Dr sc Julija Erhardt, Zavod za animalnu fiziologiju, BO, PMF,

Zagreb

Uvod u znanost o laboratorijskim životinjama

Zašto istražujemo na životinjama?

• Biomedicinska istraživanja • Organizam je puno više nego suma njegovih dijelova, da bi se dobila

cjelokupna slika, ne možemo izbjeći finalnu provjeru koncepta donešenih in vitro u in vivo uvjetima.

Nobelova nagrada za fiziologiju i medicinu - u 75/98 eksperimentiranje na životinjama

UVOD

• Razumijevanje funkcioniranje organizma – Osnovni stanični procesi slični kod svih životinja. – Vitalne funkcije

• Modeli za proučavanje bolesti

– Životinje i ljudi dijele stotine zajedničkih bolesti

• Razvijanje potencijalnih terapeutika – Mnogi dijagnostički alati, implanti, te kirurške procedure koje se danas

koriste razvijene koristeći životinje

• Radi zaštite ljudi, životinja – Novi lijekovi moraju proći testiranje na životinjama. – Podaci o efikasnosti i sigurnosti.

Zašto istražujemo na životinjama?

• Testiranje sigurnosti proizvoda - kemikalija za široku uporabu, kozmetike, pesticida...

Zašto istražujemo na životinjama?

Draize test

• Edukacija 20 mil/godišnje USA Zakon o zaštiti životinja, NN 135/06, 37/13 - na snazi od 05.04.2013. Članak 29. (1) U obrazovne svrhe ne smiju se obavljati pokusi na životinjama koji uzrokuju bol, patnju i ozljedu ili smrt životinje. (2) Iznimno od odredbe stavka 1. ovoga članka, nadležno tijelo može odobriti pokuse ako se izvode u visokoškolskim ili znanstvenoistraživačkim ustanovama i ako su neophodni za obrazovanje veterinara, liječnika, stručnjaka farmaceutsko-biokemijske struke, agronoma – stočara, biologa i stomatologa te ako se zadovoljavajući rezultati ne mogu postići drugim nastavnim pomagalima (npr. kompjutorske simulacije, filmovi, slike, modeli, preparati i sl.), uz uvjet da se za svaku skupinu smije upotrijebiti samo jedna životinja.

PhysioEx, BioPac, http://www.teachkind.org/humanesci_digital-frog.asp, http://www.tactustech.com/vfrog/, http://anatomyinclay.com/, http://www.sheffbp.co.uk/sbpmain.htm,

3 R „Reduction” „Refinement” „Replacement”

DOBROBIT („wellfare”) – VRIJEDNOSTI temeljne vrijednosti uvjeti prirodnog okruženja

Russel i Burch, 1959. god „Principi humanih eksperimentalnih tehnika“

4-ti R „Rehabilitation”

Povijest istraživanja na životinjama u svijetu

• Stara Grčka - „Corpus Hippocraticum”, 400. god p.n.e.

• Stari Rim – Galen 2 st. , liječnik, kirurg i filozof • Glavni interes anatomija - vivisekcije

• Avenzoar, 12 st. Arapski liječnik i kirurg iz Andaluzije Kirurške metode testirao na životinjama prije nego ih je izvodio na ljudima.

• Vesalius, 15 st. „De Humani Corporis Fabrica”

• Rene Decartes (1596-1650) – sposobnost osjećaja i mišljenja pripada isključivo čovjeku

Povijest...

• 17. st. Fiziološki procesi

• 1628. William Harvey opisao krvotok gdje je srce pogonska pumpa do tada Galenov opis rada srca, arterija i vena

• Edmund O’Meara „nedostojno i jadno mučenje životinja pri vivisekciji dovodi tijelo životinje u neprirodno stanje”.

• Životinje previše različite od čovjeka i inferiorne, te se rezultati dobiveni na životinjama ne mogu primjenjivati na ljudima.

Povijest ...

• 18. st. - Prihvaćeno mišljenje da eksperimentiranje na životinjama doprinosi napretku medicine.

• Francois Magendie (1783-1855) – otac moderne fiziologije procesi koji se dešavaju u tijelu rezultat međusobnog djelovanja više organa. („notorious vivisector”)

• Jeremy Bentham 1789. god. „Uvod u principe morala

i legislative“ postavlja pitanja „The question is not, can they reason? Nor, can they talk? but, can they suffer?“

Povijest ...

• 19. st. • Prvi pokreti protiv vivisekcije • Prvo udruženje za zaštitu životinja (1824 Richard Martin, SPCA – Society for

the prevention of Cruelty to Animals) • Prvi zakon o zaštiti životinja u pokusima „Cruelty to animals act”, 1876.

god. (311 životinja korišteno u pokusima 1880. god do preko 95 000 u 1910. god)

• Claude Bernard (1813-1878) – „prince of vivisectors”, smatra da je testiranje na životinjama neophodno za unaprijeđenje biologije i medicine („science of life is a superb and dazzling lighted hall which may be reached only by passing through a long ghastly kitchen”)

• Otkriće anestezije, sofisticiranijih kirurških procedura, itd. - pokusi sve

brojniji. (1882. otkriće uzročnika tuberkuloze, 1894. uzročnik difterije)

Povijest ...

• 20. st. • „Brown Dog Affair” – politička kontroverza oko

vivisekcije koja je potresala Englesku 1903-1910. William Bayliss izveo nelegalnu disekciju pred studentima

• Procvat uzgoja srođenih malih glodavaca, • 1960.: 30 mil. kralješnjaka korišteno u istraživanjima • 1970.: 100 – 200 milijuna • Od 1980.

• Procjena danas

– u svijetu oko 100 milijuna – u Europi 10-11 milijuna

Povijest ...

Title Animal(s) Whooping cough (pertussis) vaccine Mouse, Rabbit Stroke Other or unspecified rodents, Primates Spinal cord injury Mouse, Rat, Dog Schistosomiasis Mouse, Other or unspecified rodents, Primates Prostate cancer Rat Parkinson's Disease Mouse, Mouse (knockout/GM), Rat Muscular dystrophy Mouse, Dog Multiple sclerosis Mouse, Mouse (knockout/GM), Rat Motor neurone disease (amyotropic lateral sclerosis)

Mouse (knockout/GM), Rat

Malaria Mouse, Mouse (knockout/GM), Goat, Primates Leukaemia Mouse, Rabbit Leishmaniasis Mouse, Dog Influenza Mouse, Rat, Ferret, Dog, Sheep Huntington's disease Mouse (knockout/GM), Hamster HIV/AIDS Prophylaxis Primates Drugs to control transplant rejection Mouse, Rabbit, Cat, Dog Drugs for high blood pressure Mouse, Rat, Cat, Dog Down's Syndrome Mouse, Mouse (knockout/GM) Deafness Mouse, Guinea pig, Ferret, Cat, Dog, Chicken

Cystic fibrosis

Mouse, Mouse (knockout/GM), Rat, Sheep, Primates

Cardiac arrest & ventricular fibrillation

Dog, Other or unspecified mammals (non-rodent/non-primate)

BSE & CJD Mouse, Hamster, Primates Breast cancer Mouse, Rat, Primates Botulinum Toxin Mouse Bone and joint disease Mouse, Mouse (knockout/GM), Sheep Blindness Mouse, Mouse (knockout/GM), Rat Asthma Mouse, Rat Antidepressants Mouse, Rat, Primates Anticoagulants Mouse, Rabbit, Guinea pig, Dog

Anaesthetics

Rat, Other or unspecified rodents, Rabbit, Cat, Dog, Primates

Alzheimer's disease Mouse (knockout/GM) AIDS & HIV Mouse, Primates

20. st.

Lijekovi povučeni s tržišta

Talidomid Viox TGN1412

• Kraj 19 st. Bjelovar cjepiva protiv velikih boginja (telad, goveda) • 1901. god. Križevci, Veterinarski bakteriološki zavod • 1912. god. Zagreb, Kraljevski zemaljski bakteriološki zavod • 1920. god. Zagreb, Serumski zavod • 1933. god. Split, Bakteriološka stanica • 1847. god. Zagreb, Institut za medicinska istraživanja • 1950. god. Zagreb, Imunološki zavod

• Prvo srođivanje štakora i miševa - Prof Borislav Nakić (AGA, Y59)

Povijest istraživanja na životinjama u Hrvatskoj

Sadašnjost

• Porast interesa za netradicionalne modele

Danio sp., Xenopus sp.

Sadašnjost i budućnost ...

REPLACEMENT

• Sekvencioniranje i manipulacija genoma – Izmjena genetskog sastava bioloških modela

• Bioinformatika – izvući maksimum iz postojećih baza podataka

Znanost o laboratorijskim životinjama - danas

• Multidisciplinarnost – Proučavanje biologije, genetike, postupci standardizacije

(genetske, mikrobiološke), prevencija, liječenje, optimizacija eksperimentalnih procedura, uvjeti anestezije, eutanazije. Uvjeti držanja, uzgoja, itd.

• AALAS - „American Association for Laboratory Animal Science“ , 50-te god 20.st.

• FELASA - „Federation of European Laboratory Animal Science Association“, 1978. god. 18 sastavnica u 24 zemlje

• CROLASA - „Croatian Laboratory Animal Science Association“, 1981. god, 2004 članica FELASE.

• ICLAS - „International Council for Laboratory Animal Science“, 40 zemalja

• ANZCCART, JALAS, SAALAS, CALAS, ...

Organizacije i udruženja...

• PETA – People for the ethical Treatment of animals • BUAV – British Association for Abolition of vivisection • Prijatelji životinja

Organizacije i udruženja...

Kako još koristimo životinje … 2011 u UK

Istraživanja: 3,5 milijuna životinja Prehrana: 2 500 milijunaživotinja Psi lutalice 100 000 (7000 se usmrti) Psi i mačke ubijene u prometu: 100 000 Deratizacija : procjena najmanje 2 000 000 živ. Procjena da je 220 milijuna divljih životinja uhvaćeno i ubijeno

godišnje

• Hrvatski sabor je na sjednici u prosincu 2006. donio ODLUKU O PROGLAŠENJU ZAKONA O ZAŠTITI ŽIVOTINJA.

• Prema članku 32. ovog zakona pokuse na životinjama, postupke pri proizvodnji bioloških pripravaka i kirurške zahvate na životinjama mogu obavljati veterinari, liječnici, farmaceuti, medicinski biokemičari, stomatolozi, agronomi stočari ili biolozi, ako imaju položen ispit za rad sa životinjama.

• Pravilnik Ministarstva poljoprivrede, „O ZAŠTITI ŽIVOTINJA KOJE SE KORISTE U POKUSIMA ILI U DRUGE ZNANSTVENE SVRHE“, (NN 47/11), „Program osposobljavanja osoba koje rade s pokusnim životinjama i životinjama za proizvodnju bioloških pripravaka“,

ZAKONSKI OKVIR TEČAJA

• Ispit za rad s pokusnim životinjama • Članak 32. (NN 37/13) • (1) Pokuse i postupke pri proizvodnji bioloških pripravaka mogu provoditi

veterinari, liječnici, farmaceuti, medicinski biokemičari, stomatolozi, agronomi stočari, biotehnolozi ili biolozi, ako imaju položen ispit za rad sa životinjama.

• (2) Kirurške zahvate na životinjama tijekom pokusa i pri proizvodnji bioloških pripravaka mogu provoditi veterinari, ako imaju položen ispit iz stavka 1. ovoga članka.

• (3) Iznimno od stavka 2. ovoga članka, kirurške zahvate tijekom pokusa mogu provoditi i liječnici, farmaceuti, medicinski biokemičari, stomatolozi, agronomi stočari, biotehnolozi ili biolozi i to na laboratorijskim životinjama: mišu, štakoru, zamorcu, zlatnom hrčku, kineskom hrčku, mongolskom skakaču, žabi i zebrici, ako imaju položen ispit iz stavka 1. ovoga članka.

• (4) U slučaju kada kirurški zahvat iz stavka 3. ovoga članka ne provodi veterinar, odgovorna osoba za zaštitu životinja mora biti veterinar.

• (5) Program ispita iz stavka 1. ovoga članka propisuje ministar pravilnikom.

Iz novog zakona …

• 1. Osposobljavanje osoba koje se brinu o životinjama (u objektima za uzgoj životinja, u objektima za opskrbu životinjama ukoliko u njima životinje borave, u pravnim osobama za provođenje pokusa na životinjama te pravnim ili fizičkim osobama za proizvodnju bioloških pripravaka. Minimalna satnica predviđena za ovo osposobljavanje je 30 sati.

• 2. Osposobljavanje osoba koje provode pokuse na životinjama te odgovorne osobe kao i voditelja nastambi za životinje i njihovih zamjenika. Minimalna satnica predviđena za ovo osposobljavanje je 60 sati.

• 3. Osposobljavanje voditelja pokusa i njegova zamjenika. Minimalna satnica predviđena za ovo osposobljavanje je 60 sati.

• 4. Osposobljavanje osobe odgovorne za zaštitu životinja odnosno doktora veterinarske medicine odgovornog za zaštitu životinja. Minimalna satnica predviđena za ovo osposobljavanje je 60 sati.

Nivoi osposobljavanja

Prvi stupanj (a) etiku i propise vezano za smještaj i njegu životinja u pokusima ili za proizvodnju

bioloških produkata. (b) laboratorijske i pokusne životinje: vrste, životni ciklus, ponašanje i reprodukcijske

značajke, osiguranje okoliša primjerenog svakoj vrsti i kategoriji životinja, način usmrćivanja pojedinih vrsta životinja, gospodarenje životinjama te uzgoj i držanje potrebnog broja životinja;

(c) osnove bolesti laboratorijskih i pokusnih životinja; (d) prepoznavanje stresa laboratorijskih i pokusnih životinja; (e) prijevoz životinja.

Kriteriji Ministarstva poljoprivrede

Kriteriji Ministarstva poljoprivrede

• Dodatno za 2. stupanj: • (a) etiku i propise s područja zaštite životinja vezano za provođenje

pokusa na životinjama; • (b) pokusne metode; • (c) značenje sustava smještaja i držanja životinja kao i lokalnog

okoliša za sam pokus; mikrobiološki status životinja; anatomija pokusnih životinja; anestezija, analgezija i drugi postupci za smanjivanje/uklanjanje boli i patnje životinja; upotreba primjernih tehnika i kirurških postupaka.

• • Dodatno za 3 stupanj: • (a) alternativne pokusne metode; • (b) planiranje i provođenje pokusa uz poštivanje koncepta 3R

Kriteriji FELASA-e za kategoriju „C” a) Osoba mora biti prvostupnik ili magistar struke iz područja biomedicinskih disciplina i završiti tečaj od 80 sati osposobljavanja b) U silabusu bi trebalo bi biti uključeno 8 glavnih tema:

1. Biologija i gospodarenje laboratorijskim životinjama 2. Mikrobiologija i bolesti 3. Opasnosti za zdravlje i sigurne ponašanje i procedure u životinjskim nastambama 4. Dizajn i provođenje eksperimenta na životinjama 5. Anestezija, analgezija i eksperimentalne procedure 6. Alternative korištenju životinja 7. Etički aspekti i legislativa 8. Analiza znanstvene literature.

c) Polaznici tečaja moraju imati završni ispit na kraju tečaja d) Dodatni specijalistički trening bi trebao biti omogućen

http://www.felasa.eu/

LabAnim Kategorija 3 - 09-11. svibnja

četvrtak, 09/05. petak, 10/05. subota, 11/05.

9:00-9:45 Julija Erhardt: Uvod u znanost o laboratorijskim

životinjama

Ivna Kocijan: Dobrobit laboratorijskih životinja

Maja Abram: Sigurnost u radu sa Lab. Životinjama

9:45-10:30 Dobrobit i eksperimentalni i humani kraj

Domagoj Đikić: Genetika i standardizacija

10:30-11:00 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

11:00-11:45 Branka Buković Šošić: Zakonodavstvo, pravilnici i

nadležne službe; Sustav praćenja

Ana Galov: Alternative korištenju životinja

Genetika i standardizacija

11:45-12:30 Radovan Fuchs:

Toksikologija 12:30-13:15 Mladen Petrovečki:

Analiza znanstvene literature

Dubravka Švob Štrac: Bol i otklanjanje boli

13;15-14:15 RUČAK RUČAK

14:15-15:00 RUČAK Grupa A: Zebrice eksperimentalno

Domagoj Đikić: Seminar/vježbe,

toksikologija 15:00-15:45 Marko Ćaleta: Komp. Biol. - ribe/ vod./gmazovi

15:45-16:15 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

16:15-17:00 Komparativna biologija - ribe, vodozemci i gmazovi

M. Šrut, A. Štambuk: Predavanje: Zebrice

Julija Erhardt: Seminar: Video (aktivističke grupe)

17:00-17:45 Komparativna biologija – velike životinje i ptice Grupa B: Zebrice

eksperimentalno

17:45-18:30 Komparativna biologija – primati

Kategorija 3 - 16-18. svibnja

četvrtak, 16/05. petak, 17/05. subota, 18/05.

9:00-9:45 Sofija Blažević: Etika u radu

sa LŽ

Bojan Polić: Dobivanje i korištenje transgeničnih

životinja

Željko Grabarević: Praćenje zdravlja i bolesti laboratorijskih životinja 9:45-10:30

10:30-11:00 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

11:00-11:45 Duje Lisičić: Komparativna biologija – mali glodavci i

kunići Nada Oršolić: Životinjski modeli

Dražen Vnuk: Anestezija, analgezija i eutanazija

11:45-12:30 Anestezija, analgezija i

eksperimentalna kirurgija 12:30-13:15 Duje Lisičić: Držanje

životinja, admin. supst. … 13;15-14:15 RUČAK RUČAK RUČAK

14:15-15:00 Vježbe: Eksperimentalni uvod na neživim modelima

Vježbe: Eksperimentalni uvod na neživim modelima

Anestezija, analgezija i eksperimentalna kirurgija

15:00-15:45 Vježbe: video - miš Vježbe: video - miš Seminar: video, kirurgija

15:45-16:15 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

16:15-17:00

Sofija Blažević, Duje Lisičić: Vježbe: miš Vježbe: miš

Utjecaj okoliša na homeostazu i eksp. rez

17:00-17:45 Dubravka Hranilović: Životinjski modeli u

neurobiologiji 17:45-18:30

Kategorija 3 - 23-25. svibnja 2013.

četvrtak, 23/05. petak, 24/05. subota, 25/05.

9:00-9:45 Lidija Bilić-Zulle: Statistika: Planiranje, dizajn i pokusa sa lab

životinjama

Jadranka Bubić: Prehrana i Nabavljanje životinja i lokalna pravila o nastambama i eksp.

Maja Lang Balija: Imunizacija i proizvodnja

antitijela 9:45-10:30

10:30-11:00 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

11:00-11:45 Jadranka Bubić: Nastambe, gospodarenje i briga o lab. živ.

Sofija Blažević: Seminar/vježbe: planiranje, dizajn pokusa.

Maja Lang Balija: Sanitacija

11:45-12:30 Jadranka Bubić: GLP u istraživanju životinja u

laboratoriju ISPIT

12:30-13:15

13;15-14:15 RUČAK RUČAK RUČAK

14:15-15:00 A: Seminar ponašanje Jadranka

Bubić: Grupa B: GLP seminar

Jadranka Bubić: Grupa A:

GLP seminar

B: Seminar ponašanje Podjela diploma,

zaključak, komentari, anketa 15:00-15:45 A: Vježbe:

video - štakor B: Vježbe:

video - štakor 15:45-16:15 PAUZA za kavu/čaj PAUZA za kavu/čaj

16:15-17:00 Sofija Blažević,

Duje Lisičić: Grupa A:

Vježbe: štakor

Lidija Bilić-Zulle: Grupa B:

Statistika seminar /

vježbe

Grupa A: Statistika seminar /

vježbe

Sofija Blažević, Duje

Lisičić:Grupa B: Vježbe: štakor

17:00-17:45

17:45-18:30

Hvala na pažnji