ ��� ����� �
� ����� !�� ������������� � ..#89<�#� ��� �5#89
58#+7 �������� �#
2�� ��������"����1� ��������� �2,1=� � ��
������� ��� ���� �������� �� ��� �������� �
����������� �������� ��� � �� �� � ��������5 ���
����� ������� � ���� ��� ��� �*>)*� ��� ���� ����
�� � %��������� 2,1= �������� �� ��������" ���
����� ������ � �� �� �� � ������ #&6 /� *>)*�
���� � ����� � � �� �� � ������� ��� ��� ����� ��
����� ������ � ���� ������� !��� ��� �����
���� �� ��� �� ���� ����� ������ � ���� ����
����#
��� ����� !�� �� ����� �� ���� � �� �� � ����
����� ������� ��� � ���� �������� �� ����#
EXPERIMENTALCallus culture4���� � � ���� �� �� �� �� ���� !��� ��������
��� � ������� ���� ���?�� � 4��� � �����# ���
echnology, Seoul National University, Suwon 441-744, Korea
66&1@�6#66 .�5
�� ��� �� �
����� !��� ���?�� � !���� �� &6�� ��� ���� ���
!�� &6" �& ����� ����� ���� �� &.��# /�
����� ��������� ���� ��� ����� !��� ����� �����
���� !�� ��� �� !���� ��� ���� �� � ( ��� ���
���?�� !�� !���� �� ����� "�������� ����# B�����
� ��� "�������� ���� !��� ��� ��� ��� ���� ���
���� �� 3�����"� ��� 4?��" �34�&& �����
�� ������� !�� �6" �& �������� &�" �& ��+���
�� �������������� ��� ���+�)� ��� &6" �& �"��#
��� ����� $ !�� ��:����� �� .#8 !�� 6#.3 C�=$
�� ��� ����� ���"# ,� �� !�� �� ������ �� �8°,����� !��� ���������� "�� �&�66 ��� &������&�#
Suspension culture4������� �� ���� !�� ������ � .6� � 34
����� �� ������� !�� �6" �& ������� ���
&�" �& ��+�)# 3���� $� �� ������ ����������
��� ������� ��� !��� ��� ���� �� ����� �� �� ��
�� ����# � ���� �� � !��� �� ������ � � ���?�"
�������� �&&6���� ��� &.� � ��� �� ���� !��
����� ����� ����� &� ����#
�� ����� �� "��!��� ��� �������� �� ���� !��
�������� � .6� � 34 ����� �� �������
!�� .6" �& ������� ��� &�" �& ��+�)# ��� �����
!�� ���� �� ������ ���������# * &6� ����� �
�� ���� !�� ���� ���� ��� ���� ����� ���� ����� <
����#
Measurement of cell growth* &� ����� � �� �������� !�� ��?�� ��� ���
�� ���� ��� ����� ����� ��� � ���!�"��� ��������
�� �"� ����# ��� !�"�� � ��� ���� �������" ���
�� � ��� %�� ����� !�� �������� ��� ��� ����
!�� ����� �"�� �� &6666�� �� .��# * ��� ������"
��� %�� ������&� ��� !�"�� � ��� ���� �������"
��� �� � !�� �������� �� �������� ���� �� !�"��
�D,;�� ��� ��� ���� !�� ���� ���� �� �6°, �� �+�
�� �������� ��� �� !�"�� �),;�#
Measurement of sugar concentrations* �"� �� ������� %�� ��������"���� �$'B,�
������ �������� 2������� !�� ���� �� �������"
��"�� ������������� � �� ���� ����� ����" ���
�� ������# ,������� �� $'B, !��� �� � �!�A
�� ���� ,����������� *�� ��� ,� ��� ��#5����66��� ;������ E4*�� �� ����� <.7 ��1�� ������
��� �� ��! ����� �� ���&� ��������� � ������
�� ���������� �������� 2�������� �:����� �� ����
�6� #
Liquid–liquid continuous extraction�� ������� ������� � �� �� �� � ��������� �� � !���
������� ��� ��� �������� �� ���� �&. ���� � �� ��
����" �����"� � ( ��� ��� �;������ C� +&�
;������� E��# ,� � ��� �������� !�� ������ ��
�&<°, ��� �� ��������� � ��� �� �� ��# * .66�
����� � �� � ��� ��������� 8<6� � ��� ��
!���� ��� 5<#+�" � �������� ������� ���������
!��� ��������� !�� &.6� � ��� ���������� ��
�6°, �� �+� ���" � %��9 %�� ���������
.86
��������� �B�� 2 ���� E4*�# >����� !���� � ���
������� !�� ������� �� �����" ��� ��� ����" ����
�6" � ��������� ����� �� ����# >������� !���
������������ �� &66� ���" � ������ ������ �������
��� �>�� �� -���� ��� � "��� � ������ � ����"�� "��#
Direct solvent extractionD�� ������" ��� ��� ������ �������� � ������
��������� �� � ��� �������� !�� ������� ���
�������� �� ���� ��������� ����� + ���� �� ( ����"
�����"� ;������ C� +& ( ��� ���# �� �������
������� � �� �� �� � ��������� +6� � �� � ���
��������� <�6�" � &������� ������� ���������
��� &6� � ��� ���������� !��� ���?�� �"����� �
�� &6�� � � ����!����� ���� ����# ��� ��� ����
������� ���� !�� ������� � ��� ����� �"���� ��
866�� �� �6��# >����� !���� � ��� ������� !��
������� �� �����" ��� ��� ����" ���� �" �
��������� ����� �� ����#
�� ������� ������ � �� �� �� � ��������� ���
� �� !���� !�� ����� �� ��� ���!�"��� ���� �� ��
��� ��� ���� �� ��� !�� ��:����� �� +6� # ,� � !���
���?�� � �� ���:����" ���� �� �� � ������� ������
���� �� &6��# >�������� !�� �� ����� �������"
�� ��� � ����������� ��������#
Gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS)2,134 ��� ��� !�� ������ ��� ���" �� $' .<56
4���� // 2,1$' .58� ������� ����� �������� �34)�
$�! ����'��?��� ,�� E4*�# D�� ��� ���� �!� ���� �
���� � �� �� ��� �� ��� !�� � ����� � �����
!��� ����� � $'�.34 ��6� ��"���6#�.�� ��6#�.�� ( � ���?����� $�! ����'��?��� ,�� E4*�
��� )F�;*G ��6� ��"���6#�.�� ��6#�.��
( � ���?����� - H; 4����(�� E4*�# * &� �����
� ���� ������� !�� �:����� �� � ��� ����� ���
�� �� !�� ���� �� � ������ "�� �� � �������� ��! ����
� 6#<� ���&# =��� ���������� !�� ��"������
��� +6 �� �66°, �� � ���� � �°,���&� !�� ���
��� (�� �� � ���� � . ��� �6�� �������� �#
=���� 34) �������� !��� �� � �!�A �:�����
����������� �66°,� �������� ����������� �.6°,�
���� ���"�� ��� ��9..6� ������" ����� &#+�������&#
I������� ����� �I/�� !��� ��������� ���" ��
��� (�� ,<9,�� �� ������� �� �������#&�
Aroma extract dilution analysis (AEDA)2,1= ��� ��� !�� ������ ��� ���" � J���� ��.6
2, �J���� /��������� 2���� E4*� �%��� !�� �
���� ������� �������� �D/)� ��� � �� (�" ���#
> ����� ��� ��� ��� � ��� 2, �� ��� !�� � � &A&
���!��� ��� D/) ��� ��� �� (�" ���# 4��� � �����
�&A�� � ��� ������� !��� ������ ���" ��� ����
������� �� � � ����# * &� ����� � ���� � ����
��� � !�� �:����� ��� � �� ��� �� ��� �)F�.34
�� )F�;*G�# =��� ���������� !�� ��"������
��� +6 �� �66°, �� � ���� � <°,���&� !�� ���
��� (�� �� � ���� � . ��� �6�� �������� �#
=���� �������� � 2, !��� ��� ���� �� ����� �
2,134# 2,1= !�� �� ����� �� ��� ���������
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
Figure 1. Effects of sucrose concentration on cell growth of Agastacherugosa suspension culture. Initial sucrose concentrations: �, 30g l�1;�, 50g l�1. A, fresh cell weight; B, dry cell weight. Other conditions of each
�������� ���� ��� ���� �� *"������� ��"��� �� ������ ����
��� ��# ��� ������ � ���� �D)� ����� � ����
����������� ������� !�� ������� �� �������� ��
2�����#&6
Identification and quantification of volatile flavourcompounds/����(������ � �� �� � �������� !��� ����� ��
��� �������� � ���� ������ ��� I/� � ��?��!��
!�� ����� � �������� ���������# ;��� ���������
!��� ��� ��� �� �� ����(������ !��� �� ����� !��
��� �� � � ���� ������ �������� �; �� �8.� &55.�
$�! ����'��?��� ,�� E4*� ��� �� ���� I/�#&+�&. /�
��� ���� � ����������� ��������� ����(������
!��� ����� �� ��� �������� � ���� ������� I/� ���
����� ������� � ��?��!�� !�� ����� � ��������
���������# *������� ������ �������� !��� ���
�� �� * ���� ,����� ,� �E4*� ��� D�����9
������ *������� �������#
I� ���� ������������� � ��� ����(�� ������
��������� !��� ��������� �� �������� � ����
��? ����� !�� ���� � ��� ������ �������� ���
������ �� &������� �# /� ��� ��� ������ ������ ���
������������� � ������ �������� !��� ��������
�� ��� )F�;*G �� ���#
medium were the same (MS medium supplemented with 1mg l�1 2,4-D).The results are the average�standard deviation (n =7).Figure 2. Sugar utilisation by Agastache rugosa cells in suspensionculture. Cells were cultivated in MS medium supplemented with 50g l�1
sucrose and 1mg l�1 2,4-D. The external sucrose (�) was hydrolysed toglucose (�) and fructose (�) by the cells. An HPLC system was used formeasuring sugar concentrations. The results are the average�standarddeviation (n =2).
RESULTS AND DISCUSSIONGrowth of ��������� ���� suspension culture2��!�� � � ���� �������� �� ���� !�� ������
!��� ��� �� ���� !�� �� ������ � 34 �����
�� ������� !�� .6" �& ������� ��� &�" �&
��+�)# /� ��� ������ �� !�"�� !�� 5� ��� .&7
�"��� � ),; ��� D,; �������� � �� ��� � ���� �
34 ����� �� ������� !�� �6" �& ������� ���
&�" �& ��+�) �D"� &* ��� &F�# �����"���� ���
�� ���� ����� D,;1),; � .6" �& ������� !��
�!�� ���� ���� � �6" �& ������� ����� ��� ���!���
���� �"��� ��"�� ������������ �� ����� ���� ���
�� �"�� ����� ��������� � �� ��� ��� �� � �� !����
�������#&� 4������ � ��� �� ���� ����� !�� ������
���� �� " ����� ��� ������� !��� � ����� ��� ���
�������� �� ���� �������� " ����� �� ����� � �D"
��# ��� ������������ � ������� � ��� �� ����
����� ������� �������� ��� ��� � �� ��� &�#
C�� �� � �� � ���� �� � ����� ��� ������� ����
��� � ������� �� ��� ����� �� ���� ���� � ��
�� ��� " ����� ���� �� ����� �#&89�&
Volatile compounds of ��������� ����
suspension cultureD��� ��� �" ���� �� ��� �" ���� � "��!�� �����
69<�� � ���� �������� �� ���� ������� �������
����� !�� �� �! �� �� ���# $�!����� ��� ��
�� ��� "����� � ����"�� �� � ��? ����" ��� �������
��� ���� �� ��� ��� <�� ��� ��� �� ���� ������� ��
����� ��������1!��� ?� ������ !��� ������
�����"�� !�� ��"�� �� ������ ���# J� �� � ����
����� !��� ��������� ��� � &.������ � ��������
�� ���� !��� �������� ������� ����� �� !� ��
��������1!��� ?� �����#
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
��� � & ��� ��� �� �� � ������ ��������
����(�� � � ���� �������� �� ����� ���� �����"�
������� ��� ��� I/� � ��� �������� �� $'�.34
��� )F�;*G �� ����# * ���� � �� ��������
!��� ����(��� �& � !��� !��� ����� � ����(��#
/����(�� �������� �� ���� &� � ���� �� (��
������� �� �!� ������ ��� �� ���� ������ ����
�����# ��� �� �� � ��( � � � ���� ��������
�� ���� !�� ���� � � ����� ��� ���� � ��� �����
���# 3���� ������ � ?��!� �� ��� ���� ��������
�� �� � ������� � ��� ����� �����9< !�� ���
.8&
Table 1. Volatile compounds of Agastache rugosa suspension culture
�������� ���
� ������
��� ���� � ��� ���� ��� ������� ������
���� ��!
���������� ����� ������� ������� ���� ���� ��� �
���������� ���� ������� ���� ���� �� �
����� ���� ��� ��� ���� �� �
����� ���� ��� ��� ��!� ��� �
��"�#���� �!� ���� �� �
��������������$%�$���� ���������� ��! �!�� �� �
���&� ������ ����&����������� ���� ���� �� �
������������ �$����� ������� ���� ���! �� �
�"����'��������� ���� ���� �� �
�#$"������'��� �������� ���� �!�� �� �
�#����'��������� ��!� �!�� �� �
��'������ ��!� ���� �� �
��(����������#$���� ���� ���� �� �
��� %� ��� & ��!
����� ���� ���� � ������� ���� ��� ��� �
��" %�#���� ������ ��������� ���� ��!� ����� �
��" %�#�������#���&�� � � �)�������� ���� ����� �� �
�����" %�#$�������� ������ �%��$��%% *������ ���� ���� �! +
�����" %�#�������#$�������� ������ �&��,�%���� ���� ����� �� +
#! '!
��������������� %�#�#� $%�$������ ��!� ���� �� �
����������#����$������ ���� ����� ��� �
��!�������! ��������!
������-%���������#�&����� ��� ���� ��� +
��" %�#� ������ ��� ������� ���� �%��������� ��� ���� ��� �
������-%��������&��� ��� ���! ��� �
���%%��� ����� ��!! ���� �� +
����.� %����$��� ���� ����� �� +
'������� ���� ���� �� �
� /�������� �� �# ���%���� ���, ��$�%�01�� +�2+�� �� %�0�%�����3� �)�%�,� ��� �� �� 4� 0�% ��� ��� ���3� 5 ����1������6 �� ���� �$���% � �� %�������� �� �# 7�%� ���������� 7�� ���� �0 �� � ������ ���� �% 8 �� ���� �$���% � 7��
� ������� �� ��� �0 9��� �!� ���� �$���%�� ������� �� %�������� �� �# 7�� ���������� 7�� ��� �0 /�0� �� �� ��8 +� ���� �$���% �
7�� ���������� 7�� ��� �0 9��� �!� ���� �$���%�� ������� ��������)� � ����1�������3
�� ��� �� �
�������� � ��� �������� �� ����# ) ������� �
�� �� � �������� ���!��� �������� �� �����
����� ����� �� ���� �������� ��� ���� �����
���� ���� ���� ������� � ������ �� ���� �������#+
��� ��� �� ��� �� ��� ����� ��������� � �� � ���
���(� ����� ���� � ������� �� ������ ���" ������
��������#��
������� � ���� � !��� �������� �� � ������������ �� ����� � !��� &����������� !�� ���
���� �������� � ���� # *������ �� � ������������ �
� �� ���� � ��� �� ��������� ��� ���� ����(�� �
�������� ��!�� ��� !���#�� ��3���� �&������� �
&������� � &������� � �������� �����&������ �
����� � ���� ��� ������ ������ � !��� ��� ������
����������� � ������ ��������+ ��� !������ !���
�������� � ��� �������� �� ����# = ������ ������� �
&������� � !��� � ?��!� �� ��� � ��� ���
� ���� ���. ��� ���� ������� �� �� ������� ��
�� ������ ���� ��� !��������� �"��� ��#�� ��'���� �
������ � !�� �� � � ����� ?� ������ � ��������� ��
.8�
����� ��� ������ � ��� �� ������"��#�8 ��
�3���� �����&������ !�� ������� �� � ���������
� ���� ��� !�� �����������#�8 4����� ,5 � ���� �
���� �� ������������&�� � �� ���������������&�� �
������������&�� ��� &������� !��� ��������# ���
�� ���< ����(�� ����� �������� �� ��� ����������
��� �� �� �� � ��������# �� �������C�������&��
��������� � ���� � � ������������ ��� �� ���
��� �� � ������� ������� �� ���"������
����������� ����� �������� ��� � ���� ��������
"�����#�5 * ������ ����� ������������ ���� ��� ����
��������� � �� ��� ���� !��� � �� �������
�������� �� ��� � ������ �� � ��� ��������
�� ����� ��� � �������� !��� ��� �� ����� !���
������� !�� ����� �� ��"� � �����#�6 ������? ���
$�� ����?�& ������������ ���� ��� ������� �
������������� � ��� �� �� �� ����� ����" ���
��������� ���� �"�� ���� ���� ��� ��� ����� ����
���� � !��� ��� �� ����� �� !� ��"����� �"��
��� �� ����"����� � �����# ������C�����&�� ���
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
�������� ���� ��� ���� �� *"������� ��"��� �� ������ ����
������������&�� !��� ������� �� �� ����� ���
�� �� ���#�5 +�J�� �������������� � � � ���� ?�
����� ������� � �� �� ��� ������8 !�� � �� ����
� � ���� ��������#
,������ � !��� ��������� � �������� � ���
�������� �� ����� �������������������� ���" ���
���� ��������� ���������" ���� 567 � ��� ����
�� �� ��# * ����"� �������������������� !�� ���
����� �� �� � ���� ����� ���� � � ��������� ����
���� ���� � ��� �� ������ ��� ��������������� ���
��������� ���� ������� � �� ����� ���� ���
�����#�� ����F��������� !�� � �� ���� � � ������������# ,� ���� ������� ���� ��� �������� �
�������������� ��� �������������������� ���� ���
� � ��������� ��� � ������������ ������� �����#
B�! ������������� � ��� � ��� �������� ?�����
!��� ��������� ��� ����� �������� !��� ������� ��
�� ������������ � �� �������� �� �����#�+��.
K�"������ ��� � ��� ��"��� ����� �������� �
"�"����� !�� �������� � ����(��#
4����� ������ ��� ���� ������ �������� !���
� �� ����# *���" ������ ���������������� ������
���� ��+�.�������� �������� ��� �������� ������ ���
&���+�������� ������� !��� ���� � �� ���� � �"�
�������������# ��+�.�������� �������� ��� !���
��� �� ���������� �� ��� ������� � ������������
�������� !�� ����� ������ � ������ �� ����� ���
���� ����(�� � �� �� ��� #�8 ��F����� �������
������" � �!��� ������ !�� ���� � ���� ����#�8
Aroma-active compounds of ��������� ����
suspension culture��� ����������� �������� �������� � � &.�����
� � � ���� �������� �� ���� ��� ���� �����
������� ��� ���!� � ��� � �# * ���� � &+
����������� �������� !��� �������� �� *>)*#
Table 2. Aroma-active compounds of Agastache rugosa suspension culture
(� �������� ���
� �
�'������ ������
� ����� ���� ���� ���� ��� �
� ���������� ���� '. �$
� ����� ���� ��� ��� ���� :%
� ��"�#���� ��� ���� ;%
� ��������������$%�$���� ��� �!�� ;�
� <�*��7� ���� ����� =$
! ������������ ���� ���� /�
� �#$"������'��� ����� ���� ���� +
� �#$"������'��� �������� ��!� �!�� +
�� <�*��7� ���� '. :��
�� <�*��7� ���� '. ;%
�� <�*��7� ���� '. 9�
�� <�*��7� '. ���� ;%
�� <�*��7� '. ���� >�
� /�������� �� �# ���%���� ���, ��$�%�01�� +�2+�� �� %�0�%�����3� :��)� % �� ���� 0����%3� 5 ����1������6 �� ���� �$���% �� %�������� �� �# �� �%��� $%�$�%� 7�%� ��������
7�%� ���������� 7�� ���� �0 �� � ������ ���� �% 3
'.� ��� ������ 3
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
�� ������ ���� �� ����������� ��������� *>)*
!�� �� ����� �� �!� �� ��� �� ���� !�� � �����
� ����� �)F�.34 ��� )F�;*G�# D) ������ �
����������� �������� ��� "����� � �!� ��� ����
�������� ���� �� .� 8 ��� 59&+� ���!�� � �����
D) ������ �� ��� �!� �� ����# $�!����� �������
������ �������� ���������" ������� ��� ������
��� ������ !��� ����� � ����(��#
����F��������� ��� &�� �� ��������������� ���
<� ��� �� ���������������&�� ��� 5� !��� ��� ����
��������� ����������� ��������� !�� �"� D)
������ �� ���� �� ����# ����F��������� � �� ����
�� ���� ��� ������������ ������� ����� �� � ������������ �� ���� ����� �� �� �����" ����� �������
�D)L&�� ��� �! ������� � �� �� ��#���#�< *
������� !�� �����" ��������1�� ��� ?� �����
!�� �������� �� 2,1= ��� !�� ����� � ����(�� ��
�� ��������������� ����� �� ��� I/� � ��� �!�
�� ���� �)F�.34 ��� )F�;*G� ��� �� �����
������# �� �������C������� � ?��!� �� �� �� ��
� ��������5 !��� ��� ���� ������� �� �� ��� �����
����� ������� � �������� ��� ���?�� ��#�5
��� ������� � �� �� � ��� ,5 � ������ !�� ���
���� � ������� �� 6#6&��+6 ����� � �! �������
�� ����� � ��� ����� ����������� ��������# �� ���
����C�������&�� ���������1�!���� !�� � �� ���
������ �� *>)* !�� �� ���� � �"� D) ������
���"�" ��� � �)F�.34� �� + �)F�;*G�# �����
,5 �������� ��� ����"�� �� ���� ��� ���������
?� ����� �� � ���� �������� �� ���� �� �������
�� ���� �"� D) ������ ��9<� ��� ������������
����� �����#
F����� �� ���������������&�� � ������ � ���� �
!��� �������� �� *>)* !�� �� ���� � �! D) ������
���"�" ��� & �� �# ����F������� ��� �� ����1
�!����� &������� ��� +� "����1!������ �������� �
��� �!�'�� ���
)� �
��� ���� ��� ������� ������
���%� ����� �� �� �
$��� 0%�� � '. �
��� �7��� � � �
���� 7�� � � �
����� � �$ %� � � � �
��%���� � �
��� ��� � � �
� ���%� ����� � � �
� ���%� �7��� � � �
%��� $������ � '.
�$�� �7��� � '.
��� ,%�$� � '.
���� 7�� '. �
���� ,����� '. �
�� 7�� ���� �0 �� � ������ ���� �% 8 �� %�������� �� �# �� �%��� $%�$�%�
.8�
�� ��� �� �
�����&������ ��� .� "�� �1�� ������� ��� ��
���� ������ ��� 8� ����1������ !��� �������� ��
���� )F�.34 ��� )F�;*G �� ����# $�!�����
&������� ��� �� � �1�!���� !�� �������� �� � ��
)F�.34# 3��� � ����� �������� ���� �� ����
������ �� ��� !��� ?� ����� ������������ � ����� �������� ������� ���� ��� ��������� �� ��
������� � "�������" ��� ������ � ������ !���#��
/� ������� �� ��?��!� ����������� ��������
���� � ��� &69&+� !��� �������� �� *>)*# = ������
��� && �"���1�!���� ��� &� �!��1"���� ��� �� ����
�� ���� ��� !��� ?� ����� �� � ���� ��������
�� ���� �� ����� �� �� ���� ������������ ����� �����#
Time course production of flavour compounds in��������� ���� suspension culture�� ���������� ��� �� ������ ���!��� �� "��!��
��� ������ �������� � � ���� �������� �� �����
��� �� !�"�� ��� ������� � �� �������� � ���
������������ ������ �������� !��� ��������
����" ��� �� ������ ��� �D" ��# ��� ������� � ��
������ �������� � � ���� �������� �� ���� �
����"��!������������ ������# 4� �� ���� �� ����
���� ������� � � ������ � ������� ���������
�� ����� ��� �� ���� �������#+& /� ���� ��������
�� ������ ��������� ������ ��� !��� ������� �� �
!��� ��� �� � ����� "��!�" ��� ������� ���
��������� ����#+� ;� � �� �������� ��� ������ � ��
�������� � ����� ������ ��������� ��� ��� ��������
!��� ��������� � �!�� ���� ����� � ��� ������� � ��
��� �� ����� ��� ���!��#
* ��� ������ � ��������������� !��� ��� ���
�"���� D) ������� !�� �������� ��� ��� �" ���� ��
��� �" ���� ����� 69<�# /�� ������� �������� �"��
(���� � � ��� ��� �� � ������� ��� ��������� ����
�� ��� ��� <�# ��� �������� � �����������������
���� ���!�� � �� �� ������ �� ���� � ���������
������ ����� ��� ���!��# ��� ������� � ����������
���������� !�� ����� � �"��� ���� ����� � ��� �����
Figure 3. Time course production of flavour compounds in Agastacherugosa suspension culture. Cell-free suspension and 1-butanol (internalstandard) were directly extracted by dichloromethane. Flavour compounds:�, 2,3-butanedione; �, (E,Z)-2,6-nonadien-1-ol; �, 2-phenylethanol. Theresults are the average of triplicate samples.
.8+
������ �������� ����" ��� ����� �� ���� �����
������" ��8�+5�" �& ������"���������� �����
���� � L�� �� ��� �+# �� �������C�������&�� !��
��� �������� ��� ��� 6 �� ��� <� ��� �� �������
������� �� ������� ��� ������ � ��� ���������
����# =���� ,5 � ���� � ���� �� ������������&��
��� ������������&�� ���!�� �� �� ��������
������� ����� ��� ���!��� ���� �������� ������"
&#.��6#+6 ��� ��6#.5�" �& �� L�� �������� �
�� ��� �6# �� �������C������� !�� ��� ��������
����" ��� ����� �� ���� ���� �!�" �� �� �!
���������# ��� ������� � ��������� �� ���� �
�� �� �������� ������ �� ���� � �� �������
��������&�� � ���� ����� �������� � �! ���
���� ���������� ���!����5 ��� � ���� �� ����
������� ��� ������������ ����� � �� �����������
����� � ��� ��������� ����# ��'���� ������ �
!��� ���������� �� ��� !��� ?� ����� �����������
���� � �� ��� � �� �� �������� ������ �� ����� �
,5 � ���� �#
��� ���� � � ��� ��� ������ ����� � ��������� !��
��� ����"� � ������������ ������ ��� �������
����� �� �������1��������1!��� ?� ������ � ���
��������� ����# ����F���������� !�� �������
������ ���� �� ��� ����� ����������� �������
����" ��� ����� �� ���� ���� � � ���� ��������
�� ����# 4��� ����������� �������� ���� ��
�� ��������������� � �� ���������������&�� ���
������ ������ !��� ������� ����" ��� ���������
����� �����" ��������1!��� ?� ����� �������
������� �� ��� � ���� �������� �� ����#
ACKNOWLEDGEMENTS��� !��? !�� ������� �� ��� ������ 4����� ���
>�"�����" D�������� ��=4>D� �����"� ��� I��
������ ,����� �� C�! F��3����� � � *"��� ���� ��
4��� C����� E�������# �$� � "���� � �� �
"������� � �!�� ������ �� ��� ������ 3�����
� >������� �����"� ��� F��� ����� �& '��:���#
REFERENCES& )�M�������" $ ��� ����� )� ,�� ��"�� ��� ��������� ��
������ �� �������� ��� ��� �� ��� ����� �� ����# ����
������� #%�&&�A+89.+ �&558�#
� )�M�������" $ ��� ����� )� 4�����"�� �� ��� ��������� �
��������� ������ �� �������� � ��� �� �� �����# ���
#���$ ������� %6A�8+9�<+ �&55.�#
� 2�� - ��� B�� -3� > ��� � ���"�� �� � �� ��� ��������
�� ���� � "������ � ���(�� ������� �� �# %��������� !��
5A�<.9�56 �&55��#
+ 4��� =� ' ��� ����� �� ����� � %�� ����� !������� �� �����
������� ��� &��� '���������� >� �� 2��� ��� *� ; ���
C�! 0��?� ��59�8. �&55+�#
. 2 �������� > ��� $� ���� D� (�� �)��������� *)��� J� J//#
*?������J�� �"� F�� �� <8 �&5�&�#
� *�� F ��� 0��" ,F� J� �� � ����� ��������� � ���"��
���������� ���� = ������� ����# ����� � ���� ��� �������
&0A.<�9.<� �&55&�#
8 ,��� �� )-� 4��� -> ��� ;�� ������ 3'� ,������������� �
������� � � ��������� �����# � ���� ���� &��� 07A&5+�9
&5+5 �&55&�#
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
�������� ���� ��� ���� �� *"������� ��"��� �� ������ ����
< ; ��� B*� 4������ C' ��� ;�� ������ 3'� $�������
��� ��� � ��� �� �� � � � � ���������# � ���� ���� &���
'$A&���9&��� �&55��#
5 3���� F4� I������� �I ��� = ��� B�� 2�� ��������"����9
� ��������� �� ��� ����������� � ?�� �������� � ����� �
������+�� �� ����"���� ���� ����� >� �� 3��� I� 3����
)�??��� C�! 0��?� ��.9�5� �&558�#
&6 2����� ;� )������� � ����� �������� � ���� �� �����
��������� � ���� ��� ���# ����� ���� ��� ������� 'A�<98�
�&55��#
&& 3�����"� � ��� 4?��" D� * ������ ����� �� ��� "��!��
��� ��������� !�� ������� ����� �� �����# !�"���� !����
%#A+8�9+58 �&5���#
&� 3 � )I ��� B�� -3� * �� �� �������� ������ ��
��������" !�� ��� ��� !�"�� ������������� � ��� ��
�������� �� ����� ���" ��������� �"� �����# !���� &��� ,�
%#A��+9��� �&55��#
&� J�� ��� )�� $ ��� ����� ')� * "����� ����� � ��� ��������
���� ������ �� ���" ���� ���������� ��"������ "��9
%�� ������ ��������"����# � &������� %%A+��9+8&
�&5���#
&+ -����"� ; ��� 4������� �� -��������� ����"��� �� ����� ���
������� ��������� $" .���� &� ����" .�� &�������� �"#
*������ '����� C�! 0��? �&5<6�#
&. ����:���� C ��� F����"��N -B� &�� ������� �� ,������� ,��������
'������ �� ��� ����"��� �� ������� &�� ����# B���������
D ����� 4IJ� /CI* �� ����� ,����� �&55��#
&� '��? /4 ��� �� )/� 4"�(����� � ���� !�"�� �� ��� ��
!�"�� ���� � ��� �� �������� �� �����# %��������� ����
6A��89��6 �&55��#
&8 3������ F, ��� '��? ,$� ,������������ � ����� ��������
�� ����� � ����������� &���� $���� �� �A ������� � ���#
%��������� !�� 7A589&66 �&55��#
&< 3����� 3I� *���� *-� =��ON� 2) ��� -��N��� 24� > ��� �
������ ������ �� �� "��!�� ��� ���� �� �������� � ��
�������� �� ���� � %��� ������# %��������� /��� %3A<.�9<.<
�&55+�#
&5 4������� J ��� I�� ))0� /��������� � ��?��� ���
������� � /����� ��� �"�������� �� �� ���� �� � ����
����" ������ ��� ����"�� ����" ������"�# %��������� %�����
'&A85�9855 �&55��#
�6 *������ $� $��?�� �� B GC� 4�"���� � ��� 0������� 0�
'��( �� � ������� ��� ��� � " ��� ��� � &��������� ����
�� � � ����� �������� �� ����# � !���� !�"���� %00A�<9+.
�&5<<�#
�& ������� -� F������ I* ��� ,���� C,� ,����� ���� ���� �
������ �� � � %�� �� ����# !���� !�"���� 5&A���9��< �&5<��#
�� ,� � $*� D ������ � &��� &��� ��� ������� &��� .������� ��
!������ J� J� >� �� ,������� D ��� J�� /�� *������
'����� 4�� )�"�� ,*� .�59.<. �&5<<�#
�� ; ��� **� B�!� 3- ��� 3�� $J� ��� �� �� � ������
��������� � �������� ��� !���# � ��� ���� ����
0'A�&&9�&5 �&5<��#
�+ 4������ '� )��!��� D ��� ;�? �� D� ,������� � ������
�� �� � ����������� � "��� �������# � ���� ���� &���
&6A��.9�8� �&585�#
� ��� ���� ���� ���.�59.8. ��� ��A �66&�
�. C�?�M��� B ��� C�?�M��� /� )�� �� ������"��� � ��������
&�� ���� �� ����� ��� %�������� >� �� 3����� $� 3����
)�??��� C�! 0��?� .+89.<6 �&55&�#
�� F�M�:����� �� 4��M ��� E� *����? ' ��� ��������� *� *�� ���
� �� �� � �������� �� �������� � �� �� � ������ ����� �#
&���� &��� 33A�669�6+ �&5<5�#
�8 F� �� $) ��� 2����� ;� *���� ����������� � ���� &������"�
>� �� F� �� $) ��� 2����� ;� 4��"��� F�� �� �.89�6+
�&5<8�#
�< ��� �I� ����� )> ��� 4�� �� B'� /����(����� � ����
�� �� � �������� ��� ��������# � ���� ���� &���
&&A8&898&< �&58+�#
�5 $�����?� *� ��� ���� "���� ���� ������ �� ����# ���� ,�� '��
%&A�6�9�.6 �&55��#
�6 ����� ,� ��?�����;? 3� I��� � 4� $�� ����? � ���
4������ />� I��� ��������� ��� �"� � ��� ��� �������
� ����� ��� ���� ��� ���������� �IC* �� ��"�
� ����� ���� � !��������� ��� �# !�� 0��� ���� ���
1�� 7'A�6859�6<+ �&558�#
�& ������? > ��� $�� ����? �� )�������� � ��� ��� �
����� ��� ��� ������ ������� �� ��"� � ���� �� ���
"��!�� ���"� � !��������� ��� � �� �� �����# !���� &��� ,�
'A�889�<6 �&5<.�#
�� B����� I,� D ������ � ���� &������"� >� �� D������ =I�
3���� )�??��� C�! 0��?� 8��98�. �&55��#
�� ,� �� >F� F��������� � ����� �������� �� ������"���
���# � (��" ��� ##A&6��9&6�< �&58&�#
�+ D��? , ��� F���� �� '� /������� � "��!�� ��"� ����� ��� ��
� ���� �� ���� ������ ������ �� � �������� �� ����
� ������� ���������# !�"���������" &7A<+.9<+< �&556�#
�. F���:����;����? ; ��� $������ 2� F��������� � ����
��������� ����������� � �������� ���� ��� ����� �� �
�����# !�"���������" 0#A���9��< �&55+�#
�� 4������ ;- ��� 4��� -B� C�! �������� � ��� ��"���
��� �� � "�"��9��"����� ��� ���"�� # � ���� ���� &���
'$A���9��. �&55��#
�8 3������ )4� 3���� � �������� &�� ���� �� ����� ��� %��������
>� �� 3����� $� 3���� )�??��� C�! 0��?� &689&88
�&55&�#
�< D��� 4� 4������ ������� � �� �� � 3� ��� �������� �������
��� �� ���� ��������# �&� �"� �� &%#A&<.9�<� �&5<��#
�5 4������ � '� = ��� 4 ��� 2����� ;� >�� ����� � �����
�������� � ��������� �&���� ������� ��� ���?�� ���
�&���� ����� �� ����� ������� � ���� ��� ���# � ���� ���
##A&5�9&5. �&556�#
+6 F������ I2� 4� ��� I3� 2����"� )2 ��� B�" B,�
,������������� � ���� �� �� � ����������� � �� ����#
� ���� ���� &��� %6A&���9&��8 �&5�5�#
+& ,��� !��� FJ ��� ,��� !��� �*� ������� �������� �
��� �� �� ������ � ���������� &������" ��� %���������" ��
!���� �� ������� >� �� $������� -F ��� ������F������� D*�
, �������� =� ���� 5.9&�� �&55&�#
+� F����"� *� 4�������� ��� ������ ��� ��� ����� �� ����� �
'� ���� &��������� �� !���� &����� >� �� $����� ,D� F������
!����9$�������� =� ���� &�&9&+5 �&55��#
.8.