uji efek antihiperglikemia ekstrak n-heksan...
TRANSCRIPT
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK
n-HEKSAN DARI LUMUT HATI(Mastigophora diclados)
DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN
SKRIPSI
ARESTYA OTARI NIM. 109102000035
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA
2013
iv
ABSTRAK
Nama : Arestya Otari
Program Studi : Farmasi
Judu : Uji Efek Antihiperglikemia Ekstrak n-heksan dari Lumut Hati
Mastigophora diclados dengan Metode Induksi Aloksan
Tumbuhan lumut Mastigophora diclados telah diketahui mengandung senyawa-
senyawa fenolik seskuiterpen yang memiliki aktivitas sistotoksik, antioksidan dan
antimikrobial. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak n-heksan
dari Mastigophora diclados dalam menurunkan kadar glukosa darah pada tikus.
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode induksi aloksan secara
intraperitoneal dengan dosis 100mg/kg BB. Penelitian ini dibagi menjadi 6 kelompok
yaitu kelompok I (kontrol normal) tanpa perlakuan, kelompok II (kontrol negatif)
yang hanya diinduksikan aloksan, kelompok III (kontrol positif) diberikan
glibenklamid, kelompok IV dosis 1mg/kg BB Mastigophora diclados, dosis sedang
(10mg/kg BB) dan dosis tinggi (100mg/kg BB). Obat yang digunakan adalah
glibenklamid sebagai pembanding dari ekstrak n-heksan Mastigophora diclados.
Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan sebelum pemberian ektrak dan sesudah
pemberian ekstrak pada hari ke 7, 14, 21 dan 28. Pada dosis 100mg/kg BB
menunjukkan efek penurunan glukosa tertinggi dengan presentase sebesar 64,2%.
Dengan uji statistik ANOVA menunjukkan bahwa dosis 100mg/kg BB tidak berbeda
secara bermakna dengan kontrol positif (p≥0,05).
Kata kunci : Mastigophora diclados, aloksan, glukosa dan glibenklamid.
v
ABSTRACT
Name : Arestya Otari
Program Study : Pharmacy
Title : Antihyperglycemic effect of n-hexane Extract of the Liverwort
Mastigophora diclados on alloxan-induced.
The liverwort Mastigophora diclados has been reported to contain phenolic
sesquiterpene, which have cytotoxic, antioxidant, and antimicrobial properties. The
purpose of this research was to discover the effect of n-hexane-extract of
Mastigophora diclados in lowering blood glucose levels in rats. The method used in
this research is alloxan inducing intraperitoneally a dosage of 100mg/kg BB. The
experiment consisted of three control and three treatment groups: group I (normal
control), group II (negative control), in which diabetes was induced with alloxan but to
which no further treatment was given, group III (positive control) which was given
glibenclamide, and groups IV-VI, which were given low (1mg/kg BB), medium
(10mg/kg BB), and high (100mg/kg BB) doses of Mastigophora diclados extract,
respectively. Glibenclamide was used in group III as standard treatment against which
to compare the effectiveness of n-hexane extract of Mastigophora diclados.
Measurements of blood glucose levels were taken before and after administration of
the extract on days 7, 14, 21, and 28 of the experiment. The high (100mg/kg BB)
dosage proved most effective in reducing glucose levels, reducing them by 64.2%.
ANOVA analysis reveals that results for the high-dosage (100mg/kg BB) group did
not differ significantly from that of the positive control group (p≥0,05).
Keywords: Mastigophora diclados, alloxan, glucose, glibenclamide.
vi
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT atas segala nikmat dan karunia-
Nya sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi. Serta
shalawat dan salam untuk baginda Nabi Muhammad SAW yang membawa petunjuk
bagi umat manusia, semoga kelak kita mendapatkan syafaat beliau.
Skripsi dengan judul “Uji Antihiperglikemia Ekstrak n-heksan dari Lumut
Hati Mastigophora diclados dengan Metode Induksi Aloksan” ini disusun untuk
memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi di Program Studi
Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari
masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi ini terasa sangat sulit bagi penulis untuk
menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Ibu Dr. Azrifitria, M.Si Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu Ismiarni
Komala, M.Sc.,Ph.D.Apt selaku pembimbing kedua, yang memiliki andil besar
dalam proses penelitian dan penyelesaian skripsi saya ini, semoga segala
bantuan dan bimbingan bapak dan Ibu mendapat imbalan yang lebih baik di
sisi-Nya.
2. Prof. Dr. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And. selaku Dekan Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Drs. Umar Mansur, M.Sc.,Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah
Jakarta.
4. Bapak dan Ibu staf pengajar dan karyawan yang telah memberikan bimbingan
dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitar Islam Negerri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
5. Bapak Soesetyo Adie, MM panutan dalam keluarga dan Ibu Siti Aminah
wanita terhebat dalam hidup ini yang selalu memberikan doa, dukungan serta
vii
nasihat. Serta Kakak - kakaku tercinta kk ida dan mba diat yang selalu
memberikan doa dan motivasi.
6. Reza indra yang selalu memberikan semangat, motivasi, doa dan keceriaan
kepada penulis.
7. Teman-teman Farmasi 2009, teman-teman “GK”, terkhusus untuk sahabat-
sahabat terbaik Nida, Migi, Ummu, Qori, Tuty A, Ayu, Isti, Liza, Agung, Dina,
Asiffa, Desi, Devi yang selalu memberikan keceriaan, semangat, bantuan yang
luar biasa tanpa pamrih kepada penulis.
8. Dan kepada seluruh pihak yang telah membantu penulis selama penyusunan
skripsi ini yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu.
Saya menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih banyak kekurangan dan
jauh dari kesempurnaan. Oleh Karena itu, dengan segala kerendahan hati, saya sangat
mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini.
Saya berharap semoga skripsi ini bermanfaat dan dapat member sumbangan
pengetahuan khususnya di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu
kesehatan, Universtas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan pembaca pada
umumnya.
Jakarta, 16 September 2013
Penulis
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .......................................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .............................................. iii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................. iv
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ v
ABSTRAK ........................................................................................................... vi
ABSTRACT ........................................................................................................ vii
KATA PENGANTAR ........................................................................................ viii
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ................... x
DAFTAR ISI ....................................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiii
DAFTAR TABEL ............................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv
BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang Masalah .................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah ........................................................................... 2
1.3 Hipotesis ............................................................................................ 2
1.4 Tujuan Penelitian .............................................................................. 2
1.5 Manfaat Penelitian ............................................................................. 2
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................... 4
2.1 Lumut hati (Mastigophora diclados) ................................................ 4
2.1.1 Klasifikasi.................................................................................. 4
2.1.2 Sinonim ..................................................................................... 4
2.1.3 Kandungan Kimia ..................................................................... 4
2.1.4 Aktifitas Biologis ...................................................................... 5
2.2 Simplisia ............................................................................................ 5
2.3 Ekstrak ............................................................................................... 5
2.3.1 Ekstraksi .................................................................................... 6
2.3.2 Penyaring/Pelarut ...................................................................... 6
2.3.3 Frezze drying ............................................................................. 8
2.4 Diabetes Mellitus ............................................................................... 8
2.4.1 Definisi ...................................................................................... 8
2.4.2 Klasifikasi.................................................................................. 9
2.4.3 Gejala Klinik ............................................................................. 10
2.4.4 Diagnosis ................................................................................... 10
2.4.5 Terapi ........................................................................................ 11
2.4.5.1 Terapi Non Farmakologi ............................................... 11
2.4.5.2 Terapi Farmakologi ....................................................... 12
2.5 Aloksan .............................................................................................. 13
2.6 Glibenklamid ..................................................................................... 14
Halaman
x
2.7 Metode Pengujian Diabetes ............................................................... 15
2.7.1 Metode Induksi Aloksan .......................................................... 15
2.7..2 Metode toleransi Glukosa ............................................... 15
2.8 Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa darah ..................................... 16
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 17
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 17
3.2 Alat dan Bahan .................................................................................. 17
3.2.1 Alat ............................................................................................ 17
3.2.2 Bahan ......................................................................................... 17
3.3 Cara Kerja ......................................................................................... 18
3.3.1 Pembuatan Simplisia ................................................................ 18
3.3.2 Ekstraksi ................................................................................... 18
3.3.3 Penapisan Fitokimia ................................................................. 18
3.3.4 Pengujian Parameter Non Spesifik ........................................... 20
3.3.5 Pengujian Parameter Spesifik ................................................ 21
3.4 Rancangan Percobaan ........................................................................ 21
3.5 Pembuatan Sediaan Dosis Uji ............................................................ 22
3.6 Pengambilan Darah dan Pengaruh Kadar Glukosa ............................ 22
3.7 Uji Statistik Glukosa Darah................................................................ 22
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 23
4.1 Penyiapan Bahan ............................................................................... 24
4.2 Ekstraksi .............................................................................................. 24
4.3 Hasil Penapisan Fitokimia................................................................... 24
4.4 Pengukuran Kadar Glukosa Darah ..................................................... 25
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 31
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 32
LAMPIRAN ......................................................................................................... 35
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur Aloksan . ............................................................................... .... 13
Gambar 2. Struktur Glibenklamid ........................................................................ .... 14
Gambar 3. Grafik Pengukuran Darah ................................................................. .... 28
Gambar 4. Penyuntikan Secara Intraperitoneal ..................................................... .... 35
Gambar 5. Pengukuran Glukosa Darah Pada Hewan Uji. .................................... .... 35
Gambar 6. Pemberian Sediaan Uji Secara Oral .................................................... .... 35
Gambar 7. Alkaloid ( Dragendroff) . ................................................................... .... 36
Gambar 8. Alkaloid ( Mayer ) . ............................................................................ .... 36
Gambar 9.Fenolik . ................................................................................................ .... 36
Gambar 10.Flavonoid . .......................................................................................... .... 36
Gambar 11 Saponin . ............................................................................................ .... 37
Gambar 12.Terpenoid .......................................................................................... .... 37
Halaman
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Perlakuan Metode Induksi Aloksan ..................................................... 21
Tabel 2. Hasil Karateristik Ektrak n-Heksan ....................................................... 25
Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia ...................................................................... 25
Tabel 4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi ............................................................ 26
Tabel 5. Hasil Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah ................................ 27
Tabel 6. Uji Normalitas ....................................................................................... 48
Tabel 7. Uji Homogenitas ..................................................................................... 49
Tabel 8. Uji Kruskal Wallis ................................................................................ 50
Tabel 9. Uji ANOVA ............................................................................................ 51
Tabel 10.Uji BNT. ................................................................................................ 52
Halaman
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Perlakuan Hewan Uji .................................................................. 35
Lampiran 2. Penapisan Fitokimia ................................................................... 36
Lampiran 3. Sertifikat Glibenkamid ............................................................... 38
Lampiran 4. Determinasi ................................................................................. 39
Lampiran 5. Alur Pembuatan Ekstrak ............................................................. 40
Lampiran 6. Alur Aklimatisasi Hewan Uji ..................................................... 41
Lampiran 7. Alur Kerja Uji Metode Aloksan ................................................. 42
Lampiran 8. Perhitungan Dosis ....................................................................... 43
Lampiran 9. Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak Yang Didapat ............. 45
Lampiran 10. Hasil Pengukuran Pada Metode Induksi Aloksan .................... 46
Lampiran 11. Perhitungan Presentase Kadar Glukosa Darah ......................... 47
Lampiran 12. Hasil Statistik Dosis Ekstrak Mastigophora diclados .............. 48
Halaman
1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Diabetes mellitus (DM) adalah suatu penyakit atau gangguan metabolisme
kronis dengan multi etiologi yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah
disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai
akibat insufisiensi fungsi insulin. Insufisiensi fungsi insulin dapat disebabkan oleh
gangguan atau defisiensi produksi insulin oleh sel-sel β Langerhans kelenjar
pankreas, atau disebabkan oleh kurang responsifnya sel-sel tubuh terhadap insulin
(Depkes RI, 2005).
Penyakit diabetes mellitus memerlukan pengobatan jangka panjang dan
biaya yang mahal, sehingga perlu mencari obat antidiabetes yang relatif murah
dan terjangkau masyarakat. Sebagai salah satu alternatif adalah penggunaan obat
tradisional yang mempunyai efek hipoglikemia. Pada tahun 1980 WHO
merekomendasikan agar dilakukan penelitian terhadap tanaman yang memiliki
efek menurunkan kadar gula darah karena pemakaian obat modern kurang aman
(Kumar. et al, 2005).
Telah dilaporkan bahwa tumbuhan lumut Mastigophora diclados yang
tumbuh di Tahiti mengandung senyawa-senyawa fenolik seskuiterpenoid
herbetan. Senyawa-senyawa golongan fenolik seskuiterpenoid herbetan
dilaporkan memiliki aktivitas sistoksik, antioksidan, dan antimikrobial (Komala et
al, 2010). Antioksidan bekerja dapat menghambat radikal bebas yang diketahui
sebagai mediator dari berbagai penyakit diantara lain karsinogenesis, jantung
koroner, inflamasi, artritis, diabetes dan penuaan (Ali et al. 2011).
Berbagai penelitian sebelumnya menyatakan bahwa tumbuhan yang
mengandung antioksidan dapat menekan terjadinya stress oksidatif dan mampu
menurunkan kadar gula darah pada diabetes antara lain jahe (Zingiber officinale),
kumis kucing (Orthosiphon aristatus), jeruk purut (Citrus aurantiifolia) (Miyake
et al. 1998). Antioksidan dan komponen polifenol dapat menangkap radikal bebas
yang mengurangi stres oksidatif. Senyawa fitokimia ternyata mampu
2
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
memanipulasi dengan berbagai mekanisme sehingga dapat mengurangi
komplikasi pada diabetes melalui pengurangan stres oksidatif (Widiowati, 2008).
Berdasarkan uraian diatas memberikan alasan bahwa senyawa antioksidan
yang mencegah atau menghambat radikal bebas dapat menurunkan kadar gula
darah pada penderita diabetes. Hal tersebut mendasari penelitian uji efek
antihiperglikimia dari ekstrak n-heksan lumut hati Mastigophora diclados pada
hewan coba tikus dengan metode induksi aloksan.
1.2 Rumusan Masalah
Apakah pemberian ekstrak n-heksan dari Mastigophora diclados dapat
menurunkan kadar gula darah tikus putih jantan.
1.3 Hipotesis
Ektrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados dapat menurunkan
kadar gula darah pada tikus jantan yang telah diinduksi aloksan.
1.4 Tujuan Penelitian
Untuk mengetahui pengaruh dan potensi pemberian ekstrak n-heksan
Mastigophora diclados terhadap kadar gula darah tikus putih jantan diabetes yang
diinduksi dengan aloksan.
1.5 Manfaat Penelitian
1. Secara Teoritis
Hasil penelitian ini dapat memberikan masukan dalam pengembangan
ilmu pengetahuan tentang tubuhan lumut Mastigophora diclados yang ada di
Indonesia dan digunakan sebagai antihiperglikemia.
2. Secara Metodologi
Hasil penelitian ini dapat digunakan untuk mengetahui pengujian aktivitas
penurunan kadar gula dengan menggunakan metode induksi aloksan yang
menyebabkan peningkatan kadar gula pada darah tikus.
3
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3. Secara Aplikatif
Tumbuhan alam yang ada di Indonesia khususnya lumut hati sebagai
bahan obat.
4 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tanaman Lumut Hati (Mastighopora diclados)
2.1.1 Klasifikasi Tanaman
Klasifikasi tanaman lumut hati adalah sebagai berikut (J Nat Med, 2010)
Kingdom : Plantae
Phylum : Marchantiophyta
Class : Jungermanniopsida
Order : Jungermanniales
Suborder : Lophocoleineae
Family : Mastigophoraceae
Genus : Mastigophora diclados Nees
Species : Mastigophora diclados (Brid.) Nees
2.1.2 Sinonim Mastigophora
Mastigophora diclados f. confertta (nees) sciffin, Mastigophora diclados f.
nana (nees) sciffin, Mastigophora diclados f. rhizobola (nees) sciffin, f. tenerior
schiffin (Konrat, 2010)
2.1.3 Kandungan Kimia
Mastigophoraceae dan Herbertaceae memiliki kandungan kimia yang
sama karena sama-sama menghasilkan senyawa seskuiterpenoid herbetan sebagai
komponen utamanya (Asakawa, 1995; 2004; Harinantenaina & Asakawa, 2007).
Dari pemeriksaan GCMS ekstrak eter Mastigophora disclados (Brid. ExF. Weber)
Ness dari Borneo menunjukkan adanya senyawa herbertene, herbertenol,
herbertene-2,3-diol dan herbertene-1,2-diol. Dalam koleksi sebelumnya dari
Mastigophora diclados Malaysia Timur selain herbertane, herbertane dimer juga
ditemukan pada mastigophorenes A-D (Asakawa et al,1991). Koleksi Jepang
menjabarkan herbetene dan α-herbetenol dengan siklik diklorinasi bis-bibenzyl,
dimana tidak ada diterpenoid dan dimer herbertane yang telah telah terditeksi
5
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
(Hashimoto et al, 2000). Data ini menunjukkan bahwa setidaknya ada tiga ras
geografis Mastigophora diclados di Asia; tipe bis-bibenzyl di Jepang, jenis
mastigoporene di Borneo (Malaysia Timur) dan jenis pimarane serta turunan
pimarane trachylobane diterpenoid di Taiwan dan Malaysia Barat (Harinantenaina
& Asakawa, 2004) (Agnieszka & Asakawa, 2010).
2.1.4 Aktivitas biologis
Mastighopora diclados memiliki aktivitas sitotoksik terhadap HL-60 dan
sel KB, antioksidan dan aktivitas antimikrobial terhadap bacillus subtilis
(Komala, 2010; Komala, et al ,2010 ).
2.2 Simplisia
Simplisia adalah bentuk jamak dari kata simpleks yang berasal dari kata
simple, berarti satu atau sederhana. Istilah simplisia dipakai untuk menyebut
bahan-bahan obat alam yang masih berada dalam wujud aslinya atau belum
mengalami perubahan bentuk. Departemen kesehatan RI membuat batasan tentang
simplisia sebagai berikut. Simplisia adalah bahan alami yang diguakan untuk obat
dan belum mengalami perubahan proses apapun, kecuali dinyatakan lain
umumnya berupa bahan yang telah dikeringkan. Berdasarkan hal itu maka
simplisia dibagi menjadi tiga golongan, yaitu simplisia nabati, simplisia hewani,
dan simplisia pelikan/mineral (Depkes RI, 1979).
2.3 Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut
yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau
serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah
ditetapkan. Sebagian besar ekstrak dibuat dengan mengekstraksi bahan baku obat
secara perkolasi. Seluruh perkolat biasanya dipekatkan secara destilasi dengan
pengurangan tekanan, agar bahan sedikit mungkin terkena panas (Farmakope
Indonesia, 1995). Faktor yang mempengaruhi ekstrak yaitu faktor biologi dan
faktor kimia. Adapun faktor biologi meliputi: spesies tumbuhan, lokasi tumbuh,
waktu pemanenan, penyimpanan bahan tumbuhan, umur tumbuhan dan bagian
yang digunakan. Sedangkan faktor kimia meliputi beberapa hal, yaitu: faktor
6
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
internal (Jenis senyawa aktif dalam bahan, komposisi kualitatif senyawa aktif,
komposisi kuantitatif senyawa aktif, kadar total rata-rata senyawa aktif) dan faktor
eksternal (metode ekstraksi, perbandingan ukuran alat ekstraksi, ukuran,
kekerasan dan kekeringan bahan, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi,
kandungan logam berat, kandungan pestisida) ( Depkes, 2000).
2.3.1 Ekstraksi
Ekstraksi adalah proses penarikan zat pokok yang diinginkan dari bahan
mentah obat dengan menggunakan pelarut yang dipilih di mana zat yang
diinginkan larut. Bahan mentah obat yang berasal dari tumbuh-tumbuhan atau
hewan tidak perlu diproses lebih lanjut kecuali dikumpulkan dan dikeringkan.
Karena tiap-tiap bahan mentah obat, berisi sejumlah unsur yang dapat larut dalam
pelarut tertentu, hasil dari ekstraksi, disebut ekstrak (Ansel H, 1985).
2.3.2 Ekstraksi Dengan Menggunakan Penyari ( Depkes RI, 2001).
Cairan penyari yang digunakan dalam proses pembuatan ekstrak adalah
penyari yang baik untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau aktif. Penyari
tersebut harus dapat dipisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan lainnya,
serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar seyawa kandungan yang
diinginkan. Faktor utama yang menjadi pertimbangan dalam pemilihan penyari
adalah selktifitas, ekonomis, dan kemudahan bekerja.
Macam-macam metode penyarian dalam ekstraksi yang dapat dilakukan
diantaranya:
1. Ekstraksi Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakkan simplisia dengan menggunakan
pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar) secara teknologi termasuk ekstraksi dengan metode pencapaian
konsetrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan
yang kontinyu, sedangkan remaserasi berarti dilakukan pegulangan penambahan
pelarut setelah dilakukana penyaringan meserat pertama dan seterusnya.
7
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur
ruangan. Prinsip perkolasi adalah dengan menentukan serbuk simplisia pada suatu
bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari akan
menarik zat aktif dalam sel-sel yang terdapat dalam simplisia.
2. Ekstraksi Cara panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut sampai dengan pada temperatur
titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif
konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses
pada residu pertama 3-5 kali seingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.
b. Sokletasi
Soklet adalah ekstraksi menggunakan penyari yang selalu baru yang
umumnya dilakukakan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi berlanjut
sampai jumlah penyari relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, secara umum dilakukan
pada temperatur 400C-50
0C.
d. Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
mendidih, temperature terukur 960C-98
0C selama waktu tertentu (15-20 menit).
Infus pada umumnya digunakan untuk menarik atau mengekstraksi zat aktif yang
larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Hasil dari ekstraksi ini akan
menghasilkan zat aktif yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan
kapang, sehingga ekstrak yang diperoleh dengan infus tidak boleh disimpan lebih
dari 24 jam.
8
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
e. Dekok
Dekok adalah infus yang waktunya lebih lama sampai 30 menit dan
temperatur sampai titik didih air.
2.3.3 Freeze Drying
Pengeringan-beku atau lyophilization adalah proses pengeringan dimana
pelarut atau media suspensi yang dapat mengkristal pada temperatur rendah dan
sesudahnya mensublimasi dari padat langsung ke fase uap. Pengeringan beku
mengubah es atau air dalam fase amorf menjadi uap. Karena tekanan uap es
rendah, maka volume uap menjadi besar. Tujuan pengeringan beku adalah untuk
memproduksi suatu substansi dengan stabilitas yang baik dan tidak berubah
setelah rekonstitusi dengan air, meskipun hal ini sangat tergantung juga pada
langkah terakhir proses yaitu pengemasan dan kondisi penyimpanan. Keuntungan
dari proses pengeringan beku adalah :
1. Pengeringan dengan suhu rendah dapat mengurangi penurunan produk
sensitif panas.
2. Produk cair dapat secara akurat terdosiskan.
3. Kandungan air dari produk akhir dapat dikontrol selama proses.
4. Produk obat dapat memiliki bentuk fisik yang menarik.
5. Produk obat dengan luas permukaan spesifik yang tinggi dengan cepat
kembali (Oetjen dan Haseley, 2004).
2.4 Diabetes Mellitus
2.4.1 Definisi
Diabetes mellitus (DM) adalah suatu penyakit atau gangguan metabolisme
kronis dengan multi etiologi yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah
disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai
akibat insufisiensi fungsi insulin. Insufisiensi fungsi insulin dapat disebabkan oleh
gangguan atau defisiensi produksi insulin oleh sel-sel β Langerhans kelenjar
pankreas, atau disebabkan oleh kurang responsifnya sel-sel tubuh terhadap
insulin. Diabetes melitus merupakan suatu sindroma klinik yang ditandai oleh
poliuri, polidipsi dan polifagi, disertai dengan peningkatan kadar glukosa darah
9
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
atau hiperglikemia (glukosa puasa ≥ 126 mg/dL atau postprandial ≥ 200 mg/dL
atau glukosa sewaktu ≥ 200 mg/dL) (Depkes RI, 2005).
2.4.2 Klasifikasi Diabetes Mellitus
1. Diabetes Mellitus Tipe 1
DM tipe 1 merupakan diabetes yang jarang atau sedikit populasinya,
diperkirakan kurang dari 5-10% dari keseluruhan populasi penderita diabetes.
Gangguan produksi insulin pada DM Tipe 1 umumnya terjadi karena kerusakan
sel-sel β pulau Langerhans (Depkes RI, 2005). Destruksi dari sel-sel β pulau
Langerhans kelenjar pankreas langsung mengakibatkan defisiensi sekresi insulin.
Defisiensi insulin inilah yang menyebabkan gangguan metabolisme yang
menyertai DM Tipe 1. Sekitar 20% dan 40% dari pasien mengalami diabetes
ketoasidosis setelah beberapa hari dari poliuria, polidipsi, polifagia, dan
penurunan berat badan (Dipiro et al. 2009). Secara normal, hiperglikemia akan
menurunkan sekresi glukagon, namun pada penderita DM Tipe 1 hal ini tidak
terjadi, sekresi glukagon tetap tinggi walaupun dalam keadaan hiperglikemia. Hal
ini memperparah kondisi hiperglikemia. Salah satu manifestasi dari keadaan ini
adalah cepatnya penderita DM Tipe 1 mengalami ketoasidosis diabetik apabila
tidak mendapat terapi insulin (Depkes RI, 2005).
2. Diabetes Mellitus Tipe 2
Diabetes Tipe 2 merupakan tipe diabetes yang lebih umum, lebih banyak
penderitanya dibandingkan dengan DM Tipe 1. Penderita DM Tipe 2 mencapai
90-95% dari keseluruhan populasi penderita diabetes. Pada DM tipe 2 terjadi
letargi, poliuria, nokturia, polidipsia dapat terjadi pada diagnosis, penurunan berat
badan yang signifikan dapat terjadi (Dipiro et al. 2009). DM Tipe 2 bukan
disebabkan oleh kurangnya sekresi insulin, tetapi karena sel-sel sasaran insulin
gagal atau tak mampu merespon insulin secara normal. Keadaan ini lazim disebut
sebagai “Resistensi Insulin”. Disamping resistensi insulin, pada penderita DM
Tipe 2 dapat juga timbul gangguan sekresi insulin dan produksi glukosa hepatik
yang berlebihan. Namun demikian, tidak terjadi pengrusakan sel-sel β Langerhans
secara otoimun sebagaimana yang terjadi pada DM Tipe 1. Dengan demikian
10
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
defisiensi fungsi insulin pada penderita DM Tipe 2 hanya bersifat relatif, tidak
absolut (Depkes RI, 2005).
3. Diabetes Mellitus Gestasional
Diabetes Mellitus Gestasional (GDM = Gestational Diabetes Mellitus)
adalah keadaan diabetes atau intoleransi glukosa yang timbul selama masa
kehamilan, dan biasanya berlangsung hanya sementara atau temporer. Sekitar 4-
5% wanita hamil diketahui menderita GDM, dan umumnya terdeteksi pada atau
setelah trimester kedua. Diabetes dalam masa kehamilan, walaupun umumnya
kelak dapat pulih sendiri beberapa saat setelah melahirkan, namun dapat berakibat
buruk terhadap bayi yang dikandung. Akibat buruk yang dapat terjadi antara lain
malformasi kongenital, peningkatan berat badan bayi ketika lahir dan
meningkatnya risiko mortalitas perinatal. Disamping itu, wanita yang pernah
menderita GDM akan lebih besar risikonya untuk menderita lagi diabetes dimasa
depan. Kontrol metabolisme yang ketat dapat mengurangi risiko-risiko tersebut
(Depkes RI, 2005).
2.4.3 Gejala Kilinik
Gejala yang sering dirasakan penderita diabetes antara lain poliuria (sering
buang air kecil), polidipsia (sering haus), dan polifagia (banyak makan/mudah
lapar) (Depkes RI, 2005).
1. Pada DM Tipe 1 gejala klasik yang umum dikeluhkan adalah poliuria,
polidipsia, polifagia, penurunan berat badan, cepat merasa lelah (fatigue),
iritabilitas, dan pruritus
2. Pada DM Tipe 2 gejala yang dikeluhkan umumnya hampir tidak ada. DM
Tipe 2 seringkali muncul tanpa diketahui, dan penanganan baru dimulai
beberapa tahun kemudian ketika penyakit sudah berkembang dan komplikasi
sudah terjadi. Penderita DM Tipe 2 umumnya lebih mudah terkena infeksi,
sukar sembuh dari luka, daya penglihatan makin buruk, dan umumnya
menderita hipertensi, hiperlipidemia, obesitas, dan juga komplikasi pada
pembuluh darah dan syaraf .
11
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.4.4 Diagnosis
Diagnosis klinis DM umumnya dipikirkan apabila ada keluhan khas DM
seperti poliuria, polidipsia, polifagia, dan penurunan berat badan yang tidak dapat
dijelaskan penyebabnya . Jika terdapat keluhan khas serta hasil pemeriksaan kadar
glukosa darah sewaktu ≥ 200 mg/dL, maka hal tersebut sudah cukup untuk
menegakkan diagnosis DM. Selain itu, jika hasil pemeriksaan kadar glukosa darah
puasa ≥ 126 mg/dL, maka hasil ini juga dapat digunakan sebagai patokan
diagnosis DM (Depkes RI, 2005).
Apabila tidak terdapat keluhan yang khas, hasil pemeriksaan kadar
glukosa darah yang abnormal tinggi satu kali saja tidak cukup kuat untuk
menegakkan diagnosis DM. Diperlukan pemastian lebih lanjut dengan
mendapatkan minimal satu kali lagi kadar gula darah sewaktu yang abnormal
tinggi (> 200 mg/dL) pada hari lain dan kadar glukosa darah puasa yang abnormal
tinggi (> 126 mg/dL) (Depkes RI, 2005).
2.4.5 Terapi Diabetes Mellitus
2.4.5.1Terapi Non Farmakologi (Depkes RI, 2005).
a. Pengaturan Diet
Pengaturan diet merupakan salah satu kunci keberhasilan penatalaksanaan
DM. Diet yang dianjurkan ialah makanan dengan kecukupan gizi baik yang terdiri
dari karbohidrat 60-70%, protein 10-15%, lemak 20-25%. Penurunan berat badan
telah dibuktikan dapat mengurangi resistensi insulin dan memperbaiki respon
sel-sel β terhadap stimulus glukosa. Selain jumlah kalori, masukan kolesterol tetap
diperlukan, namun jangan melebihi 300 mg per hari. Masukan serat diusahakan
paling tidak 25 g per hari yang dapat menolong menghambat penyerapan lemak,
membantu mengatasi rasa lapar yang kerap dirasakan penderita DM
b. OlahRaga
Olah raga secara teratur dapat menurunkan dan menjaga kadar gula darah
tetap normal. Olahraga akan memperbanyak jumlah dan meningkatkan aktivitas
reseptor insulin dalam tubuh dan juga meningkatkan penggunaan glukosa
12
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.4.5.2 Terapi Farmakologi (Depkes RI, 2005).
a. Terapi Insulin
Insulin merupakan obat utama untuk penderita DM tipe 1. Pada DM tipe 1,
sel-sel β Langerhans kelenjar pankreas penderita rusak, sehingga tidak lagi dapat
memproduksi insulin, sebagai penggantinya maka penderita DM tipe 1 harus
mendapatkan insulin eksogen untuk membantu agar metabolisme karbohidrat
tetap berjalan dengan normal.
b. Terapi Obat Hipoglikemik Oral
1. Golongan Sulfonilurea
Obat hipoglikemik oral golongan sulfonilurea merupakan obat pilihan
untuk diabetes mellitus. Bekerja dengan merangsang sekresi insulin di kelenjar
pankreas, sehingga hanya efektif bila sel-sel β Langerhans pankreas masih dapat
berproduksi. Penurunan kadar glukosa darah yang terjadi setelah pemberian
sulfonilurea terjadi karena perangsangan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas.
Adapun yang termasuk kedalam golongan sulfonilurea yakni glibenklamida,
glipizida, glikazida, glimepirida, serta glikuidon.
2. Golongan Meglitinida dan Turunan Fenilalanin
Bekerja dengan meningkatkan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas.
Umumnya senyawa obat hipoglikemik oral golongan ini dipakai dalam bentuk
kombinasi dengan obat-obat antidiabetik oral lainnya. Obat hipoglikemik oral
golongan meglitinida dan turunan fenilalanin meliputi repaglinida, serta
nateglinida.
3. Golongan Biguanida
Golongan ini bekerja langsung pada hati (hepar), menurunkan produksi
glukosa hati. Senyawa-senyawa golongan biguanida tidak merangsang sekresi
insulin, dan hampir tidak pernah menyebabkan hipoglikemi. Satu-satunya
senyawa biguanida yang masih dipakai sebagai obat hipoglikemik oral saat ini
ialah metformin.
13
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4. Golongan Tiazolidindion (TZD)
Golongan tiazolidindion bekerja dengan meningkatkan kepekaan tubuh
terhadap insulin dengan jalan berikatan dengan PPARγ (peroxisome proliferator
activated receptor-gamma) di otot, jaringan lemak, dan hati untuk menurunkan
resistensi insulin. Senyawa-senyawa TZD juga menurunkan kecepatan
glikoneogenisis. Obat hipoglikemik oral golongan TZD meliputi rosiglitazone
serta pioglitazone.
5. Golongan Inhibitor α-Glukosidase
Golongan inhibitor α-glukosidase bekerja dengan menghambat enzim alfa
glukosidase yang terdapat pada dinding usus halus. Enzim-enzim α-glukosidase
(maltase, isomaltase, glukomaltase, dan sukrase) berfungsi untuk menghidrolisis
oligosakarida pada dinding usus halus. Inhibisi kerja enzim ini secara efektif dapat
mengurangi pencernaan karbohidrat kompleks dan absorbsinya, sehingga dapat
mengurangi peningkatan kadar glukosa post prandial pada penderita diabetes.
Senyawa inhibitor α-Glukosidase juga menghambat enzim α-amilase pankreas
yang bekerja menghidrolisis polisakarida di dalam lumen usus halus. Obat
hipoglikemik oral golongan ini meliputi akarbose dan miglitol.
2.5 Aloksan
Gambar 1. Struktur Aloksan
Sinonim : Alloxan;
2,4,5,6-Tetraxohexahydropyrimidine;mesoxalyurea;
Mesoxalylcarbamide
Rumus molekul : C4H2N2O4
Berat molekul : 142,07
14
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Injeksi aloksan ke dalam hewan menyebabkan penurunan dari sel β pada
pulau langerhans yang sangat kecil. Sejak sel ini disintesis oleh hormon insulin,
aloksan sering digunakan untuk induksi diabetes pada percobaan hewan (Halliwel
et al, 1999).
Aloksan terdapat dalam tiga bentuk senyawa yaitu aloksan anhidrat,
aloksan monohidrat dan aloksan tetrahidrat. Aloksan mempunyai bentuk hablur
kristal, tidak berair, warna merah muda pada suhu 2300C dan tidak stabil pada
suhu 2560C. LD50 pada dosis 200 mg/kg BB secara intravena. Sebagai
diabetogenik, aloksan dapat digunakan secara intravena, intraperitoneal dan
subkutan. Dosis intravena yang digunakan biasanya 65mg/kg BB, sedangkan
intraperitoneal dan subkutan adalah 2-3 kalinya (Szkudelsi, 2001).
Mekanisme aksi dalam menimbulkan perusakan yang selektif belum
diketahui dengan jelas. Beberapa hipotesis tentang mekanisme aksi yang telah
diajukan antara lain adalah pembentukan kelat terhadap Zn, interfersi dengan
enzim-enzim sel β pulau langerhans pankreas secara selektif oleh aloksan belum
banyak diketahui (Suharmiati, 2003).
Penelitian terhadap mekanisme kerja aloksan secara in vitro menunjukan
bahwa aloksan menginduksi pengeluaran ion kalsium dari mitokondria sel
β pankreas sehingga proses oksidasi sel tersebut terganggu. Keluarnya ion
kalsium dari mitokodria menyebabkan gangguan homeostatis yang merupakan
awal dari matinya sel β pankreas sehingga tidak dapat memproduksi insulin
(Suharmiati, 2003).
2.6 Glibenklamid (Paffitt, 1983)
Gambar 2. Struktur glibenklamid
Sinonim : Glibenklamid, glyburide, glybenclamide
Rumus molekul : C23H28CIN3O5S
15
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Berat molekul : 494.01
Deskripsi : Bewarna putih atau hampir putih, berbentuk serbuk
kristal.
Dosis : Dosis 5 mg/hari selama 7 hari, dosis 2,5 mg - 5 mg/hari
sampai 15 mg/hari.
Absorpsi : Glibenklamid diabsorpsi dari lambung dan sangat bagus di
protein plasma, dikeluarkan lewat feses dan di metabolisme
di urin. Glibenklamid adalah golongan sulfonilurea yang
mempunyai aksi sama dengan kloporpamid. Setelah
diberikan dosis tunggal dari glibenklamid, gula darah turun
3 jam dan konsentrasi berkurang kira-kira 15 jam. Pasien
yang usia lanjut membutuhkan dosis yang lebih kecil.
Sebagian pasien dikontrol dengan insulin dan dapat juga
dikontrol dengan glibenklamid.
2.7 Metode Pengujian Diabetes
2.7.1 Metode Induksi Aloksan
Keadaan diabetes pada hewan uji ini dapat dilakukan dengan cara
pankreotomi dan juga secara kimia. Zat-zat kimia sebagai induktor diabetogen
antara lain aloksan dan steptrozosin yang pada umumnya dapat diberikan secara
parenteral. Zat diatas mampu menginduksi hiperglikemi yang permanen dalam
waktu dua sampai tiga hari (Depkes, 1993).
Prinsip metodenya adalah kepada hewan uji dilakukan dengan
memberikan suntikan aloksan monohidrat secara intravena dengan dosis 65 mg/kg
BB. Perembangan hiperglikemia diperiksa setiap hari. Pemberian antidiabetes
secara oral dapat menurunkan kadar glukosa darah dibandingkan terhadap hewan
uji positif (Depkes, 1993).
2.7.2 Metode Toleransi Glukosa
Kemampuan tubuh untuk menggunakan karbohidrat disebut toleransi
karbohidrat (toleransi glukosa). Dengan memberikan glukosa secara oral, kadar
glukosa darah akan naik, tetapi tetap dalam keadaan normal tidak pernah melebihi
16
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
170mg/100 mL. Puncak kadar glukosa dalam ½ atau 1 jam dan kembali normal
setelah 2-3 jam.
Prinsip metodenya adalah kepada hewan uji yang telah dipuasakan lebih
kurang 20 sampai 24 jam, diambil darah melalui intravena lalu diberikan bahan
uji obat antidiabetes dan diberi larutan glukosa per-oral. Kemudian cuplikan darah
diambil lagi setelah interval waktu tertentu ( Depkes RI, 1993).
2.8 Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah (Widijanti, 2009)
Pemeriksaan kadar glukosa darah dapat ditentukan dengan 4 macam
metode , yaitu metode oksidasi reduksi, metode kondensasi, metode enzimatik,
metode dengan glukometer.
a. Metode Oksidasi Reduksi
Pengukuran glukosa berdasarkan pada sifatnya sebagai zat pereduksi
dalam larutan alkali panas. Metode ini tidak spesifik karena adanya zat- zat non
glukosa lain juga bersifat mereduksi.
b. Metode Enzimatik
Metode ini menggunakan enzim-enzim yang bekerja secara spesifik pada
glukosa, sehingga memberikan hasil yang relatif lebih tepat dibandingkan metode
lainnya. Beberapa metode enzimatik yang digunakan antara lain metode glukosa
oksidase dan metode heksokinase
c. Glucose Test (glukometer)
Pengukuran kadar glukosa darah tikus putih dilakukan dengan glucose test
(glukometer). Alat ini merupakan alat yang digunakan untuk memonitor tingkat
glukosa didalam darah. Tes ini merupakan spesifik untuk glukosa. Tes tersebut
menggunakan oksidasi glukosa dan berdasarkan pada kemajuan teknologi biologi
sensor.
17 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Penapisan
Fitokimia dan Laboratorium Hewan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Berlangsung mulai dari
bulan Maret 2013 sampai dengan Juli 2013.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :
Timbangan hewan, kandang tikus beserta tempat makan dan minum, sonde oral,
jarum suntik, blender, glukometer (easy touch), vacuum rotary evaporator, oven,
timbangan analitik, kertas saring, kapas, sarung tangan, masker, alumunium foil,
lumpang, label dan alat-alat gelas.
3.2.2 Bahan
1. Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan
galur Wistar yang berumur 2 – 3 bulan dengan berat badan 150 – 250 g yang
diperoleh dari Institut Pertanian Bogor.
2. Bahan Uji
Bahan uji yang digunakan adalah ekstrak n-heksan dari lumut hati
Mastigophora diclados (Mastigoporaceae), glibenklamid (BPOM) sebagai obat
pembanding dan aloksan monohidrat sebagai penginduksi.
3. Bahan Kimia
Bahan-bahan yang diperlukan dalam penelitian ini adalah n-heksan
(Brataco), NaCMC, Kloroform, H2SO4 pekat , amonia encer, etil asetat, FeCl3,
pereaksi Mayer, pereaksi Dragendroff, asam klorida, NaOH, aquadest.
18
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3 Cara Kerja
3.3.1 Pembuatan Simplisia
Pembuatan simplisia yang memenuhi standar terdiri dari tahap-tahap
sebagai berikut : pengumpulan simplisia yang diambil dari Gunung Slamet
Purwokerto pada bulan September 2012, kemudian disortasi bertujuan agar
memudahkan pencucian dan agar dapat memisahkan simplisia dengan
pengotornya, pencucian dilakukan dengan menggunakan air yang mengalir,
setelah itu dilakukan pengeringan dengan cara diangin-anginkan setelah benar-
benar kering dilakukan kembali sortasi untuk memastikan simplisia bebas dari
pengotor, kemudian simplisia ditimbang dan digiling hingga menjadi serbuk lalu
dilakukan pengayakan.
3.3.2 Ekstraksi
Ditimbang serbuk simplisia 2100 gram, kemudian dimasukkan ke dalam
wadah, lalu diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut non polar,
semi polar, dan polar yaitu pelarut n-heksan, etil asetat dan metanol sampai
seluruh serbuk terendam oleh pelarut, disimpan ditempat yang gelap dan sesekali
diaduk hingga tidak ada lagi senyawa yang terekstrak dengan ditandai warna
pelarut yang jernih. Filtrat yag diperoleh diuapkan dengan rotary evaporator
hingga didapat ekstrak yang kental. Jika masih ada air yang tersisa dikentalkan
menggunakan freeze dryer.
3.3.3 Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan dengan menguji adanya golongan senyawa
alkaloid, flavonoid, terpenoid, saponin, tanin dan fenolik. Prosedur pengujiannya
adalah sebagai berikut.
a. Identifikasi Alkaloid
Untuk mengidentifikasi alkaloid, ekstrak dilarutkan dengan etanol 96%
kemudian ditambahkan asam klorida encer 2N. Filtrat yang diperoleh disaring
kemudian diidentifikasi menggunakan pereaksi Mayer LP, Bouchardat LP,
Dragendorff LP. Pada penambahan Mayer LP, hasil positif ditandai dengan
terbentuknya endapan berwarna putih atau kuning. Hasil positif Dragendorff LP
ditunjukkan dengan terbentuknya endapan berwarna merah bata. Penambahan
19
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Bouchardat LP memberikan hasil positif jika terbentuk endapan coklat sampai
hitam (Ayoola et al, 2008).
b. Identifikasi Saponin
Ekstrak ditambahkan 5 ml aquadest panas, didinginkan kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 menit. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih
yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10 cm dan pada
penambahan 1 tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang (Ayoola et al, 2008).
c. Identifikasi Flavonoid
Tiga metode yang digunakan untuk menguji flavonoid. Pertama, amonia
encer (5 mL) ditambahkan ke sebagian filtrat encer dari ekstrak. Kemudian asam
sulfat pekat (1 mL) ditambahkan. Hilangnya warna kuning menunjukkan adanya
flavonoid. Kedua, beberapa tetes larutan aluminium 1% ditambahkan ke sebagian
dari filtrat, terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid. Ketiga,
sebagian dari ekstrak dipanaskan dengan 10 mL etil asetat yang telah diuapkan
selama 3 menit. Campuran kemudian disaring dan 4 mL filtrat dikocok dengan
penambahan 1 mL larutan amonia encer, terbentuknya warna kuning
menunjukkan adanya flavonoid (Ayoola et al, 2008).
d. Identifikasi Terpenoid
Sejumlah 0,5 g ekstrak masing-masing ditambahkan dengan 2 mL
kloroform. Kemudian dengan hati-hati ditambahkan (3 mL) H2SO4 pekat sampai
membentuk lapisan. Terbentuknya warna merah kecoklatan pada permukaan
menunjukkan adanya terpenoid (Ayoola et al, 2008).
e. Identifikasi Tanin
Sebanyak 0,5 g ekstrak dipanaskan dalam 10 ml air dalam tabung reaksi
dan kemudian disaring. Ditambahkan beberapa tetes FeCl3 0,1% dan diamati
perubahan warna menjadi hijau kecoklatan atau biru kehitaman (Ayoola et al,
2008).
f. Identifikasi Fenolik
Sejumlah ekstrak ditambahkan 3-4 tetes larutan besi klorida, terbentuknya
warna biru-hitam menunjukkan adanya fenolik ( Tiwari et al, 2011 ).
20
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3.4 Pengujian Parameter Non spesifik Ekstrak ( Depkes RI, 2000).
a. Susut Pengeringan
Ektrak ditimbang dengan seksama sebanyak 1-2 gram dan dimasukkan ke
dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada
suhu 1050 C selama 30 menit dan telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak
diratakan dalam botol timbangan dengan menggoyang- goyangkan botol, hingga
merupakan lapisan setebal lebih kurang 5 mm sampai 10 mm, kemudian
dimasukkan kedalam oven, buka tutupnya. Pengeringan dilakukan pada suhu
penetapan yaitu 1050 C hingga diperoleh bobot tetap lalu ditimbang. Sebelum
setiap pengeringan, botol dibiarkan dalam keadaan tertutup mendingin dalam
eksikator hingga suhu kamar.
b. Kadar Air
Pengukuran kadar air dilakukan dengan cara kurang lebih 3 gram ekstrak
dimasukkan dan ditimbang seksama dalam wadah yang telah ditara. Ekstrak
dikeringkan pada suhu 1050 C selama 5 jam dan ditimbang. Pengeringan
dilanjutkan dan ditimbang pada jarak 1 jam sampai perbedaan antara 2
penimbangan berturut- turut tidak lebih dari 0,25%.
c. Kadar Abu
Lebih kurang 2-3 g ekstrak yang telah digerus dan ditimbang seksama,
dimasukkan kedalam krus platina atau krus silikat yang telah dipijarkan dan
ditara, lalu ekstrak diratakan. Dipijarkan pelahan-lahan hingga arang habis,
didinginkan, ditimbang. Jika arang tidak dapat hilang, ditambahkan air panas,
disaring dengan menggunakan kertas saring bebas abu. Dipijarkan sisa abu dan
kertas saring dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan ke dalam krus, diuapkan,
dipijarkan hingga bobot tetap, ditimbang. Kadar abu dihitung terhadap berat
ekstrak dan dinyatakan dalam % b/b.
3.3.5 Pengujian Parameter Spesifik ( Depkes RI, 2000).
Uji parameter spesifik hanya dilakukan uji parameter organoleptik ekstrak
dengan menggunakan pancaindera mendeskripsikan bentuk, warna, bau dan rasa.
21
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4 Rancangan Percobaan
Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih jantan galur Wistar,
berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150 – 250 gram diaklimatisasi selama dua
minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama proses adaptasi,
dilakukan pengamatan kondisi umum dan penimbangan berat badan.
Hewan uji dipilih sebanyak 30 ekor tikus putih jantan secara acak untuk
dibagi menjadi 6 kelompok, masing- masing terdiri dari 5 ekor. Penentuan tikus
tiap kelompok mengacu pada syarat WHO.
Tabel 1. Tabel Perlakuan Metode Induksi Aloksan
Kelompok Jumlah Perlakuan
I 5 Kontrol normal, diberi air suling.
II 5 Kontrol negatif, diinduksi aloksan & diberi Na CMC 0,5%.
III 5 Kontrol positif, diinduksi aloksan kemudian diberi suspensi
glibenklamid 0,1mg/200 BB.
IV 5
Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5 %
ektrak lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis
1mg/kg BB.
V 5
Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5% ekstrak
lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis 10mg/kg
BB.
VI 5
Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5 %
ekstrak lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis 100
mg/kg BB.
3.5 Pembuatan Sediaan Dosis Uji
1. Dosis ekstrak lumut hati Mastigophora diclados
Dosis yang digunakan pada ekstrak n-heksan Mastigophora diclados
adalah dosis 1 mg/kg BB, 10 mg/kg BB dan 100 mg/kg BB yang kemudian di
konversikan ke dalam dosis tikus masing-masing menjadi 0,2 mg/200 g BB, 2
mg/200 g BB dan 20 mg/200 g BB.
2. Dosis Glibenklamid Sebagai Kontrol Positif
Glibenklamid diberikan dalam bentuk suspensi dengan Na CMC sesuai
dosis oral efektif pada manusia 5 mg/60kg BB yang dikonversikan berdasarkan
22
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
perhitungan menggunakan luas permukaan tubuh (HED), yaitu dosis untuk setiap
200 g BB tikus menjadi 0,1 mg/200g BB.
3. Dosis Aloksan
Dosis aloksan monohidrat yang akan digunakan dalam percobaan ini
adalah 100 mg/kg BB dilakukan secara intraperitoneal untuk tikus dengan berat
badan 200g adalah 20 mg/200g BB (Nandhagopal et al , 2013) adapun dalam
penelitian lain menggunakan dosis 150mg/kg BB secara interperitoneal (Kharkar
et al 2013).
3.6 Pengambilan Darah dan Pengaruh Kadar Glukosa Darah
Pengambilan darah dilakukan dengan cara tikus dimasukkan ke dalam
kandang kecil. Kemudian ekor tikus dibersihkan dengan alkohol 70%.
Selanjutnya darah diambil secara intravena melalui ujung ekor dilakukan
pemijatan perlahan terhadap ekor agar darah keluar, dan di ukur kadar gula darah
dengan alat glukometer.
3.7 Uji Statistik Terhadap Kadar Glukosa Darah
a. Pengelohan Data
Data yang diperoleh diolah secara statistik menggunakan SPSS. Analisis
yang dilakukan yaitu uji normalitas dan uji homogenitas, selanjutnya dilakukan
analisis varian satu arah (ANOVA) untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan
bermakna antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Bila terdapat
perbedaan bermakna, maka untuk mengetahui perbedaan antar kelompok
perlakuan dilanjutkan uji beda nyata terkecil (BNT).
Hipotesis :
Ho : tidak ada perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok.
Ha : terdapat perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok.
Pengambilan Keputusan :
Jika nilai signifikansi ≥ 0,05, maka Ho diterima.
Jika nilai signifikansi ≤ 0,05, maka Ho ditolak.
23
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
b. Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah dengan Rumus Sebagai
berikut : (Farida dkk, 2011)
Presentase penurunan kadar glukosa darah =
Keterangan :
Go: gula darah puasa sebelum diberikan sediaan uji.
Gt: gula darah setelah diberikan sediakan uji.
24 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Penyiapan Bahan
Tumbuhan lumut hati yang digunakan diperoleh dari Gunung Slamet
Purwokerto. Kemudian dilakukan determinasi di Pusat Penelitian Bogoriense
(LIPI) Cibinong Bogor yang bertujuan untuk mengetahui keaslian tumbuhan yang
akan digunakan dan untuk menghindari terjadinya kesalahan dalam pemilihan
tumbuhan. Hasil determinasi yang diperoleh menunjukan bahwa tumbuhan lumut
hati yang digunakan merupakan spesies Mastighopora diclados (Brid.) Nees.
Tumbuhan lumut yang diperoleh, disortasi untuk memisahkan antara
tumbuhan dengan kotoran dan kontaminan lainnya. Proses pengeringan dilakukan
dengan cara diangin-anginkan yang bertujuan untuk meminimalisir adannya
pemanasan yang dapat merusak senyawa yang terkandung, penghalusan dilakukan
untuk memperkecil ukuran partikel tanaman, yang bertujuan untuk
memaksimalkan dalam proses ekstraksi, karena semakin kecil ukuran partikel,
semakim besar luas permukaannya, sehingga kontak antara pelarut dengan
partikel tanaman semakin besar dan proses ekstaksi dapat berjalan maksimal.
Simplisia disimpan dalam wadah tertutup rapat.
4.2 Ekstraksi
Tumbuhan lumut hati diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi.
Cara ini dipilih untuk meminimalisir kerusakan senyawa termolabil. Proses
maserasi ini menggunakan teknik maserasi bertingkat dengan pelarut yang
memiliki tingkat kepolaran yang berbeda yaitu n-heksan, etil asetat dan metanol.
Alasan menggunakan teknik maserasi bertingkat ini yaitu untuk memaksimalkan
proses ekstraksi dimana senyawa akan terekstraksi berdasarkan tingkat
kepolarannya.
Sebuk simplisia lumut yang digunakan untuk maserasi sebanyak 2103
gram yang kemudian diperoleh ekstrak n-heksan sebanyak 46 gram dengan
randemen 2,18%.
25
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Tabel 2. Hasil Karateristik Ektrak n- heksan dari Mastigophora diclados
No Parameter Ektrak n-heksan
1. Organoleptis Warna : hitam
Bau : jamu
Bentuk : gumpalan kasar
2. Kadar air 0,048%
3. Kadar abu 0,636%
4.3 Hasil Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengidentifikasi komponen apa saja
yang terkandung dalam tanaman sehingga memungkinkan untuk megetahui
senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes. Penapisan fitokimia yang
dilakukan meliputi uji senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, terpenoid, saponin,
tanin dan fenol. Berdasarkan uji fitokimia yang dilakukan diketahui bahwa
ekstrak n-heksan Mastighopora diclados hanya mengandung terpenoid.
Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia
No. Metabolit Sekunder Hasil
1. Alkaloid -
2. Flavonoid -
3. Saponin -
4. Steroid -
5. Terpenoid +
6. Tanin -
7. Fenol -
Keterangan : (+) Memberikan reaksi positif, (-) Memberikan reaksi negatif
4.4 Pengukuran Kadar Glukosa Darah Dengan Metode Induksi Aloksan
Pada penelitian ini tikus diaklimatisasi selama 2 minggu agar tikus dapat
menyesuaikan diri dengan lingkungannya dengan pemberian makan dan minum.
Setelah aklimatisasi, tikus kemudian ditimbang. Sebelum dilakukan pengukuran
26
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
darah, seluruh tikus dipuasakan selama 18 jam untuk meniadakan pengaruh zat-
zat lain pada pengukuran kadar glukosa darah.
Tikus diinduksi melalui interperitoneal dengan dosis 100mg/kg BB atau
setara dengan 20mg/200g BB dipilih untuk membuat diabetes tipe 2 dalam
penelitian ini, karena diharapkan diabetes yang timbul berupa resistensi insulin
yang masih dapat diobati oleh penggunaan obat hipoglikemik. Setelah diinduksi
dengan aloksan kemudian tikus dipelihara selama 7 hari sebelum diberi perlakuan
dengan sampel uji untuk membuat hiperglikemia yang stabil.
Setelah tikus hiperglikemia oleh induksi aloksan, tikus kemudian dibagi
menjadi 5 kelompok perlakuan untuk kelompok yang akan diberikan terapi.
Adapun 1 kelompok untuk kelompok kontrol normal tanpa diinduksi aloksan.
Pemberian ekstrak n-heksan Mastigophora diclados dan glibenklamid sebagai
terapi hiperglikemik diberikan secara oral pada tikus selama 28 hari.
Glibenklamid dilipilih sebagai terapi pembanding ekstrak n-heksan Mastigophora
diclados karena glibenklamid diabsorpsi dari lambung dan sangat bagus di protein
plasma, dikeluarkan lewat feses dan di metabolisme di urin (Paffitt, 1983).
Adapun pemberian glibenklamid dan ekstrak n-heksan diberikan dalam sediaan
suspensi dengan penambahan NaCMC 0,5 % sebagai agen pensuspensi.
Setelah pengukuran glukosa darah didapatkan hasil, kemudian dapat
dihitung nilai rerata dan standar deviasi yang dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi Kadar Glukosa Darah Tikus
Kelompok
Perlakuan
Hari ke 0
sebelum
pemberian
ekstrak
Hari ke 7
setelah
pemberian
ekstrak
Hari ke 14
setelah
pemberian
ekstrak
Hari ke 21
setelah
pemberian
ekstrak
Hari ke 28
setelah
pemberian
ekstrak
Kontrol normal 58,8±15,31 60,6±15,38 59,2±12,85 60±15,41 60,2±12,35
Kontrol negatif 161,8±12,67 165±13,54 169,6±13,12 189,8±8,61 171,4±23,43
Kontrol positif 136,2±14,75 107,6±15,09 93,8±17,12 78,4±18,76 65,8±19,51
Dosis 1mg/kg BB 149,75±7,41 124,5±3,51 111,25±4,97 104,5±4,04 105±4,35
Dosis 10mg/kg BB 143±7 142±6 126,75±14,43 115±15,76 109±12,72
Dosis 100mg/kg BB 164,6±14,01 98,33±14,57 72,66±10,70 69,5±22,01 58,8±8,52
27
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Hasil penelitian ini didapat bahwa rerata kadar glukosa darah pada
kelompok perlakuan lebih tinggi dari pada kelompok kontrol dan hasil ini tidak
bermakna secara statistik. Untuk membandingkan lebih jelas efek
antihiperglikemik antara kelompok, dapat dilihat pada presentase penurunan kadar
glukosa pada tabel 5.
Tabel 5. Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Pada Tikus
Kelompok Perlakuan Hari ke 7 Hari ke 14 Hari ke 21 Hari ke 28
Kontrol positif 20,99% 31,13% 42,43% 51,68%
Dosis 1mg/kg BB 16,8% 25,71% 30,21% 29,88%
Dosis 10mg/kg BB 0,6% 11,36% 19,58% 23,77%
Dosis 100mg/kg BB 40,2% 55,8% 57,7% 64,2 %
Untuk penelitian antihiperglikemik ini menggunakan dosis bertingkat
secara teratur pada tikus. Ekstrak di siapkan dalam 3 besaran dosis kelipatan 10
untuk tiap kelompok. Besarnya dosis ditentukan dari hasil penelitian tahun
sebelumnya yang mengacu pada penelitian Endah Purnamasari, yang
menunjukkan efek paling baik pada pemberian dosis 100mg/kg BB.
Dilihat dari hasil presentase kadar penurunan glukosa darah seluruh dosis
perlakuaan dari dosis rendah sampai dosis tinggi mengalami penurunan glukosa
darah namun dari data tersebut dapat dilihat dosis yang dapat menurunkan
glukosa secara maksimal terdapat pada dosis tinggi (100mg/kg BB) adapun
dosis rendah (1mg/kg BB) lebih besar presentase penurunannya dibandingkan
dosis sedang (10mg/kg BB). Dari presentase kadar penurunan tersebut dapat
dibuat kurva hubungan antara kadar glukosa darah (mg/dL) terhadap waktu (hari)
untuk semua kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 3.
28
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Gambar 3. Kadar Glukosa Darah Pada Metode Induksi Aloksan
Pada grafik diatas dapat dilihat yang menunjukkan efek penurunan kadar
glukosa darah yang paling besar adalah perlakuan ektrak n-heksan dari lumut hati
Mastigophora diclados dosis tinggi (100mg/kgBB) diikuti perlakuan
glibenklamid 0,1mg/200gBB kemudian ekstrak n-heksan dari lumut hati
Mastigophora diclados dosis rendah (1mg/kgBB) dan terakhir perlakuan ekstrak
n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados dosis sedang (10mg/kgBB).
Grafik pada kontrol negatif dimana tikus hanya diinduksikan oleh
aloksan terjadi penurunan pada hari ke 28 hal ini mungkin dikarenakan adanya
regenerasi sel beta pankreas, sesuai dengan penelitian (Chaugale et al, 2007) yang
mengatakan bahwa regenerasi pankreas dapat terjadi pada waktu 12 hari pada
penggunaan aloksan dosis 120mg/kgBB. Dalam penelitian tersebut juga dikatakan
bahwa pemberian aloksan dosis 140mgkg BB akan terjadi peningkatan glukosa
darah yang dapat kembali normal pada waktu beberapa bulan.
Dari seluruh data diatas memperlihatkan bahwa efek penurunan kadar
glukosa darah secara maksimal terdapat pada dosis tinggi (100mg/kg BB).
Sedangkan untuk dosis rendah (1mg/kg BB) dan dosis sedang (10mg/kg BB)
belum dapat menghasilkan efektifitas dosis yang maksimal perlu dilakukan
penelitian lebih lanjut dengan dosis yang lebih bervariasi agar diketahui dosis
optimal untuk dapat menurunkan glukosa darah pada tikus hiperglikemik.
58.8 60.6 59.2 60 60.2
161.8 165 169.6
189.8
171.4
136.2
107.6 93.8
78.4 65.8
149.75
124.5 111.25
104.5 105
143 142 126.75
115 109
164.6
98.33
72.66 69.5 58.8
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
0 7 14 21 28
Grafik Kadar Glukosa Darah Tikus
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Positif
Dosis rendah
Dosis Sedang
Dosis Tinggi
29
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Belum terdapat penelitian mengenai aktivitas antidiabetes dari
Mastigophora diclados. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa
ekstrak n-heksan dari tumbuhan dapat memiliki aktivitas sebagai antidiabetes
antara lain biji jinten hitam yang dilaporkan memiliki dosis 10g/kg BB
(Khanam,2009) maka ekstrak n-heksan dari Mastigophora diclados memiliki
aktivitas antidiabetes yang lebih besar karena dosis yang digunakan hanya sebesar
100mg/kg BB dengan metode yang sama.
Pada penelitian tersebut dilaporkan juga bahwa metabolit sekunder yang
didapat adalah senyawa terpenoid. Dalam penelitian ini ekstrak n-heksan dari
lumut hati Mastigophora diclados juga didapatkan metabolit sekunder yang sama
yaitu terpenoid. Kandungan senyawa terpenoid dapat sebagai antioksidan yang
dimana dapat membantu tubuh dalam proses pemulihan sel-sel tubuh (Nur asda
wardiah, 2009).
Berbagai penelitian sebelumnya juga menyatakan bahwa tumbuhan yang
mengandung antioksidan dapat menekan terjadinya stress oksidatif dan mampu
menurunkan kadar gula darah pada diabetes antara lain jahe (Zingiber officinale),
kumis kucing (Orthosiphon aristatus), jeruk purut (Citrus aurantiifolia) (Miyake
et al. 1998).
Selanjutnya, untuk melihat kesamaan dan perbedaan nilai rata-rata
presentase kadar glukosa darah tikus pada setiap kelompok uji data pengukuran
glukosa darah dianalisis secara statistik dengan mengunakan Uji ANOVA satu
arah (lampiran 12). Uji statistik awal yakni dilakukan uji normalitas dengan
menggunakan kolmogorov-smirnof, dari tabel normalitas diketahui bahwa seluruh
hewan uji terdistibusi dengan normal (P≥0,05) baik sebelum maupun setelah
perlakuan.
Pada hasil pengujian BNT menunjukkan bahwa kontrol positif, dosis
rendah, dosis sedang dan dosis tinggi berbeda signifikan dengan kontrol negatif
yang artinya bahwa glibenklamid dan ekstrak n-heksan dari lumut hati
Mastighopora diclados dapat memberikan efek antidiabetik terhadap tikus yang
di induksi aloksan. Pada hari ke 7, 21 dan 28 kontrol positif tidak terjadi
perbedaan secara bermakna dengan dosis tinggi yang artinya bahwa dosis tinggi
mempunyai efek yang hampir sama dengan kontrol positif atau bahkan dapat
30
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
memberikan efek yang lebih baik, kemungkinan karena glibenklamid hanya
menstimulasi pelepasan insulin pada tikus sedangkan ekstrak lumut hati
berkemungkinan dapat memperbaiki kerja sel beta pankreas.
31 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan :
1. Ekstrak n-heksan dari Lumut hati Mastigophora diclados dapat menurunkan
kadar glukosa darah tikus putih yang diinduksi dengan aloksan.
2. Presentase kadar penurunan glukosa darah terbesar yaitu pada dosis tinggi
(100mg/kgBB) sebesar 64,2% dan tidak berbeda secara bermakna dengan
kontrol positif (P≥0,05) dengan dosis 0,1 mg/200g BB.
5.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian tentang toksisitas dari ekstrak n-heksan lumut
hati Mastigophora diclados pada hewan uji untuk mengevaluasi batas
keamanannya jika digunakan dalam jangka panjang, serta dilakukan penelitian
lebih lanjut dengan dosis yang lebih bervariasi agar diketahui dosis optimal untuk
menurunkan glukosa darah tikus dan memperhatikan lama perlakuan.
32 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
DAFTAR PUSTAKA
Ali, M., et al., “Phytochemical screening, antioxidant and analgesic activities
Of Croton argyratus ethanolic extracts” Journal of Medicinal Plants
Research Vol. 6.
Ansel, Howard C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi Keempat.
Penerjemah Farida Ibrahim. UI Press : Jakarta.
Asakawa, Y. 2000. Recent Advance in Phytocemistry of Bryophytes –
Acetogenins Terpenoid and Bis (bibenzil )s from Selected
Japans,Taiwanes,New Zeland,Argebtina and European Liverwort.
Phytocemistry 56(2001) 297-312. 31 agustus 2000.
Ayoola, GA., et al. 2008. Chemical analysis and antimicrobial activity of the
essential oil syzigium aromatikum (clove). African journa of Microbiology
Research 2 (1), pp. 162-166
Chougale AD, Panaskar SN, Gurao PM, Arvindeka AU. 2007. Optimization of
alloxan dose is essential to induce stable diabetes for prolong period.
Conard, h.s redfearn. 1996. How to know the mosses and liverworts.
Lowa: wm. C. Brown company publisher.
Departemen Kesehatan RI. 1993. Metode penapisan Farmakologi,Pengujian
Fitokimia, Pengujian klinik Pengembangan dan Pemanfaatan Obat
Bahan Alam. DEPKES RI; 15-17
Departemen Kesehatan RI . 1979. Farmakope indonesia, edisi III.
Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Direktorat
Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta
Departemen Kesehatan RI. 1996 Materia Medika Indonesia. Jilid I: Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan
Obat. Dirjen Pengawasan Obat dan Makanan.Volume 1 : Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 2001. Parameter Standar Umum Ekstrak
Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Badan Pengawasan Obat
danMakanan. DEPKES RI Jakarta ; hal 13.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (2005). Pharmaceutical Care untuk
Penyakit Diabetes Militus. Direktorat Bina Farmasi dan Komunitas dan
Klinik Jakarta . Hal : 1-27.
33
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Dipiro, J. T. (2009). Pharmacotherapy Handbook. 7th Edition. The McGraw-
Hill. New York.
Halliwel B, Gutterridge, J , M, C. 1949. Free radial in biology and medicine .3nd
ed oxford university press. London ;561-563.
Jung, Y.W., T. R. Schoeb., C.T. Waever., D.D. Chaplin. 2006.
Antigen and Lipopolysaccharide Play SynergisticRoles in the Effector
Phase of AirwayInflammation in Mice. American Journal of Pathology
168 (5).
Kharkar Ritesh, Pawar .P. Deepak, Shamkuwar .B. Prashant. 2013. Antidiabetic
Activity of Sphaeranthus Indicus linn Extracts In Alloxan. Induced
Diabetic Rats.Vol (5)
Khanam, Matira and Esmin Fauzia Dewan. 2009. Effects of the crude and the
n- hexane Extract Of Nigella Sativa Linn (Kalajira Upon diabetic
rats.Banglades h j Pharmacol Vol.4.4 P 17-20.
Komala, I., Ito, T., Nagashima, F. 2010. Cytotoxic,Rradical Scavenging, and
Antimicrobial Activities of Sesquiterpenoids from Tahitian Liverworth
Mastigophora diclados (Brid). Nees (Mastigophoracee) .J.Nat.Med
(2010) 64:417-422.
Kumar, E.K., Ramesh, A., Kasiviswanath, R. (2005). Hypoglicemic and
Antihyperglicemic Effect of Gmelina asiatica Linn. In normal and in
alloxan Induced Diabetic Rats. Andhra Pradesh: Departement of
Pharmaceutical Sciences.
Laurence D.R., and Bacharach, A.L. 1964. Evaluation Of Drug Activities
Pharmacometrics. Academic Press. London and New York.
Ludviczuk Agnieska And Asakawa Yoshinori. 2010. Chemosystematics of
Selected Liverwort Collected in Borneo. Tropical Bryology 31: 33-42,
2010 Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokushima Bunri University,
Yamashiro-cho;Tokushima 770-8514, Japan.
M.D Rockville. 2002. Guidance for Industry and Reviewers Estimating The Safe
Starting Dosein Clinical Trais For The Rapeutics in Adult Healthy
Voluntreers Pharmacology and Toxicology.
Miyake, Y., Yamamoto, K. Tsujihara, N., and Osawa, T., 1998.
Protective Effect of Lemon Flavonoids on Oxidative Stress in Diabetic
Rats. Lipid, 33 : 689-695
Nandhagopal.K, Kanniyaku Mari M, Anbu and V. Velpandian. 2013.
Antidiabetic Activity of Karchure Chooranam On Alloxan Induced
34
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Diabetic Rats. International Journal Of Pharma and Bio Sciences. 434-
439, India
Oetjen, Georg-Wilhem & Haseley, Peter. 2004. Frezz-Drying. From Germany:
WILEY-VCH Verlag Gmbh & Co.Kga.
Pafitt, K. 1983. Martindale the extrapharmacopela. 20th
. the parmaceutical.
Geneva. London : 854.
Suharmiati. 2003. Pengeujian bioaktivitas anti diabetes militus tumbuhan obat.
Badan penelitian dan pengembangan kesehatan, pusat penelitian
pengebangan pelayanan dan teknologi kesehatan. Departemen kesehatan
RI Surabaya.
Szkudelski, T. (2001). The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in
B Cells of the Rat Pancreas. Physiological Research. 50:536-546.
Tiwari, S., Gehlot, S. and Gambhir, I.S. (2011) Centella asiatica: A concise
drug review with probable clinical uses. Journal of Stress Physiology &
Biochemistry 7, 38-44.
Widijanti A, Ratulangi T.B. 2009. Pemeriksaan Laboratorium Penderita
Diabetes Mellitus. Malang.
Widowati, Wahyu. 2008. Potensi Antioksidan Sebagai Antidiabetes.
Universitas Kristen maranatha.Bandung. JKM.7(2): 192-202.
35
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 1. Perlakuan Hewan Uji
Gambar 4. Penyuntikan Aloksan Gambar 5. Pemberian Sediaan Uji
Secara Intraperitoneal.
Gambar 6 . Pengukuran Glukosa Darah Pada Hewan Uji.
36
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 2. Hasil Penapisan Fitokimia
Gambar 7. Alkaloid (Dragendoff) Gambar 8. Alkaloid (Mayer)
Gambar 9.Fenolik Gambar 10.Flavonoid
37
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Gambar 11. Saponin Gambar 12. Terpenoid
38
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 3. Sertifikat Glibenklamid
39
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 4. Determinasi
40
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 5. Alur Pembuatan Ekstrak
Lumut Hati Mastigophora diclados basah.
basah Determinasi tanaman
basah Sortasi basah
basah Dicuci dengan air bersih dan mengalir
basah Diangin-anginkan
basah Sortasi kering
basah Lumut Hati Mastigophora diclados dibelender
hingga menjadi serbuk.
basah Pembuatan Ekstak : 2103gram serbuk di
maserasi dengan pelarut dari non polar, semi polar,
dan polar, hasil destilasinya disimpan ditempat
yang gelap dan sesekali digoyang- goyangkan
.pelarut diganti setiap 3 hari dan disaring sampai
mendapat filtrat yang bening.
basah Filtrat dipekatkan menggunakan vacum rotary
evaporator, hasil ekstrak yang masih terdapat
kandungan air dikentalkan menggunakan freeze
dryer
basah Ekstrak kental.
basah
41
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 6. Alur Aklimatisasi Hewan Uji
Disiapkan 30 ekor tikus
putih jantan dengan bobot
150-250 g.
Diadaptasikan atau
diaklimatisasi selama 14
hari .
Dikelompokkan secara acak
menjadi 6 kelompok.
5 ekor kelompok kontrol normal
5 ekor kelompok kontrol positif
5 ekor kelompok kontrol negatif
5 ekor kelompok dosis rendah
Mastigophora diclados.
5 ekor kelompok dosis sedang
Mastigophora diclados.
5 ekor kelompok dosis tinggi
Mastigophora diclados.
42
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 7. Alur Kerja Uji Metode Aloksan
Persiapan Tikus puasa selama 18 jam
Kontrol
Normal
Kontrol
Negatif
Kontrol
Positif
Dosis
Rendah.
Dosis
Sedang.
Dosis
Tinggi.
Aquadest Induksi aloksan dosis 20 mg/200g BB tikus
Pekembangan Hewan Uji Selama 7 hari
Pengukuran Kadar Hiperglikemia Awal
Aquadest Suspensi
Na CMC
0,5%
Glibenkla
mid. 0,1
mg/200g
BB
Dosis
rendah.
1mg/kg BB
Dosis
sedang.10
mg/kg BB
Dosis
tinggi.100
mg/kg BB
Ukur Kadar Gula Darah pada hari ke 7, 14, 21, 28
Analisa Data
43
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 8. Perhitungan Dosis
A. Ekstrak n- heksan Mastigophora diclados dengan Kelompok Dosis :
Dosis rendah (D1) = 1 mg/kg BB
Dosis sedang (D2) = 10 mg/kg BB
Dosis tinggi (D3) = 100 mg/kg BB
1. Dosis Rendah
Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis rendah
dalah :
1 mg/kg BB = 0,2 mg/200g BB
VAO = Dosis x Berat badan
Konsentrasi
= 0,2 mg/200g BB x 200g
0,2 mg/mL
= 1mL
2. Dosis Sedang
Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis sedang
adalah :
10 mg/ kg BB = 2 mg/200g BB
VAO = Dosis x Berat badan
Konsentrasi
= 2 mg/200g BB x 200g
2 mg/mL
= 1mL
3. Dosis Tinggi
Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis tinggi
adalah :
100 mg/kg BB = 20 mg/200g BB
VAO = Dosis x Berat badan
Konsentrasi
= 20 mg/200g BB x 200g
20 mg/mL
= 1 mL
B. Glibenklamid
HED (mg/kg) = dosis hewan (mg/kg) x km hewan
Km manusia
5 mg/60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 6
37
5 mg/60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 0,162
Dosis hewan = 0,83 mg/kg
0,162
Dosis hewan = 0,1 mg/200g BB
C. Aloksan
Dosis ( 20 mg/200g BB)
VAO = Dosis x Berat badan
Konsentrasi
44
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
= 20 mg/200 g x 200g
20 mg/mL
= 1 mL
45
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 9. Pemeriksaan Parameter Ekstrak
Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak Yang Didapat
46 X 100
2103
= 2,18 %
Pemeriksaan Kadar Air
Berat cawan kosong (A) = 24,1865 gr
Berat sampel = 1,0006 gr
Berat cawan + sampel sebelum di oven (B) = 25,1925 gr
Berat cawan + sampel sesudah di oven (C) = 25,1802 gr
= 0,048 %
Pemeriksaan Kadar Abu
Berat Krus kosong (A) =24,4164 gr
Berat sampel = 1,0052 gr
Berat Krus + sampel sebelum di tanur (B) =25,4216 gr
Berat Krus + sampel sesudah di tanur (C) =24,4228 gr
% kadar Abu = C – A 100%
B – A
= 24,4228-24,4164 X 100%
25,4216-24,4164
= 0,636 %
46
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 10. Hasil Pengukuran Pada Metode Induksi Aloksan
Kelompok
Perlakuan
Sebelum
pemberian
ekstrak n-
heksan
Mastigopho
ra diclados
Hari ke 0
Setelah
peberian
ektrak n-
heksan
Mastigophora
diclados
Hari ke 7
Setelah
pemberian
ekstrak n-
heksan
Mastigophor
a
diclados
Hari ke 14
Setelah
pemberian
ekstrak n-
heksan
Mastigopho
ra diclados
Hari ke 21
Setelah
pemberian
n- heksan
Mastigoph
ora
diclados
Hari ke 28
Kontrol
Normal
45 50 50 46 49
70 72 62 73 62
80 82 80 80 79
49 49 48 49 49
50 50 56 52 62
58,8 60,6 59,2 60 60,2
Kontrol
Negatif
161 167 173 186 186
143 145 164 188 181
158 161 177 184 169
173 182 184 205 160
174 170 150 186 161
161,8 165 169,6 189,8 171,4
Kontrol
Positif
145 125 115 104 91
125 85 71 60 55
149 111 105 91 82
116 102 93 74 55
146 115 85 63 46
136,2 107,6 93,8 78,4 65,8
Dosis
Rendah
152 127 112 102 102
139 122 113 110 110
156 128 104 101 103
152 121 107 105
149,75 124,5 111,25 104,5 105
Dosis
Sedang
146 139 121 107 103
135 147 139 112 104
148 135 109 103 101
147 138 138 128
143 142 126,75 115 109
Dosis
Tinggi
149 88 76 76 65
169 92 78 55 70
176 115 64 55 54
105 92 49
56
164,6 98,33 72,66 69,5 58,8
47
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 11. Perhitungan Presentase Kadar Glukosa Darah Metode Induksi
Aloksan
A. Glibenklamid
Hari ke 7 = 136,2 -107,2 X 100 % = 20,99 %
136,2
Hari ke 14 = 136,2 – 93,8 X 100 % = 31,13 %
136,2
Hari ke 21 = 136,2 -78,4 X 100% = 42, 43 %
136,2
Hari ke 28 = 136,2 – 65,8 X 100% = 51,68 %
136,2
B. Dosis Rendah
Hari ke 7 = 149,75 – 124,5 X 100% = 16,84 %
149,75
Hari ke 14 = 149,75 -111,25 X 100 % = 25,70 %
149,75
Hari ke 21 = 149,75 – 104,5 X 100% = 30,21 %
149,75
Hari ke 28 = 149,75 – 105 X 100 % = 29,88 %
149,75
C. Dosia Sedang
Hari ke 7 = 143 -142 X 100 % = 0,699 %
143
Hari ke 14 = 143 – 126,75X100 % = 11,36 %
143
Hari ke 21 = 143 – 115X 100 % = 19,58 %
143
Hari ke 28 = 143 -109 X 100 % = 23,77 %
143
D. Dosis Tinggi
Hari ke 7 = 164,6 – 98,33 X 100% = 40,26 %
164,6
Hari ke 14 = 164,6 -72,66 X100 % = 55,85 %
164,6
Hari ke 21 = 164,6 – 69,5 X 100 % = 57,77 %
164,6
Hari ke 28 = 164,6 – 58,8 X 100 % = 64,2 %
164,6
48
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Lampiran 12 . Hasil Statistik Dosis Ektrak n-heksan Mastigophora diclados
dengan Metode Induksi Aloksan.
1. Uji Normalitas Kolmogorof –Smirnov dan Uji Homogenitas
a. Uji Normalitas Kolmogorof – smirnov
b. Tujuan : Untuk mengetahui kenormalan data penurunan kadar glukosa
darah
Hipotesis
Ho : Data penurunan kadar glukosa darah tikus yang terdistribusi normal
Ha : Data penurunan kadar glukosa darah tikus tidak terdistribusi normal
Tabel 7. Uji Normalitas Mastigophora diclados Pada Metode Induksi Aloksan
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
Hari ke 0 Hari ke 7 Hari ke 14 Hari ke21 Hari ke 28
N 25 26 26 27 28
Normal Parametersa Mean 1.3192E2 1.1481E2 1.0573E2 1.0196E2 92.3571
Std. Deviation 4.01351E1 3.52012E1 3.84973E1 4.48789E1 4.39370E1
Most Extreme Differences Absolute .251 .118 .097 .189 .162
Positive .136 .083 .097 .189 .162
Negative -.251 -.118 -.071 -.114 -.146
Kolmogorov-Smirnov Z 1.253 .599 .495 .984 .856
Asymp. Sig. (2-tailed) .087 .865 .967 .288 .456
a. Test distribution is Normal.
Keterangan : Nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima, artinya penurunan kadar
glukosa darah pada tikus seluruh kelompok perlakuan terdistribusi normal.
b.Uji Homogenitas levene
Tujuan : Untuk melihat homogenitas data penurunan kadar glukosa darah tikus.
Hipotesis
Ho : Data penurunan kadar glukosa darah tikus bervariasi homogen
Ha : Data penurunan kadar glukosa darah tikus bervariasi tidak homogen
Pengambilan keputusan
Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima
Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak
49
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Tabel 8. Uji Homogenitas
Levene Statistic df1 df2 Sig.
Hari 0 1.779 5 19 .165
Hari 7 2.804 5 20 .045
Hari 14 1.383 5 20 .273
Hari 21 2.262 5 21 .086
Hari 28 2.915 5 22 .036
Keterangan : Pada uji homegenitas data tersebut yang tidak memenuhi syarat
yaitu pada hari ke 7, 21 dan 28 karena signifikansi P≤ 0,05.
Kesimpulan : Data kadar glukosa darah hari ke 0 sebelum pemberian ekstrak dan
hari ke 14 setelah pemberian ekstrak. Dilanjutkan dengan ANOVA
karena syarat normalitas dan homegenitasnya telah terpenuhi.
2. Uji Kruskal Wallis Mastigophora diclados pada metode induksi
aloksan
Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan secara bermakna pada
data penurunan kadar glukosa darah pada tikus karena tidak memenuhi syarat uji
ANOVA
Hipotesis
Ho : Data penurunan kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data penurunan kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna
Pengambilan Keputusan
Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima
Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak
Tabel 9. Uji Kruskal-Wallis Mastigophora diclados Pada Metode Induksi
Aloksan
hari7 hari21 hari28
Chi-Square 12.522 10.519 9.471
Df 2 2 2
Asymp. Sig. .002 .005 .009
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: kelompok7
50
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Keterangan : Data kadar glukosa darah tikus hari ke 7, 21 dan 28 setelah
pemberian ekstrak berbeda secara bermakna maka dilanjutkan
dengan uji BNT Menggunakan metode LSD. Uji BNT merupakan
uji lanjutan apabila hasil pengujian menunjukkan adanya perbedaan
nilai secara bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan
kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara
bermakna dengan kelompok lainnya.
Tabel 10. Uji Analirah Varian ( ANOVA) Satu Arah dan Beda Nyata
Terkecil (BNT)
Terhadap kadar glukosa darah kelompok hewan uji.
Tujuan : Untuk mengetahi ada atau tidaknya perbedaan data kadar glukosa
darah tikus.
Hipotesis:
Ho : Data kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna
Ha : Data kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna
Pengambilan keputusan :
Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima
Jika nilai signifikansi≤ 0,05 maka Ho ditolak
a. Uji ANOVA satu arah terhadap kadar glukosa darah seluruh kelompok
hewan uji hari ke 0 sebelum pemberian ekstrak dan hari ke 14 setelah
pemberian ekstrak.
ANOVA
Tabel 10. Uji ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Hari ke 0 Between Groups 35680.023 5 7136.005 45.501 .000
Within Groups 2979.817 19 156.832
Total 38659.840 24
Hari ke 14 Between Groups 33954.899 5 6790.980 43.866 .000
Within Groups 3096.217 20 154.811
Total 37051.115 25
51
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Tabel 11. Uji BNT
LSD
Dependen
t Variable
(I)
kelompo
k1
(J)
kelompo
k1
Mean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
Hari 0 Kontrol
normal
Kontrol
negatif -101.40000* 7.92042 .000 -117.9776 -84.8224
Kontrol
positif -77.40000* 7.92042 .000 -93.9776 -60.8224
Dosis
rendah -90.95000* 8.40087 .000 -108.5332 -73.3668
Dosis
sedang -84.20000* 9.14571 .000 -103.3422 -65.0578
Dosis
tinggi -105.86667* 9.14571 .000 -125.0089 -86.7245
Kontrol
negatif
Kontrol
normal 101.40000* 7.92042 .000 84.8224 117.9776
Kontrol
positif 24.00000* 7.92042 .007 7.4224 40.5776
Dosis
rendah 10.45000 8.40087 .229 -7.1332 28.0332
Dosis
sedang 17.20000 9.14571 .075 -1.9422 36.3422
Dosis
tinggi -4.46667 9.14571 .631 -23.6089 14.6755
Kontrol
positif
Kontrol
normal 77.40000* 7.92042 .000 60.8224 93.9776
Kontrol
negatif -24.00000* 7.92042 .007 -40.5776 -7.4224
Dosis
rendah -13.55000 8.40087 .123 -31.1332 4.0332
Dosis
sedang -6.80000 9.14571 .466 -25.9422 12.3422
Dosis
tinggi -28.46667* 9.14571 .006 -47.6089 -9.3245
Dosis
rendah
Kontrol
normal 90.95000* 8.40087 .000 73.3668 108.5332
Kontrol
negatif -10.45000 8.40087 .229 -28.0332 7.1332
Kontrol
positif 13.55000 8.40087 .123 -4.0332 31.1332
Dosis
sedang 6.75000 9.56481 .489 -13.2694 26.7694
Dosis
tinggi -14.91667 9.56481 .135 -34.9360 5.1027
Dosis
sedang
Kontrol
normal 84.20000* 9.14571 .000 65.0578 103.3422
Kontrol
negatif -17.20000 9.14571 .075 -36.3422 1.9422
Kontrol
positif 6.80000 9.14571 .466 -12.3422 25.9422
52
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Dosis
rendah -6.75000 9.56481 .489 -26.7694 13.2694
Dosis
tinggi -21.66667* 10.22521 .047 -43.0683 -.2651
Dosis
tinggi
Kontrol
normal 105.86667* 9.14571 .000 86.7245 125.0089
Kontrol
negatif 4.46667 9.14571 .631 -14.6755 23.6089
Kontrol
positif 28.46667* 9.14571 .006 9.3245 47.6089
Dosis
rendah 14.91667 9.56481 .135 -5.1027 34.9360
Dosis
sedang 21.66667* 10.22521 .047 .2651 43.0683
Hari 7 Kontrol
normal
Kontrol
negatif -96.00000* 7.93129 .000 -112.5444 -79.4556
Kontrol
positif -47.00000* 7.93129 .000 -63.5444 -30.4556
Dosis
rendah -63.90000* 8.41240 .000 -81.4480 -46.3520
Dosis
sedang -81.40000* 8.41240 .000 -98.9480 -63.8520
Dosis
tinggi -37.73333* 9.15826 .001 -56.8371 -18.6295
Kontrol
negatif
Kontrol
normal 96.00000* 7.93129 .000 79.4556 112.5444
Kontrol
positif 49.00000* 7.93129 .000 32.4556 65.5444
Dosis
rendah 32.10000* 8.41240 .001 14.5520 49.6480
Dosis
sedang 14.60000 8.41240 .098 -2.9480 32.1480
Dosis
tinggi 58.26667* 9.15826 .000 39.1629 77.3705
Kontrol
positif
Kontrol
normal 47.00000* 7.93129 .000 30.4556 63.5444
Kontrol
negatif -49.00000* 7.93129 .000 -65.5444 -32.4556
Dosis
rendah -16.90000 8.41240 .058 -34.4480 .6480
Dosis
sedang -34.40000* 8.41240 .001 -51.9480 -16.8520
Dosis
tinggi 9.26667 9.15826 .324 -9.8371 28.3705
Dosis
rendah
Kontrol
normal 63.90000* 8.41240 .000 46.3520 81.4480
Kontrol
negatif -32.10000* 8.41240 .001 -49.6480 -14.5520
Kontrol
positif 16.90000 8.41240 .058 -.6480 34.4480
dosis
sedang -17.50000 8.86745 .062 -35.9972 .9972
Dosis
tinggi 26.16667* 9.57794 .013 6.1874 46.1459
Dosis
sedang
Kontrol
normal 81.40000* 8.41240 .000 63.8520 98.9480
53
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Kontrol
negatif -14.60000 8.41240 .098 -32.1480 2.9480
Kontrol
positif 34.40000* 8.41240 .001 16.8520 51.9480
Dosis
rendah 17.50000 8.86745 .062 -.9972 35.9972
Dosis
tinggi 43.66667* 9.57794 .000 23.6874 63.6459
Dosis
tinggi
Kontrol
normal 37.73333* 9.15826 .001 18.6295 56.8371
Kontrol
negatif -58.26667* 9.15826 .000 -77.3705 -39.1629
Kontrol
positif -9.26667 9.15826 .324 -28.3705 9.8371
Dosis
rendah -26.16667* 9.57794 .013 -46.1459 -6.1874
Dosis
sedang -43.66667* 9.57794 .000 -63.6459 -23.6874
Hari 14 Kontrol
normal
Kontrol
negatif -105.40000* 7.86920 .000 -121.8149 -88.9851
Kontrol
positif -34.60000* 7.86920 .000 -51.0149 -18.1851
Dosis
rendah -49.80000* 8.34655 .000 -67.2106 -32.3894
Dosis
sedang -67.55000* 8.34655 .000 -84.9606 -50.1394
Dosis
tinggi -13.46667 9.08657 .154 -32.4209 5.4876
Kontrol
negatif
Kontrol
normal 105.40000* 7.86920 .000 88.9851 121.8149
Kontrol
positif 70.80000* 7.86920 .000 54.3851 87.2149
Dosis
rendah 55.60000* 8.34655 .000 38.1894 73.0106
Dosis
sedang 37.85000* 8.34655 .000 20.4394 55.2606
Dosis
tinggi 91.93333* 9.08657 .000 72.9791 110.8876
Kontrol
positif
Konrol
normal 34.60000* 7.86920 .000 18.1851 51.0149
Kontrol
negatif -70.80000* 7.86920 .000 -87.2149 -54.3851
Dosis
rendah -15.20000 8.34655 .084 -32.6106 2.2106
Dosis
sedang -32.95000* 8.34655 .001 -50.3606 -15.5394
Dosis
tinggi 21.13333* 9.08657 .031 2.1791 40.0876
Dosis
rendah
Kontrol
normal 49.80000* 8.34655 .000 32.3894 67.2106
Kontrol
negatif -55.60000* 8.34655 .000 -73.0106 -38.1894
Dosis
rendah 15.20000 8.34655 .084 -2.2106 32.6106
Dosis
sedang -17.75000 8.79803 .057 -36.1024 .6024
54
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Dosis
tinggi 36.33333* 9.50296 .001 16.5105 56.1562
Dosis
sedang
Kontrol
normal 67.55000* 8.34655 .000 50.1394 84.9606
Kontrol
negatif -37.85000* 8.34655 .000 -55.2606 -20.4394
Kontrol
positif 32.95000* 8.34655 .001 15.5394 50.3606
Dosis
rendah 17.75000 8.79803 .057 -.6024 36.1024
Dosis
tinggi 54.08333* 9.50296 .000 34.2605 73.9062
Dosis
tinggi
Kontrol
normal 13.46667 9.08657 .154 -5.4876 32.4209
Kontrol
negatif -91.93333* 9.08657 .000 -110.8876 -72.9791
Kontrol
positif -21.13333* 9.08657 .031 -40.0876 -2.1791
Dosis
rendah -36.33333* 9.50296 .001 -56.1562 -16.5105
Dosis
sedang -54.08333* 9.50296 .000 -73.9062 -34.2605
Hari 21 Kontrol
normal
Kontrol
negatif -121.00000* 9.39220 .000 -140.5321 -101.4679
Kontrol
positif -18.40000 9.39220 .064 -37.9321 1.1321
Dosis
rendah -44.50000* 9.96193 .000 -65.2170 -23.7830
Dosis
sedang -55.00000* 9.96193 .000 -75.7170 -34.2830
Dosis
tinggi -9.50000 9.96193 .351 -30.2170 11.2170
Kontrol
negatif
Kontrol
normal 121.00000* 9.39220 .000 101.4679 140.5321
Kontrol
positif 102.60000* 9.39220 .000 83.0679 122.1321
Dosis
rendah 76.50000* 9.96193 .000 55.7830 97.2170
Dosis
sedang 66.00000* 9.96193 .000 45.2830 86.7170
Dosis
tinggi 111.50000* 9.96193 .000 90.7830 132.2170
Kontrol
positif
Kontrol
normal 18.40000 9.39220 .064 -1.1321 37.9321
Kontrol
negatif -102.60000* 9.39220 .000 -122.1321 -83.0679
Dosis
rendah -26.10000* 9.96193 .016 -46.8170 -5.3830
Dosis
sedang -36.60000* 9.96193 .001 -57.3170 -15.8830
Dosis
tinggi 8.90000 9.96193 .382 -11.8170 29.6170
Dosis
rendah
Kontrol
normal 44.50000* 9.96193 .000 23.7830 65.2170
Kontrol
negatif -76.50000* 9.96193 .000 -97.2170 -55.7830
55
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Kontrol
positif 26.10000* 9.96193 .016 5.3830 46.8170
Dosis
sedang -10.50000 10.50079 .329 -32.3376 11.3376
Dosis
tinggi 35.00000* 10.50079 .003 13.1624 56.8376
Dosis
sedang
Kontrol
normal 55.00000* 9.96193 .000 34.2830 75.7170
Kontrol
negatif -66.00000* 9.96193 .000 -86.7170 -45.2830
Kontrol
positif 36.60000* 9.96193 .001 15.8830 57.3170
Dosis
rendah 10.50000 10.50079 .329 -11.3376 32.3376
Dosis
tinggi 45.50000* 10.50079 .000 23.6624 67.3376
Dosis
tinggi
Kontrol
normal 9.50000 9.96193 .351 -11.2170 30.2170
Kontro
negatif -111.50000* 9.96193 .000 -132.2170 -90.7830
Kontrol
posiitf -8.90000 9.96193 .382 -29.6170 11.8170
Dosis
rendah -35.00000* 10.50079 .003 -56.8376 -13.1624
Dosis
sedang -45.50000* 10.50079 .000 -67.3376 -23.6624
Hari 28
Kontrol
normal
Kontrol
negatif -111.20000* 7.99636 .000 -127.7834 -94.6166
Kontrol
positif -5.60000 7.99636 .491 -22.1834 10.9834
Dosis
rendah -44.80000* 9.23340 .000 -63.9489 -25.6511
Dosis
sedang -48.80000* 8.48142 .000 -66.3894 -31.2106
Dosis
tinggi 2.20000 7.65593 .777 -13.6774 18.0774
Kontrol
negatif
Kontrol
normal 111.20000* 7.99636 .000 94.6166 127.7834
Kontrol
positif 105.60000* 7.99636 .000 89.0166 122.1834
Dosis
rendah 66.40000* 9.23340 .000 47.2511 85.5489
Dosis
sedang 62.40000* 8.48142 .000 44.8106 79.9894
Dosis
tinggi 113.40000* 7.65593 .000 97.5226 129.2774
Kontrol
positif
Kontrol
normal 5.60000 7.99636 .491 -10.9834 22.1834
Kontrol
negatif -105.60000* 7.99636 .000 -122.1834 -89.0166
Dosis
rendah -39.20000* 9.23340 .000 -58.3489 -20.0511
Dosis
sedang -43.20000* 8.48142 .000 -60.7894 -25.6106
Dosis
tinggi 7.80000 7.65593 .319 -8.0774 23.6774
56
UIN Syarif Hidaytullah Jakarta
Dosis
rendah
Kontrol
normal 44.80000* 9.23340 .000 25.6511 63.9489
Kontrol
negatif -66.40000* 9.23340 .000 -85.5489 -47.2511
Kontrol
positif 39.20000* 9.23340 .000 20.0511 58.3489
Dosis
sedang -4.00000 9.65653 .683 -24.0264 16.0264
Dosis
tinggi 47.00000* 8.94021 .000 28.4591 65.5409
Dosis
sedang
Kontrol
normal 48.80000* 8.48142 .000 31.2106 66.3894
Kontrol
negatif -62.40000* 8.48142 .000 -79.9894 -44.8106
Kontrol
positif 43.20000* 8.48142 .000 25.6106 60.7894
Dosis
rendah 4.00000 9.65653 .683 -16.0264 24.0264
Dosis
tinggi 51.00000* 8.16125 .000 34.0746 67.9254
Dosis
tinggi
Kontrol
normal -2.20000 7.65593 .777 -18.0774 13.6774
Kontrol
negatif -113.40000* 7.65593 .000 -129.2774 -97.5226
Kontrol
positif -7.80000 7.65593 .319 -23.6774 8.0774
Dosis
rendah -47.00000* 8.94021 .000 -65.5409 -28.4591
Dosis
sedang -51.00000* 8.16125 .000 -67.9254 -34.0746
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Kesimpulan :
Pada hasil uji LSD diatas menunjukkan bahwa kontrol positif, dosis
rendah, dosis sedang dan dosis tinggi berbeda secara bermakna dengan
kontrol negatif yang artinya bahwa glibenclamid dan ekstrak n-Heksan
dari lumut hati mastighopora diclados dapat memberikan efek terhadap
tikus yang di induksi aloksan.
Pada hari ke 7, 21 dan 28 kontrol positif tidak berbeda secara bermakna
dengan dosis tinggi yang artinya bahwa dosis tinggi mempunyai efek yang
hampir sama dengan kontrol positif atau bahkan dapat memberikan efek
yang lebih baik .