Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1747

Artigo

Validaccedilatildeo de Meacutetodo Analiacutetico para a Quantificaccedilatildeo de

Paracetamol em Soluccedilatildeo Oral por Espectrofotometria no UV

Junior E J A G Roeder J S Oliveira K B L Ferreira M P Silva J

G

Rev Virtual Quim 2017 9 (4) 1747-1759 Data de publicaccedilatildeo na Web 26 de junho de 2017

httprvqsbqorgbr

UV Spectrophotometry Analytical Method Validation for Quantification

of Paracetamol in Oral Solution

Abstract In the present article it is described the validation of a simple precise accurate rapid and low-cost UV spectrophotometric method for quantification of paracetamol in oral solution The method was linear in the range between 64 ndash g L-1 presenting a good o elatio oeffi ie t = a d ade uate li its of ua tifi atio g L-

1 a d dete tio g L-1) Precision and analysis showed low coefficient of variation (lt 50) and a good average recovery percentual (10346 - reference and 10276 - generic) was obtained The method was applied for paracetamol determination in two oral solutions and these results are in good accordance with the declared values of manufacturer at a 95 confidence level

Keywords Paracetamol UV Spectrophotometry Pharmaceutical formulations

Resumo

O presente artigo descreve a validaccedilatildeo de um meacutetodo espectrofotomeacutetrico UV simples preciso raacutepido e de baixo custo para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral O meacutetodo foi linear na faixa de 64 - g L-1 apresentando um bom coeficiente de o elaccedilatildeo li ea = e li ites de ua tifi accedilatildeo g L-1 e dete ccedilatildeo g

mL -1) satisfatoacuterios O estudo de precisatildeo apresentou baixo coeficiente de variaccedilatildeo (lt 50) e um bom percentual meacutedio de recuperaccedilatildeo (10346 - referecircncia e 10276 - geneacuterico) foi obtido O meacutetodo foi aplicado na quantificaccedilatildeo do paracetamol em duas soluccedilotildees orais e os resultados foram concordantes com os valores declarados pelos fabricantes a um niacutevel de confianccedila de 95

Palavras-chave Paracetamol Espectrofotometria no UV formulaccedilotildees farmacecircuticas

Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia Curso de Quiacutemica QS 07 lote 01 EPCT Aacuteguas Claras CEP 71966-700 Taguatinga-DF Brasil

jonatasgyahoocombr DOI 10215771984-683520170101

Volume 9 Nuacutemero 4

Revista Virtual de Quiacutemica

ISSN 1984-6835

Julho-Agosto 2017

1748 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Validaccedilatildeo de Meacutetodo Analiacutetico para a Quantificaccedilatildeo de

Paracetamol em Soluccedilatildeo Oral por Espectrofotometria no UV

Enock Joseacute A G Junior Jakson S Roeder Kaiky B L Oliveira Mateus P

Ferreira Jonatas G da Silva

Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia Curso de Quiacutemica QS 07 lote 01 EPCT Aacuteguas Claras CEP 71966-700 Taguatinga-DF Brasil

jonatasgyahoocombr

Recebido em 9 de maio de 2017 Aceito para publicaccedilatildeo em 21 de junho de 2017

1 Introduccedilatildeo

2 Parte Experimental

3 Resultados e Discussatildeo

4 Conclusatildeo

1 Introduccedilatildeo

O paracetamol (PAR) tambeacutem conhecido como acetaminofeno (Figura 1) eacute um faacutermaco amplamente utilizado sem prescriccedilatildeo meacutedica como antipireacutetico analgeacutesico e anti-inflamatoacuterio leve como uma alternativa a Aspirinareg sendo um agente eficaz e empregado para reduzir a febre e aliviar a dores de cabeccedila dente lombar musculares artrite e poacutes-operatoacuteria O uso controlado e limitado do PAR eacute seguro

natildeo apresentando efeito secundaacuterio prejudicial No entanto uma dose elevada ou o seu uso prolongado pode causar efeitos adversos para a sauacutede devido agrave acumulaccedilatildeo de metaboacutelitos toacutexicos podendo levar a hepatotoxicidade e nefrotoxicidade graves e agraves vezes fatais1-3 Portanto eacute importante desenvolver e validar meacutetodos analiacuteticos simples raacutepidos sensiacuteveis e precisos para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas gerando assim resultados confiaacuteveis no controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica

Figura 1 Estrutura quiacutemica do paracetamol

HO

N

O

H

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1749

Satildeo descritos na literatura para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas diferentes meacutetodos analiacuteticos como espectrofotomeacutetrico45 espectrofluorimeacutetrico6 cromatograacutefico7-9 e voltameacutetrico1011 Para o doseamento de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas a farmacopeia brasileira12 descreve um meacutetodo baseado em medidas espectrofotomeacutetricas como oficial No meacutetodo descrito pela farmacopeia brasileira a quantificaccedilatildeo do paracetamol em soluccedilatildeo oral eacute realizada a partir dos valores das absorbacircncias de uma uacutenica soluccedilatildeo padratildeo (com concentraccedilatildeo igual a da formulaccedilatildeo farmacecircutica) e da soluccedilatildeo oral empregando-se como solvente o metanol Enquanto que no meacutetodo proposto nesse artigo a quantificaccedilatildeo do paracetamol seraacute por meio de uma curva analiacutetica empregando-se como solvente o etanol podendo ser utilizado no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas

A espectrofotometria na regiatildeo do ultravioleta (UV) eacute amplamente aplicada na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de faacutermacos em formulaccedilotildees farmacecircuticas sendo utilizada principalmente no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas pois cumpre requisitos essenciais para as anaacutelises de rotina como rapidez baixo custo operacional e confiabilidade dos resultados1314 Satildeo encontrados na literatura alguns exemplos do emprego da espectrofotometria na regiatildeo do UV na quantificaccedilatildeo de faacutermacos como carvedilol13 efavirenz14 sinvastatina15 aciclovir16 olanzapina17 e fluoxetina18 em formulaccedilotildees farmacecircuticas

A validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos eacute necessaacuteria para gerar resultados confiaacuteveis no contexto do controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica pois deve-se assegurar por meio de estudos experimentais que o meacutetodo atenda agraves exigecircncias analiacuteticas assegurando a confiabilidade dos resultados Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico os seguintes paracircmetros (figuras analiacuteticas de meacuterito) devem ser avaliados seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de

detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez19

Portanto a validaccedilatildeo de um meacutetodo simples preciso raacutepido e de baixo custo para a anaacutelise de rotina de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas eacute importante devido agrave grande utilizaccedilatildeo desse faacutermaco e seus efeitos adversos para a sauacutede humana Nesse contexto o presente trabalho tem como objetivo validar um meacutetodo empregando a espectrofotometria na regiatildeo do UV para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

2 Parte Experimental

Equipamentos

As medidas espectrofotomeacutetricas no UV foram realizadas em triplicata utilizando-se o espectrofotocircmetro UV-Vis Cary 50 (Varianreg) de duplo feixe detector de 190 a 1100 nm cubetas de quartzo de 1 cm e acoplado a um microcomputador Todas as medidas de massa foram realizadas em balanccedila analiacutetica semi- i o σ le g AUW D (Shimadzureg)

Reagentes soluccedilotildees e amostra

Todos os reagentes utilizados foram de grau analiacutetico e as soluccedilotildees foram preparadas em aacutegua ultrapura (Direct-Qreg 8 UV Smart Millipore 1 Ω O pad atildeo de PAR -101 foi adquirido da sigma-aldrich (USA) e utilizado sem purificaccedilatildeo adicional A soluccedilatildeo estoque de PAR 1 mg mL-1 foi preparada dissolvendo-se 10 mg de PAR em aacutegua ultrapura em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O aacutecido cloriacutedrico (HCl) 37 e o etanol absoluto 998 foram adquiridos da Vetec (Brasil) A soluccedilatildeo de HCl 01 mol L-1 foi preparada por diluiccedilatildeo em aacutegua ultrapura A soluccedilatildeo oral contendo PAR foi adquirida em comeacutercio local

Junior E J A G et al

1750 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico

O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International

Conference on Harmonisation of Technical

Requirements for Registration of

Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol

Seletividade

A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina

soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g

mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais

L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1

Linearidade e intervalo

A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)

Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21

Fonte SQ GL MQ Fcalculado

Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr

Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)

Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep

Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)

Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de

medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1751

Limites de detecccedilatildeo (LD) e de

quantificaccedilatildeo (LQ)

Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219

LD = DPa IC

(1)

LQ = DPa IC

(2)

O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22

Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)

DPa= S radic Σ i

Σ( i - ) (4)

Precisatildeo

A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para

Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

CV = DPCMD

(5)

Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada

Exatidatildeo

A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo

Robustez

A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico

proposto

Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida

Junior E J A G et al

1752 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Anaacutelises estatiacutesticas

A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg

3 Resultados e Discussatildeo

Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR

Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo

oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de

200 250 300 350 400

00

02

04

06

08

10

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

max

= 250 nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1753

absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido

pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas

concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR

Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)

A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io

iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a

Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e

Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95

200 250 300 350 400

00

04

08

12

16

20

Ab

so

rbacircn

cia

Comprimento de onda nm

Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

1750 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico

O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International

Conference on Harmonisation of Technical

Requirements for Registration of

Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol

Seletividade

A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina

soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g

mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais

L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1

Linearidade e intervalo

A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)

Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21

Fonte SQ GL MQ Fcalculado

Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr

Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)

Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep

Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)

Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de

medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1751

Limites de detecccedilatildeo (LD) e de

quantificaccedilatildeo (LQ)

Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219

LD = DPa IC

(1)

LQ = DPa IC

(2)

O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22

Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)

DPa= S radic Σ i

Σ( i - ) (4)

Precisatildeo

A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para

Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

CV = DPCMD

(5)

Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada

Exatidatildeo

A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo

Robustez

A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico

proposto

Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida

Junior E J A G et al

1752 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Anaacutelises estatiacutesticas

A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg

3 Resultados e Discussatildeo

Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR

Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo

oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de

200 250 300 350 400

00

02

04

06

08

10

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

max

= 250 nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1753

absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido

pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas

concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR

Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)

A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io

iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a

Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e

Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95

200 250 300 350 400

00

04

08

12

16

20

Ab

so

rbacircn

cia

Comprimento de onda nm

Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1751

Limites de detecccedilatildeo (LD) e de

quantificaccedilatildeo (LQ)

Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219

LD = DPa IC

(1)

LQ = DPa IC

(2)

O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22

Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)

DPa= S radic Σ i

Σ( i - ) (4)

Precisatildeo

A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para

Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

CV = DPCMD

(5)

Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada

Exatidatildeo

A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo

Robustez

A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico

proposto

Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida

Junior E J A G et al

1752 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Anaacutelises estatiacutesticas

A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg

3 Resultados e Discussatildeo

Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR

Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo

oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de

200 250 300 350 400

00

02

04

06

08

10

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

max

= 250 nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1753

absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido

pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas

concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR

Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)

A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io

iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a

Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e

Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95

200 250 300 350 400

00

04

08

12

16

20

Ab

so

rbacircn

cia

Comprimento de onda nm

Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

1752 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica

Anaacutelises estatiacutesticas

A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg

3 Resultados e Discussatildeo

Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR

Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo

oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de

200 250 300 350 400

00

02

04

06

08

10

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

max

= 250 nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1753

absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido

pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas

concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR

Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)

A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io

iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a

Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e

Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95

200 250 300 350 400

00

04

08

12

16

20

Ab

so

rbacircn

cia

Comprimento de onda nm

Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1753

absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido

pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas

concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR

Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)

A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io

iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a

Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e

Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95

200 250 300 350 400

00

04

08

12

16

20

Ab

so

rbacircn

cia

Comprimento de onda nm

Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

1754 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica

Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida

Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado

Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670

Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear

Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710

Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste

Total 0155065805 14 0011076129

SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica

A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g

mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral

A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo

PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

63 70 77 84 91 98

056

064

072

080

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g mL-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1755

Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()

64 127 -

1 1 80 144 -

96 165 -

64 093 138

2 2 80 160 161

96 176 434

CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)

Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se

recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica

Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico

Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo

As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os

valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo

240 270 300 330 360 390

00

02

04

06

08

10

-08 -04 00 04 08 12 16068

072

076

080

084

088

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Concentraccedilatildeo g L-1

Ab

so

rbacirc

nc

ia

Comprimento de onda nm

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

1756 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)

Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo

g L-1)

Recuperaccedilatildeo

meacutedia plusmn DP ()

05 10955 plusmn 1007

Referecircncia 10 10334 plusmn 446

15 9745 plusmn 172

Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605

05 11997 plusmn 705

Geneacuterico 10 9459 plusmn 657

15

Meacutedia plusmn DP

9371 plusmn 675

10276 plusmn 1491

n = 3 DP = Desvio padratildeo

Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis

marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5

Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo

dia g L-1) DP CV ()

Marca do etanol absoluto

Dinacircmica 768 001 019 ANOVA

fcalculado = 395 ftabelado = 514

Reagen 718 010 147

Vetec 737 005 076

Temperatura

24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190

tcalculado = 0001 ttabelado= 4303

27degC 737 005 076

n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo

A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse

paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1757

opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O

valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas

A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV

Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto

PAR (mg mL-1)

Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()

Referecircncia 200 201 plusmn 5 050

Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050

n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100

O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas

Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11

para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos

4 Conclusatildeo

O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas

Agradecimentos

Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

1758 Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759|

Referecircncias Bibliograacuteficas

1 Zhu W Huang H Gao X Ma H

Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical

Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of

Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced

Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical

Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD

determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of

Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science

2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual

de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and

Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova

2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova

2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo

Junior E J A G et al

Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1759

analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica

Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova

2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova

2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n

o 899 de

29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human

Use Q 2B- validation of Analytical procedure

methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica

Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical

Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]