vivian, tamiris e poliana
DESCRIPTION
Vivian, Tamiris e Poliana. PCR - DEFINIÇÃO. PCR. Polymerase. chain. reaction. Reação em cadeia de polimerase. PCR – BREVE HISTÓRICO. Descrito por Kary Mullis em 1983. Patenteado em 1989 pela Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation. Prêmio Nobel da Química 1930. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/1.jpg)
Vivian, Tamiris e Poliana
![Page 2: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/2.jpg)
PCR - DEFINIÇÃO
PCRPolymera
sechain reactio
n
Reação em cadeia de polimerase
![Page 3: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/3.jpg)
Patenteado em 1989 pela Hoffman La Roche &Perkin-Elmer Corporation
PCR – BREVE HISTÓRICODescrito por Kary Mullis em 1983
Prêmio Nobel da Química 1930
![Page 4: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/4.jpg)
PCR - FUNDAMENTO
AMOSTRA DE DNA
CONTENDO A SEQÜÊNCIA
ALVO
1º CICLO
3º CICLO2º CICLO
4º CICLO
..
.
![Page 5: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/5.jpg)
PCR - CARACTERÍSTICAS
SENSIBILIDADE
ESPECIFICIDADE
RAPIDEZ
REPRODUTIBILIDADE
PEQUENAS CONCENTRAÇÕES DA AMOSTRA SÃO NECESSÁRIAS
SEQUÊNCIAS -ALVO
AMPLIFICAÇÃO EXPONENCIAL
CONSTÂNCIA NA REPRODUÇÃO DOS DADOS
![Page 6: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/6.jpg)
PCR - ELEMENTOS
DNA
PRIMERS dNTPDNA-
POLIMERASETERMOESTÁVE
L
TAMPÃO DE REAÇÃO E CONCENTRAÇÃO
ADEQUADA DE MgCl2
![Page 7: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/7.jpg)
PCR - TEMPERATURAS
TERMOCICLADOR
![Page 8: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/8.jpg)
PCR- TEMP. DE HIBRIDIZAÇÃOA temperatura escolhida para a hibridização depende dos iniciadores utilizados. [G/C] Temp [A/T] Temp
SOFTWARES
![Page 9: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/9.jpg)
PCR - FUNDAMENTO
Vídeo demonstrando a PCR
e o aumento
do número de
moléculas conforme os ciclos.
http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1
![Page 10: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/10.jpg)
PCR – DETECÇÃO DO PRODUTO
![Page 11: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/11.jpg)
PCR EM TEMPO REAL
MENOR TEMPOMENOR RISCO DE CONTAMINAÇÃO
![Page 12: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/12.jpg)
CURVA DE AMPLIFICAÇÃO
Ct = cycle threshold = momento (PCR- ciclo) no qual o fluorescência é maior que o background.
![Page 13: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/13.jpg)
Ajuste da linha de base e threshold
![Page 14: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/14.jpg)
CURVA DE DISSOCIAÇÃO
O produto específico apresenta uma temperatura de desnaturação de (Tm ) de 80.5 °CO dímero de primer apresenta Tm de 75 °C.
Temperature (°C)
![Page 15: Vivian, Tamiris e Poliana](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062410/56815b3f550346895dc91cea/html5/thumbnails/15.jpg)
PCR EM TEMPO REAL
Vídeo demonstrando a PCR em tempo
real e comparand
o com a PCR
convencional
http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1