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VII JORNADAS DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR DE LIPIDOS Y LIPOPROTEINAS

LIBRO DE RESUMENES

Universidad Nacional de San Luis Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia

Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas – CONICET Ejercito de los Andes 950 – San Luis

17 y 18 de Agosto de 2017

Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas

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COMITÉ ORGANIZADOR María Sofía Giménez (IMIBIO, Universidad Nacional de San Luis)

Silvina Mónica Álvarez (IMIBIO, Universidad Nacional de San Luis)

Nidia Noemí Gómez (IMIBIO, Universidad Nacional de San Luis)

Veronica Silvina Biaggio (IMIBIO, Universidad Nacional de San Luis)

Ethel Viviana Larregle (Universidad Nacional de San Luis)

Carolina Ferrari Vivas (Universidad Nacional de San Luis)

COMITÉ CIENTIFICO Aveldaño, Marta (INIBIBB, Universidad Nacional del Sur)

Bernal, Claudio (Universidad Nacional del Litoral)

Pasquaré, Susana (INIBIBB, Universidad Nacional del Sur)

Ves Losada, Ana (INIBIO LP, Universidad Nacional de La Plata)

Gramajo Hugo Cesar (IBR, Rosario)


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AUSPICIANTES

Universidad Nacional de San Luis

Facultad de Química, Bioquímica Facultad de Ciencias de la Salud y Farmacia

Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológica


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Programa de actividades de las VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas

Jueves 17 de Agosto de 2017.

8:30-9:00 h Acreditación

9:00-9:15 h Palabras de Bienvenida Decana de la Fac. de Qca. Bioqca. y Farmacia: Dra. Mercedes Campderrós

9:15-10:55 h Conferencia: Lípidos como reguladores del destino de células madre

neuronales. Mecanismos moleculares subyacentes e impacto en la regeneración neuronal. Dra. Claudia Banchio-IBR CONICET y Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas UNR. Rosario (Santa Fé)

10:55- 11:15 h Café

11:15-13:00 h Comunicaciones Orales – Coordinador: Dra. María Sofía Giménez 11.15: CO01- 1-alfa sinucleína: propiedades moduladoras en el metabolismo lipídico neuronal. Alza NP1, Scodelaro Bilbao PG1,2,3, Conde MA1,2 y Salvador GA1,2 ´1 INIBIBB-CONICET, 2Dpto. Biol., Bioq. y Farm.-UNS, 3CERZOS-CONICET. Bahía Blanca, Argentina

11.30: CO02- Efecto del envejecimiento en el metabolismo lipídico nuclear y en su modulación por los ácidos retinoico, docosahexanoico y araquidónico. Gaveglio VL, Pascual AC, Giusto NM, Pasquaré SJ. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, CCT – Bahía Blanca, UNS-CONICET. 11.45: CO03- Efecto de las conformaciones oligoméricas y fibrilares del péptido beta-amiloide en el metabolismo del 2- araquidonoil glicerol de terminales sinápticos. Pascual AC, Gaveglio VL, Giusto NM, Pasquaré SJ. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (UNS-CONICET), Bahía Blanca, Argentina 12.00: CO04- Proteoma de las gotas lipídicas nucleares Lagrutta Lucía C1, Trejo Sebastián A2, Ves-Losada Ana1,3 1INIBIOLP (CCT-La Plata -CONICET-UNLP); 2IMBICE (CCT-La Plata -CONICET-UNLP), 3Dpto. de Ciencias Biológica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP


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13:00-15:00 h Almuerzo

15:00-15:40 h Conferencia: Lípidos bioactivos en procesos neurodegenerativos Dra. Gabriela A. Salvador. Instituto de Investigaciones Bioquímicas. Bahía Blanca – INIBIBB- CONICET. Universidad Nacional del Sur. Bahía Blanca

15:40 h Comunicaciones Orales – Coordinador: Dra. Silvina Mónica Alvarez 15.40: CO05- Biosíntesis de novo de especies moleculares poliinsaturadas de esfingomielina y ceramida en células espermatogénicas. Santiago Valtierra FX, Aveldaño MI, Oresti GM. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, CONICET y UNS, Bahía Blanca, Argentina. 15.55: CO06- Las ceramidas desencadenan un mecanismo de señalización que conduce a la exocitosis acrosomal del espermatozoide humano. Vaquer CC, Pacheco Guiñazú A, Altamirano K, Resa Jurín L, Belmonte SA. Instituto de Histología y Embriología Mendoza-CONICET-UNCuyo. 16.10: CO07- La proteína TAT del HIV inhibe la secreción del gránulo acrosomal inducida por progesterona en espermatozoides humanos. Pacheco Guiñazú A1; Masone D1; Beaumelle B2; Resa L1; Altamirano K1; Belmonte S1 1Instituto de Histología y Embriología Mendoza- CCT-CONICET. FCM, UNCuyo; 2CNRS, UMontpellier, France.

16:25 -16.45 h Café

16.45 -18:00 h Comunicaciones Orales – Coordinador: Dra. Verónica Silvina Biaggio 16.45: CO08- La diferenciación de las células MDCK requiere de modificaciones en el metabolismo de ceramida. Pescio LG, Santacreu BJ, Romero DJ, Tulino MS ,Favale NO, Sterin-Speziale NB. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. BCM. CONICET - UBA. IQUIFIB. 17.00: CO09- La sincronización en el metabolismo de los esfingolípidos modula el transporte del complejo adherente en las células MDCK. Santacreu BJ, Romero DJ, Pescio LG, Sterin de Speziale NB, Favale NO. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. BCM. Buenos Aires, Argentina CONICET - IQUIFIB. Buenos Aires, Argentina


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Viernes 18 de Agosto de 2017.

9:00-9:40 h Conferencia: Efectos de la proteína de soja dietaria sobre la dislipidemia e insulino resistencia a nivel experimental y su extensión a humanos. Dra. Yolanda B Lombardo. Lab. de Cs. Biológicas. Fac Bqca y Cs. Biológicas. UNL. Santa Fe.

9:40-10:45 h Comunicaciones Orales – Coordinador: Dra. Ethel Viviana Larregle

9.40: CO12- El efecto de drogas biosimilares al GLP-1 (exenatida) en la adipogénesis de 3T3-L1. Del Veliz S1,4, Masone D1, Gojanovich AD1, Bustos DM1, Uhart M1 1 Lab. de Integración de Señales Celulares, IHEM, Fac. Cs. Médicas U.N.Cuyo-CONICET, Mendoza. 9.55: CO13- Análisis comparativo en la interacción lípido-proteína del ∆K 107, una variante proaterogénica de apolipoproteína A-I Díaz Ludovico I1; Vázquez R1; Mate S1; Tricerri MA1; Garda HA1, González MC1

1Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner (INIBIOLP)

17.15: CO10- Participación del factor de transcripción XBP1 (X-Box Binding Protein) en los mecanismos de osmoprotección renal. Casali, CI, Malvicini, R, Weber, K, Erjavec, L, Perazzo, C, Fernández Tome, M . Universidad de Buenos Aires-Facultad de Farmacia y Bioquímica-BCM y UBA-CONICET-IQUIFIB 17.30: CO11- Participación de la vía SK/S1P/S1PR en el proceso de diferenciación de células epiteliales. Romero DJ, Santacreu BJ, Pescio LG, Favale NO. Universidad de Buenos Aires, Facultad de Farmacia y Bioquímica, BCM. CONICET -IQUIFIB, Argentina.

17:45-18:25 h Conferencia: Regulación de las propiedades de membrana por esteroles y hopanoides. Estudios en membranas modelo. Dra. Natalia Wilke Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba (CIQUIBIC, UNC-CONICET), Universidad Nacional de Córdoba.

18:30 h Brindis de Bienvenida


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10.10: CO14- Efecto del estrés oxidativo sobre el metabolismo del adipocito Blazquez AC, Salvador GA, Uranga RM Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, Universidad Nacional del Sur (UNS)-CONICET, Bahía Blanca, Argentina. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia, UNS, Bahía Blanca, Argentina. 10.25: CO15- Efectos de la Salvia hispanica L dietaria (rica en ácido α-linolenico) sobre el estrés oxidativo del corazón en un modelo experimental de dislipemia y resistencia insulínica. Creus A1, Alvarez SM2, Giménez MS2, Chicco A1, Lombardo YB1

1Depto. de Ciencias Biológicas, UNL, Santa Fe. 2Lab.de Bioquímica Molecular, Universidad de San Luis, San Luis. 10:40: CO16- Actividad y regulación de las SN-1 lipasas en obesidad. Barchuk M1,2, Miksztowicz V1,2,3, Morales C4, Zago V1,2,3, Friedman S5, Gelpi R4, Schreier L1,2, Berg, G1,2,3. 1 UBA. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Dpto de Bioquímica Clínica. Cátedra de Bioquímica Clínica I. Bs As, Argentina. 2 UBA. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica (INFIBIOC). Bs As, Argentina. 3 UBA. CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Bs As, Argentina. 4 UBA. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatología Cardiovascular, Departamento de Patología. Bs As, Argentina. 5 UBA. Facultad de Odontología. Cátedra de Bioquímica General y Bucal. Bs As, Argentina.

10:55-11:10 h Café

11:10-12:00 h Comunicaciones Orales – Coordinador: Dra. Nidia Noemí Gómez

11.10: CO17- Translocación nuclear de la proteína intestinal transportadora de ácidos grasos. Suárez M1, Canclini L2, Folle G2, Esteves A1. 1Sección Bioquímica, Facultad de Ciencias, U de la R. Montevideo, Uruguay; 2IIBCE, Montevideo, Uruguay. 11.25: CO18- Endocanabinoides derivados de ácido araquidónico como mediadores del tráfico de colesterol en el nematodo C. elegans Prez GM*a, Galles C*a, Port, Eb, Penkov Sc, Boland Sc, Labadie Gb, Kurzchalia Tc, de Mendoza, Da. aInstituto de biología molecular y celular de Rosario, Rosario, Argentina bInstituto de química de Rosario, Argentina


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c Instituto Max Planck de biología molecular y celular, Dresden, Germany 11.40: CO19- Producción de lípidos en Haematococus pluviales en respuesta al estrés lumínico. Scodelaro Bilbao P1,2 ,3, Salvador G1,3, Leonardi P1,2. 1Dpto. Biol., Bioq y Farm.-UNS. 2CERZOS, 3INIBIBB-CONICET. Bahía Blanca, Argentina 11.55: CO20- El Tl(I) y Tl(III) inducen alteraciones en el metabolismo lipídico de células MDCK. Morel Gomez E1,3, Verstraeten SV2,3*, Fernandez MC1,3* 1UBA, FFyB, BCM. 2UBA, FFyB, QB 3CONICET, IQUIFIB.

11:55-12:40 h Conferencia: Dilucidando el metabolismo de lípidos en ciliados a través del análisis molecular de las enzimas integrales de membrana con motivos de histidina Dr. Alejandro D. Nusblat. Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC) UBA-CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.

12:40-14:30h Almuerzo

14:30-16:30 h Posters

P01- LOS NIVELES DE APOE Y LIPOPEROXIDACION OSCILAN DIARIAMENTE EN EL HIPOCAMPO. EFECTO DE LA INYECCION I.C.V. DE AGREGADOS DEL PEPTIDO A Castro A, Navigatore Fonzo L, Anzulovich A. Laboratorio de Cronobiología, IMIBIO-SL, CONICET-UNSL. P02- EFECTO DE SEIS MESES DE DEFICIENCIA DE VITAMINA A SOBRE EL METABOLISMO LIPÍDICO HEPÁTICO DE RATAS HEMBRAS Orozco Reina A, Brovarone R, Vasquez Gomez ME, Giménez MS. Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. P03- ANÁLISIS DE LOS PARÁMETROS MORFOLÓGICOS DE GOTAS LIPÍDICAS DE CÉLULAS HEPG2 TRATADAS CON ACEITE ESENCIAL DE LIPPIA ALBA QUIMIOTIPO TAGETENONA Montero-Villegas S1, Polo M1, Rodenak-Kladniew B1, Castro M1, Ves-Losada A1,2, Crespo R1, García de Bravo M1

1INIBIOLP (UNLP-CONICET CCT La Plata) Fac. Cs. Médicas. La Plata. 2Dep. Cs. Biol., Fac. Cs. Exactas, UNLP P04- ESTUDIO DE LA REGULACIÓN EPIGENÉTICA ALTERADA DE GENES DE MEMORIA EN EL ENVEJECIMIENTO


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Harman MF1, Martín MG1

1Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra. INIMEC- CONICET- UNC; CORDOBA, ARGENTINA P05- EFECTOS DE LA PÉRDIDA DE COLESTEROL DURANTE EL ENVEJECIMIENTO NEURONAL Elorza SD1, Gómez Casati ME 2, Martín MG1

1Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra, INIMEC- CONICET; CORDOBA2 Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular INGEBI-CONICET P06- ALTERACIONES MOLECULARES, BIOQUÍMICAS Y CELULARES EN GLÁNDULA MAMARIA POR CONTAMINACIÓN AMBIENTAL CON CADMIO. EFECTOS DEPENDIENTES DE LA NUTRICIÓN Sanchez ES¹, Vásquez E¹, Michel MC¹, Alza N², Boldrini G¹, Ferrari C¹, Pérez Chaca V¹, Biaggio V¹, Gomez N¹, Alvarez SM¹, Giménez MS¹ ¹Universidad Nacional de San Luis-IMIBIO-SL. ² INIBIBB Inst. de Investig. Bioquímicas de Bahía Blanca. P07- METABOLISMO LIPÍDICO EN CÉLULAS TUMORALES: ROL DE FABP5 Garcia KA, Córsico B; Scaglia N. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP). Facultad de Ciencias Médicas. UNLP. P08- PARTICIPACIÓN DE ESFINGOSINA-1-FOSFATO Y VEMURAFENIB EN LA PROGRESIÓN DEL MELANOMA EN HIPOXIA Perez CN1,2, Castro MG1,2, Campos LE1,2, Rodriguez YI1,2, Ramirez DC1,2, Alvarez SE1,2. 1IMIBIO-SL CONICET. 2Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. Argentina P09- EFECTO DE LA INTOXICACION CRONICA CON CADMIO EN EL METABOLISMO LIPIDICO DE PROSTATA, PULMON Y CEREBELO Alvarez SM, Boldrini GG, Martin Molinero GD, Gómez NN, Giménez MS. Laboratorio de Nutrición y Medio Ambiente – FQByF – Universidad Nacional de San Luis. IMIBIO-SL, CONICET. San Luis. P10- INFLUENCIA DE UNA DIETA RICA EN SOJA SOBRE EL METABOLISMO LIPIDICO EN CEREBRO E HIGADO DE FETOS, A LOS 20 DÍAS DE GESTACIÓN Biaggio VS, Altamirano KN, Gimenez MS. Laboratorio de Nutrición y Medio Ambiente – IMIBIO – CONICET-SL P11- ESTUDIO DEL METABOLISMO LIPÍDICO EN EL CARACOL POMACEA CANALICULATA BAJO CONDICIONES DE ESTRÉS POR AYUNO Y EXPOSICIÓN A UN TÓXICO Lavarías SML1,2, Peterson GB2,3,5, Lagrutta LC3, Rodrigues Capítulo A1, Ves-Losada A3,4.


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1ILPLA, 2Fac.Cs.Médicas, UNLP, 3INIBIOLP, 3Dto. Cs. Biol., 4Fac.Cs.Exactas, UNLP ,5CIC P12- EL METABOLISMO INTRACELULAR DEL COLESTEROL TESTICULAR ES SENSIBLE A LOS LÍPIDOS DE LA DIETA EN CONEJOS Funes A, Simón L, Saez Lancellotti E, Fornés M. Laboratorio de investigaciones andrológicas de Mendoza (LIAM) del Área e Instituto de Histología y Embriología de Mendoza (IHEM), Facultad de Ciencias Médicas- UNCuyo, CCT CONICET Mendoza y FCM, Universidad del Aconcagua P13- TRES MESES DE DEFICIENCIA DE VITAMINA A MODIFICA LOS ÍNDICES DE ÁCIDOS GRASOS DE LÍPIDOS TOTALES EN GLÁNDULA MAMARIA VIRGEN Vasquez ME, Marra C1, Ferrari Vivas C, Giménez MS. 1 INIBIO-CONICET, La Plata. Dpto Bioquímica y Cs Biológicas. FQByF-UNSL. P14- EFECTO DEL ESTRÉS POR TEMPERATURA SOBRE EL METABOLISMO DE ÁCIDO FOSFATÍDICO Peppino Margutti M, Racagni G, Gaveglio VL, Giusto N, Pasquaré SJ, Villasuso AL. Departamento de Biología Molecular, FCEFQN, Universidad Nacional de Río Cuarto, Río Cuarto; Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, Bahía Blanca .

16:30-16:45 h Café

16:45-17:25 h Conferencia: Biotransformación de esteroles para la producción de pro-vitamina D. Dra Clara Nudel. Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC) UBA-CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.

17:30 Palabras de cierre de las Jornadas.


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CONFERENCIAS


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C1- LÍPIDOS COMO REGULADORES DEL DESTINO DE CÉLULAS MADRE NEURONALES. MECANISMOS MOLECULARES SUBYACENTES E IMPACTO EN LA REGENERACIÓN NEURONAL

Dra. Claudia Banchio IBR-CONICET y Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario

El microambiente del tejido nervioso dañado induce una reactividad debida a la hipertrofia de los astrocitos y a la producción de una matriz extracelular inhibitoria, lo que conduce a la formación de una cicatriz glial. Esta reactividad dificulta la regeneración neuronal afectando la sobrevida, la auto renovación, la migración y la diferenciación neuronal de células madre, tanto las endógenas como las exógenas trasplantadas. Es por ello que para establecer terapias de regeneración del SNC basadas en células madre es necesario controlar la formación de la cicatriz glial y disminuir la producción de factores nocivos, además de regular el comportamiento de la microglía y modular los procesos de diferenciación de células madre de manera de dirigir el destino de los astrocitos de la cicatriz hacia neuronas funcionales. Los resultados sugieren que fosfolípidos como fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina regulan la diferenciación de células madre neuronales promoviendo la diferenciación hacia las progenies neuronal o astroglial respectivamente, es decir, modificando el balance neuronas/astrocitos. La presente propuesta contribuirá a definir con mayor precisión la dinámica de los mensajeros lipídicos como reguladores del destino de precursores neuronales. Además, la identificación de lípidos bioactivos capaces de regular la diferenciación a partir de células madre podría ser clave para el desarrollo de estrategias para el diseño de potenciales terapias de regeneración y diferenciación celular.


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C2- LÍPIDOS BIOACTIVOS EN PROCESOS NEURODEGENERATIVOS Dra. Gabriela A. Salvador Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INIBIBB), CONICET y Universidad Nacional del Sur. En nuestro laboratorio estudiamos el rol de las vías de señalización y metabolización lipídica en modelos experimentales que mimetizan diversos aspectos de desórdenes neurodegenerativos, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA) y la de Parkinson (EP). Ambas son las patologías neurodegenerativas asociadas a la senilidad de mayor prevalencia a nivel mundial y tienen en común una progresiva degeneración neuronal acompañada de la acumulación anormal de péptidos amiloidiogénicos y de hierro (Fe). En investigaciones realizadas en modelos de injuria neuronal disparada por la acumulación de Fe, demostramos que los factores de transcripción claves para la defensa contra el estrés oxidativo y la determinación del destino celular son regulados por vías de señalización lipídica, tales como la fosfatidilinositol (PI) 3 quinasa y las fosfolipasas A2. En neuronas de hipocampo, encontramos que tanto la fosforilación del PI como su hidrólisis por activación de fosfolipasa C son eventos cruciales para desplegar estrategias neuroprotectoras frente al péptido amiloide en estado oligomérico. Por otro lado, demostramos que las neuronas dopaminérgicas que sobreexpresan diversas variantes de la proteína -sinucleína experimentan cambios en el metabolismo lipídico por incremento de la actividad y la expresión de la sintasa de ácidos grasos, lo cual promueve una mayor disponibilidad de ácidos grasos y un incremento de los niveles de triacilgliceroles (TAG). La acumulación de TAG, inusual en neuronas, constituiría un marcador temprano de neurodegeneración. En resumen, el conocimiento alcanzado acerca del rol de diversas vías que generan y/o metabolizan lípidos bioactivos nos permite establecer roles estratégicos para las mismas tanto en la neuroprotección como en la promoción de la injuria neuronal. Estos hallazgos constituyen el puntapié inicial para estudios futuros destinados a indagar la implicancia de dichas vías en modelos animales de EA y de EP.


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C3- REGULACIÓN DE LAS PROPIEDADES DE MEMBRANA POR ESTEROLES Y HOPANOIDES. ESTUDIOS EN MEMBRANAS MODELO Mangiarotti Agustín, Genovese Darío M, Wilke Natalia. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba (CIQUIBIC, UNC-CONICET), Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. Los esteroles constituyen un porcentaje significativo en la composición lipídica de membranas en eucariotas, mientras que la membrana de procariotas carece de estas moléculas. En su lugar, se encuentran los hopanoides, compuestos pentacíclicos que han sido propuestos como análogos a los esteroles, aunque esto aún no se ha demostrado fehacientemente. En membranas celulares de diferentes grupos filogenéticos existen diferentes esteroles, como el colesterol en vertebrados, los fitoesteroles en plantas y el ergosterol en hongos. Todos ellos se proponen como inductores de fase líquido-ordenada (LO), y por tanto, se consideran importantes reguladores de la reología y la permeabilidad de la membrana celular. A fin de conocer más detalladamente las posibles diferencias y semejanzas en la regulación promovida por esteroles y hopanoides, en este trabajo investigamos el comportamiento del colesterol, el ergosterol, el estigmasterol (un fitoesterol mayoritario) y el diplopterol (un hopanoide mayoritario) en estado puro, así como el efecto de su presencia en membranas modelo compuestas por dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC) y dioleil-fosfatidil-colina (DOPC) en relación 2:1. Los estudios de las moléculas puras se realizaron en monocapas de Langmuir y las mezclas se investigaron tanto en monocapas como en bicapas. Los esteroles puros formaron monocapas condensadas, colapsando a alrededor de 40 mN/m y 0.4 nm2. El diplopterol puro mostró también un estado condensado, pero colapsó a 30 mN/m y a mayor área molecular. Además, el espesor de las monocapas de diplopterol fue mayor al de las monocapas de esteroles. En cuanto a las mezclas con fosfolípidos, la segregación de fases se observó en mayores regiones del diagrama de fases para el ergosterol, siguiendo el colesterol, mientras que el estigmasterol y el diplopterol mostraron regiones de coexistencia muy pequeñas. Este hopanoide, a diferencia de los esteroles, indujo dominios de formas alargadas en lugar de circulares. En relación a la fluidez de las membranas, analizamos la difusión de microesferas incluidas en la interfase. Encontramos comportamientos similares para todos los esteroles y el diplopterol puros, mientras que en las mezclas, las microesferas difundieron a una velocidad dos veces menor en presencia del esterol o del hopanoide que cuando éstos estuvieron ausentes. En conclusión, el hopanoide presenta un comportamiento diferente al de los esteroles en cuanto a espesor y densidad, pero similar en cuanto a su fluidez. En relación a su efecto sobre mezclas, el diplopterol induce segregación de fases con formación de dominios en un modo similar a como lo hacen los esteroles, si bien dichos dominios tienen diferente forma.


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C4- EFECTOS DE LA PROTEÍNA DE SOJA DIETARIA SOBRE LA DISLIPIDEMIA Y LA INSULINO RESISTENCIA A NIVEL EXPERIMENTAL Y SU EXTENSIÓN A HUMANOS

Dra. Yolanda B. Lombardo. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe. La resistencia insulínica es un factor clave en la etiología del Síndrome Metabólico, el cual incluye entre otras dismetabolias: diabetes tipo 2, dislipidemia, hipertensión, enfermedad cardiovascular, adiposidad visceral y obesidad. Este síndrome, de alta y creciente prevalencia en la población mundial y en nuestro país, se encuentra fisiológicamente relacionado con factores genéticos y medioambientales (sedentarismo, hábitos alimentarios como consumo de un exceso de calorías en dietas ricas en grasas y/o carbohidratos). La composición de macronutrientes dietarios (tipo de ácidos grasos: poliinsaturados vs saturados; origen de la proteína: vegetal vs animal) juega un rol importante en este síndrome, dado que puede inducir cambios potencialmente favorables en las alteraciones metabólicas incluidas en estas anomalías modulando la expresión de genes involucrados en ellas. En los últimos años ha surgido gran interés en investigar los potenciales efectos beneficiosos sobre la salud del consumo de proteína de soja, ya que estudios clínicos y experimentales observaron que dicha proteína ejerce efectos anticolesterolémicos, antilipogénicos, antihipertensivos y antidiabéticos, mejorando la homeostasis de la glucosa y la sensibilidad insulínica. Utilizando un modelo experimental de dislipidemia, resistencia insulínica, y adiposidad visceral que mimetiza en roedores el fenotipo del síndrome metabólico del humano, resultados de nuestro laboratorio demostraron que el reemplazo isocalórico de caseína por proteína de soja en la dieta indujo los siguientes efectos: 1-En el hígado, revirtió la esteatosis hepática por mecanismos que involucran downregulation del SREBP-1, menor lipogénesis de novo, up-regulation del PPAR, e incremento de la oxidación de ácidos grasos. En el plasma, normalizó la dislipidemia y la moderada hiperglucemia sin cambios en la insulinemia, mejorando la resistencia insulínica. 2-Decreció el peso corporal. Mejoró la disfunción del tejido adiposo revirtiendo el estrés oxidativo, reduciendo la adiposidad visceral, la lipogénesis de novo y la lipólisis basal. Normalizó la acción antilipolítica de la insulina y la expresión de la masa proteica del Glut-4 bajo el estímulo de la hormona. 3-En el músculo gastronemio, redujo la lipotoxicidad, normalizó la expresión de la masa proteica del Glut- 4 y de la PKC, mejorando las vías metabólicas de la utilización de la glucosa. 4-En el músculo cardíaco, redujo significativamente la lipotoxicidad a través de mecanismos que incluyen el transporte y la oxidación de ácidos grasos (CD/36, M-CPT-1), y la expresión de la masa proteica de pAMPK. Mejoró el transporte, la fosforilación y la oxidación de la glucosa. Si bien no podemos extrapolar los resultados obtenidos en roedores al ser humano, este modelo animal es sumamente útil para analizar más profundamente la influencia de los nutrientes como complemento en el tratamiento de las alteraciones metabólicas que son susceptibles de manipulación dietaria.


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C5- DILUCIDANDO EL METABOLISMO DE LÍPIDOS EN CILIADOS A TRAVÉS DEL ANÁLISIS MOLECULAR DE LAS ENZIMAS INTEGRALES DE MEMBRANA CON MOTIVOS DE HISTIDINA

Dr. Alejandro D. Nusblat. Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC) UBA-CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Las enzimas integrales de membrana con motivos de histidina (IMHME) son una clase de proteínas binucleares de hierro no hemínico distribuidas ampliamente entre procariotas y eucariotas. Se caracterizan por la presencia de un motivo tripartito conservado de ocho a diez residuos de histidina. Las IMHME están involucradas en el metabolismo de varios lípidos, como esteroles, ácidos grasos y esfingolípidos, llevando a cabo reacciones de hidroxilación, desaturación y reducción, entre otras. Si bien estas enzimas han sido estudiadas en animales, organismos fototróficos o diversos parásitos unicelulares, su estudio en protozoos heterótrofos de vida libre, resulta escasa. En el presente trabajo se aborda el estudio de las IMHME en el filo Ciliophora a través del genoma de 7 ciliados: Euplotesoctocarinatus, Ichthyophthiriusmultifiliis, Oxytrichatrifallax, Stylonychialemnae, Tetrahymenathermophila, Parameciumtetraurelia y Pseudocohnilembuspersalinus. Su estudio molecular y filogenético, en conjunto con el análisis de lípidos, permite dilucidar posibles vías metabólicas de ácidos grasos y esfingolípidos, como así también de esteroles. La eliminación génica de estas enzimas en el modelo unicelular Tetrahymenathermophila ha permitido obtener fenotipos mutantes que pueden dar indicios a diferentes patologías en otros organismos, incluyendo los humanos. En este sentido, se discutirá la relación de la enzima ácido graso hidroxilasa de esfingolípidos con fases del estadio sexual.


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C6- BIOTRANSFORMACIÓN DE ESTEROLES PARA LA PRODUCCIÓN DE PRO-VITAMINA D

Dra. Clara Nudel. Instituto de Nanobiotecnología (NANOBIOTEC) UBA-CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Las biotransformaciones microbianas son una herramienta muy poderosa para la generación de drogas esteroidales, así como para la producción eficiente de ingredientes farmacéuticos activos (APIs) e intermediarios claves. La biotransformación permite la funcionalización en posiciones difícilmente abordables por métodos químicos, con especificidad regio y estéreo específica, pudiendo complementarse pasos metabólicos sucesivos mediante la construcción de organismos recombinantes. Las vitaminas D2 y D3son compuestos esteroidales que difieren solo en un grupo metilo. La Vitamina D2 (ergocalciferol) se obtiene por irradiación UV del ergosterol extraído de hongos, donde cumple una función estructural y regulatoria similar a la del colesterol en los vertebrados. La vitamina D3 (colecalciferol) se obtiene por irradiación UV del 7-dehidrocolesterol, a su vez extraído de la lanolina u obtenido por síntesis química a partir del colesterol. Si bien tradicionalmente ambas formas de la vitamina D fueron consideradas equivalentes en su actividad farmacológica, los estudios más recientes indican que la vitamina D2 es menos potente y más inestable que el colecalciferol, y de hecho, se sugiere no utilizarla en humanos Durante los últimos 70 años el método de síntesis química de 7-dehidrocolesterol a partir de colesterol fue el más utilizado y ha sido optimizado continuamente. El proceso actualmente en uso alcanza un rendimiento del 50%, partiendo de colesterol purificado y generando un gran número de intermediarios e impurezas que deben ser eliminados previamente a la irradiación UV. Esta última etapa también posee un bajo rendimiento, obteniéndose vitamina D en forma de resina con un contenido efectivo de aproximadamente el 20% que luego debe ser extensamente purificada. Todo ello hace que el costo de la Vitamina D3 de uso farmacéutico sea muy alto. El empleo de pequeñas cantidades morigera los costos, sobre todo si se considera que en la actualidad numerosos productos (lácteos, por ej.) deben ser suplementados con esta vitamina. La transformación de colesterol en 7-dehidrocolesterol es muy rara en la naturaleza, a pesar de su similitud con la muy extendida desaturación en la posición C5. El análisis bioinformático permitió revelar la presencia de ortólogos con actividad comprobada en algunos insectos y nematodos, y potencialmente en ciliados del grupo Oligohymenopohorea. Investigamos la presencia de esta actividad en Tetrahymenathermophila, y comprobamos mediante diversos análisis la presencia de 7-dehidrocolesterol, entre otros compuestos también presentes. La enzima responsable de la actividad 7-desaturasa, caracterizada como una enzima de tipo Rieske, fue estudiada en sus requerimientos (cofactores) y su localización intracelular, mientras que el gen responsable fue identificado por noqueo somático y RNAi, y también comprobada su expresión en otros organismos (levadura y células de insecto), contándose con un sistema potencial de producción de 7-dehidrocolesterol a partir de la biotransformación en una única etapa de colesterol. La actividad C24 deacetilasa que posee Tetrahymena también permite la obtención de 7-dehidrocolesterol a partir de fitoesteroles de plantas. Nuevas estrategias


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surgidas a partir del desarrollo de técnicas de noqueado múltiple de genes permiten postular nuevos métodos eficaces de obtención de vitamina D3 y sus derivados.


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COMUNICACIONES

ORALES


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CO01- -SINUCLEÍNA: PROPIEDADES MODULADORAS EN EL METABOLISMO LIPÍDICO NEURONAL

Alza Natalia P1, Scodelaro Bilbao Paola G1,2,3, Conde Melisa A1,2, Salvador Gabriela A1,2 1 INIBIBB-CONICET, 2Dpto. Biol., Bioq. y Farm.-UNS, 3CERZOS-CONICET. Bahía Blanca, Argentina. [email protected] La -sinucleína (-sin) es una proteína citosólica abundante en las terminales nerviosas presinápticas que se encuentra agregada anormalmente en diferentes patologías, tales como la Enfermedad de Parkinson (EP). Tanto su función fisiológica, como su rol en la patogénesis de la EP aún no han sido totalmente esclarecidos. Numerosos estudios reportan que la -sin poseer la capacidad de remodelar membranas e interactuar con distintos lípidos y, como consecuencia, regular la fusión de las vesículas sinápticas. Sin embargo, aún no se conoce la relación de la -sin con el metabolismo lipídico, ni cuáles podrían ser las implicancias de estos mecanismos en los procesos de injuria neuronal en la EP. En base a lo expuesto, el objetivo principal de este trabajo consistió en caracterizar el rol de -sin en el metabolismo y la señalización lipídica en neuronas en cultivo en presencia o ausencia de injuria oxidativa. Para ello, se utilizaron líneas celulares neuronales de corteza cerebral y dopaminérgicas que expresan de manera estable alguna variante de la proteína -sin (salvaje -WT- y la mutante A53T), o bien, el vector de transfección pcDNA3 (control). Además, para evaluar el efecto del estrés oxidativo, las neuronas se sometieron a una sobrecarga de hierro (Fe). La sobreexpresión de ambas variantes de -sin aumentó la expresión de la sintasa de ácidos grasos (AG), así como el contenido total de AG y de triacilglicéridos (TAG). Este último incremento fue acompañado por la acumulación de gotas lipídicas (GL) citoplasmáticas. Asimismo, la inducción de la formación de GL mediante el tratamiento con altas concentraciones de ácido oleico (300 y 600 µM) permitió observar que tanto el número como el tamaño de las mismas se incrementó en presencia de -sin, con respecto a las células control. La sobrecarga de Fe estimuló el incremento de la concentración de TAG en neuronas dopaminérgicas, y se observó una cantidad aún mayor de este lípido en las neuronas que sobre-expresaban A53T -sin. Por otro lado, se observó que la inhibición de las distintas isoformas de la fosfolipasa D (PLD) incrementó los niveles de expresión del marcador de GL perilipina 2. En conjunto los resultados demuestran que á -sin regula el metabolismo lipídico promoviendo la formación de GL, a su vez, este mecanismo modulador estaría involucrado en la respuesta a la injuria neuronal.

mailto:[email protected]


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CO02- EFECTO DEL ENVEJECIMIENTO EN EL METABOLISMO LIPÍDICO NUCLEAR Y EN SU MODULACIÓN POR LOS ÁCIDOS RETINOICO, DOCOSAHEXAENOICO Y ARAQUIDÓNICO

Gaveglio Virginia Lucía, Pascual Ana Clara, Giusto Norma María, Pasquaré Susana Juana. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, CCT – Bahía Blanca, UNS-CONICET. Diferentes estudios han demostrado que el metabolismo y la funcionalidad de los fosfolípidos nucleares son diferentes de aquellos de otros compartimentos celulares. Estos fosfolípidos generan segundos mensajeros lipídicos los cuales son potenciales moduladores de la expresión de genes. Nuestro laboratorio ha reportado la presencia de actividades enzimáticas relacionadas con el metabolismo de los ácidos fosfatídico (PA) y lisofosfatídico (LPA), del diacilglicerol (DAG) y del monoacilglicerol (MAG) en núcleos aislados de tejido cerebelar. Por otra parte, se pudo demostrar que estas enzimas son reguladas por los ácidos retinoico (RA), docosahexaenoico (DHA) y araquidónico (AA) a través de un mecanismo no genómico. Estas moléculas cumplen un rol importante en el desarrollo y mantenimiento del sistema nervioso, al ser capaces de unirse y activar a los receptores nucleares RAR, PPAR y RXR. Se ha reportado que la activación de estos receptores produce un efecto antiinflamatorio, actuando como neuroprotectores en diferentes modelos de neurodegeneración. Por lo tanto, consideramos relevante estudiar el efecto de los RA, DHA y AA sobre el metabolismo mencionado en un modelo in vivo de envejecimiento. En particular, evaluamos las actividades de lípido-fosfato fosfohidrolasa, lisofosfatidatofosfohidrolasa, lisofosfatidatofosfolipasa, diacilglicerol lipasa y monoacilglicerol lipasa en núcleos aislados de cerebelos de ratas de la cepa Wistar de edad avanzada (26-28 meses, seniles) y de edad adulta (4 meses). Se trabajó con preparaciones nucleares de un alto grado de pureza obtenidas por ultracentrifugación en un gradiente discontinuo de sacarosa y los ensayos enzimáticos fueron realizados empleando sustratos radiactivos exógenos. El efecto de RA, DHA y AA se evaluó co-incubando 10 µM de los mismos con los sustratos respectivos. Se observó una disponibilidad mayor de DAG y de MAG en muestras de animales seniles respecto a lo observado en muestras de adultos. Por otra parte, en animales adultos el RA estimuló la producción de DAG y MAG mientras que el DHA y el AA solo aumentó la formación de MAG. En cambio, en animales seniles el RA únicamente estimuló la producción de MAG mientras que el DHA y el AA disminuyeron su formación. Estos resultados indican que el envejecimiento no solo modifica este metabolismo, sino también su regulación por RA, DHA y AA, lo cual sugiere que los lípidos a nivel nuclear podrían tener un rol importante como moléculas de señalización al regular probablemente la transcripción de genes en procesos degenerativos del sistema nervioso.


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CO03- EFECTO DE LAS CONFORMACIONES OLIGOMÉRICAS Y FIBRILARES DEL PÉPTIDO BETA AMILOIDE EN EL METABOLISMO DEL 2-ARAQUIDONOILGLICEROL DE TERMINALES SINÁPTICOS

Pascual Ana Clara, Gaveglio Virginia Lucía, Giusto Norma María, Pasquaré Susana Juana Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (UNS-CONICET), 8000 Bahía Blanca, Argentina

El sistema endocannabinoide es un sistema de señalización celular ampliamente distribuido en el organismo. Este sistema está formado por ligandos endógenos o endocannabinoides, las enzimas que participan en su metabolismo, y los receptores mediante los cuales ejercen su acción. Una de las funciones más conocidas de los endocannabinoides es la regulación de la plasticidad sináptica, cumpliendo así un rol neuroprotector a nivel del Sistema Nervioso Central. El 2-araquidonoilglicerol (2-AG) es uno de los endocannabinoides más relevantes. El mismo es sintetizado a partir de fosfolípidos de membrana mediante la acción de las enzimas diacilglicerol lipasa (DAGL) o lisofosfatidato fosfohidrolasa (LPAasa), es liberado al espacio sináptico y actúa sobre los receptores cannabinoides CB1 y CB2 de terminales presinápticos. Su nivel se encuentra estrictamente regulado mediante la degradación del mismo. Esta degradación se da principalmente por la hidrólisis a cargo de la enzima monoacilglicerol lipasa (MAGL). En estudios previos hemos demostrado una desregulación del metabolismo del 2-AG en terminales sinápticos de corteza cerebral (CC) de rata durante el envejecimiento. La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una patología neurodegenerativa que está estrechamente relacionada con la senilidad. En cerebros post mortem de pacientes que han padecido la EA se observa un incremento en el péptido beta amiloide (A), tanto en forma de depósitos de fibrillas como en su conformación de oligómeros solubles más pequeños. Se cree que este péptido sería el agente neurotóxico de la EA, aunque en la actualidad existen controversias en cuanto a la conformación del mismo que resulta nociva para las neuronas. El objetivo del presente trabajo es analizar el efecto de oligómeros y fibrillas del péptido A en el metabolismo del endocannabinoide 2-AG. Para ello el péptido A se “envejeció” mediante su incubación durante 2 horas, a 37 °C, con agitación de 300 rpm, para la obtención de oligómeros; y durante 22 horas más, a 37 °C, con agitación de 150 rpm, para la obtención de fibrillas. Sinaptosomas de CC de ratas adultas (4-6 meses) fueron incubados con el péptido en sus diferentes conformaciones durante 10 minutos a 37 °C. Los sinaptosomas se obtuvieron mediante centrifugación diferencial y posterior purificación en gradientes de ficoll. Luego de esta incubación se realizaron estudios de microscopía electrónica de transmisión (MET), evaluación de la liberación de lactato deshidrogenasa (LDH), y medición de las actividades de las enzimas LPAasa, DAGL y MAGL utilizando sustratos radiomarcados específicos. Los resultados demuestran que los oligómeros del péptido A provocan daño en la membrana sinaptosomal y, a su vez, disminuyen la disponibilidad del 2-AG en los terminales sinápticos debido a una menor actividad de síntesis vía DAGL. Contrariamente, las fibrillas incrementan la disponibilidad de este endocannabinoide por un aumento de su síntesis, aunque también provocan daño en la membrana sinaptosomal. Sin embargo, el daño fue significativamente


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menor cuando se ensayó una mayor concentración de fibrillas. Estos resultados evidencian un efecto diferencial del péptido A en el metabolismo del 2-AG que depende de la conformación de dicho péptido.


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CO04- PROTEOMA DE LAS GOTAS LIPÍDICAS NUCLEARES

Lagrutta Lucía C1, Trejo Sebastián A2, Ves-Losada Ana1,3 1INIBIOLP (CCT-La Plata -CONICET-UNLP); 2IMBICE (CCT-La Plata -CONICET-UNLP), 3Dpto. de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP. En el núcleo de las células eucarióticas, los lípidos neutros se organizan y compartimentalizan en una pequeña población de Gotas lipídicas (nLD) construidas por tres pequeñas LD que representan el 10% de las poblaciones celulares de LD (nLD + cLD: LD citosólicas). En células eucarióticas, los lípidos neutros se organizan y compartimentan en gotas lipídicas (LD): una población mayor, predominantemente citosólica (cLD) y una menor de LD nucleares (nLD). En células en condiciones fisiológicas, las nLD están en un bajo número (en promedio tres pequeñas nLD por núcleo) y representan un bajo porcentaje (2-10%) de la población total de LD. Las nLD estarían involucradas en la homeostasis lipídica, y en el interior nuclear servirían como un sistema buffer capaz de aportar o de incorporar en forma rápida proteínas y lípidos involucrados en vías de señalización, aportando ligandos (FA, DAG, etc.) para factores de transcripción, sustratos, y enzimas del metabolismo lipídico y de otros procesos que se desarrollan dentro del núcleo. Las nLD, están constituidas por un core hidrofóbico de triacilglicéridos (TAG) y ésteres de colesterol (CE), rodeado de una monocapa de lípidos polares (LP), colesterol y proteínas asociadas. Los LP nucleares participan activamente como segundos mensajeros en diferentes vías de señalización que involucraran a glicerofosfolípidos y esfingolípidos. Los LP nucleares se caracterizan por contener mayoritariamente 20:4n-6 y 18:0, mientras que los LN contienen 16:0, 16:1n-7, 18:2n-6 y 18:1n-9 (AO) esterificados en sus moléculas. Previamente hemos demostrado que las nLD son un organoide celular dinámico, inducido reversiblemente por AO, que requiere de la biosíntesis en curso de TAG, CE y LP, y determina cambios morfológicos coordinados entre las poblaciones celulares de LD (nLD y cLD). El objetivo de este trabajo fue comenzar a dilucidar las funciones celulares de las nLD, su metabolismo y su organización estructural. Se utilizó como herramienta experimental el análisis de la proteómica de las nLD por GeLC-MS en condiciones fisiológicas y no patológicas a partir de una fracción aislada de las nLD de hígado de rata. En una primera etapa se desarrolló un protocolo experimental que permitió concentrar y aislar a las proteínas de las nLD, teniendo en cuenta que son un componente celular minoritario (0,0004%) y que se aíslan en una banda de un gradiente de sacarosa en la que las LD están muy diluidas. El protocolo incluyó la eliminación en la muestra de los interferentes con el análisis de proteómica, como la sacarosa (proveniente de los gradientes) y los LN que son moléculas hidrofóbicas y además los componentes mayoritarios de las LD. En estas condiciones experimentales se identificaron 35 proteínas, que se clasificaron en las siguientes categorías funcionales: Citoesqueleto y Estructurales (50%), Factores de transcripción (23%), Plegado de proteínas y modificaciones postraduccionales (9%), Proliferación celular y cáncer (9%), Metabolismo lipídico (6%) y Transporte (3%). En conclusión, estos son los primeros resultados de la proteómica de las nLD y demuestran que el protocolo desarrollado permite el estudio por GeLC-MS. Dado que hay una gran diversidad


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en las funciones celulares de las proteínas identificadas y las nLD estarían involucradas directamente o indirectamente en dichos procesos celulares.


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CO05- BIOSÍNTESIS DE NOVO DE ESPECIES MOLECULARES POLIINSATURADAS DE ESFINGOMIELINA Y CERAMIDA EN CÉLULAS ESPERMATOGÉNICAS

Santiago Valtierra Florencia X, Aveldaño Marta I, Oresti Gerardo M. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, CONICET y UNS, Bahía Blanca, Argentina. Las membranas de las células germinales contienen esfingomielinas (SM) y ceramidas (Cer) con ácidos grasos poliinsaturados de muy larga cadena (VLCPUFA) en versiones no hidroxiladas (n-V) y 2-hidroxiladas (h-V), que han demostrado ser esenciales para un desarrollo exitoso de la espermatogénesis. El objetivo del presente estudio fue determinar si las células espermatogénicas, en cultivo y privadas del sostén metabólico que in vivo les es provisto por las células de Sertoli, son capaces de sintetizar estos esfingolípidos (SL) de novo. Para ello se aislaron células germinales a partir de túbulos seminíferos de ratas adultas y se cultivaron en un medio conteniendo 3[H]palmitato como precursor, en ausencia o en presencia de Fumonisina B y L-cicloserina (inhibidores específicos de la serina palmitoil transferasa y de la Cer sintasa respectivamente, enzimas claves en la vía de biosíntesis de novo de los SL). Se estudió la incorporación y distribución del 3[H]palmitato entre SL, en comparación con clases de glicerofosfolípidos y lípidos neutros. Las células germinales aisladas incorporaron 3[H]palmitato en sus SL, a un nivel que disminuyó significativamente en presencia de los dos inhibidores utilizados. El SL más marcado fue la Cer, y en menor medida la SM y la glucosilceramida. En Cer y en SM, el 3[H]palmitato se incorporó tanto en las especies que contienen ácidos grasos saturados (SFA) y monoenoicos como en las que contienen n-V y h-V. El 3[H]palmitato incorporado en los SL, y también en GPL y lípidos neutros, aumentó cuando las células germinales se suplementaron con el medio sobrenadante recuperado de cultivos primarios de células de Sertoli. Entre los SL, el aumento más notorio por esta causa se produjo en las especies que contienen SFA y h-V de la Cer. Estos resultados permiten concluir que las células espermatogénicas tienen la capacidad de biosintetizar de novo las diferentes especies de SL que contienen. Además sugieren que las células de Sertoli, posiblemente a través de la liberación al medio de factores por el momento desconocidos, influencian positivamente dicha biosíntesis.


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CO06- LAS CERAMIDAS DESENCADENAN UN MECANISMO DE SEÑALIZACIÓN QUE CONDUCE A LA EXOCITOSIS ACROSOMAL DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO

Vaquer Cintia C, Pacheco Guiñazú Anahí, Altamirano Karina, Resa Jurín Lucas, Belmonte Silvia A. Instituto de Histología y Embriología Mendoza-CONICET-UNCuyo. [email protected] La cabeza del espermatozoide contiene una gran vesícula secretoria denominada acrosoma. La fusión de la membrana de esta vesícula con la membrana plasmática es una exocitosis regulada, calcio dependiente, denominada reacción acrosomal (RA). En nuestro laboratorio estudiamos la participación de los esfingolípidos en la RA. Demostramos que la esfingosina 1-fosfato (S1P) induce la exocitosis en espermatozoides humanos impactando sobre receptores de membrana acoplados a proteína G. La ceramida es un precursor casi inmediato de S1P y ocupa un lugar central en el metabolismo de esfingolípidos. Nos propusimos dilucidar si las ceramidas regulaban o afectaban la RA y si era así, los mecanismos moleculares involucrados. Primeramente, determinamos si las enzimas del metabolismo de ceramidas estaban presentes en espermatozoides humanos. Mediante Western blot identificamos una esfingomielinasa neutra, ceramidasas neutra y alcalina y ceramida quinasa (CERK). Mediante ensayos de exocitosis observamos que el agregado de ceramida de 6 átomos de carbono (C6) induce exocitosis en un porcentaje similar al de progesterona (Pg), inductor fisiológico de la RA (Fig. 1A). La RA inducida por ceramida ocurre sólo en espermatozoides capacitados (Fig. 1B). Dado que la composición en ácidos grasos de las ceramidas del espermatozoide es tan particular utilizamos D-NMPPAD, un inhibidor de ceramidasas, para provocar un aumento de ceramidas endógenas. La presencia de dicho inhibidor produjo el mismo efecto sobre la AR que el agregado de ceramidas exógenas (Fig. 1C). Figura 1.Ceramida de 6 átomos de carbono induce la RA en un porcentaje similar al inducido por progesterona en espermatozoides capacitados. (A) Curva dosis-respuesta de ceramida C6: Espermatozoides humanos capacitados se incubaron con concentraciones crecientes (0,1M - 25M) de C6 durante 15 minutos. Se evaluó la RA por microscopía de epifluorescencia. (B) Espermatozoides humanos aislados por swim up, fueron divididos en dos poblaciones: una población fue capacitada (Incubados en medio HTF con BSA, Barras negras) y la otra población fue mantenida en condiciones no capacitantes (las incubaciones se realizaron en medio HTF sin BSA, Barras grises). Ambos grupos fueron tratados con progesterona 15 M (control positivo) o con C6 10 M por 15 minutos. Los datos representados son la media (± ES) del porcentaje de RA relativa con respecto a Pg en condiciones capacitantes. Los tratamientos se compararon mediante test de Dunnett con respecto a progesterona en espermatozoides capacitados ** p<0,01; *** p<0,001, n=4. (C) Curva dosis respuesta a diferentes concentraciones del inhibidor de ceramidasas: DNMAPPD. Experimentos de medición de calcio, realizados por espectrofluorometría en una población de espermatozoides (Fig. 2), demostraron que tanto el agregado de C6 como el aumento de ceramidas endógenas indujeron un incremento de calcio intracelular similar al inducido por Pg.

C



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Utilizando inhibidores específicos de canales de calcio, observamos que la ceramida promovía aumento de calcio por liberación del ion a través de canales sensibles a rianodina. Por otra parte, vimos que el tratamiento de los espermatozoides con un inductor exocítico como el ionóforo de calcio A23187 provocó un aumento en la producción de ceramida 1-fosfato (C1P), un metabolito bioactivo de ceramida.

Figura 2: La ceramida C6 induce un aumento en los niveles de calcio intracelular. Mediciones de calcio intracelular en población. Espermatozoides humanos aislados por swim up, fueron incubados en condiciones capacitantes durante 2 hs, luego fueron cargados con la sonda fluorescente de calcio Fluo3-AM (2M) por 30 minutos, se lavaron y se procedió a medir los niveles de calcio en población frente a distintos tratamientos. A – C: Curvas que representan la variación de la fluorescencia relativa en el tiempo frente a la adición de progesterona (15M) (A); ceramida C6 (10M(B) o el inhibidor de ceramidasas, D-NMAPPD (10M) (C). D: Gráfico de barras que representa el porcentaje de la media (± ES) de la diferencia entre la fluorescencia basal y la fluorescencia luego del agregado el estímulo. Se observa que ceramida C6 y D-NMAPPD generan un aumento en los niveles de calcio intracelular con una

magnitud similar al de progesterona, n ≥ 3. Todos los tratamientos se compararon mediante test de Dunnett con respecto a progesterona: ns: no significativo.

Figura 3. Ceramida promueve la RA a través de C1P y es necesaria para la exocitosis inducida por progesterona. Gráficos de barras que representan la media (± ES) del porcentaje de RA relativa en cada tratamiento. Los espermatozoides humanos capacitados se preincubaron durante 15 minutos con el inhibidor específico de ceramida quinasa (NVP-231, 200nM) y posteriormente se estimularon por 15 minutos más con ceramida sola o bien con ceramida mas C1P 10M (A). En la Fig (B) se utilizó Pg solamente

o Pg mas C1P 10M. Todos los tratamientos se compararon entre sí mediante test de Tukey. ns: no significativo, ** p≤ 0,01, *** p≤ 0,001, n=3. El agregado de C1P también estimuló la RA y promovió el aumento de los niveles de calcio intracelular. Mediante microscopía electrónica observamos que tanto C6 como C1P inducen los cambios ultraestructurales típicos que ocurren durante la RA. Usando ensayos funcionales demostramos que NVP-231, inhibidor de la CERK, era capaz de inhibir la RA inducida por C6 (Fig. 3A) y por Pg (Fig. 3B) y que dichos efectos se revertían por el agregado de C1P. La CERK no sólo está presente en el espermatozoide humano, sino que se activa frente a un aumento del calcio intracelular y produce C1P. La producción de este lípido bioactivo es requerida para que ocurra la RA estimulada tanto por progesterona como por ceramida. Esto indica que las vías de señalización de ambos inductores exocíticos convergen en la producción de C1P. Concluimos que el metabolismo de esfingolípidos está activo en espermatozoides humanos y está involucrado principalmente en la vía de señalización disparada por progesterona.

A B

C D


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CO07- LA PROTEÍNA TAT DEL HIV INHIBE LA SECRECIÓN DEL GRÁNULO ACROSOMAL IND UCIDA POR PROGESTERONA EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS

Pacheco Guiñazú Anahí1, Masone Diego1, Beaumelle Bruno2, Resa Lucas1, Altamirano Karina1, Belmonte Silvia.1 1Instituto de Histología y Embriología Mendoza- CCT-CONICET. FCM, UNCuyo; 2CNRS, UMontpellier2, France. [email protected]; [email protected] La proteína Tat del HIV1 es una proteína básica de 11kDa esencial para la transcripción activa del virus. Aunque carece de una secuencia señal para ser secretada, es activamente liberada por las células infectadas [Rayne et al., EMBO J, 2010. 29(8): p. 1348-62]. El mecanismo de secreción de la proteína no se conoce con exactitud, pero se ha demostrado que Tat se une específicamente al PIP2 de la membrana, a través de un dominio básico que reconoce una sola molécula de PIP2 y se estabiliza por la inserción de la cadena lateral del triptófano 11. Esta interacción guarda una afinidad tan elevada que perturba la posibilidad de reclutamiento de otras proteínas de unión a PIP2. La proteína Tat circulante en el suero de pacientes con HIV alcanza concentraciones nanomolares y es capaz de ingresar a células no infectadas afectando su fisiología [Li et al., Neurotox Res, 2009. 16(3): p. 205-20]. Esta proteína contribuye a la patogénesis del HIV-1 de diferentes maneras: en células cromafines inhibe la neurosecreción debido a que se une e impide la función de PIP2. Disfunciones motoras o cognitivas, cambios de comportamiento, y demencia han sido observados en los pacientes que poseen HIV-1; dado que Tat cruza la barrera hematoencefálica, se cree que podría ser en parte, la responsable de la neuropatogénesis observada. Por otro lado la infección por HIV en hombres induce inflamación leve del tracto genitourinario y fertilidad reducida, los pacientes con HIV que recurren a técnicas de fertilización asistida tienen una tasa de éxito solo del 50% en los procedimientos de fertilización. Además, algunos parámetros de calidad del semen como la integridad del DNA y la reducción de la motilidad difieren de los parámetros normales [Nicopoullos et al., HIV Med, 2011. 12(4): p. 195-201] pudiendo verse afectada la capacidad fertilizante del espermatozoide. Uno de los eventos requeridos para que el espermatozoide pueda fertilizar es la reacción acrosomal. Ésta es una exocitosis regulada, calcio dependiente, que debe ser inducida por un estímulo exocítico fisiológico o farmacológico. Nuestro grupo de investigación ha descripto que luego de este estímulo, se desencadena un loop que retroalimenta la síntesis de PIP2, siendo este fosfolípido fundamental en el proceso de exocitosis del gránulo acrosomal [Lopez et al., Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids, 2012. 1821(9): p. 1186-1199]. En este estudio nos proponemos evaluar si la proteína Tat del HIV-1 por su capacidad de ser secretada por las células infectadas, de ingresar a través de las membranas intactas de células no infectadas y de unirse a PIP2, bloqueando su función, puede afectar la exocitosis acrosomal de espermatozoides humanos y por lo tanto su capacidad fertilizante en pacientes portadores del virus. Para el desarrollo experimental se utilizó la isoforma de 86 residuos de la proteína TatWT (wild type) recombinante, y dos variantes mutadas en secuencias específicas: TatW11Y y Tat(49-51)A mutada en un dominio de unión a fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2). En primera instancia, evaluamos si Tat era capaz de ingresar al espermatozoide humano. Incubando las células con la proteína TatWT, por Western blot (WB) (fig1) e



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inmunofluorescencia indirecta (IFI) (datos no mostrados) logramos determinar que esta proteína era internalizada por las gametas a muy baja concentración (10nM fig1A). El mismo tratamiento se realizó con la mutante TatW11Y la cual no fue internalizada, ni logró unirse a la membrana de la gameta (datos no mostrados). Por simulación computacional descubrimos que la tracción hacia el centro de la membrana del estado TatWT frente al estado TatW11Y, es un evento termodinámicamente más favorable, lo que confirma la relevancia del residuo W11 en el anclaje de Tat a membrana. Para evaluar el posible efecto de Tat sobre la reacción acrosomal (RA) de espermatozoides humanos inducida por progesterona (Pg), incubamos las gametas con Tat o sus mutantes durante 2 hs y luego realizamos ensayos de exocitosis. Observamos que la proteína TatWT inhibe la RA inducida por Pg (**p≤0.01) (fig2A), mientras que la mutante Tat(49-51)A incapaz de unir PIP2, ingresa a las gametas (fig1B) sin ejercer efecto alguno (fig2B). La mutante TatW11Y que no fue capaz de ingresar al espermatozoide, tampoco ejerció efecto sobre la RA (datos no mostrados). A su vez la inhibición de la proteína Tat sobre la RA fue rescatada por la adición de PIP2 (datos no mostrados). Estos resultados demuestran que Tat afecta la RA y que la interacción de esta proteína con PIP2 es clave en este proceso. Este aporte contribuye en gran medida a la investigación en salud reproductiva humana de pacientes hombres seropositivos.


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CO08- LA DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS MDCK REQUIERE DE MODIFICACIONES EN EL METABOLISMO DE CERAMIDA Pescio Lucila G, Santacreu Bruno J, Romero Daniela J, Tulino María Soledad, Favale Nicolás O, Sterin-Speziale Norma B. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. BCM. CONICET - UBA. IQUIFIB. Las ceramidas son esfingolípidos clave en muchos procesos biológicos y su función puede variar de acuerdo a la longitud de cadena. Las principales enzimas responsables de la producción de la diversidad de especies moleculares de ceramidas son seis isoenzimas de ceramida sintasa (CerS1-6). En este estudio se investigaron los cambios en el metabolismo de esfingolípidos durante la diferenciación de células Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) por espectrometría de masa MALDI TOF TOF. Se compararon las especies moleculares de ceramida (Cer), glucosilceramida (GlcCer), lactosilceramida (LacCer) y esfingomielina (SM), en células no diferenciadas y diferenciadas (cultivadas bajo hipertonicidad). Las especies moleculares detectadas en ambas condiciones experimentales fueron las mismas, pero las células sometidas a hipertonicidad presentaron mayores niveles de C24:1 Cer, C24:1 GlcCer, C24:1 SM y C16:0 LacCer. El análisis de la expresión de las CerS por RT-PCR demostró que las células MDCK expresan CerS2, CerS4 y CerS6, pero que su nivel de expresión no se modifica durante la diferenciación celular. Paralelamente, se analizó el metabolismo de los glicoesfingolípidos a través del análisis de la incorporación de 14C-Galactosa, en presencia de distintos inhibidores de las vías de síntesis. Se encontró que las células sometidas a hipertonicidad en presencia de amitriptilina, un inhibidor de la esfingomielinasa ácida, así como las células incubadas en presencia del siRNA de la enzima, presentaron una menor incorporación de 4C-Galactosa a los glicoesfingolípidos. Los estudios de inmunofluorescencia para los marcadores de diferenciación mostraron que dichas células no desarrollaron membrana apical madura. Estos resultados sugieren que la hipertonicidad induce la degradación endolisosomal de esfingomielina, generando la ceramida utilizada como sustrato para la síntesis de especies moleculares específicas de los glicoesfingolípidos esenciales para la diferenciación de células MDCK.


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CO09- LA SINCRONIZACIÓN EN EL METABOLISMO DE LOS ESFINGOLÍPIDOS MODULA EL TRANSPORTE DEL COMPLEJO ADHERENTE Santacreu Bruno J, Romero Daniela J, Pescio Lucila G, Sterin de Speziale Norma B, Favale Nicolás O. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. BCM. Buenos Aires, Argentina CONICET - IQUIFIB. Buenos Aires, Argentina En nuestro laboratorio se ha descripto que la línea celular MDCK, una línea prototipo de células epiteliales, se diferencia morfológicamente cuando es sometida a hipertonicidad extracelular. Asociado a este fenómeno, se logra la polarización de las células, y el establecimiento de las uniones adherentes (AJ) maduras. En este proceso resulta imprescindible la reprogramación en el metabolismo de esfingolípidos (SLs). En este trabajo estudiamos la importancia de la Esfingosina 1 fosfato (S1P), el metabolito final de la vía de los SLs, en la adquisición y el mantenimiento del estado diferenciado. Encontramos que la expresión de Esfingosina Kinasa (SphK), enzima que biosintetiza S1P, disminuye conforme progresa la diferenciación celular. La inhibición de la SphK durante la diferenciación, produjo una alteración morfológica con acumulación intracelular de proteínas de la AJ en la Red Trans Golgi, mientras que la inhibición en células diferenciadas no produjo alteración en la distribución de AJ. Esta diferencia fue atribuida a la capacidad metabólica diferencial que presentan las células dependiendo de su estado de diferenciación. En células en proceso de diferenciación, la inhibición de SphK produjo un aumento de la síntesis de novo de todos los SLs con predominio de ceramida. En cambio, en células ya diferenciadas el aumento fue mayoritario en Esfingomielina. La alteración en la unión adherente se acompañó con acumulación nuclear de los factores de transcripción SNAI1/2, indicadores de transición epitelio mesénquima. Estos resultados muestran un cambio en el metabolismo de SLs durante la diferenciación celular, en donde la SphK participa coordinando el tono de síntesis de los demás SLs.


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CO10- PARTICIPACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN XBP1 (X-BOX BINDING PROTEIN) EN LOS MECANISMOS DE OSMOPROTECCIÓN RENAL. Casali Cecilia Irene, Malvicini Ricardo, Weber Karen, Erjavec Luciana, Perazzo Cecilia, Fernández Tome María del Carmen. Universidad de Buenos Aires-Facultad de Farmacia y Bioquímica-BCM y UBA-CONICET-IQUIFIB Fisiológicamente, las células de los túbulos colectores medulares renales se encuentran inmersas en un intersticio que posee la osmolaridad más alta del organismo. Esta elevada osmolaridad está estrechamente relacionada con la función de la médula renal de llevar a cabo la concentración final de la orina para mantener la homeostasis hídrica y electrolítica del organismo. Así, las células epiteliales tubulares habitualmente están expuestas a concentraciones altas y variables de NaCl y urea que, dependiendo del estado de diuresis de un individuo, pueden llegar hasta 500 y 1000mM, respectivamente. Para enfrentar este entorno adverso las células han desarrollado mecanismos de protección y adaptación que involucra, entre otros, el aumento en el metabolismo lipídico para mantener la homeostasis de las membranas celulares y la expresión de numerosos genes osmoprotectores. Este aumento abrupto en la síntesis de proteínas podría causar una sobrecarga proteica en el retículo endoplasmático lo que llevaría a lo que se conoce como estrés del retículo endoplásmico. Trabajos previos en nuestro laboratorio han demostrado que cambios en la hiperosmolaridad ambiental induce la expresión de marcadores de estrés de retículo como CHOP y XBP1en cultivos de células MDCK. XBP1 es un factor de transcripción que regula la expresión de varios genes lipogénicos lo que conlleva a un aumento en la biogénesis de membranas y que podría participar del mecanismo aliviador del estrés de retículo gracias a la expansión de las membranas de dicho compartimiento. Por otro lado, ha sido descripto que XBP1 puede regular la expresión de genes en forma independiente a la activación de estrés de retículo. El objetivo del presente trabajo fue evaluar si XBP1 participa en la regulación de los genes lipogénicos en células renales sometidas a estrés hiperosmolar. Para ello se cultivaron células MDCK en condiciones de isosmolaridad (control, 298 mOsm/KgH2O) e hiperosmolaridad (NaCl 125mM, 512 mOsm/KgH2O) en ausencia o en presencia de un inhibidor de la vía del XBP1, 4µ8C, o en células tratadas con un siRNA silenciador de la expresión de la proteína XBP1. Luego de 24 h de tratamiento se evaluó la incorporación de 14C-glicerol a los fosfolípidos (FLs), los triglicéridos (TGs) y el intermediario de síntesis diacilglicerol (DGs), como parámetro de síntesis de novo, así como la expresión de las enzimas que participan de esta vía por medio de la técnica de RT-PCR. El tratamiento con medio hiperosmolar causó un aumento significativo en la biosíntesis de las tres especies lipídicas. En estas condiciones, también se encontró incrementada la forma madura del mRNA de XBP1 (s-RNA), lo que conlleva a un aumento en su traducción obteniendo una mayor cantidad de este factor de transcripción XBP1. El tratamiento de las células con 4µ8C, inhibidor de la actividad de RNAsa asociada a IRE1, disminuyó la biosíntesis de TGs en forma dependiente de la concentración; concomitantemente se observó una acumulación en la radioactividad asociada al DG. Sin embargo, no se observaron cambios en la radioactividad asociada a los FLs. Un efecto similar se observó cuando las células fueron tratadas con el


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silenciador de XBP1. Cuando se analizó la expresión de enzimas lipogénicas, se encontró disminuido el mRNA de las enzimas DGAT2 y de la Lipina2. En conjunto estos resultados indican que la hiperosmolaridad induce la activación del factor de transcripción XBP1 el cual participa de la regulación la síntesis de lípidos en las células epiteliales de estirpe renal, y evidencian la relevancia de XBP1 que a través de este mecanismo podría estar ejerciendo un efecto osmoprotector.


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CO11- PARTICIPACIÓN DE LA VÍA SK/S1P/S1PR EN EL PROCESO DE DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES Romero Daniela J, Santacreu Bruno J, Pescio Lucila G, Favale Nicolás O. Universidad de Buenos Aires, Facultad de Farmacia y Bioquímica, BCM. CONICET -IQUIFIB, Argentina. Nuestro laboratorio ha demostrado que la hipertonicidad extracelular induce la diferenciación en células epiteliales, y que esta depende de cambios en el metabolismo de los esfingolípidos. Dentro de estos se desatacan los metabolitos complejos como glucoesfingolípidos (GSLs) y esfingomielina (SM). Sin embargo, se encuentra poco estudiada la participación de la Esfingosina 1-fosfato (S1P) en el proceso de diferenciación celular. S1P constituye el verdadero metabolito final del metabolismo esfingolipídico, al cual deben ser metabolizados todos los esfingolípidos para su degradación final. Desde el punto de vista de sus funciones, S1P es un esfingolípido bioactivo clásicamente descripto como una molécula antiapoptótica y proliferativa, pero son escasas las evidencias que la relacionan con el proceso de diferenciación. S1P puede activar diferentes mecanismos para ejercer sus funciones. Por un lado puede actuar como segundo mensajero intracelularmente y/o como ligando de sus receptores de membrana (S1PR), existiendo una relación entre el tono de síntesis de S1P y el mecanismo activado. Se observó que durante el tránsito hacia el estado diferenciado disminuye el tono de síntesis de S1P, por lo que prima la acción vía receptores. Por esto se evaluó si existía un cambio en los niveles y localización de los receptores en el proceso de diferenciación. Se encontraron cambios en la localización del S1PR2 y S1PR3. A medida que la célula progresa hacia estados de mayor grado diferenciación ambos receptores translocarían a diferentes dominios de membrana. Se demostró que la correcta movilización de los receptores resulta un mecanismo determinante en los cambios fenotípicos secuenciales que determinan la adquisición del fenotipo diferenciado. Estos resultados demuestran una nueva función de la vía SK/S1P/S1PR.


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CO12- EL EFECTO DE DROGAS BIOSIMILARES AL GLP-1 (EXENATIDA) EN LA ADIPOGÉNESIS DE 3T3-L1 Del Veliz Samanta1,4, Masone Diego1, Gojanovich Aldana D1, Bustos Diego M1, Uhart Marina1 1 Lab. de Integración de Señales Celulares, IHEM, Fac. Cs. Médicas U.N.Cuyo-CONICET, Mendoza. [email protected] Los preadipocitos 3T3-L1 se cultivan en monocapa y se induce su diferenciación a células con características morfológicas y bioquímicas de los adipocitos. Las 3T3L1 se cultivan en medio DMEM (Gibco, Life Technologies, Denmark) suplementado con 10% Suero Fetal Bovino (SFB), 1% L-Glutamina y los antibióticos penicilina y estreptomicina. Para la diferenciación adipogénica se utiliza un Medio de Diferenciación Adipogénico (MDA), puesto a punto en nuestro laboratorio (Gojanovich et al., 2016) , compuesto de DMEM con 10% SFB, 250 nM Dexametasona, 10 µg/ml Insulina Bovina, 0,5 mM IBMX y 2 µM Rosiglitazona, por medio de un tratamiento de 48 hs. Las vacuolas lipídicas se evidencian por tinción con Red oil O. El objetivo de este ensayo fue evaluar el efecto de drogas biosimilares al GLP-1 (glucagon-like peptide 1) en la adipogénesis de 3T3-L1. El GLP-1 es una hormona intestinal con carácter de incretina, que estimula la secreción de insulina e inhibe la de glucagón. El valor del papel potencial terapéutico del GLP-1 no sólo en la diabetes sino también en la obesidad es un hecho cuyo mecanismo de acción concreto requiere aclaración (Valverde et al., 2006). La Exenatida (péptido biosimilar al GLP-1) funciona como agonista del receptor de GLP-1 humano también in vitro, estando su mecanismo de acción mediado principalmente por el AMPc, estimulando muchas vías de señalización intracelular. En este experimento se utilizó como control negativo 3L3-L1 cultivadas con DMEM suplementado con 2,5% de SFB. En cambio, como control positivo utilizamos 3T3-L1 cultivadas con el medio MDA. También se realizaron diferentes experiencias en donde se buscó evaluar el potencial de diferenciación de GLP-1. Para ello las células se cultivaron en un Medio de Inducción a Prueba 1 (MIP-1) que contenía las mismas drogas que el MDA pero se reemplazó IBMX por exenatida 1μg/mL, y también se utilizó un MIP-2 que también contenía todas las drogas que el MDA pero se reemplazó insulina por exenatida 1μg/mL. El control negativo, NO TRATADO (células con DMEM SFB 2,5%) presentó una diferenciación basal debido a la alta confluencia celular. MDA (células con MDA), presentó la formación de vacuolas lipídicas en casi todas células, salvo algunas excepciones y esto nos permitió su uso como referencia para comparar las demás condiciones de diferenciación. La tinción con Red Oil O nos permitió visualizar pequeñas vacuolas y otras de mayor tamaño en la mayoría de las células. MIP-1 (células con MDA, reemplazando IBMX por exenatida) presentó mayor cantidad de células con vacuolas lipídicas, la tinción con Red Oil O nos permitió la visualización en su mayoría de vacuolas pequeñas, presentes en casi todas las células, con una distribución homogénea. MPI-2 (células con MDA, reemplazando insulina por exenatida) presentó la formación de vacuolas lipídicas de tamaño pequeño en comparación con las otras dos condiciones, con una distribución similar a lo observado en MDA. A su vez todos estos resultados fueron cuantificados por medio de un software diseñado en nuestro laboratorio.



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Se concluyó que el GLP-1 es un inductor de la adipogénesis en 3T3-L1, lo que concuerda con otro trabajo (Yang et al., 2013), en donde se indica que GLP-1 eleva los niveles de expresión de aP2 y PPARγ durante la diferenciación de preadipocitos 3T3-L1. Por otro lado, se ha publicado que el uso de un agonista del receptor de GLP-1, favorece una correcta adipogénesis de los adipocitos funcionales, formando pequeñas vacuolas lipídicas en las células madre diferenciadas, disminuyendo la masa grasa de los adipocitos y aumentando el metabolismo de lípidos (Cantini et al., 2016), lo cual pudo ser observado en nuestra condición experimental MIP-1.

FIGURA 1: Células teñidas con Red Oil O para evaluar la diferenciación adipogénica de 3T3L1. (Microscopio Nikon 80i, objetivo 40X, Campo claro) y cuantificación del número de vacuolas lipídicas y el tamaño relativo de las mismas por medio de un software diseñado en nuestro laboratorio.


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CO13- ANÁLISIS COMPARATIVO EN LA INTERACCIÓN LÍPIDO-PROTEÍNA DE ∆K107, UNA VARIANTE PRO-ATEROGÉNICA DE APOLIPOPROTEÍNA A-I Díaz Ludovico Ivo1; Vázquez Romina1; Mate Sabina1; Tricerri María Alejandra1; Garda Horacio A1, Gonzalez Marina C1

1Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner (INIBIOLP)

La apolipoproteína A-I (ApoA-I) es el componente proteico mayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL). Las HDL remueven el exceso de colesterol de los tejidos periféricos trasportándolo al hígado para su excreción en forma de sales biliares; este proceso es conocido como transporte reveso de colesterol (TRC). Se han descripto diversas variantes naturales de ApoA-I que poseen efectos ateroprotectivos o pro-aterogénicos. En la variante natural de ApoA-I K107→0 (∆K107); se han descripto efectos pro-aterogénicos en sus portadores. Diversos estudios sugieren modificaciones estructurales en la variante de deleción; sin embargo los mecanismos moleculares alterados en el TRC para dicha mutante siguen siendo desconocidos. El objetivo del trabajo es analizar las diferencias en la interacción lípido-proteína para ApoA-I y ∆K107 comparativamente, en modelos simples mediante técnicas biofísicas. Medición de pérdida de contenido acuoso de vesículas lipídicas: las vesículas fueron construidas con POPC o POPC:Col (4:1) por ultrasonicación en medio acuoso en presencia del complejo fluorescente [Tb-DPA] y posterior cromatografía de exclusión en buffer tris 10mM NaCl 150mM EDTA 30 mM. Las medidas de fluorescencia se realizaron a excitación= 250nm y emisión= 544nm agregando ApoA-I o ∆K107 a concentraciones finales de 0,3mg/mL. Los cambios en intensidad de fluorescencia se analizaron comparativamente con aquel producido por el agregado de 1% SDS. Medidas de adsorción/inserción proteica a monocapas lipídicas mediante la Balanza de Langmuir: Se construyeron monocapas de POPC o POPC:Col (4:1). Se llevó el film lipídico a una presión inicial (Ï0) de 10mN/m. La subfase fue en todos los casos PBS. Las proteínas fueron dializadas contra PBS, e inyectadas en la subfase a una concentración final de 0,0015mg/mL. Las isotermas de adsorción/inserción se realizaron a 20°C ± 1,5°C. Las medidas de fluorescencia evidencian que tanto ApoA-I como ∆K107 interaccionan con liposomas. Comparativamente, no se observaron diferencias significativas en la variación de fluorescencia por incubación con ApoA-I o ∆K107, tanto en liposomas de POPC como de POPC:Col. Sin embargo, ambas proteínas presentaron una mayor interacción con liposomas de POPC:Col respecto a los de POPC. Los ensayos de adsorción/inserción de ambas proteínas en monocapas lipídicas mostraron una disminución significativa en los ∆ generados por ∆K107 respecto a los generados por ApoA-I en monocapas de POPC a 0~10mN/m. Este resultado no se repitió en monocapas de POPC:Col. A diferencia de lo observado en los ensayos con liposomas, en los ensayos con monocapas lipídicas no se observó la interacción preferencial de ambas proteínas con mezclas de POPC:Col (4:1).


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CO14- EFECTO DE ESTRÉS OXIDATIVO SOBRE EL METABOLISMO DEL ADIPOCITO Blazquez Ana Catalina, Salvador Gabriela Alejandra, Uranga Romina M Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, Universidad Nacional del Sur (UNS)-CONICET, Bahía Blanca, Argentina. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia, UNS, Bahía Blanca, Argentina. [email protected] El sobrepeso y la obesidad son problemas sanitarios de primer orden, tanto por el aumento de su prevalencia como por las numerosas comorbilidades asociadas. Uno de los fenómenos característicos del panículo adiposo de pacientes con sobrepeso es el estrés oxidativo (EO), y se desconoce si este antecede o procede a la hiperplasia e hipertrofia adiposas, así como también las vías de señalización que modula. Por lo expuesto, el objetivo de este trabajo consistió en evaluar el efecto del EO en adipocitos así como también en el proceso de diferenciación de preadipocitos 3T3-L1. Para ello, se trabajó con dos modelos: uno en el cual el EO estuvo presente durante todo el proceso de diferenciación (estrés al que llamaremos “crónico”, dado que esta condición se mantuvo en el cultivo durante los 10 días que dura el proceso completo) y otro sobre adipocitos ya diferenciados (al que llamaremos “agudo”, dado que el tiempo de exposición de los adipocitos al estrés fue solo de 5 h). Como inductor de EO se utilizó menadiona, un derivado de la vitamina K sintético capaz de generar especies reactivas de oxígeno intracelulares. En el modelo de EO “crónico” (5, 10 y 15 µM menadiona) se observó, tanto por microscopía de campo claro como por tinción con Oil Red O, que la adipogénesis disminuyó en función de la concentración de menadiona. Asimismo, se determinó la disminución de la expresión de distintos marcadores de diferenciación adiposa (PPAR, cEBP, FAS, FABP4). En paralelo, se evaluó el estado de activación de dos vías de señalización típicamente asociadas a la supervivencia celular: PI3K/Akt y ERK1/2. Se observó que ambas vías se regulan de manera inversa frente a la presencia de menadiona: mientras que Akt se inactiva (disminuye su estado fosforilado) las quinasas ERK1/2 se activan (aumenta su fosforilación).



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CO15- EFECTOS DE LA SALVIA HISPÁNICA L. DIETARIA (RICA EN ÁCIDO Α-LINOLÉNICO) SOBRE EL ESTRÉS OXIDATIVO DEL CORAZÓN EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE DISLIPEMIA Y RESISTENCIA INSULÍNICA Creus Agustina1, Alvarez Silvina M2, Giménez Maria S2, Chicco Adriana1, Lombardo Yolanda B1

1Depto. de Cs Biológicas, UNL, Santa Fe y 2Lab.de Bioquímica Molecular, Universidad de San Luis, San Luis. Ratas alimentadas con una dieta rica en sacarosa (DRS) desarrollan alteraciones metabólicas similares a las que se manifiestan en el síndrome metabólico humano. El corazón de éstos animales presenta un incremento de los lípidos intracelulares (lipotoxicidad), disminución de la utilización glucosa, depleción de las defensas antioxidantes y un incremento en los niveles de especies reactivas del oxígeno (ROS). Previamente hemos demostrado que la semilla de Salvia hispánica L. (chía) dietaria (rica en ácido α-linolénico) administrada en DRS mejora la lipotoxicidad y el alterado metabolismo de la glucosa del músculo cardíaco. Nuestro objetivo fue evaluar si los efectos beneficiosos de la semilla de chía sobre las alteraciones metabólicas del músculo cardíaco involucran cambios que mejoran/revierten la depleción de defensas antioxidantes, la producción de ROS y los niveles plasmáticos de citoquinas proinflamatorias. Se trabajó con ratas macho Wistar recibieron durante 3 meses una DRS (% energía: 60 sacarosa, 23 aceite de maíz (AM) y 17 caseína). La mitad de los animales continuó con DRS durante 3 meses adicionales mientras que la otra mitad recibió DRS donde la semilla de chía reemplazó isocalóricamente al aceite de maíz (DRS+chía) hasta el final del período experimental (6 meses). El grupo de referencia recibió una dieta control (DC). En el músculo cardíaco de los animales de cada grupo dietario analizamos: actividades enzimáticas de las enzimas catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GPx) y la expresión génica de MnSOD y GPx. Niveles de ROS y expresión génica de la subunidad p47 de la NAD(P)H oxidasa (p47NOX) y del factor de transcripción Nrf2. En plasma medimos niveles de marcadores de estrés oxidativo (TBARS y grupos protein carbonilos),IL-6 y TNF-α. El análisis estadístico se realizó por ANOVA. La administración de la semilla de chía en reemplazo del AM en DRS: 1- mejoró las actividades enzimáticas CAT, GPx y SOD junto con un incremento de los niveles de mRNA de SOD sin cambios en mRNA de GPx. 2- normalizó el incrementado nivel de mRNA de p47NOX y los niveles de ROS observado en el corazón de DRS. 3- incrementó significativamente los niveles de mRNA de Nrf2. 4-los niveles plasmáticos de TBARS, protein carbonilos, TNF-α e IL-6 presentaron a valores similares a los obtenidos en DC. Estos resultados demuestran que la semilla de chía dietaria (rica en ácido α-linolénico) administrada en reemplazo del AM mejora/revierte alteraciones presentes en el músculo cardíaco de ratas sometidas a DRS mediante mecanismos que involucran la restauración de las defensas antioxidantes y la disminución del estado pro-inflamatorio.


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CO16- ACTIVIDAD Y REGULACIÓN DE LAS SN-1 LIPASAS EN OBESIDAD Barchuk Magali1,2, Miksztowicz Verónica1,2,3, Morales Celina4, Zago Valeria1,2,3, Friedman Silvia5, Gelpi Ricardo4, Schreier Laura1,2, Berg Gabriela1,2,3. 1 UBA. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Dpto de Bioquímica Clínica. Cátedra de Bioquímica Clínica I. Bs As, Argentina. 2 UBA. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica (INFIBIOC). Bs As, Argentina. 3 UBA. CONICET. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Bs As, Argentina. 4 UBA. Facultad de Medicina. Instituto de Fisiopatología Cardiovascular, Departamento de Patología. Bs As, Argentina. 5 UBA. Facultad de Odontología. Cátedra de Bioquímica General y Bucal. Bs As, Argentina. Las tres principales enzimas lipolíticas involucradas en el metabolismo de las lipoproteínas, Lipoproteína Lipasa (LPL), Lipasa Hepática (LH) y Lipasa Endotelial (LE), son miembros de la familia de la SN-1 lipasas. Las condiciones de Insulino-resistencia (IR) alteran la expresión y actividad de dichas enzimas, regulando en forma negativa a la LPL y positiva a la LH y LE, principalmente, modificando el perfil lipídico- lipo-proteico. Es conocido que la expresión de estas lipasas están altamente reguladas por varios factores, siendo los miembros de la familia de los Peroxisome Proliferator Activated Receptors (PPARs), uno de los más importantes. La expansión del tejido adiposo visceral, así como la esteatosis hepática y cardíaca, son características de la IR, las cuales podrían condicionar la expresión de los PPARs en los tejidos afectados, alterando de esta forma la actividad de las lipasas. Hasta la actualidad, no se han reportado datos acerca de la actividad tisular de LE en los tejidos afectador por la IR. Nuestro objetivo fue estudiar la actividad de LPL y LE en el tejido adiposo expandido y en el corazón con esteatosis, así como la actividad de LH en el hígado graso, y su asociación con el perfil metabólico, en un modelo de obesidad inducido por la dieta. Además, evaluar la expresión de PPARs, asociándola a la actividad de las enzimas lipolíticas. Se utilizaron ratas Wistar macho (180-200g), a las cuales se las alimentó durante 14 semanas con dieta standard (grupo Control, n=14) o con dieta estándar adicionada con grasa (15% saturada), representando el 40% de las calorías totales (Grupo Dieta Alta en Grasa, DAG, n=14). Este protocolo fue aprobado por el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (CICUAL) de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires. Al finalizar la experiencia, se midió glucosa, perfil lipídico y marcadores de IR en el suero de los animales. Se evaluó esteatosis cardíaca y hepática, así como características del tejido adiposo epididimal (TA), por histología. Por su parte, las actividades de LPL como triglicérido (TG)-hidrolasa y LE como fosfo (PL)-lipasa se evaluaron en TA y corazón, mientras que la actividad de LH como TG-hidrolasa se estudió en el hígado de los animales. Finalmente, se evaluó la expresión de PPARγ en TA y PPARδ en corazón por Western Blot. El grupo DAG presentó una ganancia de peso mayor que el grupo control, así como un perfil lipídico-lipoproteico más aterogénico, con marcadores de IR aumentados. Se evidenció esteatosis hepática y cardíaca en el grupo DAG, no así en el control. Respecto a las características histológicas del TA, el grupo DAG presentó menor número de adipocitos (p<0.001), de mayor tamaño (p=0.02), que el grupo control. En el corazón y TA, la actividad de LE se encontró aumentada en el grupo DAG (p<0.001 y p=0.002, respectivamente), mientras que la actividad de LPL fue menor en ambos tejidos en el mismo grupo (p<0.001 y p=0.002, respectivamente), respecto al grupo control. En ambos tejidos, las actividades de LPL y LE se asociaron en forma inversa (p<0.001 en el corazón y p=0.004 en TA). En el corazón, la actividad de LPL se asoció en forma inversa a los niveles de TG (p<0.001), ácidos grasos libres (AGL) (p=0.05) y al colesterol No-HDL (No HDL-C) (p=0.01), mientras que la actividad de LE en el mismo tejido se asoció en forma directa a este último parámetro (p=0.01). Por su parte, la actividad de LPL en el TA correlacionó en forma inversa con los AGL circulantes (p=0.05), mientras que una asociación directa se


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evidenció entre la actividad de LE y los AGL (p=0.05) y el No HDL-C (p<0.001), e inversa con el HDL-C (p=0.05). Por su parte, la expresión de PPARγ en el TA se encontró disminuida en el grupo DAG respecto al Control (p<0.001), fue asociado en forma directa a la actividad de LPL (p=0.014) e inversa a la actividad de LE (p=0.001). No se hallaron diferencias en la expresión de PPARδ en corazón, así como tampoco asociaciones con las actividades enzimáticas. Finalmente, la actividad de LH no mostró diferencias entre los grupos, y tampoco se asoció al perfil lipídico ni a marcadores de IR. Dada la asociación inversa entre las actividades de LPL y LE en los tejidos estudiados, podría proponerse a la LE como la enzima encargada de suministrar los AGL a los tejidos en situaciones donde la actividad de LPL se halle disminuida, promoviendo así la expansión del TA y los procesos de esteatosis. La asociación directa de LE con las lipoproteínas aterogénicas y AGL, e inversa con el HDL-C, avalan el rol negativo de esta enzima en las situaciones de IR. En cuanto a la regulación de estas enzimas, en el TA los receptores PPARγ serían responsables de la misma, mientras que en el músculo cardíaco podrían estar involucrados otros mecanismos que regulen la expresión y/o actividad de LPL y LE. Finalmente, la falta de diferencias en la actividad de LH, aun en situaciones de esteatosis hepática, así como de asociaciones con el perfil metabólico, podrían deberse al estadio temprano de IR, y no la propondrían como una de las principales enzimas involucradas en el desarrollo del perfil pro-aterogénico evidenciado en este modelo.


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CO17- TRANSLOCACIÓN NUCLEAR DE LA PROTEÍNA INTESTINAL TRANSPORTADORA DE ÁCIDOS GRASOS Suárez Mariana1, Canclini Lucía2, Folle Gustavo2, Esteves Adriana1. 1Sección Bioquímica, Facultad de Ciencias, UdelaR. Montevideo, Uruguay; 2IIBCE, Montevideo, Uruguay. La obesidad es sin duda uno de los principales problemas de salud pública en todo el mundo debido a su rápida progresión y los efectos nocivos de las enfermedades asociadas. El acceso fácil a alimentos sabrosos y ricos en energía se cree que contribuye en gran medida a esta epidemia. En las dietas occidentales, los lípidos representan más del 40% de la ingesta calórica diaria, mientras que el valor nutritivo es menor al 10%. Este alto consumo graso, asociado con un desbalance nutritivo, contribuye no solamente al aumento de la prevalencia de la obesidad en la población, sino a la aparición de una serie de enfermedades que implican costos dramáticos para el hombre y la sociedad. Es por esta razón que se ha realizado una considerable inversión para comprender el papel de los lípidos en la etiología de estas patologías. Sin embargo, a pesar de conocerse que el intestino es responsable de la absorción de los lípidos, poco se sabe de los mecanismos involucrados en la captura, transporte y destino intracelular de los lípidos y sus derivados metabólicos en la célula intestinal. Los lípidos obtenidos a través de la dieta son el mayor aporte de lípidos presentes en el lumen del intestino. Su hidrólisis por los jugos pancreáticos libera grandes cantidades de ácidos grasos (AG) de cadena larga que son absorbidos por los enterocitos mediante mecanismos complejos. Este fenómeno involucra tanto la difusión pasiva como la participación de proteínas de membrana. Una vez en el citoplasma, los AG se pueden empaquetar en vesículas o unirse a las proteínas transportadoras de ácidos grasos (FABPs). Las FABPs son proteínas intracelulares, que unen en forma no covalente AG de cadena larga y otros ligandos hidrofóbicos. Pertenecen a una familia multigénica de proteínas de bajo peso molecular (14-15 kDa), con una distribución filogenética muy amplia. Se distinguen unas de otras, no sólo por su distribución tisular, sino también por la especificidad y afinidad por sus ligandos. La función específica de cada una de ellas está aún bajo investigación. Algunos de sus miembros estarían implicados en la modulación del crecimiento y proliferación celular, así como en la regulación de la expresión génica. La mucosa intestinal es un sistema muy atractivo para evaluar el destino intracelular de los ácidos grasos exógenos. Hemos elegido el pez cebra (Danio rerio) como modelo para el estudio de los mecanismos involucrados en la absorción y transporte intracelular de los lípidos. En los peces, como en los mamíferos, el tercio proximal del intestino es el mayor sitio de absorción de lípidos.

En el intestino de este organismo, se expresan la FABP de tipo intestinal (Fabp2)1, la de tipo

hepático (Fabp1) y la de tipo ileal (Fabp6). El patrón de expresión cefalocaudal de estas proteínas en el intestino de los mamíferos se conserva a través de la evolución. En los peces, al igual que en mamíferos, el tercio proximal del intestino es la región de mayor absorción de

1 Notación aceptada para Danio rerio


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lípidos. Además, tanto el colesterol como otros lípidos son transportados por diferentes lipoproteínas similares a las descritas en mamíferos. Estos hechos hacen de Danio rerio un modelo útil para el estudio del metabolismo lipídico en vertebrados. El objetivo de nuestro trabajo se ha centrado en determinar el rol de la proteína Fabp2 en el enterocito de Danio rerio. En una primera instancia, nos propusimos determinar el destino intracelular de ácidos grasos ingeridos con la dieta transportados por la Fabp2. Para ello, peces adultos fueron alimentados con yema de huevo embebida en el análogo de ácidos graso fluorescente BODIPY-FLC12, para luego analizar por microscopía confocal la co-localización Fabp2-ligando fluorescente. Comprobamos, en primer lugar, que el ácido graso había sido absorbido, distribuyéndose en forma homogénea a nivel citosólico. De forma interesante, observamos además, que el ácido graso se localizaba en el núcleo de los enterocitos, co-localizando con la Fabp2. La localización nuclear de la proteína fue confirmada por inmunomicroscopía electrónica de transmisión. Las imágenes electrónicas muestran además señal en el citoplasma y su ausencia en las mitocondrias y gotas lipídicas. Considerando que la proteína no tienen una señal de localización nuclear canónica, nuestro segundo objetivo fue identificar una señal no canónica y tridimensional (ncNLS), similar a la propuesta para otros miembros de la familia. Propusimos que los residuos K17, K29 y R30 localizados en la región helicoidal de la proteína podrían conformar la ncNLS de Fabp2. Realizamos en primer lugar, mutagénesis dirigida para luego clonar tanto el gen salvaje como el mutante en el vector de expresión pCDNA3-EGFP apto para su utilización en células Caco-2. Las células transfectadas con una y otra construcción se analizaron mediante inmunomicroscopía confocal y se cuantificó la relación núcleo-citoplasma de la señal fluorescente. Los resultados indican que la señal propuesta sería la responsable de la translocación de la Fabp2 al núcleo del enterocito del pez cebra. La presencia de la proteína en el núcleo transportando su ligando sugiere un rol en el metabolismo nuclear, ya sea participando en la regulación de la expresión génica como en el metabolismo lipídico de este compartimento. Nos proponemos a corto y mediano plazo, determinar si efectivamente Fabp2 es la responsable de la translocación nuclear de los ácidos grasos, determinar si existe interacción entre la Fabp2 y receptores nucleares así como profundizar en la composición y organización lipídica del núcleo.


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CO18- ENDOCANABINOIDES DERIVADOS DE ÁCIDO ARAQUIDÓNICO COMO MEDIADORES DEL TRÁFICO DE COLESTEROL EN EL NEMATODO C. ELEGANS Prez Gastón M*a, Galles Celina*a, Porta Exequielb, Penkov Siderc, Boland Sebastianc, Labadie Guillermob, Kurzchalia Teymurasc, de Mendoza Diegoa. aInstituto de biología molecular y celular de Rosario, Rosario, Argentina bInstituto de química de Rosario, Argentina c Instituto Max Planck de biología molecular y celular, Dresden, Germany *Los autores contribuyeron de igual manera a este trabajo. Email: [email protected] El objetivo principal de nuestro trabajo es emplear al nematodo Caenorhabditis elegans como organismo modelo para el estudio a nivel bioquímico de la influencia que ejercen las moléculas endocanabinoides sobre el metabolismo del colesterol y otros esteroles. El colesterol es un lípido esencial usado por la mayoría de los organismos eucariotas. Este lípido cumple funciones estructurales en membranas y es precursor de hormonas esteroideas, oxiesteroles y sales biliares, por lo que la regulación de su homeostasis es crucial para el normal funcionamiento de la célula. En el interior de las células el colesterol debe ser movilizado hacia los lugares donde cumplirá su función estructural o las organelas donde será utilizado como precursor de otras biomoléculas. Cuando este proceso, conocido como transporte intracelular de colesterol, se encuentra afectado en humanos da lugar a patologías como la ateroesclerosis y síndromes degenerativos como Niemmann-Pick tipo C (perdida de función de npc-1) [Ikonen, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., vol. 9, pp. 125–138, 2008; Iaea et al, Essays Biochem., vol. 57, pp. 43–55, 2015]. A pesar de que mayoritariamente el colesterol se encuentra en las membranas, la información que existe sobre cómo los lípidos influyen en su movilización es muy escasa. Recientemente se ha descubierto una nueva clase de glicolípidos denominados fosfoetanolamina glucosilceramidas (PEGC por sus siglas en ingles) que estimulan la movilización de colesterol en el nematodo C. elegans [Boland et al, Nat. Publ. Gr., vol. 13, no. 6, pp. 647–654, 2017]. C. elegans es un excelente modelo para estudiar tráfico de colesterol ya que el gusano es auxótrofo para el mismo [Matyash et al, PLoS Biol., vol. 2, no. 10, 2004]. El ingreso de colesterol a las células se produce vía endocitosis, la cual lo localiza primeramente en los endosomas y luego en los lisosomas. Finalmente se distribuye a otras organelas con la asistencia de ortólogos a NPC1, una proteína lisosomal que es esencial para la exportación del colesterol en humanos, NCR-1 y NCR-2 [Li et al, Development, vol. 131, pp. 5741–5752, 2004]. La importancia de este sistema en C. elegans se ve reflejada en el fenotipo de la mutante ncr-1; ncr-2 la cual en lugar de generar nematodos adultos en su población presenta una mayoría de gusanos en un estado hipometabólico de diapausa denominado dauers. Se ha demostrado que este arresto larval está directamente relacionado con la disminución de la síntesis de ácido dafacrónico (DA), una hormona esteroidea derivada del colesterol [Matyash et al, PLoS Biol., vol. 2, no. 10, 2004; Motola et al, Cell, vol. 124, no. 6, pp. 1209–1223, 2006]. Esta hormona integra vías de señalización que están estrechamente vinculadas con la regulación del ciclo de vida tales como la vía de traducción de señales mediada por DAF-7 (péptido señal homologo al TGF- de mamíferos) [Motola et al, Cell, vol. 124, no. 6, pp. 1209–1223, 2006.] Asimismo ha sido



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establecido que la via de DAF-7 estimula la síntesis de AD, al menos parcialmente, por la activación de la movilización de colesterol mediada por PEGC. Debido a que la movilización de colesterol en C. elegans requiere PEGC, decidimos investigar si otros lípidos están involucrados en este proceso. Pudimos establecer que la síntesis de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA por sus siglas en inglés) es importante para el tráfico intracelular de colesterol y por ende para el desarrollo del nematodo. Más precisamente pudimos establecer que los endocanabinoides 2-araquidonoil glicerol (2-AG) y araquidonoil etanolamida (AEA) promueve la movilización de reservas internas de colesterol en el nematodo, siendo lo más relevante el hecho de que la suplementación de la dieta con 2-AG y AEA evitan el arresto larval en mutantes en el modelo NPC1, ncr-2;ncr-1. La información recabada nos permite formular la interesante hipótesis de que los ECs ejercen su efecto sobre el desarrollo de los nematodos por modulación del transporte de colesterol, lo que condiciona la producción de DA.


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CO19- PRODUCCIÓN DE LÍPIDOS EN HAEMATOCOCCUS PLUVIALIS EN RESPUESTA AL ESTRÉS LUMÍNICO Scodelaro Bilbao Paola1,2,3, Salvador Gabriela1, Leonardi Patricia1,2. 1Dpto. Biol., Bioq y Farm.-UNS, 2CERZOS, 3INIBIBB-CONICET. Bahía Blanca, Argentina. [email protected] Los problemas energéticos y ambientales que se enfrentan a nivel mundial han intensificado la búsqueda de nuevas fuentes de energía renovables y sustentables. En este contexto, las microalgas han surgido como una alternativa de materia prima para la producción de biodiesel. Sin embargo, aún no se ha logrado que su utilización sea económicamente viable. En la actualidad, se busca trabajar bajo el concepto de biorrefinería, es decir, con especies de microalgas oleaginosas productoras de triacilglicéridos (TAG), materia prima para la producción de biodiesel, así como de co-productos de alto valor agregado. Haematococcus pluvialis es una microalga oleaginosa utilizada como fuente de un carotenoide de alto poder antioxidante, la astaxantina, a escala industrial. Recientemente, hemos demostrado la capacidad de esta especie de sintetizar fitoesteroles de interés nutracéutico y TAG con potencial aplicación para la producción de biodiesel, en respuesta al estrés lumínico. Sin embargo, en esta especie se desconocen los mecanismos moleculares involucrados en la producción de estos lípidos. Por lo expuesto, nuestro objetivo fue estudiar las enzimas que estarían implicadas en las vías de síntesis y degradación TAG en H. pluvialis; y asimismo evaluar si existe una relación entre las vías de síntesis de fitoesteroles y TAG en respuesta al estrés. Para lograrlo, H. pluvialis UTEX 2505 se cultivó durante 24, 48 y 72 horas a dos intensidades lumínicas: 90 µmol m-2 s-1 (condición control) y 300 µmol m-2 s-1 (condición stress). El análisis mediante Western Blot demostró que se indujo la expresión del complejo enzimático ácido graso sintasa (FAS) así como de dos enzimas involucradas en la síntesis de TAG, ácido lisofosfatídico aciltransferasa (LPAAT) y diacilglicerol aciltransferasa (DGAT) en respuesta a la incubación con luz intensa. Estos resultados fueron corroborados mediante la cuantificación espectrofotométrica de TAG; mientras que la incubación con propranolol (inhibidor de lipinas) disminuyó el efecto mencionado. Estos lípidos neutros se acumularon bajo la forma de gotas lipídicas citoplasmáticas de acuerdo a lo observado por microscopía confocal utilizando el colorante lipofílico Rojo Nilo. Además, la luz intensa provocó un aumento en la expresión de las enzimas lipolíticas monoacilglicérido lipasa (MAGL) y diacilglicérido lipasa (DAGL) por Western Blot. Sin embargo, no se detectaron cambios significativos en la concentración de glicerol en el medio de cultivo a los tiempos ensayados. Se demostró también que el estrés lumínico indujo la síntesis de fitoesteroles libres y esterificados. Sin embargo, la incubación de las células con propranolol no afectó el contenido de fitoesteroles libres pero si redujo el contenido de fitoesteroles esterificados. En conjunto, los resultados sugieren que el estrés lumínico induce la síntesis de TAG mediante el incremento de la vía de síntesis de ácidos grasos y del aumento de la expresión de enzimas de la vía de Kennedy, LPAAT y DGAT. La elucidación de los mecanismos moleculares involucrados en la síntesis de moléculas de interés industrial sintetizadas por H. pluvialispermitirá aplicar herramientas de biología molecular tendientes a mejorar el rendimiento de la cepa de manera de que sea transferible al sector productivo.



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CO20- EL Tl(I) Y Tl(III) INDUCEN ALTERACIONES EN EL METABOLISMO LIPÍDICO DE CÉLULAS MDCK Morel Gomez Emanuel D1,3; Verstraeten Sandra V2,3*, Fernandez María del Carmen1,3* 1UBA, FFyB, BCM; 2UBA, FFyB, QB; 3CONICET, IQUIFIB. *Ambas son consideradas como últimas autoras Email: [email protected] El talio (Tl) es un metal pesado tóxico que contamina el ambiente y causa severos problemas relacionados con la salud humana. Este metal presenta dos estados de oxidación: el catión talioso (Tl(I)) y el catión tálico (Tl(III)), siendo este último un oxidante fuerte. La intoxicación con Tl altera la funcionalidad tisular al afectar la progresión del ciclo celular o al promover la muerte celular programada. La intoxicación con Tl afecta diversos órganos y tejidos, siendo el sistema renal uno de los principales órganos blanco de esta toxicidad. Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en dicha condición patológica aún son poco conocidos. Dado que previamente ha sido reportado que otros metales pesados también pueden alterar la homeostasis de los lípidos celulares, en el presente trabajo estudiamos si el Tl afecta el metabolismo de los lípidos renales, ya que podrían estar involucrados en la toxicidad de este metal. Con este propósito, empleamos un modelo de células epiteliales de estirpe renal (MDCK) proliferantes. Los cultivos de células MDCK subconfluentes fueron incubadas durante 24 o 48 h en ausencia o presencia de Tl(I) o Tl(III) (10 o 100 µM). Luego del tratamiento, las células se cosecharon, se contaron y se analizó la viabilidad, la morfología y el contenido y composición de los lípidos celulares. Los resultados obtenidos indican que el Tl(III) disminuyó el número total de células con viabilidad conservada y también la funcionalidad mitocondrial. A través de microscopía electrónica pudimos observar que principalmente el Tl(III) generó importantes alteraciones en la ultraestructura celular: en uniones célula-célula, acumulación de cuerpos lipídicos (CL), imágenes compatibles con estrés de retículo y autofagia. Por otro lado, el Tl causó acumulación de triglicéridos como así también aumento del contenido de los lípidos de membranas (fosfolípidos y colesterol) y alteraciones en las propiedades biofísicas de las membranas. Además, observamos que esta alteración en el perfil de lípidos celulares fue causada por el aumento en la biosíntesis lipídica. En resumen, los resultados obtenidos sugieren que el Tl(I) y el Tl(III) afectan las células MDCK en estadio proliferativo, causando alteraciones tanto en la viabilidad y morfología celulares como en el metabolismo de los lípidos. De ocurrir in vivo, estas alteraciones podrían contribuir a la patología renal observada en los individuos intoxicados con Tl.



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POSTERS


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P01- LOS NIVELES DE APOE Y LIPOPEROXIDACION OSCILAN DIARIAMENTE EN EL HIPOCAMPO. EFECTO DE LA INYECCION I.C.V. DE AGREGADOS DEL PEPTIDO A Castro Andrea, Navigatore Fonzo Lorena, Anzulovich Ana. Laboratorio de Cronobiología, IMIBIO-SL, CONICET-UNSL. E-mail: [email protected]. La enfermedad de Alzheimer (EA) es la forma más frecuente de demencia y es uno de los trastornos psiquiátricos más devastadores. Actualmente cerca de 46.8 millones de personas en el mundo padecen la enfermedad y este número se duplicará cada veinte años llegando a casi 131.5 millones de casos para el 2050 (Prince y col., 2015).De acuerdo a la hipótesis amiloidea, la EA es causada por un desbalance entre la producción del péptido A y su clearance (Hardy y col., 2002), resultando en elevadas cantidades del mismo en distintas áreas del Sistema Nervioso Central (SNC), el hipocampo entre ellas. El depósito de grandes cantidades del péptido Aâ está asociado con la pérdida de neuronas y sinapsis y la alteración de las funciones neuronales (Iwata y col., 2000). El estrés oxidativo también juega un rol importante en la patogénesis de la EA (Barnham y col.,2004; Sayre y col., 2005).Recientes investigaciones realizadas por Butterfild, Swomley y Sultana (2013), han demostrado que el péptido Aâ insertado en la membrana podría inducir directamente estrés oxidativo a través de la formación del radical sulfóxido demetionina, el cual ocasionaría el inicio de la peroxidación lipídica seguido por el daño oxidativo a otras biomoléculas. Por otro lado, la ApoE regula la redistribución y homeostasis del colesterol y es la apolipoproteína predominante en el SNC, necesaria para el mantenimiento estructural y la integridad funcional de las sinapsis y membranas (Mahley 1988; Kim y col., 2009). Además, se ha demostrado que esta lipoproteína juega un rol directo en el clearance normal y fisiológico del péptido Aâ del cerebro ya que facilita la degradación proteolítica intra y extracelular del mismo(Jiang y col., 2008) y que la ausencia de ApoE se relaciona con una disminuida capacidad antioxidante(Law y col., 2003). Particularmente, Honma y col (2013) observaron que ratones deficientes en ApoE mostraron un aumento del estrés oxidativo a nivel sérico y hepático. La EA se caracteriza además del deterioro cognitivo, por alteraciones de los ritmos circadianos (Harper y col., 2005), del ciclo sueño-vigilia, (Van Someren y col., 1996; Bhatt y col., 2005) y por trastornos de comportamiento (Martín y col., 2000). Las bases celulares y moleculares de la ritmicidad circadiana consisten en una compleja interacción entre varios factores de transcripción (los heterodímeros BMAL1: CLOCK, PER:CRY), que constituyen la maquinaria molecular del reloj celular, cuyo funcionamiento es dependiente del estado redox. Estos factores, además, forman parte de un mecanismo interno de temporización (Sistema Circadiano) que es entrenado por factores externos tales como los ciclos luz-oscuridad, de temperatura día-noche y otros, generando ritmos de expresión endógena con una periodicidad cercana a las 24 horas (Franken y col., 2009; Coogany col., 2011). Recientes estudios han demostrado que la alteración de los ritmos circadianos acelera el envejecimiento, favorece las patologías relacionadas con la edad, los desórdenes psiquiátricos y neurogenerativos (Antoch y col., 2008; Kondratov y col., 2006 y Wulff y col., 2010). En base a estos antecedentes, el objetivo de este trabajo fue investigar los efectos de una inyección i.c.v de agregados del péptico A(1-42) sobre el contenido del péptido A y los

mailto:[email protected].


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patrones temporales de Apo E, de los niveles diarios de lipoperoxidación,de glutatión reducido y del factor activador del reloj, BMAL1, en el hipocampo de rata. Para la obtención del modelo experimental, se siguió el procedimiento descripto por Zhang y col. (2011) con modificaciones. Para ello se emplearon ratas macho de cuatro meses de edad de la cepa Holtzman correspondientes a los grupos: control (CO, inyectado vía i.c.v. con solución fisiológica) y enfermo (EA, inyectado i.c.v. con agregados del péptido Aß). A lo largo de todo el periodo de mantenimiento, las ratas fueron mantenidas bajo condiciones de luz artificial y temperatura controladas: ciclos de 12 hs. luz-12 hs. oscuridad, y temperatura de 20-24°C y recibieron agua y alimento ad-libitium. A los siete días de la cirugía los animales de ambos grupos experimentales fueron sacrificados por decapitación e inmediatamente se extrajeron las muestras de hipocampo, manteniéndolas en nitrógeno líquido hasta el final del experimento, luego se almacenaron a -80°C hasta su análisis. Los niveles de lipoperoxidación y de GSH se determinaron por ensayos colorimétricos y los niveles de proteínas Aß, Apo E y Bmal1 por immunoblotting, en muestras de hipocampo aisladas cada 4 h durante un período de 24 hs. También se realizó un análisis bioinformático dela región promotora de Apo E en busca de sitios de unión del heterodímero BMAL1:CLOCK. Nuestros resultados revelaron que la inyección de Aß(1-42) aumentó el contenido de Aß en el hipocampo y ocasionó un corrimiento de fase en los ritmos diarios de lipoperoxidación, Apo E y Bmal1,como también una disminución del mesor de los ritmos de GSH en el hipocampo de rata. Además se encontraron sitios tipo E-box en el promotor de Apo E. Conforme estos resultados, podríamos sugerir que el incremento en los niveles del péptido A observado en nuestro modelo experimental de EA, produce cambios en los patrones temporales de lipoperoxidación y de los niveles de Apo E, y consecuentemente, altera la oscilación diaria del estado redox celular y del funcionamiento del reloj endógeno, provocando, la desincronización de la organización temporal de funciones cognitivas en hipocampo.


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P02- EFECTO DE SEIS MESES DE DEFICIENCIA DE VITAMINA A SOBRE EL METABOLISMO LIPÍDICO HEPÁTICO DE RATAS HEMBRAS Orozco Reina Agustina, Brovarone Roxana, Vasquez Gómez Miriam E, Giménez María S. Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. Email: [email protected] La vitamina A (VA) es un nutriente indispensable para el crecimiento y la diferenciación celular. Además, es conocido su efecto regulador sobre la morfología de las células. Trabajos previos realizados en nuestro laboratorio han demostrado que la deficiencia de VA (VAD) modifica parámetros de estrés oxidativo y el metabolismo de lípidos en hígado, corazón y aorta. Para observar si la dieta AIN 93G con VA (8 mg de retinol como retinil palmitato/kg de dieta) y sin VA genera un cambio en la presencia de diversos lípidos de hígado, se trabajó con ratas hembras Wistar separadas al destete en tres grupos con n=4 cada uno. Un grupo se alimentó con dieta suficiente en VA por 6 meses (A+), otro con dieta deficiente en VA por 6 meses (A-) y el tercer grupo recibió dieta deficiente en VA durante ciento cincuenta días al cabo de los cuales se le administró dieta suficiente en VA por 30 días (R). Cumplidos dichos periodos de tiempo se llevó a cabo la extracción y determinación de los niveles de ácido retinoico (AR) por medio de la aplicación de la técnica de Neeld y Pearson modificado; la extracción de lípidos de tejido hepático seguido de la determinación de lípidos totales, colesterol total (CT), triglicéridos (TG), colesterol HDL (HDLcol) y colesterol LDL (LDLcol) por ensayos enzimáticos, a excepción de los lípidos totales que se determinaron por pesaje del extracto seco obtenido de la extracción. Los ensayos enzimáticos fueron realizados usando un autoanalizador CB350i de (Wiener Lab) siguiendo las instrucciones del fabricante con kits TG Color GPO/PAP AA liquida (Wiener Lab) para determinación de TG y Colestat Enzimático AA liquido para determinación de CT (Wiener Lab). Las determinaciones de HDLcol y LDLCOL se llevaron a cabo con los kits HDL Colesterol monofase AA plus (Wiener Lab) y LDL Colesterol monofase AA (Wiener Lab), respectivamente. Se aplicaron los siguientes análisis estadísticos: Estadístico Anova de una via, post-Test Tukey con Graphpad Prism.

A+ A- R Lípidos Totales 0,1022 ± 0,02129 0,1059 ± 0,01968 0,1206 ± 0,01551

CT 0,4051 ± 0,1153 0,3491 ± 0,08507 0,3751 ± 0,07919 TG 4,538 ± 1,135 4,308 ± 1,093 5,481 ± 0,3261

HDLcol 0,02818 ± 0,006539a 0,01403 ± 0,003491b 0,01485 ± 0,002112b

LDLcol 0,1913 ± 0,09061 0,1327 ± 0,03418 0,2143 ± 0,08261

Perfil lipídico de hígado. Los datos corresponden a la media de 4 determinaciones independientes ± la desviación estándar. Las muestras se analizaron por duplicado y la unidad utilizada para expresar los valores es de mg/dL por mg de tejido, a excepción de lípidos totales que están expresados en mg/mg de tejido y las diferencias significativas (ANOVA + Tukey) para un p < 0.05 se indican con letras diferentes.



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No se observaron diferencias significativas en lípidos totales, CT, TG y LDLcol entre ninguno de los grupos experimentales, pero en lo que respecta a HDLcol se observó una disminución significativa en A- con respecto a A+ (p= 0,0254) y una no recuperación en R (A+ vs R, p=0.0082). De la regresión lineal AR vs HDLcol se pudo determinar que existe una estrecha relación positiva entre ambas variables (R2= 0.7865, p= 0.0033). Con estos resultados podemos concluir que la deficiencia VA no afecta de manera significativa, la cantidad de lípidos hepáticos, a excepción de HDLcol, el cual se correlaciona positivamente con los niveles de AR en hígado, se ve negativamente afectado con la deficiencia de seis meses y cuyos niveles no pueden recuperarse con la realimentación de VA de un mes, ya sea porque este tiempo no sea suficiente para observar una recuperación o porque el efecto de una deficiencia a largo plazo produzca un efecto irreversible sobre el metabolismo de HDLcol, metabolito especialmente importante por su participación en el transporte reverso de colesterol, en la homeostasis de glucosa y en la prevención de la aterosclerosis.

AR vs HDLcol

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.50.00

0.01

0.02

0.03

0.04

R2= 0.7865, p= 0.0033

ARM/mg de tejido

HD

Lcol

mg/

dL/m

g de

tejid

oRelación entre los niveles de AR y HDLcol en modelo de VAD.Regresión lineal de AR vs HDLcol de los grupos A+ y A-. En la gráfica se describe elvalores de “p” obtenido estableciéndose p<0.05 como significativo, también se describe el valor de “R2” como medida de la bondad de ajuste de los datos a la recta y como parámetro para establecer el grado de relación entre las variables.


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P03- ANÁLISIS DE LOS PARÁMETROS MORFOLÓGICOS DE GOTAS LIPÍDICAS DE CÉLULAS HEPG2 TRATADAS CON ACEITE ESENCIAL DE LIPPIA ALBA QUIMIOTIPO TAGETENONA

Montero-Villegas Sandra 1, Polo Mónica 1, Rodenak-Kladniew Boris 1, Castro María Agustina 1, Ves-Losada Ana1,2, Crespo Rosana1, García de Bravo Margarita M.1 1INIBIOLP (UNLP-CONICET CCT La Plata) Fac. Cs. Médicas. La Plata. 2Dep. Cs. Biol., Fac. Cs. Exactas, UNLP Los aceites esenciales de quimiotipos de Lippia alba, un arbusto ampliamente utilizado como medicina tradicional en América Latina, se promueven hoy como un medio eficaz para eliminar los problemas causados por la hiperlipemia. Se planteó la hipótesis de que los aceites esenciales de L.alba (AEL) inhiben la síntesis de colesterol y triacilglicéridos y disminuyen los depósitos intracelulares de los lípidos (gotas lipídicas), mecanismos que implican la inducción de una respuesta hipolipidémica. Previamente demostramos in vitro que distintos AELs tiene efectos hipocolesterogénicos dentro de un rango de concentración de 3,2-32 g/mL, siendo el IC50sc (concentración que inhibe la síntesis de colesterol en 50%) igual a 4 g/mL para el quimiotipo tagetenona. Usando acetato como precursor radiactivo, los lípidos insaponificables de células HepG2 manifestaron una disminución en la incorporación de [14C] en escualeno, lanosterol, latosterol y colesterol, pero no en ubiquinona, lo que sugiere una inhibición de las enzimas de la vía del mevalonato (VM) aguas abajo del farnesilo pirofosfato. El aceite esencial del quimiotipo tagetenona (AELta) fue el más eficaz y disminuyó los niveles de proteína de la enzima reguladora de la VM, la HMG-CoA reductasa. Para determinar si los cambios ocasionados por el AELta en la incorporación de acetato en los distintos lípidos celulares se traducen en cambios en el contenido de los mismos, se extrajeron los lípidos totales de células HepG2 luego del tratamiento con AELta y las distintas fracciones lipídicas fueron separadas y cuantificadas. El tratamiento de células HepG2 con AELta modificó el contenido celular de triacilglicéridos y de ésteres de colesterol. Se estudió entonces el efecto de éste aceite esencial sobre la población de gotas lipídicas citoplasmáticas (GL), principales organoides de almacenamiento de estos lípidos en las células. Para ello, células -sembradas en cubreobjetos- en fase exponencial de crecimiento fueron tratadas con 4 g/mL (1,0x IC50sc) y 16 g/mL (4,0x IC50sc) de AELta durante 48 horas y luego fijadas y teñidas con DAPI y BODIPY 493/503. A partir de las imágenes obtenidas por microscopía de fluorescencia, se evaluaron parámetros morfológicos de la población de GL a partir de medidas del diámetro de cada GL. Para el análisis estadístico se utilizaron pruebas no paramétricas dado que la prueba de Kolmogorov-Smirnov con corrección de Lilliefors demostró que éste parámetro morfológico no presenta una distribución normal. El diámetro de las GL presentes en células tratadas con el aceite resultó menor que el de las células control. Además se encontraron diferencias significativas entre tratamientos, siendo las GL de las células tratadas con 4,0x IC50sc de AELta las de menor tamaño. Se evaluó la distribución de tamaños en la población de GL. Basado en los cuartiles calculados para las GL de las células control, se generaron tres grupos de GL de acuerdo al tamaño: pequeñas (≤0,51 ìm), medianas (entre 0,51 m y 1,02 m), y grandes (>1,02 m). Al analizar las proporciones de estos tres grupos, utilizando la prueba de chi cuadrado y posterior corrección de Bonferroni, se encontraron diferencias significativas entre el control y los tratamientos. Las células tratadas


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con AELta presentaron una mayor proporción de GL pequeñas que el control. Este incremento se da a expensas de una disminución de GL grandes y medianas cuando la concentración ensayada fue de 4,0x IC50sc y sólo de GL grandes cuando se utilizó 1,0x IC50sc de AELta. Se calculó también el número y volumen total de las GL por célula (considerándolas como esferas). No se observaron diferencias significativas en el número de GL por célula con ninguna de las concentraciones de AELta utilizadas. Mientras que en el caso del volumen total, la mediana obtenida para las células tratadas [9,39 m3 (6,42; 10,25) para IC50sc y 4,87 m3 (4,50; 8,75) para 4,0x IC50sc] fue menor que para las células control [28,58 m3 (21,58; 39,24)] siendo la diferencia estadísticamente significativa para la concentración correspondiente a 4,0x IC50sc. Este trabajo demostró que AELta además de disminuir la síntesis de colesterol y triacilglicéridos disminuye la acumulación de lípidos de almacenamiento intracelular, dos eventos celulares frecuentemente asociados con una respuesta hipolipidémica.


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P04- ESTUDIO DE LA REGULACIÓN EPIGENÉTICA ALTERADA DE GENES DE MEMORIA EN EL ENVEJECIMIENTO Harman María Florencia1, Martín Mauricio Gerardo1 1Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra. INIMEC- CONICET- UNC; CORDOBA, ARGENTINA Durante el envejecimiento se produce una pérdida progresiva de las capacidades cognitivas. La alteración de mecanismos de regulación epigenética pueden ser en parte responsables del fenotipo envejecido del cerebro. Varios estudios han demostrado que los cambios que se producen a nivel de la transcripción génica en tejidos de organismos de edad avanzada está asociada a niveles aumentados de modificaciones represoras de la cromatina así como a una disminución de modificaciones activadoras. Ha sido demostrado que el envejecimiento de neuronas hipocampales está asociado al incremento de los niveles de la enzima colesterol-24-hidroxilasa o CYP46 lo que conlleva a una disminución en los niveles de colesterol (Martin et al., Mol Biol Cel, 2008). Estos cambios resultan en una función sináptica reducida medida como la pérdida de LTD (long-term depression), uno de los procesos inducidos durante estímulos de memoria), la cual puede ser recuperada al restablecer los niveles de colesterol (Martín et al., EMBO Mol. Med. 2014). Durante el último período, en el laboratorio nos hemos dedicado al estudio de la regulación epigenética de genes tempranos de memoria, principalmente en la regulación del gen de Bdnf en neuronas hipocampales. En este sentido, se ha demostrado que la transcripción basal de Bdnf a partir de los promotores II y VI así como su inducción luego del estímulo con NMDA se encuentra impedida en hipocampo de ratones viejos. El restablecimiento de los niveles de colesterol en neuronas hipocampales permitió rescatar la inducción de la transcripción de Bdnf a partir de los promotores II y VI dada por LTD e incluso mejorar los defectos cognitivos en ratones envejecidos. Sin embargo, los bajos niveles de colesterol parecen no ser la única causa del estado epigenético represor basal de los promotores de Bdnf en neuronas de estos animales, ya que al restablecer sus niveles si bien se rescatan defectos en la señalización y de marcas asociadas a la activación de la transcripción, no es suficiente para aumentar los niveles basales de los transcriptos de Bdnf (Palomer et al., Cell Reports, 2016). A fin de evaluar los mecanismos epigenéticos que pueden estar involucrados en el estado represor basal que restringe la transcripción del gen de Bdnf en animales envejecidos nos propusimos analizar la participación de dos posibles vías que podrían coexistir y actuar conjuntamente. Por un lado, esfingosina 1-fosfato (S1P) es un mediador lipídico que se une a enzimas llamadas histonas desacetilasas (HDACs) e inhibe su actividad previniendo la remoción de grupos acetilos de los residuos de lisina en las histonas, regulando de esta forma la expresión de genes (Spiegel and Milstien, 2003; Hait et al. Science, 2009). Teniendo en cuenta que los niveles de S1P están principalmente regulados por su síntesis, la cual es catalizada por dos enzimas: Sphk1 y Sphk2, decidimos evaluar en primer lugar la participación de esta víaen la inducción de la transcripción de Bdnf. Para esto analizamos por qRT- PCR los niveles de transcriptos de Bdnf en neuronas hipocampales tratadas con el inhibidor de Sphk2 (ABC2946640). Observamos que al inhibir Sphk2 se reduce la transcripción basal de Bdnf a


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partir del promotor II (**p<0,01) demostrando que la actividad de esta enzima se encuentra involucrada en la transcripción de este gen. A continuación nos propusimos evaluar los niveles de expresión de Sphk1 y Sphk2 en rodajas de hipocampo de ratones jóvenes (5 meses) y viejos (>20 meses) por qRT-PCR y observamos que los niveles de ARNm de ambas enzimas se encuentran disminuidas en los animales viejos (*p<0,05). Estos resultados fueron corroborados mediante el análisis de los niveles proteicos de ambas enzimas mediante la técnica de western blot, el que reveló que en hipocampo de ratones viejos hay menor expresión de Sphk1(**p<0,01) y Sphk2 (*p<0,05) con respecto a sus contrapartes jóvenes. Otro mecanismo que podría estar involucrado en la reducida transcripción de Bdnf en hipocampo de animales envejecidos implica a la proteína represora CDYL. Esta proteína está involucrada en la regulación de importantes procesos como transmisión sináptica e interacciona con enzimas modificadoras de histonas como HDACs. En hipocampo de ratones jóvenes CDYL se encuentra presente en el promotor II de Bdnf pero luego de la estimulación con NMDA se induce su degradación permitiendo de esta manera la transcripción. A fin de evaluar los niveles basales de CDYL en neuronas de ratones viejos realizamos ensayos de western blot y observamos que esta proteína se encuentra aumentada en hipocampo de ratones viejos con respecto al de jóvenes (*p<0,05). A continuación, para determinar si el aumento de CDYL estaba relacionado con la disminución de los niveles de colesterol que se produce en el hipocampo de ratones viejos se trataron neuronas hipocampales en cultivo con Metil--ciclodextrina (MCD) para extraerles el colesterol y mediante western blot se observó que las que habían sido tratadas con MCD efectivamente presentan mayores niveles proteicos de CDYL (*p<0,05). En base a los datos aquí presentados donde observamos una reducción de la expresión de las enzimas Sphk1 y Sphk2, las cuales son responsables de catalizar la formación del regulador de HDACs, S1P; y por otro lado el aumento de la proteína represora CDYL hallado en neuronas hipocampales de animales envejecidos, podemos concluir que efectivamente podrían existir mecanismos independientes involucrados en la restricción de la transcripción basal de Bdnf. Nuestros próximos objetivos están enfocados en evaluar el rol de estos mecanismos en la formación de complejos represores transcripcionales en los promotores de Bdnf en hipocampo de animales viejos. De esta forma podríamos aportar más datos que ayuden a comprender las causas de déficits cognitivos asociados a la alterada inducción de genes de memoria durante el envejecimiento.


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P05- EFECTOS DE LA PÉRDIDA DE COLESTEROL DURANTE EL ENVEJECIMIENTO NEURONAL Elorza Setiembre Delfina 1, Gómez Casati María Eugenia 2, Martín Mauricio Gerardo1 1Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra, INIMEC- CONICET; CORDOBA 2 Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular INGEBI-CONICET Durante el envejecimiento se producen cambios en la composición lipídica de membranas neuronales que en la mayoría de los casos han sido relacionadas a la aparición de problemas cognitivos. Uno de los cambios lipídicos que tiene mayor efecto en la estructura de las membranas celulares es el cambio en el contenido de colesterol. Debido a la presencia de una eficiente barrera hematoencefálica, el cerebro no puede incorporar colesterol del sistema circulatorio, por lo que depende de la síntesis de novo para mantener los niveles requeridos de este lípido. Además, para mantener la homeostasis, los procesos de síntesis y eliminación de colesterol del cerebro se encuentran estrictamente regulados. El principal mecanismo de eliminación de colesterol consiste en su conversión en 24-hidroxicolesterol, paso es catalizado por la enzima colesterol-24-hidroxilasa o CYP46. Nuestro grupo ha descripto la reducción de un 25% en los niveles de colesterol durante el envejecimiento en neuronas hipocampales de ratón debido a la inducción transcripcional del gen cyp46A1. Este incremento en los niveles de CYP46 produce una disminución del colesterol en neuronas viejas, lo que resulta en una reducida función sináptica y pérdida de memoria. Mecanísticamente, esto se debe a una reducida difusión lateral de receptores de membrana neuronales y alteraciones en la endocitosis de los mismos. Estos defectos pueden rescatarse por agregado de colesterol a neuronas viejas. Mediante inmunohistoquímica realizada en rodajas de ratones jóvenes y viejos se observó marca específica de CYP46 en distintas regiones del hipocampo (CA1, CA2, CA3 y DG) y en células de Purkinje en cerebelo. Mientras que en animales jóvenes se observó una marca clara tanto en cuerpos celulares como en procesos, el patrón observado en animales viejos fue irregular, con tinción principalmente en cuerpos celulares. En animales viejos se distingue además un claro aumento de expresión de CYP46 en el subículo dorsal, región de gran importancia para la consolidación de memoria y agregados de células positivas para CYP46 en hipocampo y cerebelo. Además hemos identificado la presencia de colesterol hidroxilasa en células ciliadas del órgano de corti. Considerando que estas células son muy sensibles a los niveles de colesterol, la presencia de esta enzima tendría importantes implicancias para el desarrollo de alteraciones auditivas en individuos viejos.


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P06- ALTERACIONES MOLECULARES, BIOQUÍMICAS Y CELULARES EN GLÁNDULA MAMARIA POR CONTAMINACIÓN AMBIENTAL CON CADMIO. EFECTOS DEPENDIENTES DE LA NUTRICIÓN Sánchez Emilse Silvina¹, Vásquez Elena¹, Michel María Cecilia¹, Alza Natalia², Boldrini Gabriel G¹, Ferrari Carolina¹, Pérez Chaca María Verónica¹, Biaggio Verónica Silvina¹, Gómez Nidia Noemí¹, Alvarez Silvina Mónica¹, Giménez María Sofía¹ ¹Universidad Nacional de San Luis-IMIBIO-SL. ² INIBIBB Inst. de Investig. Bioqas de Bahía Blanca La contaminación química de nuestro planeta, fruto de la actividad del hombre, es un problema actual que afecta a todos los componentes de la biosfera, en perjuicio de la calidad de vida. Entre las sustancias contaminantes se encuentra el Cadmio (Cd) cuyas fuentes de exposición para el ser humano y animales son la ingesta de alimentos o agua contaminados, exposición ocupacional o por inhalación de humo de cigarrillo. En glándula mamaria (GM), Cd actúa como interruptor endócrino, uniéndose a los receptores de estrógenos y activando cascadas de señalización intracelular. Soja también posee efectos a nivel de los receptores de estradiol, pero a diferencia de Cd ha sido asociada con procesos beneficiosos para la salud como disminución del colesterol, prevención de enfermedades coronarias, disminución de peso en casos de obesidad, protección contra el cáncer de mamas y cáncer prostático. Si bien Cd comparte con soja la capacidad de simular la acción estrogénica, sus consecuencias no han sido analizadas en GM. Las GMs están constituidas hasta en un 90% por tejido adiposo que les da forma abultada y provee de células madres, capaces de originar los distintos tipos celulares que la componen, y conjuntamente con las demás estructuras galactóforas son responsables de la producción y secreción de la leche materna. Estos tejidos sufren una remodelación activa a lo largo de la vida reproductiva de las hembras y constituyen un excelente modelo biológico para el estudio de aquellos mecanismos moleculares y adaptaciones metabólicas que regulan procesos cruciales para la funcionalidad del órgano como son: la proliferación, invasión, diferenciación y apoptosis. El objetivo de este trabajo consiste en analizar las consecuencias fisiológicas del metaloestrógeno Cd en el tejido mamario y los posibles efectos secundarios que provoca a partir de las modificaciones del perfil lipídico, en las distintas rutas de señalización. Además, se ha evaluado si la ingesta de soja atenúa o modifica los efectos tóxicos del metal en las GMs y el destino celular del tejido. Para ello, se trabajó con ratas Wistar hembras de 200 gr de peso corporal. Se dividieron en cuatro grupos: dos grupos recibieron caseína (CAS) y otros dos grupos soja (SOY) como fuente de proteína. Dentro de cada grupo dietario, un lote recibió agua potable, como agua de bebida y otro grupo cadmio (15 ppm), bajo la forma de CdCl2.5H20 durante dos meses. Las glándulas mamarias fueron extraídas y congeladas. Luego se realizó un análisis detallado de los parámetros concernientes al metabolismo lipídico, como son: lípidos totales por método gravimétrico, colesterol total por método colorimétrico, fosfolípidos por TLC, la expresión proteica de la enzima HMGCoA reductasa (HMGCoA R) por Western Blot (WB) y la expresión génica del factor SREBP-2 por RT-PCR. Se analizaron los niveles de ARNm de COX-2 y TNFα, marcadores de apoptosis Bax y Bcl-2 y capturadores de metales MT I y II, todos por RT-PCR. Se determinó la activación del factor NFκB, regulador pleiotrópico de respuestas celulares, determinando la expresión de IκBα por WB. Por último, se evaluaron histológicamente las GMs donde se tuvieron en cuenta el número de lobulillos, adenómeros y TEBs mamarios.


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Cd altera el perfil lipídico en la GM y este efecto parece ser modulado por la acción de soja. Además, afecta la expresión de HMGCoA R, efecto potenciado bajo doble tratamiento. La leguminosa regula negativamente la expresión génica del factor SREBP-2, pero cadmio revierte esta acción. Por otro lado, el doble tratamiento de soja y Cd lleva a la activación de NFκB y esto se acompaña de un ligero aumento en la expresión de COX-2. Cd por su parte incrementa la tendencia a la apoptosis y ésta es aún mayor en presencia de soja, según la expresión relativa de Bax/Bcl2. Como estrategia del tejido para resistir la exposición crónica al metal pesado se reduce la expresión de MTI y ésta es más pronunciada bajo la ingesta de soja. MTII presenta valores superiores ante cadmio, soja y ambos. A nivel tisular, Cd provoca un desarrollo glandular exagerado mientras que la soja disminuye el estroma graso y promueve la maduración de los TEBs a estructuras superiores. El tratamiento combinado provoca un avance exagerado del tejido conectivo conduciendo a una fibrosis excesiva y posible pérdida de funcionalidad. Nuestros resultados indican que Cd afecta la fisiología y desarrollo de las GMs, provocando cambios en su histoarquitectura que suponen la pérdida de funcionalidad glandular, poniendo en riesgo la descendencia animal y pérdidas en la industria. Soja es capaz de frenar los efectos proliferativos del metaloestrógeno proyectando la importancia en la posibilidad de extrapolar estos resultados a la salud humana, poniendo de manifiesto las ventajas de consumir una dieta rica en soja para disminuir la incidencia tumoral mamaria.


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P07- METABOLISMO LIPÍDICO EN CÉLULAS TUMORALES: ROL DE FABP5 Garcia Karina A, Córsico Betina, Scaglia Natalia. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP). Facultad de Ciencias Médicas. UNLP En las células tumorales se observa una reprogramación de su metabolismo hacia la síntesis de macromoléculas, necesarias para la duplicación celular. De hecho, la modulación de ciertas vías metabólicas parece ser una característica prácticamente universal del cáncer. Más aún, el metabolismo intermediario modula, a su vez, proteínas clave para la proliferación/ supervivencia celular y la expresión génica. Estos hallazgos han reavivado el interés en el metabolismo celular como partícipe necesario para la transformación celular y blanco terapéutico para el cáncer. Las proteínas que unen ácidos grasos (FABPs) son proteínas de bajo peso molecular 14-15kDa, citosólicas que unen ácidos grasos (FA) de cadena larga con alta afinidad. Se ha estudiado su estructura, distribución tisular y su mecanismo de transferencia de ácidos grasos, sin embargo, su función aún está en discusión. La existencia de nueve FABPs y la presencia simultánea de más de una isoforma en un tejido sugiere que las mismas difieren en su función. Se propone que podrían transportar FA a diferentes compartimentos celulares dirigiéndolos así hacia su oxidación, utilización en síntesis de lípidos complejos y regulación de factores transcripcionales. FABP5, epidermal o de queratinocito, presenta una expresión ubicua. A diferencia de otras isoformas FABP5 ha sido asociada positivamente con la progresión y el desarrollo de ciertos cánceres, en especial próstata y mama. Aunque su función en el metabolismo de los mismos es desconocida. El objetivo final de este trabajo es contribuir al conocimiento e importancia del metabolismo lipídico en el cáncer así como aportar a la elucidación las funciones de las FABPs. Estos estudios podrían tener profundas implicancias para el tratamiento y/o diagnóstico de enfermedades hiperproliferativas, como el cáncer. Las células A549 (provenientes de cáncer de pulmón) se cultivaron en medio DMEM bajo en glucosa (5.5mM glucosa, concentración fisiológica de glucosa sanguínea) suplementado con 10% suero fetal bovino, penicilina/ estreptomicina a 37°C, 5% CO2 y 100% humedad. El recuento y la viabilidad celular se evaluaron rutinariamente en hemocitómetro con azul de tripán. Los niveles de expresión de las FABPs fueron determinados mediante Western Blot. Células A549 fueron transfectadas con siRNAs contra FABP5 o un pool de siRNAs control por 48h, para el modelo knockdown, o incubadas por 24h con 100uM del inhibidor de FABPs pan-específico HTS01037. En los ensayos de incorporación, las células se incubaron con [1-14C] 16:0 en medio suplementado con 0.5% BSA libre de FA o con [1-14C] acetato por 4 hs. La incorporación se estimó por conteo de centelleo líquido en lípidos totales extraídos por el método de Bligh & Dyer y normalizados al contenido proteico. Los ensayos de migración celular se realizaron por 12 hs por el método de herida y los de adhesión celular mediante tinción con violeta cristal luego de 2 hs de sembrado. Evaluamos los niveles de FABP5 en distintas líneas celulares y seleccionamos las células A549 como modelo de estudio. En esta línea celular sólo se observó la presencia de la isoforma 5 por Western Blot, consistentemente con la expresión a nivel de RNA (The Human Protein Database). Debido a la expresión considerable de FABP5 en estas células y a su dependencia de


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la síntesis endógena de FA para la proliferación fueron utilizadas para generar modelos celulares con niveles alterados de FABP5. La disminución de FABP5 por siRNAs o la inhibición de FABPs con HTS01037 redujeron la proliferación y la capacidad migratoria de las células A549; no se vio afectada, sin embargo, la adhesión celular. Estas alteraciones podrían estar relacionadas con la función de FABP5 como trasportadora de ácidos grasos hacia la síntesis de membranas. De hecho, la disminución o inhibición de FABP5 redujo la incorporación de [C14] ácidos grasos exógenos. Sin embargo, no se alteró la distribución porcentual del FA marcado en las distintas clases de lípidos lo cual sugiere que FABP5 no direcciona diferencialmente FA hacia alguna vía lipogénica particular. Asimismo, observamos una disminución de la síntesis endógena de FA al inhibir las FABP5 utilizando HTS01037. Más aún, la inhibición de la síntesis de novo de ácidos grasos con C75 (inhibidor de la enzima ácido graso sintasa) produjo una disminución de los niveles de FABP5 lo cual refuerza la conexión entre FABP5 y la síntesis de novo de ácidos grasos. En conjunto, nuestros resultados sugieren que FABP5 es importante en el metabolismo lipídico estando involucrada en la incorporación de los FA exógenos como así también en la síntesis endógena de los mismos. Más aún, FABP5 es necesaria para mantener el fenotipo transformado en células tumorales.


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P08- PARTICIPACIÓN DE ESFINGOSINA-1-FOSFATO Y VEMURAFENIB EN LA PROGRESIÓN DEL MELANOMA EN HIPOXIA. Perez Celia N1,2, Castro Melina G1,2, Campos Ludmila E1,2, Rodriguez Yamila I1,2, Ramirez Darío C1,2, Alvarez Sergio E1,2. 1IMIBIO-SL CONICET. 2Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. Argentina En los últimos años, la incidencia del melanoma ha aumentado rápidamente. Aproximadamente la mitad de los pacientes con melanoma presentan la mutación V600E en la quinasa BRAF (BRAFV600E), la cual incrementa su actividad y promueve la progresión del tumor a través de la estimulación de proteínas quinasas reguladas extracelularmente (ERK). La Administración de Drogas y Alimentos de Estados Unidos (FDA) ha aprobado el uso de 4 nuevos agentes terapéuticos para el tratamiento de melanoma avanzado que modulan la vía de señalización de ERK por medio de dos mecanismos diferentes: i) inhibidores de BRAF (Vemurafenib 2011 y Dabrafenib 2013) y ii) inhibidores de MEK (Trametinib 2013 y Cobimetinib 2015). En Argentina, la droga vemurafenib está aprobada por la Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica (ANMAT). Desafortunadamente, la durabilidad de la respuesta es limitada y los tumores se vuelven rápidamente resistentes, adoptando un fenotipo agresivo que conduce a la metástasis. Numerosos mecanismos de resistencia se han reportado, incluyendo entre otros la activación paradójica de MAPK por la quinasa CRAF, inducción de STAT3 y activación de Akt. Recientemente, también se ha demostrado que la hipoxia intratumoral (Hx), una característica distintiva del microambiente tumoral (MT) del melanoma, también participa en los mecanismos de resistencia. Esfingosina-1-fosfato (S1P) es un lípido producido intracelularmente por la acción de dos esfingosina quinasas (SphK1 y SphK2) que está presente en el MT y cumple importantes funciones en procesos inflamatorios y tumorales. Precisamente, numerosos estudios demuestran una regulación bidireccional entre Hx y SphK1. Considerando estas evidencias, el objetivo de este trabajo fue evaluar el rol de vemurafenib en la viabilidad y migración de células de melanoma en Normoxia (Nx) e Hx y su relación con S1P. Utilizamos como modelo experimental células de melanoma humano Lu1205 que presentan la mutación BRAFV600E. Las células se cultivaron en Nx o en una cámara especial con una mezcla de Hx (1 % O2, 5 % CO2) a 37 °C. La viabilidad celular se analizó mediante el método de MTT, mientras que la migración celular por Wound Healing Assay (WHA). Los resultados demuestran que S1P no afecta la viabilidad de células Lu1205 en ambas condiciones. No obstante, solo en Hx, S1P induce un incremento significativo de la migración, sugiriendo que es importante para que las células adopten un fenotipo migratorio en el ambiente de escasez de oxígeno propio del MT del melanoma. Por otro lado, el tratamiento con Vemurafenib (10 µM) inhibe la viabilidad y la migración celular en Nx, pero no en Hx. Destacablemente, vemurafenib también reduce la migración inducida por S1P en Hx. Mediante ensayos de western blot observamos que el tratamiento con vemurafenib durante 48 horas inhibe la fosforilación de ERK en Nx pero no en Hx. Es importante resaltar que luego de 72 horas de tratamiento con vemurafenib los niveles de pERK se restablecen a sus valores basales.


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En su conjunto, estos resultados demuestran que el efecto inhibitorio de Vemurafenib sobre la viabilidad y migración de células de melanoma está ampliamente reducido en las zonas del tumor deprivadas de oxígeno. Vemurafenib favorecería la progresión tumoral por un mecanismo independiente de S1P y dependiente de la reactivación de la vía MAPK. En conclusión, nuestros resultados sugieren que la Hx intratumoral favorece la resistencia a vemurafenib y por lo tanto actúa como una característica permisiva para el crecimiento y potencial metástasis del melanoma


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P09- EFECTO DE LA INTOXICACION CRONICA CON CADMIO EN EL METABOLISMO LIPIDICO DE PROSTATA, PULMON Y CEREBELO Alvarez Silvina M, Boldrini Gabriel G, Martin Molinero Glenda D, Gómez Nidia N, Giménez María Sofía. Laboratorio de Nutrición y Medio Ambiente – FQByF – Universidad Nacional de San Luis. IMIBIO-SL, CONICET. San Luis. [email protected] El cadmio es un metal pesado ampliamente distribuido en el medio ambiente. El principal mercado para el cadmio hasta 1989 lo constituyó la industria de las baterías recargables de níquel-cadmio, seguido por la de recubrimientos y el electroplateo, la fabricación de pigmentos, de productos sintéticos y plásticos y las aleaciones entre otros usos. El cloruro de cadmio es usado en fotocopias, tinta para impresoras, colorantes, y en la elaboración de pigmentos para plásticos, telas y vidrios. Otros compuestos de cadmio son usados como estabilizadores térmicos del cloruro de polivinilo y el teflón, en galvanoplastia, como semiconductores, en la fabricación de celdas fotovoltaicas y en emulsiones fotográficas. Además, es importante destacar que Cadmio se encuentra como contaminante en los cigarrillos. Durante varios años en nuestro laboratorio se estudió la intoxicación crónica con cadmio en diversos órganos, con el objeto de dilucidar los potenciales efectos adversos del mismo en personas expuestas al metal pesado debido a la ingesta del mismo en aguas contaminadas. Este trabajo resume las investigaciones realizadas en próstata, pulmón y cerebelo de animales que fueron expuestos a 15 ppm de Cd en agua. Esto simula la contaminación del agua de las zonas aledañas a los parques industriales en varias ciudades de nuestro país. A su vez, el uso de esta dosis deja en suero una concentración de Cadmio similar a la observada en obreros que trabajan en la fabricación de pilas. Para llevarlo a cabo se utilizaron ratas macho de la cepa Wistar, las cuales fueron separadas en dos grupos: Control (Co) y Cadmio (Cd). El grupo Cd recibió 15 ppm de Cadmio en el agua de bebida mientras que las Co recibieron agua potable durante dos meses. Los animales se sacrificaron por decapitación y las muestras se almacenaron a -80 C, hasta su posterior uso. Se realizó una extracción de lípidos con isopropano: hexano (3:2). Los lípidos se separaron por cromatografía en capa fina (TLC). Se determinó el contenido de fosfolípidos (FL), colesterol total (CT) y triglicéridos (TG). Las proteínas se midieron con el método de Lowry. Se extrajo ARN por el método de Trizol. Un microgramo de ARN se transcribió a ADNc y se amplificaron por PCR los siguientes genes: Acido Grasa Sintetasa (AGS), Diacilglicerol acil transferasa 2 (DGAT2), Acetil coA carboxilasa (ACC), Hidroximetilglutaril coA reductasa (HMGCoAR), fosfolina-citidilil transferasa, glicerol 3 fosfatoacilransferasa (GPAT), SREBP2 y lipoprotein lipasa (LPL). En próstata, se observó una disminución en el contenido de TG (Co: 148 + 13,62; Cd: 53,57 + 1,89 mg/mg proteína), pero el resto de las fracciones no mostraron diferencias significativas. La expresión de AGS y LPL no mostraron diferencias significativas, mientras que DGAT disminuyó. Los resultados obtenidos permitieron concluir que en próstata Cd altera el metabolismo lipídico a nivel de la síntesis de TG.



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En cerebelo se encontró que CT, TG y FL aumentaron en el grupo Cd (p<0.05). La expresión de HMGCoAR aumentó en Cd, justificando el incremento de CT. ACC no mostró diferencias significativas, mientras que GPAT y DGAT2 aumentaron en Cd y AGS disminuyó. Hubo un incremento significativo de fosfocolina-citidilil transferasa, que podría explicar en parte el incremento en los fosfolípidos totales. En pulmón se observa un incremento significativo de los FL en el grupo Cd, sin cambios en TC y TG. Las enzimas y factores reguladoras ACC, AGS y SREBP2 no variaron. DGAT2 muestra un incremento significativo en Cd (p<0.05), mientras que HMGCoAR y fosfolina-citidilil transferasa muestran una tendencia al incremento en los grupos Cd. Estos resultados permiten demostrar que si bien el Cadmio afecta el metabolismo lipídico en diversos órganos, el cambio no siempre se lleva a cabo en la misma vía. En el caso de próstata, se ve afectada la vía de síntesis de triglicéridos, mientras que en cerebelo se ven alterados todos los grupos lipídicos, tal vez debido a la naturaleza altamente lipídica del órgano. Sumado a ello, en pulmón se ve afectada la síntesis de FL, posiblemente debido al alto contenido de fosfolípidos en el surfactante pulmonar.


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P10- INFLUENCIA DE UNA DIETA RICA EN SOJA SOBRE EL METABOLISMO LIPIDICO EN CEREBRO E HIGADO DE FETOS, A LOS 20 DÍAS DE GESTACIÓN Biaggio Verónica S, Altamirano Karina N, Giménez MS Laboratorio de Nutrición y medioambiente – IMIBIO – CONICET-SL. [email protected] Durante las primeras etapas de la gestación, los lípidos embrionarios y fetales derivan de los ácidos grasos libres (FFA) maternos que cruzan la placenta; mientras que en la gestación tardía hay un cambio gradual a la síntesis de novo en el tejido fetal. En respuesta a las variaciones plasmáticas del colesterol, el metabolismo del colesterol y la síntesis de lípidos están bajo el control de una familia de factores de transcripción denominados proteínas reguladoras de los elementos reguladores de los esteroles (SREBPs). Numerosos estudios han demostrado que los factores de transcripción de SREBP pueden desempeñar un papel en la patogénesis de la hipercolesterolemia y la hiperlipidemia. Sin embargo, la implicación de estos factores de transcripción en el metabolismo de colesterol y lípidos durante el embarazo y sus modificaciones nunca se han establecido claramente. El factor SREBP-2 regula genes implicados en la síntesis de colesterol, incluyendo la enzima HMGCoAR. Mientras que el factor SREBP-1c es específico de la vía sintética de los ácidos grasos y desempeña un papel clave en la regulación de la enzima ácido graso sintasa (FAS) y el factor SREBP-1a es un activador tanto del colesterol como de las rutas biosintéticas de los ácidos grasos (FA). Por otro lado, el cadmio (Cd) es un metal pesado que representa un peligro para la salud humana debido a su toxicidad. La exposición ocupacional al metal pesado y sus compuestos se produce principalmente en la minería, la fundición, el procesamiento y la fabricación de baterías. Las exposiciones ambientales y no profesionales provienen de diversos alimentos, agua contaminada, polvo contaminado y humo de tabaco, entre otros. Los niveles de Cd en el ambiente varían ampliamente debido a su capacidad para ser transportados a través del aire, el agua y el suelo. Además, la exposición a metales pesados durante la preñez, puede desencadenar un cuadro de inflamación y estrés oxidativo. Por lo tanto, la síntesis endógena de ácidos grasos cumple un rol importante en tejidos en proliferación. Debido a estos antecedentes el metabolismo lipídico podría ser afectado por la presencia de metales pesados durante el período gestacional. Es importante destacar que varios estudios en seres humanos y en animales han demostrado que la ingesta de una dieta proteica de soja reduce el colesterol sérico y los triglicéridos, particularmente en sujetos hipercolesterolémicos, aunque actualmente existe controversia en cuanto a su eficacia. El mecanismo molecular por el cual la proteína de soja disminuye los lípidos séricos no se ha establecido completamente. Se han propuesto varios mecanismos posibles, incluyendo la mejora de la excreción de ácido biliar, cambios en la relación insulina: glucagón, concentraciones de hormona tiroidea y una composición de aminoácidos que causa cambios en el metabolismo del colesterol. El objetivo del presente trabajo es evaluar el posible rol protector del consumo de proteína de soja frente a los mecanismos mediante los cuales Cd ejerce su toxicidad, durante el período de gestación en cerebro e hígado de fetos.



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Se trabajó con 4 lotes de ratas Wistar hembras; 2 lotes recibieron caseína y los otros dos lotes usaron soja como fuente proteica. En cada grupo 1 lote recibió agua corriente y el otro 15ppm de Cd en agua de bebida durante el período de preñez (20 días de gestación). Se extrajo cerebro e hígado de fetos, en los cuales se determinó: TBARS, actividad de catalasa, glutatión peroxidasa y concentración de nitritos. Se extrajo ARN total del tejido fetal y se realizó la RT-PCR usando los siguientes primers: MT I; MT II; Nrf-2; NOX-2; SOD; SREBP-1c y SREBP-2. La concentración de Cd incrementó en ambos grupos intoxicados (p<0.001). En el grupo Soja-Cd la actividad de GPx-1, los niveles de MDA, nitritos y la expresión de Nrf-2; SOD y MT I aumentaron (p<0.05; p<0.001; p<0.05, p<0.05; p<0.01 y p<0.001). Mientras que la actividad de CAT y la expresión de NOX-2 y MT II disminuyeron (p<0.01; p<0.01 y p<0.001). La expresión de SREBP-1c, aumentó en el grupo Cas-Cd (p<0.001), mientras que SREBP-2 disminuyó en ambos grupos intoxicados (p<0.001). Los parámetros analizados nos indicarían que estamos en presencia de un cuadro de estrés oxidativo. Este microambiente se ve favorecido por el incremento en la expresión de enzimas del sistema antioxidante y probablemente esté afectando la expresión de factores reguladores de la síntesis de lípidos.


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P11- ESTUDIO DEL METABOLISMO LIPÍDICO EN EL CARACOL POMACEA CANALICULATA BAJO CONDICIONES DE ESTRÉS POR AYUNO Y EXPOSICIÓN A UN TÓXICO. Lavarías Sabrina ML1,2, Peterson Graciela B2,3,5, Lagrutta Lucía C3, Rodrigues Capítulo Alberto1,

Ves-Losada Ana3,4. 1ILPLA, 2Fac.Cs.Médicas, UNLP, 3INIBIOLP, 3Dpto. de Ciencias Biológicas, 4Fac.Cs.Exactas, UNLP ,5CIC [email protected] Los lípidos tienen una función preponderante en el metabolismo energético de los organismos y pueden resultar afectados bajo condiciones de estrés por ayuno / alimentación, como así también por exposición a tóxicos. En este sentido las actividades de origen antrópico, como por ejemplo la utilización de agroquímicos para controlar plagas, pueden afectar la homeostasis lipídica en los organismos acuáticos. En nuestro país, la cipermetrina (CYP) es un plaguicida ampliamente utilizado que produce efectos adversos sobre la fauna no-objetivo alterando diversas rutas metabólicas. El objetivo de este estudio fue determinar si la exposición a CYP y el ayuno alteran la homeostasis lipídica. Para ello, se escogió el caracol de agua dulce Pomacea canaliculata como modelo de bioensayo. Esta especie se caracteriza por ser nativa de la cuenca del Plata, cosmopolita y capaz de tolerar diversas condiciones ambientales, por lo tanto se propone a este organismo como bioindicador para estudios de monitoreo de aquellos ambientes sometidos a diversos factores de estrés. Se expusieron caracoles adultos machos durante 4 y 10 días a concentraciones subletales de CYP (12, 30, 75 y 100 µg/l) bajo condiciones controladas de laboratorio y sin alimentación. Se preparó una solución de CYP (Glextrin 25, GLEBA S.A. La Plata, Argentina) disuelta en etanol de manera tal de mantener una concentración del solvente menor a 0,001 % en el medio de exposición y en los controles respectivos. Al ensayo se agregaron otros caracoles que no fueron expuestos ni al tóxico ni al etanol para evaluar el efecto del ayuno. Estos tratamientos fueron considerados como control del solvente de la exposición con el pesticida. Luego de la exposición, los caracoles se anestesiaron en hielo y se disecaron las glándulas digestivas (GD). Una pequeña muestra de la GD fue procesada para analizar la topología y distribución celular de los lípidos neutros (LN) por microscopía de fluorescencia. Para ello se marcaron los LN con BODIPY493/503 y los núcleos con DAPI. El resto de las GD se homogenizaron en buffer sacarosa 0,25 M. Se extrajeron los lípidos de los homogenatos con la mezcla cloroformo/metanol 2:1, luego se cuantificaron por gravimetría. Se realizó el análisis de los lípidos por cromatografía en capa fina. El estudio histológico reveló la presencia de gotas de lípidos (LD) localizadas principalmente en el citosol. Así mismo los núcleos presentaron una pequeña cantidad de LD. Los lípidos totales resultaron significativamente aumentados (p< 0,05) en los caracoles expuestos con CYP en relación a los controles. El ayuno provocó el descenso del contenido lipídico en la GD respecto de los animales que recibieron alimento. La concentración de etanol utilizada como vehículo de la CYP no resultó un agente estresante adicional respecto del ayuno. Así mismo se observó que los TAG, COL y EC aumentaron en los tratamientos con CYP, lo que podría estar confirmando los cambios observados en las poblaciones de LD citosólicas.



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Los resultados de este estudio indicarían que metabolismo lipídico en la GD de P. canaliculata fue alterado por el CYP a nivel molecular y celular. Por lo tanto sería interesante realizar bioensayos con otros tóxicos y estudiar organismos invertebrados para estudiar la relación entre la situación de estrés con la alteración del metabolismo lipídico. Cabe destacar que se describe por primera vez la presencia de LD nucleares en moluscos y quedaría por determinar su función específica.


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P12- EL METABOLISMO INTRACELULAR DEL COLESTEROL TESTICULAR ES SENSIBLE A LOS LÍPIDOS DE LA DIETA EN CONEJOS Funes Abi, Simón Layla, Saez Lancellotti Estefanía, Fornés Miguel W. Laboratorio de investigaciones andrológicas de Mendoza (LIAM) del Área e Instituto de Histología y Embriología de Mendoza (IHEM), Facultad de Ciencias Médicas- UNCuyo, CCT CONICET Mendoza y FCM, Universidad del Aconcagua. [email protected] La hipercolesterolemia interfiere con el normal funcionamiento de la gameta masculina y podría ser una de las causas de infertilidad. La regulación general de colesterol está enlazada con la intracelular. Esta última depende de un balance entre su producción de novo e incorporación (a partir del circulante originario de la dieta) mediante receptores específicos. Este equilibrio se logra a través de la activación o inhibición de una vía regulada por proteínas, entre ellas SREBP-2 (Sterol Regulatory Element Binding Proteins tipo 2), que regula la expresión de moléculas involucradas en la síntesis / captación de colesterol, como HMG CoA reductasa (HMGCoAR), receptor de LDL (R-LDL) y al transportador ABCA-1. Nuestro objetivo es investigar esta vía, a nivel testicular (usando hígado como órgano control), en diferentes tipos de dieta, y relacionar los resultados con las alteraciones de los parámetros espermáticos observados previamente (Saez Lancellotti et al., PLoS One, 2010. 5(10): p. e13457; Saez Lancellotti et al., PLoS One, 2013. 8(1): p. e52386; Simón et al., PLoS One, 2017. 12(2):e0172994) Se utilizaron conejos machos adultos raza neozelandés (ICIVET, CCT Santa Fe – CONICET) incorporados al Bioterio con edades entre 3-4 meses. Durante la adaptación, los conejos se alimentaron con alimento balanceado para conejos (Terminación Gepsa) hasta alcanzar los 5 meses de edad (adultez). Luego, los animales se separaron en distintos grupos:

NCR: conejos normocolesterolémicos, grupo control, que consumieron alimento balanceado (AB) para conejos,

HCR: conejos hipercolesterolémicos, obtenido mediante dieta enriquecida con grasa animal, que consumieron AB suplementado con 14% p/p, grasa vacuna/AB,

½ HCR + ½ AOV: conejos protegidos, que consumieron AB suplementado con 7% p/p de grasa vacuna y 7% p/p aceite de oliva, suplemento / AB.

Se determinó la expresión de las proteínas SREBPs, 1c y 2, y algunas de sus moléculas blanco, R-LDL y HMG CoAR, en hígado y testículo por Western Blot mediante anticuerpos específicos. Como control de carga se utilizó un anticuerpo anti-tubulina. Se midieron los niveles de expresión de los ARNm, de testículo e hígado, para las moléculas SREBP-1c, SREBP-2, R-LDL, HMG CoAR y ABCA-1 y se cuantificaron por PCR relativa-cuantitativa. Como control interno se amplificó una región de β-actina de conejo. Los animales bajo dieta enriquecida en grasas saturadas presentaron hipercolesterolemia (81,3 ± 1,765 vs 57,8 ± 0,6 mg/dl; p< 0,05), no presentaron obesidad (3,52 ± 0,052 vs 3,21 ± 0,06 kg; p> 0,05), y se observó una disminución de la calidad seminal, principalmente un descenso en el número de espermatozoides y su motilidad, acompañada de una disminución del volumen seminal y aumento de anormalidades en dichas células.



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Se analizó la vía del colesterol (3 meses de dieta) en testículo y se observó una disminución en la expresión de SREBP-2 testicular y de todas sus moléculas blanco, tanto a nivel proteico como de RNAm, en animales hipercolesterolémicos. Estudios preliminares indican que el aceite de oliva también tiene efecto sobre la vía del colesterol en testículo, modificando la expresión de proteínas involucradas. Estos resultados muestran que el testículo es sensible a la ingesta de lípidos, y que éstos son capaces de modificar el metabolismo intracelular del colesterol en este órgano dependiendo del tiempo de dieta (datos previos no mostrados). Estas alteraciones podrían explicar las modificaciones gaméticas asociadas a hipercolesterolemia inducida por una dieta grasa.


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P13- TRES MESES DE DEFICIENCIA DE VITAMINA A MODIFICA LOS ÍNDICES DE ÁCIDOS GRASOS DE LÍPIDOS TOTALES EN GLÁNDULA MAMARIA VIRGEN. Vásquez Miriam E, Marra Carlos1, Ferrari Vivas Carolina, Giménez María Sofía. 1 1 INIBIO-CONICET, La Plata Dpto Bioquímica y Cs Biológicas. FQByF-UNSL. El estado nutricional del cuerpo y de tejidos es el principal factor de control de la tasa de lipogénesis. La glándula mamaria es única en su asociación con un depósito de tejido adiposo que se conoce, comúnmente, como la almohadilla de grasa mamaria. La almohadilla de grasa mamaria representa un microambiente estromal complejo que incluye diversos tipos de células. Los adipocitos son reguladores locales del crecimiento de las células epiteliales. El tejido adiposo desempeña un papel crítico en el crecimiento de la glándula mamaria. En el consumo de energía en la dieta, el contenido y tipo de grasa tienen efectos pronunciados sobre el desarrollo mamario en los roedores. Específicamente, una deficiencia de ácidos grasos esenciales altera el desarrollo ductal y alveolar. Las células epiteliales dentro de la glándula mamaria de ratón son capaces de utilizar los ácidos grasos de los adipocitos, secuestrados de la almohadilla de grasa mamaria. Estos ácidos grasos pueden ser metabolizados a una variedad de derivados, los cuales tienen efectos tanto positivos como negativos sobre la función y el crecimiento celular epitelial. PPARα regula las vías de oxidación de ácidos grasos. Participa en el catabolismo de los lípidos y en proceso inflamatorios. Los SREBPs son factores de transcripción claves que controlan la lipogénesis y la absorción de lípidos; SREBP-1c puede regular los genes que controlan la síntesis de ácidos graso. Además, también se ha demostrado que SREBP-1c está involucrado en otras funciones celulares, como la regulación del ciclo celular y la proliferación celular. Nuestro objetivo fue determinar los niveles de ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados, ω3 y ω6 de lípidos totales; y analizar los niveles de expresión de los ARNm de los factores de transcripción involucrados en el metabolismo de los lípidos PPAR-α, y SERBP-1c, en glándulas mamarias vírgenes con deficiencia de vitamina A. Se trabajó con ratas hembras Wistar separadas al destete en tres grupos: uno se alimentó con dieta suficiente en vitamina A (8 mg de retinil palmitato/kg de dieta) por 3 meses , otro grupo con dieta deficiente en vitamina A por 3 meses y un grupo recibió dieta deficiente en vitamina A durante 75 días al cabo de los cuales se le administró dieta suficiente en vitamina A por 15 días. La determinación de ácidos grasos de los lípidos totales de glándula mamaria se determinó por cromatografía de gases capilar (c-GLC). Luego de obtener los extractos de lípidos totales. Se utilizó el método de esteres metílicos de acilo graso (FAMEs) .Los patrones cromatográficos de los FAMEs se identificaron por comparación de sus tiempos de retención relativos con patrones auténticos (Sigma Chem. Co, St. Louis, MO) que se corrieron en paralelo con cada conjunto de muestras. La distribución de la masa relativa de cada análisis se calculó electrónicamente. El análisis de la expresión génica de SREBP1c, PPARα se realizó por RT-PCR semicuantitativa. S28 se uso como endógeno. El análisis de datos fue hecho usando el Software Graphpad prism 5. Los datos fueron analizados por ANOVA de una via, y las diferencias entre las medias individuales se analizaron usando el test post hoc de Tukey. La significancia estadística fue considerada para p<0.05.


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Se observó que los ácidos grasos saturados y poliinsaturados no variaron con la dieta. El perfil de ácidos grasos monoinsaturados, aumentó a los 3 meses de deficiencia (P<0,05). Dicho perfil, durante el periodo de realimentación, mostró una reversión a los valores de los controles tras la realimentación. El porcentaje de ácidos grasos ω3 disminuye en glándula mamaria de animales deficientes en vitamina A (P<0,05), cuando se compara con los controles, mientras que en el grupo realimentado dicho parámetro alcanzó los valores del grupo control (P<0,05). Por el contrario, el porcentaje de ácidos grasos ω6 aumenta en animales deficientes en vitamina A, respecto a los controles (P<0,05) y grupos realimentados (P<0,05). La relación ω3/ω6 aumenta en el grupo deficiente con respecto a los grupos controles (P<0,05) y realimentados (P<0,05). La deficiencia de vitamina A aumentaría el índice de insaturación de ácidos grasos de lípidos totales de la glándula mamaria, respecto al grupo control (P<0,05). Durante el periodo de realimentación, se observó que el índice de insaturación alcanzaría los valores del grupo control (P<0,05). La expresión de SREBP-1c en glándula mamaria deficiente no muestras diferencias en la expresión, en los distintos lotes experimentales. En la expresión de PPAR-α se observó un aumento significativo en los lotes con dieta deprivada de vitamina A, con respecto a los grupos controles (P<0,05) y realimentados (P<0,05). La deficiencia de Vitamina A, en glándula mamaria de animales vírgenes, provocaría un mayor porcentaje de ácidos grados monoinsaturados y un mayor índice de insaturación de ácidos grasos de lípidos totales. Incrementaría la relación ω6/ω3 de lípidos totales, lo que podría provocar un estado inflamatorio. El incremento en la expresión del PPAR-α respondería al estado inflamatorio, posiblemente en respuesta a los bajos niveles de retinol que aumentarían la relación ω6/ω3, o a los eventos celulares que se desencadenarían en respuesta a su ausencia.


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P14- EFECTO DEL ESTRÉS POR TEMPERATURA SOBRE EL METABOLISMO DE ÁCIDO FOSFATÍDICO Peppino Margutti Micaela, Racagni Graciela, Gaveglio Virginia L, Giusto Norma M, Pasquaré Susana J, Villasuso Ana Laura. Departamento de Biología Molecular, FCEFQN, Universidad Nacional de Río Cuarto, Río Cuarto; Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca, Bahía Blanca . Los eventos de fosforilación-defosforilación lipídica constituyen un importante mecanismo para encender o apagar diferentes procesos biológicos. El ácido fosfatídico (PA), además de considerarse como intermediario en la biosíntesis de fosfolípidos es un importante lípido señal involucrado en la respuesta al estrés. La señalización mediada por PA es regulada por las actividades de fosfolipasas (PLC-PLD), fosfatasas (LPPs) y lípido quinasas (DGK y PAK) a través de cambios dinámicos en los niveles de DAG- PA y DGPP. El objetivo del trabajo fue estudiar aspectos bioquímicos asociados con el estrés por temperatura en relación con la señalización mediada por PA – DGPP. Se emplearon plántulas de cebada germinadas a 25C y luego estresadas por exposición a 4C durante tiempos cortos (30-180 min) y prolongados (24-36 h). Los resultados mostraron un rápida y sostenido incremento de la actividad PLD a tiempos cortos en hojas y raíces. La fosforilación de sustratos endógenos con [-32P]ATP demostró la presencia de DAG-k, PA-k y PI4-k a través de la formación de 32P[PA-DGPP-PI4P]. En respuesta al estrés se observó un comportamiento opuesto entre los tejidos y sensible a su duración. A tiempos cortos, ocurrió un aumento rápido y transitorio en las actividad lipidos quinasas en las hojas; miestras que el mismo permaneció hasta los 180 en las raíces. El estrés por tiempos prolongados afectó considerablemente las actividades lípido quinasas y la acumulación de los niveles de PA en el mismo tejido. Hecho que sugirió la presencia de enzimas que metabolizan PA. Así, la incubación de membranas microsomales con [3H]PA se reflejó en la formación [3H]DAG, [3H]MAG y productos solubles en agua (glicerol y glicerol 3P), indicativos de las actividades LPPs, DAGL y MAGL. El estrés por 24-36 h modificó las actividades de LPPs y DAGL e incremento considerablemente la formación de PSA sugiriendo el remodelado y la resíntesis de algunas especies lipídicas que podrían estar implicadas en la tolerancia y recuperación de la situación de estrés.


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ANOTACIONES


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INDICE DE AUTORES Altamirano Karina 27, 29 Alvarez Sergio E 63 Alvarez Silvina M 40, 59, 65, Alza Natalia 20, 59 Anzulovich Ana 50 Aveldaño Marta I 26 Banchio Claudia 12 Barchuk Magali 41 Beaumelle Bruno 29 Belmonte Silvia A 27, 29 Berg Gabriela 41 Biaggio Verónica Silvina 59 Blazquez Ana Catalina 39 Boland Sebastian 45 Boldrini Gabriel G 59, 65 Brovarone Roxana 52 Bustos DM 35 Campos Ludmila E 63 Canclini Lucía 43 Casali Cecilia Irene 33 Castro Andrea 50 Castro María Agustina 54 Castro Melina G 63

Chicco Adriana 40 Conde Melisa A 20 Córsico Betina 61 Crespo Rosana 54 Creus Agustina 40 de Mendoza Diego 45 Del Veliz Samanta 35 Díaz Ludovico Ivo 38 Elorza Setiembre Delfina 58 Erjavec Luciana 33 Esteves Adriana 43 Favale Nicolás O 31, 32, 35 Fernandez Maria del Carmen 48 Fernández Tome María del Carmen 33 Ferrari Carolina 59, 73 Folle Gustavo 43 Fornés Miguel Walter 71 Friedman Silvia 41

Funes Abi 71 Galles Celina 45 García de Bravo Margarita M 54 Garcia Karina A 61 Garda Horacio A 38 Gaveglio Virginia Lucía 21, 22, 75 Gelpi Ricardo 41 Genovese Darío M 14 Giménez Maria Sofía 40, 52, 59, 65, 73 Giusto Norma María 21, 22, 75 Gojanovich Aldana D 35 Gómez Casati María Eugenia 58 Gómez Nidia N 59, 65 Gonzalez María C 38 Harman María Florencia 56 Kurzchalia Teymuras 45 Labadie Guillermo 45 Lagrutta Lucía C 24, 69 Lavarías Sabrina ML 69 Leonardi Patricia 47 Lombardo Yolanda B 15, 40 Malvicini Ricardo 33 Mangiarotti Agustín 14 Marra Carlos 73 Martín Mauricio Gerardo 56, 58 Martin Molinero Glenda D 65 Masone Diego 29, 35 Mate Sabina 38 Michel María Cecilia 59 Miksztowicz Verónica 41 Montero-Villegas Sandra 54 Morales Celina 41 Morel Gomez Emanuel D 48 Navigatore Fonzo Lorena 50 Nudel Clara 17 Nusblat Alejandro D 16 Oresti Gerardo M 26 Orozco Reina Agustina 52 Pacheco Guiñazú Anahí 27, 29 Pascual Ana Clara 21, 22 Pasquaré Susana Juana 21, 22, 76


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Penkov Sider 45 Peppino Margutti Micaela 75 Perazzo Cecilia 33 Perez Celia N 63 Perez Chaca María Verónica 59 Pescio Lucila G 31, 32, 35 Peterson Graciela B 69 Polo Mónica 54 Porta Exequiel 45 Prez Gastón M 45 Racagni Graciela 76 Ramirez Darío C 63 Resa Jurín Lucas 27, 29 Rodenak-Kladniew Boris 54 Rodrigues Capítulo Alberto 69

Rodriguez Yamila I 63 Romero Daniela J 31, 32, 35 Saez Lancellotti Estefanía 71 Salvador Gabriela A 13, 20, 39, 47 Sanchez Emilse Silvina 59 Santacreu Bruno J 31, 32, 35 Santiago Valtierra Florencia X 26

Scaglia Natalia 61 Schreier Laura 41 Scodelaro Bilbao Paola 20, 47 Simón Layla 71 Sterin de Speziale Norma B 31, 32 Suárez Mariana 43 Trejo Sebastián A 24 Tricerri María A 38 Tulino María Soledad 31 Uhart Marina 36 Uranga Romina M 39 Vaquer Cintia C 27 Vasquez Elena 59 Vasquez Gomez Miriam E 52, 73 Vázquez Romina 38 Verstraeten Sandra V 48 Ves-Losada Ana 24, 54, 69 Villasuso Ana Laura 75 Weber Karen 33 Wilke Natalia 14 Zago Valeria 41

Compiladores del libro de Resúmenes: Alvarez, Silvina Mónica Giménez, María Sofía Gómez, Nidia Noemí

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