validasi dan verifikasi metode analisis
DESCRIPTION
Validasi dan Verifikasi Metode Analisis. Alfas – Surabaya, 29 Maret 2014. Mochammad Yuwono Fakultas Farmasi Universitas Airlangga E-mail: [email protected]. Sharing Knowledge Ikatan Alumni Universitas Airlangga – Fakultas Farmasi. Quality. Efficacy. Safety. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/1.jpg)
1
Validasi dan Verifikasi Metode
Analisis
Mochammad YuwonoFakultas Farmasi Universitas Airlangga
E-mail: [email protected]
Alfas – Surabaya, 29 Maret 2014
Sharing KnowledgeIkatan Alumni Universitas Airlangga – Fakultas Farmasi
![Page 2: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/2.jpg)
Sharing Knowledge2
Quality is important in every product or service, but it is vital
in medicines as it involves life.
Regulasi Obat: Persyaratan Sangat ketat !
![Page 3: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/3.jpg)
QualityInvisible when GOODImpossible to ignore when BAD
How good something isIf the quality of a product is low, it means that the product is not really good
3
Sharing Knowledge
![Page 4: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/4.jpg)
Quality of Products
The ability to make the same product the same way, over and over again.
Customer buys today is same as what they bought last month or will buy next month.
Product meets customer’s expectation.
4
Consis
tent
relia
ble
Sharing Knowledge
![Page 5: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/5.jpg)
Quality of Pharmaceutical Products
Quality of thepharmaceutical
products
Man Machine
qualified
calibrated
robust
qualified
Methods
suitable
characterised
documented
MilieuMaterial Management
Quality
Referencestandards
Tempe-rature
Analysts´support
skilled
Humidity
Vibrations Time
Supplies
Irradi-ations
Motivation
Measurements
5 Sharing Knowledge
![Page 6: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/6.jpg)
Quality in Analytical Laboratory
Alat/Instrumen
AnalisBaku Pembanding, Reagensia
Pendidikan
Pelatihan
Pengalaman
Verifikasi KinerjaPresisi
KalibrasiSelektivitas SST
Akurasi, LOD, LOQ
LinieritasLinieritas
Sensitvitas
KualifikasiValiditas
Hasil Valid &
Terpercaya
Metode Analisis
Preparasi sampel
Akomodasi & Lingkungan
6 Sharing Knowledge
![Page 7: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/7.jpg)
Quality of Analytical Data
Sharing Knowledge7
Instrumen Analisis(memenuhi kualifikasi DQ, IQ, OQ, PQ)
Metode Analisis(telah divalidasi/diverifikasi)
Sistem(memenuhi uji SST)
Internal QA(Sampel kontrol masuk rentang)
Hirarki Komponen Mutu Data Analisis
![Page 8: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/8.jpg)
Sampel
Sarana & Prasarana
Bahan Kimia & SRM
SafetyPengelola & Analis
Metode Analisis
Alat/Instrumen
Dokumen sistem Mutu
VALID & TERPERCAYA
8Sistem Manajemen MutuSharing Knowledge
![Page 9: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/9.jpg)
Laporan Hasil
Quality Assurance:
A n a l i s i s
ISO 17025/GLP
Preparasi Sampel – Analisis data
Pengem
bangan
Metode
Validasi /Verifikasi Metode
Sampel Obat, Obat Tradisional, Makanan, Kosmetik
Prosedur Analisis
Sampling9 Sharing Knowledge
![Page 10: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/10.jpg)
Metode Analisis Kimia
GC-MS GC-FTIR/MSLC-MS/MS LC-NMR
Hyphenated Instruments
10 Sharing Knowledge
![Page 11: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/11.jpg)
Metode Analisis
Optimasi
Validasi
Implementasi (rutin)
Pengembangan
Revalidasi
Pre-validasi
Andev
QC11 Sharing Knowledge
![Page 12: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/12.jpg)
Metode Standar/Baku
In House Validation of
Method
Interlaboratory Validation
(Collaborative Study)
Standard Method
Verification of Method
Single Laboratory
Validation Full
Validation
12 Sharing Knowledge
![Page 13: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/13.jpg)
Compendial Methods
Metode yang tertera dalam FarmakopeMerupakan metode Standar yang telah
divalidasi (Full Validation)Termasuk metode Resmi (Official
method) untuk negara-negara tertentu
Sharing Knowledge13
![Page 14: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/14.jpg)
14
Kategori Metode Analisis
Metode analisis untuk identifikasi
Penetapan cemaran atau hasil Degradasi Penetapan kuantitatif (II a) dan uji batas/kualitatif (II b)
Penetapan kadar komponen utama dalam bahan baku obat atau bahan aktif dalam sediaan farmasi
Penetapan karakteristik sediaan (disolusi, pelepasan obat, dll)
I
II
III
IV
Sharing Knowledge
![Page 15: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/15.jpg)
15
Karakteristik kinerja metode USP dan ICH
PresisiAkurasi
Batas Deteksi (DL/LOD)Batas Kuantitasi (QL/LOQ)
Linieritas
Selektivitas/Spesifisitas
Rentang
Validasi Metode
Robustness/RuggednessSystem Suitability Test
Sharing Knowledge
![Page 16: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/16.jpg)
Sharing Knowledge16
USP ICH 1. Presisi2. Akurasi3. Batas deteksi 4. Batas kuantitasi5. Spesifisitas 6. Linieritas7. Rentang
1. Presisi2. Akurasi3. Batas deteksi4. Batas kuantitasi5. Spesifisitas6. Linieritas7. Rentang 8. Robustness 9. Kesesuaian sistem
Parameter Validasi Menurut USP dan ICH
![Page 17: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/17.jpg)
17
Akurasi dan Presisi Metode
Akurasi rendah Presisi tinggi
Akurasi tinggi Presisi tinggi
Akurasi tinggi Presisi rendah(Hasil dirata-rata)
Akurasi rendah Presisi rendah
Sharing Knowledge
![Page 18: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/18.jpg)
Permintaan Validasi
Literature searchTelaah karakteristik AnalitPenyiapan bahan dan alat
Pengembangan/optimasi Metode
Pembuatan protokol Validasi
Percobaan laboratorium sesuai
protokol validasi
Analisis DataPenyusunan Laporan Validasi
Penyerahan dokumen
Tahapan Validasi Metode
ValidasiMetode
18 Sharing Knowledge
![Page 19: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/19.jpg)
Sharing Knowledge19
Validasi Metode Vs.
Verifikasi Metode
![Page 20: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/20.jpg)
Verifikasi
Validasi
• Suatu proses (percobaan laboratorium)• Untuk membuktikan bahwa karakteristik kinerja metode analisis telah memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan sebelumnya
• Suatu proses (percobaan laboratorium)• Untuk membuktikan bahwa laboratorium mampu menggunakan metode analisis baku/standar pada kondisi nyata di laboratoriumnya
20 Sharing Knowledge
![Page 21: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/21.jpg)
Metode baku/Standar Compendial Method
(USP, FI, AOAC, ISO dll.)
Metode tidak baku Metode pengembangan Metode baku yang dimodifikasi Metode baku yang digunakan di luar lingkup
Verifikasi
Validasi
21 Sharing Knowledge
![Page 22: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/22.jpg)
Modifikasi metode kompendial
Jika pada verifikasi metode, kondisi pada Metode kompendial TIDAK diperoleh hasil yang optimal (misal peak tailing, fronting, splitting, resolusi pemisahan tidak terpenuhi) Laboratorium dapat melakukan modifikasi atau adjustment.
Pada USP tertera batas-batas modifikasi atau adjustment yang diperkenankan
Sharing Knowledge22
![Page 23: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/23.jpg)
Modifikasi/Adjustment metode kompendial
Sharing Knowledge23
![Page 24: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/24.jpg)
Sharing Knowledge24
Panduan validasi metode analisis
ICH Q2A : Text on validation of analytical ProcedureICH Q2B Validation of analytical procedures methodologyFDA-CDER (Center for Drug Evaluation and Research)a. Reviewer guidance validation of chromatographic
methodsb. Submitting sample and analytical data for method
validationc. Analytical procedure and method validation for
human studies d. Bioanalytical method validation for human studies
USP: Validation of compendial proceduresUSP: Verification of compendial procedures
![Page 25: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/25.jpg)
Sharing Knowledge25
![Page 26: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/26.jpg)
26 Sharing Knowledge
![Page 27: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/27.jpg)
27 Sharing Knowledge
![Page 28: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/28.jpg)
Verifikasi Metode
Adopsi metode baku/standar Untuk membuktikan bahwa suatu laboratorium mampu melakukan analisis di laboratoriumnya untuk menunjukkan bahwa kinerja metode dapat
ditiru atau diulang oleh laboratorium yang bersangkutan dengan hasil yang sama
28 Sharing Knowledge
![Page 29: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/29.jpg)
Metode baku/Standar Compendial Method
(USP, FI, AOAC, ISO dll.)
Metode tidak baku Metode pengembangan Metode baku yang dimodifikasi Metode baku yang digunakan di luar lingkup
Verifikasi
Validasi
29 Sharing Knowledge
![Page 30: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/30.jpg)
Sharing Knowledge30
![Page 31: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/31.jpg)
Sharing Knowledge31
![Page 32: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/32.jpg)
Metode “General Test” (LOD, sisa pijar, bilangan asam, pH) tidak perlu diverifikasi
Sharing Knowledge32
![Page 33: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/33.jpg)
Acuan Verifikasi Metode
33 Sharing Knowledge
![Page 34: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/34.jpg)
1. Confirmation of Identity, a method that ensures a material is what it purports to be or confirms the
detection of the target analyte.2. Quantifying an analyte at a low concentration.3. Determining if an analyte is present above or below a specified, low concentration (often called a Limit Test). The specified
concentration is close to the LOQ.4. Quantifying an analyte at a high concentration.5. Determining if an analyte is present above or below a specified, high concentration (often called a Limit Test). The specified concentration is substantially above the LOQ.6. Qualitative test.
Kategori Analisis
34 Sharing Knowledge
![Page 35: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/35.jpg)
Parameter Validasi
35 Sharing Knowledge
![Page 36: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/36.jpg)
Parameter Verifikasi
36 Sharing Knowledge
![Page 37: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/37.jpg)
37 Sharing Knowledge
![Page 38: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/38.jpg)
38 Sharing Knowledge
![Page 39: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/39.jpg)
39 Sharing Knowledge
![Page 40: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/40.jpg)
40 Sharing Knowledge
![Page 41: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/41.jpg)
Parameter Verifikasi Metode
Sharing Knowledge41
Penetapan kadar bahan aktif dalam sediaan farmasi
Selektivitas/spesifisitas, Presisi dan akurasi merupakan parameter penting
![Page 42: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/42.jpg)
42
Selektivitas vs. Spesifisitas
USP dan ICH menggunakan istilah Specificity
IUPAC dan AOAC menggunakan istilah Selectivity
AOAC: Specificity “highest selectivity”
Sharing Knowledge
![Page 43: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/43.jpg)
Sharing Knowledge
43
Specificity (ICH/USP)Specificity (USP/ICH): The ability to assess unequivocally the analyte in the presence of components to expected to be present, such as impurities, degradation products, and matrix components.
Selectivity describes the ability of an analytical method to differentiate various substances in a sample.
![Page 44: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/44.jpg)
44
Spesifik dan SelektifSelektif:Mampu membedakan antara senyawa analit dengan derivat/degradan/ metabolit atau senyawa pengganggu lainnya
Spesifik:Mampu mengenal respons untuk analit tunggal/murni
Sharing Knowledge
![Page 45: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/45.jpg)
45
Spesifisitas/Selektivitas: Jika tersedia zat hasil degradasi:
Suntikkan:Blanko sampel/Placebo (Sampel minus
analit)Zat Hasil degradasi (degradants)Zat yang memiliki struktur mirip (Related
substancesZat metabolit (untuk bioanalisis)
Sharing Knowledge
![Page 46: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/46.jpg)
46
Spesifisitas/Selektivitas: Blanko sampel/Placebo
tidak menghasilkan peak/noda dengan waktu retensi/Rf yang sama dengan analit
Peak/noda analit terpisah dari peak/noda lainnya
(Rs ≥1,5)46
Sharing Knowledge
![Page 47: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/47.jpg)
Placebo
Sampel
(Rs ≥1,5)
47 Sharing Knowledge
![Page 48: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/48.jpg)
Meloxicam dalam tablet (spektrofotometri UV/Vis)
48 Sharing Knowledge
![Page 49: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/49.jpg)
49
Specificity/Selectivity:
Lakukan forced degradation studies (studi degradasi paksa)
Sampel disimpan pada suhu/kelembaban tertentu atau penambahan oksidator
Bandingkan profil pemisahan peak sebelum
dan sesudah perlakuan
Jika tidak tersedia zat hasil degradasi (Degradants)
Sharing Knowledge
![Page 50: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/50.jpg)
50
Forced Degradation Studies
Heat Temperature (50 - 60 oC) Humidity Kelembaban (70 to 80%) Acid Hydrolysis HCl 0.1 N Base Hydrolysis NaOH 0.1 N Oxidation H2O2 (3 to 30%) Light UV/Vis
Sharing Knowledge
![Page 51: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/51.jpg)
Spesifisitas: Uji kemurnian analit Menggunakan Detektor Diode array Teknik Spiking
Peak hasil spiking menunjukkan satu peak/noda dan memiliki tR/Rf sama
Pada TLC menggunakan sistem pengembang berbeda-beda
GC-MS LC-MS; LC-MS/MS
51 Sharing Knowledge
![Page 52: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/52.jpg)
Contoh studi degradasi paksa (HPLC-DAD)
PENETAPAN KADAR PAROXETINE DALAM SEDIAAN TABLET
52 Sharing Knowledge
![Page 53: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/53.jpg)
Overlay spectra UV - analit
53 Sharing Knowledge
![Page 54: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/54.jpg)
Hasil Degradasi terhadap tablet paroxetine 20 mgCondition Time
(h) % Recovery RRT* of degradation
products Acid 0.1 N HC1, 80°C 50 98.0 None detected Base 0.1 , 80°C 50 96.5 1.65 Hydrogen peroxide 0.3%, 80°C
2 73.0 0.19, 0.22, 0.23, 0.27
0.31, 0.35, 0.39, 0.43 0.45, 0.49, 0.52, 0.55 0.59, 0.63, 0.71, 0.76 1.13, 1.36, 1.64
Heat dry, 80°C 72 99.2 None detected Heat wet, 80°C 72 96.2 1.65 Light dry, 1000 foot candles 144 99.5 None detected
Light wet, 1000 foot candles 144 80.3 0.17, 0.20, 0.23, 0.42
0.44, 0.55, 0.82, 0.88 1.13, 1.60
* RRT, relative retention time.
54 Sharing Knowledge
![Page 55: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/55.jpg)
55
Linieritas (Linearity)
Kemampuan suatu metode untuk menunjukkan hubungan secara langsung atau proporsional antara respons detektor dengan perubahan konsentrasi analit.
A B C D
●
●●
●●
Respon alat
Sharing Knowledge
![Page 56: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/56.jpg)
56
Linieritas
Melalui analisis statistik Linear Regression (y = mx + b) Correlation Coefficient (r), y-intercept (b), slope (m), residual sum of squares
Disarankan menggunakan minimum 5 macam konsentrasi analit
Disarankan terhadap sampel yang independen, bukan dari sampel hasil pengenceran
Dapat digunakan larutan baku hasil pengenceran dan/atau larutan spike
2/122 })(){())((
1 yyxxyyxx
ri
ii
Sharing Knowledge
![Page 57: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/57.jpg)
57
Evaluasi terhadap Linieritas
Relative process standard deviation (Vxo)
Mandel’ testResidual testANOVA-linearity testingRSD of the Plot of response factor Vs.
concentrationXp value- Funk’s et al. r value Homogeneity of the linear-curve
Sharing Knowledge
![Page 58: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/58.jpg)
58
Evaluasi Linieritas
i
iiY
YXO
xoXO
bxayN
yyS
bSS
XSV
ˆ , 2
ˆ where
%100
0.05 p and
2-N ffor factor student t t , 1
11. .Y
with.
11. . 2
22
2
P
2
2
iiXX
XXtableY
XX
PtableXOP
XN
XQ
QX
NtSa
QbYY
NtSX
Sy/x = simpangan baku residu dari regresi linear Vxo = koefisien variansi regresi linear
Vxo = <2-5%Sharing Knowledge
![Page 59: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/59.jpg)
Koefisien korelasi
Nilai r ternyata TIDAK menjamin linieritas respons dan konsentrasi
Kurva non linier dapat memiliki r yang tinggi Korelasi linier jika rhitung > rtabel. Harga r
tergantung jumlah konsentrasi. Contoh n = 5 rtabel = 0,878; n = 10 r tabel = 0,632
r membuktikan linieritas jika rentang tidak terlalu lebar dan r ≥ 0,999
59 Sharing Knowledge
![Page 60: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/60.jpg)
Residual dan Least square
Makin kecil atau makin besar konsentrasi deviasi makin besar dikuadratkan dan diminimasi Least square
Oleh karena itu, respons harus memiliki varians yang sama (Homogeneity of variance = homoscedasticity) 60 Sharing Knowledge
![Page 61: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/61.jpg)
Persamaan garis regresi
koefisien korelasi r ≥ 0,999 Persamaan garis melewati titik 0,0 Intersep tidak berbeda secara bermakna
dengan nol lakukan uji t Slope berbeda secara bermakna dengan harga
nol lakukan uji t
61 Sharing Knowledge
![Page 62: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/62.jpg)
Respons faktor = y/x
62 Sharing Knowledge
![Page 63: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/63.jpg)
Uji Homogenitas
digunakan untuk mengetahui homogenitas varian pada persamaan garis regresi
Uji F menguji homogenitas batas atas dan bawah
Uji Cochran dan uji Barlett menguji keseluruhan titik pada rentang persamaan garis
63 Sharing Knowledge
![Page 64: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/64.jpg)
64 Sharing Knowledge
![Page 65: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/65.jpg)
65
Rentang (Range)
Interval antara konsentrasi terbesar dan terkecil dari analit dalam sampel
Memenuhi syarat dalam hal presisi, akurasi dan linieritas
Sharing Knowledge
![Page 66: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/66.jpg)
66
Minimum Specified Range:
For Drug Substance & Drug product Assay 80 to 120% of test Concentration
For Content Uniformity Assay 70 to 130% of test Concentration
For Dissolution Test Method +/- 20% over entire Specification Range
For Impurity Assays From Reporting Level to 120% of Impurity Specification for
Impurity AssaysSharing Knowledge
![Page 67: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/67.jpg)
67
Uji Homogenitas kurva kalibrasi
Sharing Knowledge
![Page 68: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/68.jpg)
Metode Analisis pada Cleaning Validation
Validasi Metode untuk analit konsentrasi sangat rendah (Residu)
Parameter LOD dan LOQ berperan sangat penting
Sharing Knowledge68
![Page 69: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/69.jpg)
69
Akurasi
Biasanya dinyatakan dalam persen perolehan kembali (% recovery)
Dapat dilakukan melalui pebandingan hasil analisis antara metode yang divalidasi dengan metode standar uji t harus tidak berbeda makna
Dapat dilakukan metode adisi standar terhadap blanko atau sampel.
Sharing Knowledge
![Page 70: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/70.jpg)
70
Akurasi
Persen perolehan kembali (% recovery)
Persyaratan untuk assay validation = 98-102%
Dianjurkan menggunakan tiga macam konsentrasi masing-masing 3 kali replikasi
Adisi standar pada blanko/plasebo
%100Re% xyasesungguhnKadar
diperolehyangKadarc
Sharing Knowledge
![Page 71: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/71.jpg)
71
KURVA AKURASI menurut Funk et. al.
- Untuk mengetahui ada atau tidaknya kesalahan sistematis, Dibuat kurva regresi antara Xf (konsentrasi analit hasil analisis) terhadap Xc (konsentrasi nominal analit)
Xf = af + bf. Xc
- Dihitung confidence range (Cr) dari intercept {VB(af)} dan slope {VB(bf)} dari recovery Pada p = 0.05
QxxXc
N1 . S . ta =aCr
2
yftableff
Qxx.Stb=bCr yftable
ff
2-N)]X-b+(a-[X
=S2
iffifyf
t = Student-t-factor f = N-2, P = 95 %. Sharing Knowledge
![Page 72: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/72.jpg)
72
M. Yuwono & G. Indrayanto, Validation method of Chromatography Methods of Analysis, Profiles of Drugs Substances, Excipients and Related Methodology, Vol. 32, Elsevier Academic Press, San Diego, New York, Boston, London, Sydney, Tokyo, Toronto. In Press (2005)
Sharing Knowledge
![Page 73: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/73.jpg)
Sharing Knowledge73
Analyte recovery at different concentration
AOAC manual for the Peer-Verified Methods program
Analyte Ingred. (%)
Analyte ratio Unit Mean recovery
(%)100 1 100 % 98-102≥ 10 10-1 10 % 98-102≥ 1 10-2 1% 97-103
≥ 0.1 10-3 0.1% 95-1050.01 10-4 100 ppm 90-1070.001 10-5 10 ppm 80-110
0.0001 10-6 1 ppm 80-1100.00001 10-7 100 ppb 80-1100.000001 10-8 10 ppb 60-115
0.0000001 10-9 1 ppb 40-120
![Page 74: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/74.jpg)
74
PresisiKedekatan dari suatu seri pengukuran yang diperoleh dari sampel yang homogen
Dalam bentuk RSD (relative standard deviation)
Meliputi: - Repeatability - Intermediate Precision - Reproducibility
Sharing Knowledge
![Page 75: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/75.jpg)
75
Repeatability
Kondisi sama pada interval waktu yang singkat
Satu larutan uji disuntikkan berkali-kali pada hari yang sama, alat yang sama, analisis serta kondisi lain yang sama.
Disebut juga Intra-assay precision
Sharing Knowledge
![Page 76: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/76.jpg)
76
Intermediate Precision
Disebut juga “within-laboratory varia-
tions”.
Berbeda hari, atau analis, atau instru-
ment (dalam satu laboratorium)
Sebagai bagian Ruggedness menurut USP
Sharing Knowledge
![Page 77: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/77.jpg)
77
Repeatability test at different labs.Berbeda analis atau instrument dari
laboratorium yang berbeda
Reproducibility
Sharing Knowledge
![Page 78: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/78.jpg)
78
Uji Presisi :
Dianjurkan menggunakan 3 macam konsentrasi berbeda, misal 80, 100 dan 120 % dari konsentrasi target
Masing-masing konsentrasi dilakukan 3 replikasi
Dapat dilakukan pada satu konsentrasi dengan 6 kali replikasi
Dianjurkan juga dilakukan pada hari yang berbeda dan analisis yang berbeda
Kriteria penerimaan: tergantung kategori analisis atau konsentrasi analit
Contoh: RSD < 2% (kategori I)Sharing Knowledge
![Page 79: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/79.jpg)
Sharing Knowledge79
Analyte concentration vs precision
AOAC manual for the Peer-Verified Methods program
Analyte % Analyte ratio Unit RSD (%)100 1 100 % 1.3≥ 10 10-1 10 % 2.7≥ 1 10-2 1 % 2.8
≥ 0.1 10-3 0.1% 3.70.01 10-4 100 ppm 5.3
0.001 10-5 10 ppm 7.30.0001 10-6 1 ppm 110.00001 10-7 100 ppb 15
0.000001 10-8 10 ppb 210.0000001 10-9 1 ppb 30
![Page 80: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/80.jpg)
Kurva Horwitz
SBR atau KV = + 2(1-0,5 log C)
C adalah konsentrasi (fraksi desimal)
Misalnya : Untuk kadar C = 100% maka fraksi desimalnya = 100/100 = 1
SBR atau KV = + 2(1-0,5 log 1) = 2%
HORRAT = SBRobs/SBRcalc
Dapat dilakukan pada satu konsentrasi
80 Sharing Knowledge
![Page 81: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/81.jpg)
Sharing Knowledge81
Validasi Metodepada
Cleaning Validation
![Page 82: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/82.jpg)
Analytical Method for Cleaning Validation
• Metode Analisis hendaknya divalidasi sebelum validasi pembersihan
• Pemilihan metode analisis untuk analisis residu berkaitan erat dengan sifat kimia target residu dan batas deteksinya
• Metode yang digunakan mampu mendeteksi residu atau kontaminan secara spesifik Kromatografi (HPLC, GC, and HPTLC). Metode lainnya (sendiri atau kombinasi): TOC, pH,
Konduktivitas, Spektrofotometri UV, ELISA
Sharing Knowledge82
![Page 83: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/83.jpg)
Analytical Method for Cleaning Validation
Validasi Metode meliputi : Presisi, Linieritas dan Selektivitas (jika target
berupa analit spesifik); LOD LOQ Recovery (melaui spiking analit) reproducibility
Batas Deteksi merupakan paramater sangat penting.
LOD di bawah batas konsentrasi residu/ kontaminan yang diperkenankan
83 Sharing Knowledge
![Page 84: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/84.jpg)
Analytical Method for Cleaning Validation
Recovery < 50% is consideredquestionable
> 80% is considered good > 50% is considered
reasonable
84 Sharing Knowledge
![Page 85: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/85.jpg)
Batas Deteksi
Batas Deteksi?
Batas Deteksi:Konsentrasi terendah analit dalam sampel yang masih dapat terdeteksi
85 Sharing Knowledge
![Page 86: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/86.jpg)
86
Lowest amount of analyte in a sample that can be detected but not necessarily quantitated.
Estimated by Signal to Noise Ratio of 3:1.
Detection Limit (DL)
Lowest amount of analyte in a sample that can be quantified with suitable accuracy and precision.
Estimated by Signal to Noise Ratio of 10:1.
Quantitation Limit (QL)
Sharing Knowledge
![Page 87: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/87.jpg)
87
Detection Limit (DL) and Quantitation Limit (QL)
1. Based in Visual Evaluations- Used for non-instrumental methods
2. Based on Signal-to Noise-Ratio- 3:1 for Detection Limit- 10:1 for Quantitation Limit
3. Based on Standard Deviation of the Response and the Slope menggunakan sampel konsentrasi rendah dapat digunakan SD dari residual; SD intrersep
Sharing Knowledge
![Page 88: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/88.jpg)
88 Sharing Knowledge
![Page 89: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/89.jpg)
89
Based on Signal-to Noise-Ratio
Sharing Knowledge
![Page 90: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/90.jpg)
90
Based on the Standard Deviation of the Response and the Slope
where s = the standard deviation of the response ( SD of blank samples or SD of intercepts of regression line)S = the slope of the calibration curve
Sharing Knowledge
![Page 91: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/91.jpg)
91
Definition: Capacity to remain unaffected by small variations in method parameters
Determination: Comparison results under differing conditions with precision under normal conditions Variations may include: stability of analytical
solution, variation of pH in a mobile phase, different column (lot/supplier), temperature, flow rate.
Robustness
Sharing Knowledge
![Page 92: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/92.jpg)
92
Re-Validation
“When sponsors make changes in the analytical procedure, drug substance, drug product, the changes, may necessitate revalidation of the analytical procedures.”
“The degree of revalidation depends on the nature of the change.”
Sharing Knowledge
![Page 93: Validasi dan Verifikasi Metode Analisis](https://reader031.vdocuments.site/reader031/viewer/2022033003/56816565550346895dd7f114/html5/thumbnails/93.jpg)
93
Terima Kasih
Mochammad YuwonoFakultas Farmasi Universitas Airlangga, Surabaya
E-mail: [email protected]
Sharing Knowledge