v1: antikörper untersuchung in stichproben - ein ideales .... riemser dia-tage/wolf.pdf ·...
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1
V1: Antikörper Untersuchung in Stichproben -
ein ideales Instrument für die BVDV-Tilgung?
TankmilchErstlaktationsmilchJungtierfenster
diagnostische Trägheit
Einflussfaktoren: Zeit:
individuell nachweisbare Antikörper 2-3 Wochen
Ansprechen der Stichprobe variabel (Aufstallung ...)
Stichprobenintervall z.B. 6 Monate
GW 1/04
V2: BVD-Virusnachweis im neugeborenen Kalb als einziges Diagnostikum für eine BVDV-Tilgung?
NPI NPI
negativer BVD-VirusnachweisKalb und Mutter sind lebenslang NPIHandelszertifikat über Tierdatenbank abrufbar
positiver BVDV-NachweisKalb ist vorläufig PI, Verbringungsregelung, PI-Bestätigung zu gegebener Zeit, Schlachtung
Untersuchung der Mutter
2
Diagnostik des BVDV-PI-Kalbes mit Blutproben und
mit Ohrstanzproben
[email protected] für Medzinische
Mikrobiologie, Infektions-
und Seuchenmedizin Veterinärstraße 13 D-80539 München
+49 (089) 2180 2533
„Die sichere Definition von BVDV nicht-PI-Tieren, ein lebenslang gültiger Status, spielt bei Tilgungs-programmen für den Tierverkehr eine große Rolle.“
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Tage p.n.
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9 9
Milchaufnahme L/Tag MIN
MAX STD
spontane Milchaufnahme aus Tränkeeimer
5‘UTRNproKapsid
ErnsE1E2p7NS2/3
(p80)......3‘UTR
Methoden
Antigen-fängerELISAs
Virusisolierung auf primären Zellen (IF)
RT-PCR (Bern, Stendal, Riems)
Immunhistologie eigen & Zürich
S i d e s c a t t e r
Al
ex
a-
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sz
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(F
L1
)
F L 1
#
of
C
el
ls
W B 1 0 3 / 1 0 5
Leukozyten-IF (FACS)
Virusneutrali-sationstestauf primären
Zellen (IF)
Antikörper ELISAs:indirekter Test; p80-blocking-Test
3
kolostraleAntikörper
1E-1
1E0
1E1
1E2
1E3
1E4
Tit
er
p80 (
CE
DI
= 5
0%
Blo
ck)
0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A172 B165 C180 D195 E185 F
G168 H188 I J67 K149
BVDV-PI CR4043
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
% In
hib
itio
n (
EL
ISA
)
0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tag p.n.
A172 B165 C180 D195 E185 F
G168 H188 I J67 K149
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
NS2/3-Antikörper (CEDI p80 blocking)
1E-1
1E0
1E1
1E2
1E3
1E4
Tit
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p8
0 (
CE
DI
= 5
0%
Blo
ck
)
0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A172 B165 C180 D195 E185 F
G168 H188 I J67 K149
BVDV-PI CR4043
-10%
10%
30%
50%
70%
90%
110%
130%
150%
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0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
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ilch
au
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me L
/Tag
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Tage p.n.
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9
9
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Milchaufnahme L/Tag MIN
MAX STD
spontane Milchaufnahme aus Tränkeeimer
BVDV-Isolierung aus Leukozyten
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
2
"Tit
er"
10
e-X
WB
C =
TC
ID5
0
0 14 28 42 56 70 Tage p.n.
BVDV-Isolierung
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)
BVDV-Isolierung (log 10, Doppelansatz)
neg.
-6,5
-5,5
-4,5
-3,5
-2,5
-1,5
-0,5
0,5
1,5
2,5
10e-X
WB
C =
TC
ID50
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 Tage p.n.
Agnes Benni Chrissi Dany Edi Finni
Gina Hansi Ikarus Judith Karli
BVDV-Isolierung aus Leukozyten
log10; rechnerisch 0:= 1 Leukozyt
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
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"Tit
er"
10
e-X
WB
C =
TC
ID5
0
0 14 28 42 56 70 Tage p.n.
BVDV-Isolierung
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)
BVDV-Isolierung (log 10, Doppelansatz)
neg.
4
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
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ch
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 day after birth
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9
9 9
9
9
9
9
9 9
9 9
9 9
Milchaufnahme L/Tag MIN
MAX STD
Milchaufnahme L/Tag
1E-1
1E0
1E1
1E2
1E3
1E4
Tit
er
p8
0 (
CE
DI
= 5
0%
Blo
ck
)
0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A172 B165 C180 D195 E185 F
G168 H188 I J67 K149
BVDV-PI CR4043
-10%
10%
30%
50%
70%
90%
110%
130%
150%
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oll
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0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
Immunfluoreszenz (FACS)
-5%
5%
15%
25%
35%
45%
55%
% W
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5 p
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Milc
ha
ufn
ah
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L/T
ag
0 7 14 21 28 35 42 49 Tage p.n.
Lymphozyten Granulo-/Monoz. Milch Tag 1-14
Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69)
Kolostrum & BVDV-Antigen in WBC
Immunfluoreszenz (FACS)
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
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0 (
CE
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= 5
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Blo
ck
)
0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A172 B165 C180 D195 E185 F
G168 H188 I J67 K149
BVDV-PI CR4043
-10%
10%
30%
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110%
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150%
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0 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 154 168 182 196 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
-5%
5%
15%
25%
35%
45%
55%
% W
B1
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/10
5 p
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itiv
e W
BC
0
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Mil
ch
au
fna
hm
e L
/Ta
g
0 7 14 21 28 35 42 49 Tage p.n.
Lymphozyten Granulo-/Monoz. Milch Tag 1-14
Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69)
Kolostrum & BVDV-Antigen in WBC
-0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
% W
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/10
5 IF
-po
sit
iv
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische Lücke
NS2-3 in Monoz./neutroph. Granuloz.
cut off 1%-0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
% W
B1
03
/10
5 IF
-po
sit
iv
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeBVDV-NS2-3 in Lymphozyten
cut off 1%
-5%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
60%
% N
S2
/3 IF
po
sit
ive
WB
C
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 98 Tage p.n.
Lymphozyten Granulo-/Monoz.
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)BVDV NS2/3 in Leukozyten
1% cut off
5
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
Antigen-Fänger
ELISAs p80
-10%
10%
30%
50%
70%
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110%
130%
150%
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0 14 28 42 56 70 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
-0%
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30%
40%
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% W
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5 I
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0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische Lücke
NS2-3 in Monoz./neutroph. Granuloz.
cut off 1%
-10%
40%
90%
140%
190%
240%
290%
340%
EL
ISA
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0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Alter (Tage)
Agnes Benni Chrissi Dany Edi Finni
Gina Hansi Ingo Judith Karli
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
o p80
BVDV-Erns im Serum/Plasma
-10%
10%
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70%
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130%
150%
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0 14 28 42 56 70 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
-10%
40%
90%
140%
190%
240%
290%
340%
EL
ISA
%-W
ert
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Alter (Tage)
Agnes Benni Chrissi Dany Edi Finni
Gina Hansi Ingo Judith Karli
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
o p80
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
OD
( -
µ n
eg
.KO
)
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeTest cc Erns Serum 4°C
cut off
6
BVDV-Antigen (polyklonaler
capture ELISA) Serum/Plasma
-10%
10%
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70%
90%
110%
130%
150%%
-Wert
rel. z
u P
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0 14 28 42 56 70 Tage p.n.
A33 B32 C20 D39 E46 F35
G20 H28 I36 K15 J~4
BVDV-CR4043 - PI-Tiere
BVDV-Antikörper ind. ELISA Barvac
-10%
40%
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190%
240%
290%
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EL
ISA
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0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Alter (Tage)
Agnes Benni Chrissi Dany Edi Finni
Gina Hansi Ingo Judith Karli
BVDV-NS2/3 in Leukozyten
o p80
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
OD
( -
µ n
eg
.KO
)
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeTest cc Erns Serum 4°C
cut off
-10%
40%
90%
140%
190%
EL
ISA
%
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeBVDV-Antigen, capture polyklonal
cut off
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
OD
( -
µ n
eg
.KO
)
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105)Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeTest cc Erns Serum 4°C
cut off
-10%
40%
90%
140%
190%
EL
ISA
%
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 Tage p.n.
Agnes (BVDV-1 CR4043 dG 97-104) Benni (BVDV-1 CR4043 dG 84-91) Chrissi (BVDV-1 CR4043 dG 83-90)
Dany (BVDV-1 CR4043 dG 54) Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69) Finni (BVDV-1 CR4043 dG 56-63)
Gina (BVDV-1 CR4043 dG 52-59) Hansi (BVDV-1 CR4043 dG 43-50) Ingo (BVDV-1 CR4043 dG 40-47)
Judith (BVDV-1 CR4043 dG 98-105) Karli (BVDV-1 CR4043 dG 97-104)
BVDV-CR4043: diagnostische LückeBVDV-Antigen, capture polyklonal
cut off
-5%
0%
5%
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30%
35%
40%
45%
50%
55%
% W
B103/1
05 p
osit
ive W
BC
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
EL
ISA
OD
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77
day after birth
Lymphozyten Granulo-/Monoz.
Test cc Erns Serum -20°C
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)Test cc Erns Serum -20°C
1% cut off
-5%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
% W
B1
03
/10
5 p
os
itiv
e W
BC
-10%0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%110%120%130%140%150%160%170%180%190%200%
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77
Tage p.n.
Lymphozyten Granulo-/Monoz.
test dd Erns Serum -20°C
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)test dd Erns Serum -20°C
30% cut off
BVDV-Antigen-capture ELISA Serum/Plasma Erns polyklonal
7
PCR mit Leukozyten-Pellets (Riems): analog BVDV-Isolierung aus Leukozyten
-6,5
-5,5
-4,5
-3,5
-2,5
-1,5
-0,5
0,5
1,5
2,5
10
e-X
WB
C =
TC
ID5
0
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70
Tage p.n.Agnes Benni Chrissi Dany
Edi Finni Gina Hansi
Ikarus Judith Karli Ayla (PT810)
BVDV-Isolierung aus Leukozyten
log10; rechnerisch 0:= 1 Leukozyt
PCR mit Serum/Plasma (Stendal)
-5%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
60%
% W
B1
03
/10
5 p
os
itiv
e W
BC
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
2
10
e-X
WB
C =
TC
ID5
0
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 98
day after birth
lymphocytes granulo-/monoc. BVDV-isolation
Edi (BVDV-1 CR4043 dG 62-69)
WBC: BVDV-NS2/3 and BVDV-isolation
1% cut off
Ct-Wert Leukos: 26,6Serum/Plasma: >38
ct-Werte (N=6 Kälber)
Lücke nachher ∆∆∆∆Leukos: 27,2 22,0 5,2Serum: 35,1 26,8 8,3Plasma: 34,7 25,7 9,0
Untersuchungsmaterial getrocknete Ohrstanze
GW 1/04
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
OD
-Wert
e
0 7 14 21 28 35 42 49 Tage p.n.
A B C D E F G H I J K
BVDV-PI (BVDV-1 CR4043)
Ohrstanze Erns OD
Kälber:
cut off 0,30
oben: ACEplus
unten: ACE
BVDV-Ernscapture ELISA
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
OD
( -
µ n
eg
.KO
)
0 7 14 21 28 35 42 49 Tage p.n.
BVDV-CR4043: diagnostische LückeTest cc Erns Serum 4°C
cut off
-5%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
% W
B1
03
/10
5 p
os
itiv
e W
BC
-0,1
0,4
0,9
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
4,4
4,9
EL
ISA
OD
0 7 14 21 28 35 42 49
day after birth
Lymphozyten Granulo-/Monoz.
Test cc Erns Serum -20°C
Ayla (BVDV-1 PT810 dG 81)Test cc Erns Serum -20°C
1% cut off
?; ?; ?; ?; AylaAylaAylaAyla
geb.geb.geb.geb.
7.3.19947.3.19947.3.19947.3.1994
A-Kgeb. 2003/2004
8
Diagnostikprojekt Ohrstanze & BVDV:(BVDV-CR4043 - Studie TSK Bayern, BMVEL)
IRG 9/05
Test Analyt Titer Varianz Ak-Einfluss
A/B/C p80=NS3 4 hoch ++++
D Erns 32 gering ++
E/F polyklonal 50 gering ++
G 5‘UTR-PCR 1-10 4 sehr hoch -
H 5‘UTR-PCR 0-10 3 sehr hoch -
G€ 5‘UTR-PCR 10 3,5 gering (?) -
Test Analyt Titer Varianz Ak-Einfluss unsp.I.
A/B/C p80=NS3 4 hoch ++++
D Erns 32 gering ++ ??
E/F polyklonal 50 gering ++ ??
G 5‘UTR-PCR 1-10 4 sehr hoch -
H 5‘UTR-PCR 0-10 3 sehr hoch -
G€ 5‘UTR-PCR 10 3,5 gering (?) - ??
BVDV-Isolierung 10----------30
GW 9/05
0 1 2 3 4 5 6 7 .10..14......30...40..........60.........90......
PCR Serum 3-------------------------------40 PCR Leukos keine Lücke bei Einzelproben (?)Erns/pol. 1-----------------------------------------------60NS2/3 (1)...3-----------------------------------------------------90..(200)
5‘UTRNproKapsid
ErnsE1E2p7NS2/3
(p80)......3‘UTR
BVDV: Diagnostische Lücke bei Blutproben
9
NS2/3 1---------------------------------------------------------90..(200)
GW 9/05
0 1 2 3 4 5 6 7 .10..14......30...40..........60.........90......
PCR keine LückeErns/pol.1-----------? keine Lücke?----------------60
5‘UTRNproKapsid
ErnsE1E2p7NS2/3
(p80)......3‘UTR
BVDV: Diagnostische Lücke bei Ohrstanzen
Immunhistologie keine Lücke
Danke für‘s Zuhören!
Tierpfleger:Hans DöringHans KluschAxel Groß
Labor-TAs:Astrid FreudensteinMichaela ReisigeHilke HubertGudrun Matschke
Tierärzte:Ilona MoßbruggerRobert Fux.....
Kooperationen:Martin Beer
Wolfgang GaedeFelix Ehrensperger
Ernst Peterhansund Mitarbeiter
Sponsoren: Bayerische TSK
BMVEL Bonnalle Hersteller
von Testkits
[email protected] für Medzinische Mikrobiologie, Infektions- und Seuchenmedizin