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UE6 Initiation à la connaissance du médicament - Module « Pharmacologie générale » -
Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques »
C Capdeville-Atkinson, C Perrin-Sarrado, N Gambier,F Dupuis, C Gaucher, G Trocklé
Livres: «Pharmacologie : des cibles vers l’indication thérapeutique», Yves LANDRY et Jean-Pierre GIES, Dunod, Paris 2009
«Initiation à la connaissance du médicament-UE6 1° année santé», Yves LANDRY, EdiScience, Dunod, Paris 2010
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Plan1. Interaction Ligand - Récepteur
1.1 Les 3 propriétés importantes1.2 Notion de ligand, agoniste, antagoniste1.3 Loi d’action de masse1.4 Théorie d’occupation des récepteurs
2. Méthodes d’étude de l’interaction Ligand - Récepteur
1.1 Approche fonctionnelle1.2 Etude de liaison à haute affinité
3. Notion de sélectivité
4. CONCLUSION
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1. Interaction Ligand - Récepteur
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Affinité = traduit la puissance de l’interaction physico-chimique entre le ligand et son récepteur = capacité de reconnaissance entre les 2 partenaires
Réponse = effet ou activité du ligand suite à sa fixation sur le récepteur
Sélectivité : - affinité préférentielle d’un ligand pour un récepteur par rapport à un autre- liée à la concentration utilisée : « l’important, c’est la dose »
- production de médicaments de plus haute sélectivitéRapport effet primaire/effets secondaire
- liaisons non covalentes (hydrophobes, ioniques, H, van der Walls)
1.1 Les 3 propriétés importantes
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Sélectivité
Transduction intracellulaire
Réponse biologique effet Activité
Couplage avec des effecteurs
Affinité
Cible (récepteur)
médicament
reconnaissance mutuelle des 2 partenaires
1.1 Les 3 propriétés importantes
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récepteur
Signald'entrée
affinité
Systèmeamplificateur
Systèmeeffecteur
effet
TransductionAmplificationModulation
Signalde sortie
activité
1.1 Les 3 propriétés importantes
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1.2 Notion de ligand, agoniste et antagoniste
Ligand : toute molécule se liant à un récepteur
Agoniste : molécule capable d’engendrer, par sa liaison à ses récepteurs, une réponse biologique semblable à celle du médiateur endogène
Antagoniste : molécule dont l’interaction avec les mêmes récepteurs ne déclenche pas de réponse biologique et s’oppose à
l’effet du médiateur endogène
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Cascade enzymatique- phosphorylations
- déphosphorylations
Réponse cellulaire
- contraction- sécrétion- croissance et division
- …..
AGONISTE
Absence de signal intracellulaire
Absence de réponse cellulaire
Seconds messagers
ANTAGONISTE
1.2 Notion de ligand, agoniste et antagoniste
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LigandEndogène
Agoniste Antagoniste
REPONSEPHARMACOLOGIQUE
AUCUNEREPONSE
Médiateur endogène
1.2 Notion de ligand, agoniste et antagoniste
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1.2 Notion de ligand, agoniste et antagoniste
Médicament agoniste : mime l’effet du médiateur
entier (réponse cellulaire maximale) partiel
Médicament antagoniste neutre : - s’oppose à la liaison du médiateur à son récepteur - n’induit pas de réponse par lui-même mais l’effet du médiateur endogène
Médicament agoniste inverse : - s’oppose à la liaison du médiateur à son récepteur- entraîne une réponse opposée à celle de l’agoniste
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1.3 Loi d’action de masse
Modèle de la loi d’action de masse
- équilibre dynamique entre formes libres et associées du ligand et récepteur
[L] + [R] [LR] k1
k-1
[L] : concentration molaire de ligand libre[R] : concentration molaire de récepteur libre[LR] : concentration molaire du complexe ligand-récepteurk1 : constante cinétique d’association (M-1 x min-1)
k-1 : constante cinétique de dissociation (min-1)
Notion d’équilibre
- modèle satisfaisant pour les études de base
- constante d’équilibre K (à une T°C donnée)
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Vitesse d’association = [L] x [R] x k1
- nombre de formation du complexe ligand-récepteur par unité de temps
A l’équilibre : les 2 vitesses sont égales :[L] x [R] x k1 = [LR] x k-1 ([L] x [R]) / [LR] = k-1/k1 = KD
Affinité : inverse de la constante de dissociation : - 1/KA pour agoniste - 1/KB pour antagoniste
KD : constante de dissociation à l’équilibre (M)- KD dénommée KA pour agoniste - KD dénommée KB pour antagoniste
Vitesse de dissociation = [LR] x k-1
- nombre de dissociation du complexe ligand-récepteur par unité de temps
1.3 Loi d’action de masse
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Affinité = 1/KA ou 1/KB = k1/k -1 = 1/KD
En pratique : 1/KA et 1/KB = peu utilisées
KA
KB
Ligands à forte affinité faible concentration pour se lier au récepteur (suggérant dose faible in vivo)
Plus KD est faible, plus l’affinité est élevée
KD = [L] nécessaire pour occuper 50 % des récepteurs à l’équilibre
grandeur de concentrationunité = Molaire
1.3 Loi d’action de masse
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1.4 Réponse et théorie d’occupation des récepteurs
Affinité réciproque de L et R
Formation du complexe LR
Activité ou effet de L
=
Réponse de R Réponse cellulaire ou réponse de l’organisme
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1.4.1 Théorie de l’occupation des récepteurs (Clark)
- Réponse proportionnelle au pourcentage de récepteurs occupés - Lorsque 100% des récepteurs occupés réponse maximale
100
50
0
Récepteurs occupés (%)
0 50 100
Effe
t (%
)
1.4 Réponse et théorie d’occupation des récepteurs
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[A] + [R] [AR]k 1
k -1
[A] : concentration molaire d’agoniste libre[R] : concentration molaire de récepteur libre[AR]: concentration molaire du complexe agoniste-récepteur
Réponse = [A]/([A]+KA)
Avec - [Rtot] = [R] + [AR]
- KA = ([A] x [R])/[AR]
1.4 Réponse et théorie d’occupation des récepteursLoi d’action de masse
Réponse = [AR]/[Rtot]Si réponse % de récepteurs occupés
Théorie d’occupation des récepteurs
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1.4.2 Evolution de la théorie de l’occupation des récepteurs
Ariens réponse maximale obtenue pour une gamme de concentration = différente d’un agoniste à l’autre
facteur de proportionnalité propre à chaque agoniste : activité intrinsèque = capacité du ligand à stimuler le tissu
Réponse = [AR] / [Rtot] = A/(A+KA)
= 1 : agoniste entier
0 < < 1 : agoniste partiel
< 0 : agoniste inverse
= 0 : antagoniste neutre
1.4 Réponse et théorie d’occupation des récepteurs
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Théorie d’occupation des récepteurs
complétée par Stephenson et Furchgott :
- Réponse maximale faibles proportions de récepteurs occupés
(2-20%)
- notion de récepteurs de réserve
= récepteurs libres alors que la réponse maximale est obtenue
1.4 Réponse et théorie d’occupation des récepteurs
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Conclusion : INTERACTION LIGAND - RECEPTEUR
3 propriétés : - Affinité- Réponse = Activité- Sélectivité
Différents types de ligands :- Agoniste entier- Agoniste partiel- Antagoniste neutre- Agoniste inverse
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2. Méthodes d’étude de l’interaction Ligand - Récepteur
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1) Approches fonctionnelles activité, affinité
Objectif global : évaluation de l’activité, et de l’affinité du médicament
pour le récepteur responsable de l’effet primaire et les récepteurs
responsables des effets secondaires notion de sélectivité d’un
agoniste ou d’un antagoniste
Etude des ligands : 2 approches
2) Approches par liaison spécifique à haute affinité affinité, activité
2. Méthodes d’étude de l’interaction ligand - récepteur
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Les différents modèles d’étude de l’affinité et de l’activité des médicaments
Récepteurspurifiés
Fragmentsmembranaires
Cellules isolées
Etude de la liaison spécifique des ligands
Organes isolés
Organismeentier
Etude fonctionnelle des ligands
in vitro In vivo
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2.1 Approches fonctionnelles
Expériences fonctionnelles préliminaires caractéristiques nouveau ligand
- Si ligand = agoniste : observation d’un effet propre du ligand en absence de médiateur endogène
- Si ligand = antagoniste : pas d’effet propre mais effet du médiateur endogène ou d’un agoniste ajouté
Suivant agoniste ou antagoniste, protocoles expérimentaux différents
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réponses graduelles : augmentent progressivement en fonction de la dose (in vivo) ou de la concentration (in vitro).
dose efficace 50 (DE50) ou concentration efficace 50 (CE50) : dose ou concentration nécessaire pour obtenir 50% de l’effet maximal
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistesagonistes
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Réalisation d’une courbe dose-réponse ou courbe concentration-réponse (doses ou concentrations cumulatives )
0 10 20 30 40
3Contraction (g)
Temps (minutes)
2
1
10-8 M
3.10-8 M
3.10-7 M
10-7 M
10-6 M
3.10-6 M
10-5 M3.10-5 M
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
ex : courbe concentration réponsed’un anneau aortique isolé
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2.1.1.1 Détermination de Emax, DE50 ou CE50
Dose ou Concentration linéaire d’agoniste
Effet
Transformée en courbe sigmoïde
Relation entre l’effet (E) et la dose, ou entre l’effet (E) et la concentration du médicament
courbe dose-réponse ou courbe concentration-réponse :
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
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2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
Transformation en courbe sigmoïde sur papier semi-logarithmique :
2 3 4 5 6 7 8 9 2 3 4 5 6 7 8 9 2 3 4 5 6 7 8 9 2 3 4 5 6 7 8 91 1 1 1 1
10-9 M 10-8 M 10-7 M 10-6 M 10-5 M[Agoniste](molaire, M)
Effet
Effet max
Effet = f([Agoniste] en Molaire) (ou = f(dose, en quantité/kg))
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2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
Transformation en courbe sigmoïde
sur papier millimétré : Effet = f(- log [Agoniste])
9 8 7 6 5
[Agoniste]-log M
Effet
Effet max
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2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
Valeurs expérimentales non assimilables à constantes d’affinité - Comparables entre labos si conditions expérimentales identiques
CE50 : concentration d’agoniste produisant 50% de l’effet maximalDE50 : dose d’agoniste produisant 50% de l’effet maximalpD2 = -log10 (CE50) (traduit l’affinité, mais pas valeur d’affinité absolue) : plus pD2 élevé plus affinité forte
Augmentation répartie sur 2 unités log
Effet = f(- log10 [A])
Effet
-log[A]
Emax
89 7 6 5-log(CE50)
Emax/2
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2.1.1.2. Détermination de l’activité : Emax et notion d’activité intrinsèque
-log[A]
100
50
9 8 7 6
= 1
= 0,5
-logCE50
Effet (%)
C = Agoniste partiel
A et B = Agonistes entiers
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
-logCE50
A
BC
NB : CE50 A < CE50 B et C donc affinité de A > B et CCE50 B = CE50 C (affinités identiques)
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2.1.1.2. Détermination de l’activité : Emax et notion d’activité intrinsèque
agoniste partiel (réponse maximale relativement faible) suggère changement de conformation partiel du récepteur et signalisation intracellulaire faible en présence d’un agoniste entier, les agonistes partiels exercent en partie un effet antagoniste (donc par ex, attention à l’administration d’un agoniste morphinique partiel (antalgique) chez un morphinoname = risque de précipiter un syndrome de manque)
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.1 Etude des agonistes
-log[A]
100
50
9 8 7 6
Effet (%)
Agoniste partiel
Agonistes entiers
en partie effet antagoniste de C par rapport à A ou B si A ou B présents en même temps que C
A
BC
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Antagonisme compétitif : liaison de l’antagoniste sur le site de liaison de l’agoniste
Différents types d’antagonisme :
Antagonisme non compétitif : liaison de l’antagoniste sur un site de liaison du récepteur distinct du site de liaison de l’agoniste
pas d’effets propres étude par observation de la modification de l’effet de l’agoniste correspondant
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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Antagonisme surmontable : déplacement courbe vers la droite
sans diminution effet maximum pentes des courbes avec et sans antagoniste = parallèles
Ex : cas des antagonistes compétitifs réversibles
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
Effet
agoniste seul
+ antagoniste
-log [agoniste]
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Antagonisme insurmontable : diminution de l’effet maximum de l’agoniste
Ex : cas des antagonistes non compétitifs
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
Effet
-log [agoniste]
agoniste seul
+ antagoniste
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2.1.1.1 Détermination du pA2 (ou pKB) d’un antagoniste
Pour antagonisme surmontable compétitif pA2
Etude de l’effet de plusieurs concentrations (doses) d’antagoniste sur la courbe concentration (dose)-réponse de l’agoniste
Déplacement vers la droite de la courbe concentration (dose)-réponse de l’agoniste est fonction de l’affinité de l’antagoniste et de sa concentration (dose)
Effet
agoniste seul
+ antagoniste
-log [agoniste]
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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Quantification de la réponse de l’agoniste en absenceet en présence antagoniste
= fonction loi action de masse et théorie occupation des
récepteurs
Réponse identique si conditions identiques
d’occupation du récepteur par l’agoniste
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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En absence d’antagoniste :
Pour une concentration A d’agoniste, une fraction des récepteurs A est
occupée avec pour résultat un effet E
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.3 Etude des antagonistes
A + R AR
Effet E
A
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Effet : E
A ++ B ++ R AR + BR ’A
- fraction des récepteurs occupés par la concentration A d’agoniste: ’A
- Compétition entre A et B pour se lier à R
effet pour la même concentration A d’agoniste
- Fonction des concentrations des ligands
En présence d’antagoniste :
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
en présence d’antagoniste B et de la même concentration A d’agoniste:
![Page 39: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/39.jpg)
Pour occuper même fraction de récepteurs et obtenir même effet, il faut augmenter la concentration d’agoniste A’ telle que A’>A et A = A’
A’R + + BRA’ ++ B ++ R
Effet E
’A=A
A’ > A Effet : E
A ++ B ++ R AR + BR’A
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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En absence d’antagoniste :
A + R AR
Effet E
A
A’R + + BRA’ ++ B ++ R
Effet E
’A = A
A’ > AEffet : E
A ++ B ++ R AR + BR’
A
En présence d’antagoniste :
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rapport de concentrations de l’agoniste occupant la même fraction de récepteurs et donnant le même effet en absence et en présence d’une concentration d’antagoniste
= A’/A = rapport des concentrations équi-actives
log10 ((A’/A) – 1) = log10 [antagoniste] – log10 KB
Représentation graphique : représentation de Schild = droite
Calcul du rapport des concentrations équi-actives (ou rapport des doses équi-actives = « dose-ratio ») et représentation graphique de Schild
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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Intersection de la droite de Schild avec axe des abscisses pA2
pA2 = - log de [antagoniste] (molaire) qui oblige à doubler la concentration
d’agoniste pour obtenir le même effet qu’en absence d’antagoniste
Plus le pA2 est , plus l’affinité de l’antagoniste pour le récepteur
lorsque log ((A’/A) – 1) = 0 A’/A = 2
log10 ((A’/A) – 1) = log10 [antagoniste] – log10 KB
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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pA 2
Log 10 (A’ ‘’ ‘’’/A - 1)
- log10 [antagoniste]0
1
2
3
log10 (a-1)
log10 (b-1)
log10 (c-1)
Représentation graphique de Schild
a
a = A’/A
b
b = A’’/A
c
c = A’’’/A
agoniste seul
Effet
[agoniste]A A’
A + antagoniste B : [B1]
A’’
A + antagoniste B : [B2]
A’’’
A + antagoniste B : [B3]
2.1 Approches fonctionnelles 2.1.2 Etude des antagonistes
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permet caractériser l’affinité d’une nouvelle molécule synthétisée vis à vis de récepteurs connus
détermination de KD
permet caractériser les récepteurs d’un tissu ou d’une cellule en utilisant des ligands connus
détermination de Bmax (nombre maximal de récepteurs)
2.2 Liaison spécifique haute affinité
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2.2.1 Réalisation des études de liaison
- Préparations subcellulaires :* homogénat
* membranes* récepteurs purifiés ou cellulaires
- Utilisation de ligand marqué = radioligand (L*) : 3H, 14C, 125I
- 3 étapes : incubation, séparation, mesure
2.2 Liaison spécifique haute affinité
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L*
récepteurs
Séparation
* **
** *** *
L*R
Mesure
* **
Mélange scintillant
Incubation
**
**
**
*
**
*
2.2 Liaison spécifique haute affinité
radioligand L* en présence d’une population de récepteurs (conditions précises de temps, pH, T°C)
formation complexe L*R
Centrifugation ou filtration
séparation ligand libre L* et complexe L*R
Radioactivité retenue sur le filtre
quantification complexe L*R
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Liaison non spécifique : liaison à sites de fixation autres que récepteurs- faible affinité- non saturable
Liaison spécifique : liaison à des récepteurs- forte affinité- critère de saturabilité
2.2 Liaison spécifique haute affinité
Mesure de la liaison totale= liaison spécifique + liaison non spécifique
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Protocoles expérimentaux permettant de déterminer liaison spécifique
Méthode par saturation
Méthode par compétition
2.2 Liaison spécifique haute affinité
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détermination de la liaison totale
Première série d’expériences = concentration récepteur fixe et concentrations croissantes de ligand marqué (L*):
Deuxième série d’expériences = tubes dans conditions identiques + surcharge ligand non marqué (L):
- Compétition entre L et L*- L >> L* L en excès déplace L* des récepteurs (car nombre limité)- mais pas de compétition pour les sites de liaison non spécifiques
(car nombre infini)
détermination de la liaison non spécifique
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
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Liaison du radioligand
L*R
[L*]
liaison spécifique
liaison non spécifique
liaison totale
Liaison spécifique = différence entre les 2 mesures
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
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Avec densité de sites de liaison spécifique : [Rt] = Bmax = [R] + [L*R]
Détermination de l’affinité du ligand pour le récepteur :
et loi d’action de masse : KD = ([L*] x [R]) / [L*R]
KD : [radioligand] requise pour occuper 50% des récepteurs
KD = ([L*] x (Bmax – [L*R])) / [L*R]
Si [L*R] = Bmax/2 KD = [L*]
plus KD faible, plus l’affinité du ligand est grande
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
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- Nature hyperbolique de la liaison spécifique : [L*R]
[L*]
liaison spécifique100%
50%KD
Bmax
-Transformation en régression linéaire : 1) Représentation de Scatchard2) Représentation de Hill
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
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Représentation de Scatchard
détermination précise KD et Bmax (quantité totale de récepteurs dans la préparation) si conditions expérimentales strictes, suffisamment de points expérimentaux …
B/F
Pente = -1/K D
B
Bmax
Bmax /K D
[L*R] = Bound = B
[L*] = Free = F
- ordonnée : B/F - abscisse B
B/F = -1/KD x B + Bmax/KD
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
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Représentation de Scatchard
Ex : en augmentant le nombre de points expérimentaux, il est possible de « découvrir » une 2° population de récepteurs dans la préparation, sur lesquels le ligand radioactif se fixerait avec une affinité plus faible que sur la 1° population
B/F
Pente = -1/K du radioligand pour la 1° population de RrD
B
B de la 1° population de Rrmax
Bmax /K D
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
Bmax /K D
B de la 2° population de Rrmax
Pente = -1/K radioligand 2° population de RrD
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Représentation de Hill
- ordonnée : log10 (B/(Bmax-B)
- abscisse : log10 [L*]
log10 (B/(Bmax-B) = nlog10 F-log10 KD
- log [L*]
Log (B/(Bmax - B))
pente = n
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
![Page 56: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/56.jpg)
- Pente de la droite n représente le nombre de Hill correspondant au nombre de sites par récepteur
Si n = 1 : loi d’action de masse vérifiée : 1 site de fixation pour le ligand
population homogène de récepteurs
Si n > 1 : présence de plusieurs sites d’affinité différente pour le ligand population hétérogène de récepteurs
Représentation de Hill Quantifier la déviation éventuelle de l’interaction ligand récepteur de la loi d’action de masse :
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.2 Méthode par saturation
![Page 57: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/57.jpg)
- Mise en présence d’une concentration déterminée de récepteur [R] et de radioligand [L*]
Affinité d’un ligand non marqué pour son récepteur R proportionnelle
au pouvoir de déplacement d’un radioligand L* de caractéristiques (KD) connues
X se fixe sur le récepteur et déplace L*
- Addition de concentrations croissantes ligand non marqué X à étudier
radioactivité en fonction affinité de X et L* pour récepteur
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.3 Méthode par compétition
![Page 58: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/58.jpg)
Liaison spécifique à haute affinité : déplacement du ligand radiomarqué
CI50
- log [X]
50 %
100 %
Liai
son
spéc
ifiqu
e du
ra
diol
igan
d [L
*R]
[R] fixe : * * *
Radioligand [L*] fixe ** *[X] croissantes :
* **
**
*
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.3 Méthode par compétition
** *
![Page 59: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/59.jpg)
CI50 : concentration inhibitrice 50
= concentration de ligand non marqué qui inhibe 50% de la liaison spécifique du radioligand.
Plus CI50 faible, plus l’affinité du ligand non marqué est grande
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.3 Méthode par compétition
![Page 60: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/60.jpg)
CI50 dépend de la concentration et du KD de radioligands L*
comparables uniquement dans des conditions expérimentales strictement identiques
Ou :
KI (équation de Cheng et Prusoff) :
KI = CI50 / (1 + ([L*] / KD))
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.3 Méthode par compétition
![Page 61: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/61.jpg)
KI : Valeur corrigée qui ne varie pas en fonction de la concentration ou du KD de L* assimilable à l’inverse de l’affinité du ligand pour le récepteur.
Dénominations KD et KI dépendent uniquement du protocole utilisé (saturation/compétition) ; leurs valeurs sont comparables.
Méthode par compétition = la plus utilisée car pas de nécessité de radiomarquer la nouvelle molécule synthétisée : utilisation de banque de ligands connus radiomarqués
2.2 Liaison spécifique haute aff 2.2.4 KD et KI
![Page 62: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/62.jpg)
3. Notion de Sélectivité
Sélectivité de l’effet du médicament pour l’effet recherché E1 vis à vis effet secondaire E2 =
Rapport : Concentration ou dose effet E2
Concentration ou dose effet E1CE50 ou DE50
Sélectivité d’un ligand pour la cible R1 vis à vis de la cible R2 =
affinité pour R2
affinité pour R1Rapport :
Notion essentielle à la connaissance d’un médicament
![Page 63: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/63.jpg)
Comparaison de la liaison spécifique d’un ligand à 3 récepteurs R1, R2, R3 en fonction de la concentration du ligand
> 100 Ligand sélectif de R1 par rapport à R3
< 10 Ligand non sélectif de R1 par rapport à R2
KD R3
KD R1Rapport : = 1000
KD R2
KD R1Rapport : = 3
3. Notion de Sélectivité (étude liaison spécifique haute affinité)
![Page 64: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/64.jpg)
Sélectivité et marge thérapeutique d’un médicament
Effet
-log[concentration]89 7 6 5
Emax/2
Effet thérapeutiqueEffet indésirable
CE50(ET) CE50(EI)
Marge thérapeutique =(= espacement entre courbes)
CE50(E Ther)CE50(E Ind)
Plus la marge thérapeutique est élevée (= plus l’espacement entre les courbes est grand, avec courbe « effet indés à droite de courbe effet thérap), plus la sécurité du médicament est importante
3. Notion de Sélectivité (approche fonctionnelle)
![Page 65: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/65.jpg)
Que choisir pour bien comparer 2 ligands ?
Comparer efficacité de divers agonistes sur un système expérimental unique CE50 peuvent être comparées de manière fiable par
méthode fonctionnelle
Comparer affinité de divers ligands sur divers systèmes expérimentaux
comparer les KD méthode de liaison spécifique à haute affinité
CONCLUSION
![Page 66: UE6 Initiation à la connaissance du m é dicament - Module « Pharmacologie g é n é rale » - Item « Paramètres de quantification des effets pharmacologiques](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062318/551d9da7497959293b8d7dc9/html5/thumbnails/66.jpg)
CONCLUSION
Paramètres mesuréscomparables d’un labo à un autre ? (indépendamment des conditions expérimentales locales)
Etudes fonctionnelles
CE50 / DE50 non
pD2 non
pA2 (antagonistes compétitifs) pA2 assimilable à pKB
plus ou moins
Etudes de liaison à haute affinité
KI oui
KD oui
CI50 non (calculer KI)