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s
UNIVERSIDAD DE JAÉN Facultad de Ciencias
Experimentales
Trabajo Fin de Grado
Antifolatos como agentes
terapeuticos
Alumno: Juan Pedro Merino Rusillo
JULIO 2014
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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Antifolatos como agentes terapeuticos
Memoria del Trabajo Fin de Grado presentada por Juan Pedro Merino Rusillo
Jaén, 8 de Julio de 2014
Fdo.: Juan Pedro Merino Rusillo
LOS TUTORES DEL TRABAJO FIN DE GRADO Fdo.: Justo Cobo DomingoCatedrático del Departamento de Química Inorgánica y Orgánica
Fdo.: Manuel Nogueras Montiel Catedrático del Departamento de Química Inorgánica y Orgánica
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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ABSTRACT
Literature search was conducted to collect the necessary information for the proposal
project of study of new dihydrofolate reductase inhibitors. Relevant conclusions were
obtained about its functionalization and active sites with different types of inhibitors
(as IC50 values obtained). It was created a library of fragments for the design of our
inhibitors. We proceeded to design and synthesize four molecules. And finally, it was
proposed as a possible project to be undertaken, with chronogram and economic
proposal.
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ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN: RELEVANCIA DE LAS PIRIMIDINAS EN ASPECTOS
BIOLÓGICOS Y MEDICINALES.
1.1. Importancia biológica 6
1.2. Importancia medicinal 7
2. ÁCIDO FÓLICO, DIHYDROFOLATO REDUCTASA Y ANTIFOLATOS. 8
2.1. Aplicaciones de inhibidores del dihidrofolato reductasa 10
2.1.1. Antibacteriales 10
2.1.2. Anticancerigenos 11
2.1.3. Antimaraliares 11
2.1.4. Antituberculosis 12
2.1.5. Leismaniasis y Tripanosomiasis 12
2.1.6. Fungicida 12
3. PNEUMOCYSTIS CARINII PNEUMONIA. 13
3.1. Tipos de fármacos 13
3.2. Análisis de la pcDHFR y la hDHFR 15
4. CLASIFICACIÓN DE ANTIFOLATOS. 16
4.1. Clasificación de Antifolatos para Pnemocystis Carinii 16
4.2. Diseño de librería de fragmentos 25
5. DESCRIPCIÓN DEL PROYECTO. 27
5.1. Hipótesis 27
5.2. Objetivos del proyecto 27
5.2.1. Objetivos generales 27
5.2.2. Objetivos secundarios 27
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5.3. Metodología, plan de trabajo y resultados previstos 28
5.3.1. Diseño y síntesis 28
5.3.1.1. Moléculas propuestas 28
5.3.1.2. Análisis Retrosintético 29
5.3.1.2.1. Derivado con un resto de 5-bencil pirimidina,
tipo 1: molécula (I) 29
5.3.1.2.2. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-il)
pirimidina, tipo 2: moléculas (II, III y IV) 30
5.3.2. Propuestas de síntesis 32
5.3.2.1. Derivado con un resto de 5-bencil pirimidina
(molécula I) 32
5.3.2.2. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-ilmetil)
pirimidina con unión de but-3-inamida
(molécula II) 33
5.3.2.3. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-
ilmetil)pirimidina con unión de éter prop-2-in-1-il amina
(molécula III) 35
5.3.2.4. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-il)
pirimidina con unión de etinamina (molécula IV) 37
5.4. Cronograma 39
5.5. Impacto esperado de los resultados 39
5.6. Resumen del presupuesto desglosado para el desarrollo del
proyecto 40
6. RESUMEN. 40
7. BIBLIOGRAFÍA. 41
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1. INTRODUCCIÓN: RELEVANCIA DE LAS PIRIMIDINAS EN ASPECTOS
BIOLÓGICOS Y MEDICINALES. [1]
En la presente Memoria se muestran los resultados de la búsqueda
bibliográfica, análisis y síntesis de información en lo que se refiere a compuestos
pirimidínicos, así como enzimas y rutas en los que participa dicha molécula. Las
pirimidinas son una fuente potencial de estudio para el desarrollo de inhibidores, y
por tanto dianas biológicas para el desarrollo de fármacos.
1.1. Importancia biológica.
La pirimidina es uno de los heterociclos nitrogenados más importantes para el
ser humano. En la actualidad, se conocen numerosas moléculas pertenecientes a
dicha familia que se encuentran en la naturaleza, participando en muchas de las
reacciones químicas a nivel biológico, como ácidos nucleicos: uracilo (1), timina (2) y
citosina (3). Otras actúan como vitaminas: Tiamina (4), riboflavina (5) y ácido fólico
(6), B1, B2 y B9 respectivamente (Figura 1.1).
Figura 1.1.
Si bien, como hemos visto, y veremos en el resto de esta memoria, no solo la
podemos encontrar en la forma 1,3-diazina, si no fusionada en otros tipos de
heterociclos compuestos por 2 o 3 anillos ya sean aromáticos o no, como por
ejemplo pteridinas, quinazolinas, etc.
O NH
NH
O
CH3
O NH
NH
O
O
NH2
NH
N
CH3
OH
S
N+
NH2
NN
CH3
Cl-
CH3 CH3
O
O
NN
NH
N
CH3
OH OH
OH
NH2 N
N
N
N
OH
NH
OH
NH
O
OH
OOH
(1) (2) (3) (4) (5)
(6)
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1.2. Importancia medicinal.
Aunque más adelante hablaremos de los distintos fármacos de base
pirimidínica enfocados a la inhibición de la ruta del ácido fólico, por el momento
citaremos una serie de ellos de forma general sin centrarnos en ningún tipo de
enfermedad o ruta.
Durante las últimas dos décadas, diversos derivados de la pirimidina han sido
empleados principalmente como agentes anti-cancerígenos (Figura 1.2), siendo el
glucoronato de trimetrexato (7) uno de los más relevantes. El 2-tiouracil (8) por
ejemplo es usado contra el hipertiroidismo con unos efectos secundarios mínimos.
Una gran mayoría de las 2,4-diaminopirimidinasson empleadas como inhibidores
selectivos para la dihidrofolato reductasa, la pirimetamina (9), es utilizada
concretamente para la malaria plasmódica. Derivados de azufre como la sulfadiazina
(10) son empleados en pacientes con insuficiencia renal. Y algunos análogos de la
timidina como el retrovir (11) son potentes inhibidores de los efectos citopáticos del
VIH.
Figura 1.2
También podemos encontrar algunas pirimidinas con función antibiótica
(Figura 1.3): la bacimetrina (12) es usada contra infecciones de estafilococos,
antifúngicos, la flucitosina (13) para tratar la micosis sistemática, la capreomicina
(14) es empleada para tratar la tuberculosis, y pirimidinas simples como el ácido
orótico (16) para prevenir fallos cardiacos y como antihistamínico siendo 10 veces
más potente que otros del tipo del astemizol como es la tazipilina (15).
NH
N
N
N
OCH3
ONH2
ONH2
CH3
NH2
(7)
S
OH
N
NH
(8)
Cl
CH3 NH2
NH2
N
N
(9)
OO
NH2
S
NH
N
N
(10)
CH3O
O
N
NH
OCH3
OH NN
+
N-
(11)
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Figura 1.3.
2. ÁCIDO FÓLICO, DIHIDROFOLATO RECUCTASA Y ANTIFOLATOS. [2] [3]
El ácido fólico es una molécula de estructura pteridínica unida a un anillo
aromático, y éste a su vez a un resto aspártico. El ácido fólico es reducido por el
coenzima Nicotinamina Adenina Dinucleotido Fosfato reducido (NADPH) con la
ayuda del enzima DiHidroFolato Reductasa (DHFR) hasta TetraHidroFolato (THF)
(Figura 2.1). El enzima, así como el coenzima participan en ambos pasos de la
reducción, tanto a dihidrofolato como a tetrahidrofolato.
Figura 2.1
NH2
OH
CH3
N
N
(12)
F
NH2
OH
N
N
(13)
NH2O
NH
O
O
NH2
O
O
OO
NH
NHNH
NH NH
NH
CH3
NH
CH3
NH2
(14)
CH3
CH3
O
O
NN
N
N
N N
SOH
(15)
OHO
NH
NH
OOH
(16)
O
O
NH2 NH
NN
NH
NH
NH
O
OH
O OH
HH
H
O
O
NH2 NH
NN
N
NH
NH
O
OH
O OH
O
O
NH2 NH
NNH
NH
NH
NH
O
OH
O OH
H
O
O
NH2 NH
NN
NH
N
NH
O
OH
O OH
Ácido Fólico
7
5
N5,N10-Metileno THF
DHFR
NADPH +
DHFR
NADPH +
Serine hidrometil transferasa
NH2
OR
NH
NN
NH
NHCH3
N5, N10-Metileno THF
Reductasa
Homocisteina
Metionina
SAM
Purinas
Timidilato sintasa (TS)
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El THF o folato, es un importante donador de un átomo de carbono en la
síntesis de purinas y de aminoácidos como metionina e histidina. Cabe destacar que
el ser humano no es capaz de sintetizar el ácido fólico, sino que debe conseguirlo
por medio de la dieta.
Para que la reacción proceda, el dihidrofolato debe protonarse en el átomo N-
5 o N-8 del residuo de pteridina para la sucesiva transferencia del ion hidruro desde
la posición 4-pro del NADPH hasta el C-6 del DHF (Figura 2.2). Para que se lleve a
cabo dicha protonación es necesaria la acción de un aminoácido que en el caso del
ser humano es el ácido glutámico, que servirá de anclaje en N-1 y en el grupo2-
amino.
Figura 2.2
La DHFR es una proteína soluble en agua que en humanos consiste en 8
láminas beta, las cuales constituyen la estructura rígida de la molécula y 4 hélices
alfa. Dos de ellas forman el sitio de unión con el sustrato y las otras 2 el sitio de
dominio de la coenzima. Al final de cada paso de reacción, la NADPH es oxidada a
NADP+.
Figura 2.3
H
H
O
R
NH2 N
NHN
NH
H
H
O
R
NH2 N
NH C+N
H
NH
H
H
H
O
R
NH2
NH
NH
NH
N
H+
H-
H
H
H
O
R
NH2 N
NHN
+
NH
12
34 5
678
R
H H
NH2
O
NH
12
34
NADPH
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La inhibición de la DHFR no daría lugar a esta reducción indicada,
cancelándose la síntesis de purinas (y por tanto la de ácidos nucleicos). Se
bloquearía la replicación celular, así como la síntesis de S-adenosil metionina
(cosustrato que interviene en la transferencia de grupos metilo).
Con estos planteamientos, nuestro objetivo será conseguir una molécula con
mayor afinidad frente al DHFR que el propio ácido fólico y así bloquear el
ensamblamiento a sus sitios de anclaje. Lo deseable sería una unión selectiva con el
DHFR de la enfermedad/parasito a tratar y menor afinidad con el DHFR humano
(hDHFR) (lo que la haría potencialmente menos tóxica). Para ello habría que
distinguir los distintos puntos de anclaje que se pueden encontrar en una y en otra y
estudiar qué tipo de fragmentos de la molécula a diseñar tendría mayor afinidad por
unos anclajes u otros.
2.1. Aplicaciones de inhibidores del dihidrofolato reductasa.
Los siguientes moléculas/inhibidores se insertan en el sitio activo de la enzima
DHFR inhibiendo así la inserción del ácido fólico, y con ello inhibiendo la replicación
celular.
2.1.1. Antibacteriales.
El estudio de inhibidores por esta ruta se ha aplicado como vía alternativa a
otras a la que ciertos microorganismos terminaron haciéndose resistentes (Figura
2.4). La Trimetoprima (TMP) (18) usada, principalmente en infecciones urinarias, y
combinada con sulfonamidas es empleada en pacientes con tuberculosis, siendo de
5 a 6 veces más activa en DHFR de bacterias que en DHFR de mamífero.
Figura 2.4
OCH 3
OCH 3
H3CO
NH2 NH2N
N
(18)
NH2
NH2 N
N
OCH 3
OCH 3N
N
O
NN
OCH 3
(19)
NH2
NH2 N
N
OCH 3
OCH 3
O
(20)
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El compuesto AL0030543 (19) ha demostrado una gran actividad in Vitro para
estafilococos y neumonía estafilococa resistentes a antibióticos tradicionales. El
compuesto (20) iclaprim, es un inhibidor selectivo de la DHFR, para bacterias
resistentes a la meticilina.
2.1.2. Anticancerígenos.
Entre los anticancerígenos más destacados se encuentran el metrotexato (21)
que es un antagonista estructural del ácido fólico. Su efecto es la destrucción del
ADN y la síntesis de proteínas lo que provoca la muerte celular.
Figura 2.5
El trimetrexato (22) muestra un mecanismo de acción similar y es
recomendado para pacientes con neumonía causada por pneumocystis (PCP) que
no son capaces de resistir o tolerar una terapia con co-trimoxazole en pacientes con
SIDA.
2.1.3. Antimalariales.
En las últimos décadas numerosos medicamentos (Figura 2.6) han sido
efectivos en las rutas bioquímica de estos parásitos del genero plasmodium. Se
conocen principalmente dos tipos: inhibidores de la DiHidroPteroato Sintetasa
(DHPS) como la sulfadoxina (23), y de DHFR (proguanil (24) y pirimetamina).
Figura 2.6
OCH3
OCH3
OCH3
CH3
NH2
NH2
N
N NH
(22)
O
NH2
NH2
NH2
N
NN
N
N
CH3
O OH
O
OH
(21)
OCH3
OCH3O
O
NH
NN
S
NH2(23) Cl
NH NH NH
NHNH
CH3
CH3
(24)
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2.1.4. Antituberculosis:
La tuberculosis, junto con el sida, es la enfermedad más destructora de la
humanidad, para aquella población más susceptible a las infecciones oportunistas.
Para su tratamiento se han utilizado inhibidores potentes que contienen anillos de
quinazolina (figura 2.4) (18) empleados en la lucha contra la bacteria que provoca
esta enfermedad.
2.1.5. Leismaniasis y Tripanosomiasis:
La leismaniasis y la tripanosomiasis son enfermedades que en África y en el
sur de Asia son causadas por parásitos protozoos que provocan desde ulceras
cutáneas hasta inflamaciones de hígado y bazo. En los últimos años, se han
sintetizados nuevas series de 5-bencil, 2,4-diaminopirimidinas (25) que presentan
una mayor selectividad para la enzima del parásito.
Figura 2.7
2.1.6. Fungicida.
Y por último, dentro de las distintas aplicaciones de los antifolatos, los
encontramos como fungicida teniendo como objetivo al patógeno candida glabrata,
encontrado en las infecciones de candidemia, y en pneumocystis carinii, la cual
produce un tipo de neumonía, que será la enfermedad en la que nos centraremos de
aquí en adelante.
NH2
NH2
N
N RO
(25)
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3. NEUMONÍA POR PNEUMOCYSTIS CARINII
La neumonía causada por Pneunocystis Carinii (PCP, de sus siglas en inglés
Pneumocystis Carinii Pnemonia) es una infección oportunista que mayoritariamente
se da en personas inmuno-deprimidas. Ya sea por una malnutrición proteica,
leucemia aguda, porque se hallen sometidos a tratamientos inmunosupresores por
enfermedades autoinmunes, trasplantes, neoplastias, o virus de inmunodeficiencia
humana (VIH). Afecta al 80% de los pacientes con SIDA, y es la enfermedad
definitiva para el 60%. Existe controversia sobre si PCP es adquirida en la vida
temprana o si es la exposición repetida la que causa la enfermedad. El organismo es
adquirido por inhalación y se adhiere a las células alveolares de tipo 1 (sitio de
intercambio gaseoso).
En los primeros estadios de la enfermedad los síntomas son únicamente
fiebre por encima de 37.7, disnea, tos, nivel de lactato deshidrogenasa (LDH) por
encima de 460 unidades por litro (lo normal en una persona adulta está entre 100 y
200 u/L) y una presión parcial de oxigeno arterial por debajo de 75 mm Hg. La
proliferación de dicha enfermedad causa supuración rosada y espumosa que llena
los espacios alveolares con la consecuencia de la disminución de la oxigenación,
espesamiento de los intersticios y eventualmente fibrosis. La Pneumocystis
extrapulmonar ocurre raramente, pero cuando lo hace, involucra órganos como el
corazón, la piel, bazo, tiroides y ojos.
3.1. Tipos de fármacos:[5] [6]
Existe cierta variedad de fármacos utilizados para el tratamiento de esta
infección. Sin embargo, su uso está limitado por la toxicidad (al ser tratamientos muy
invasivos) más que por la falta de respuesta. El tiempo de tratamiento (vía oral en
caso de PCP moderada o débil e intravenosa para PCP avanzada) va de 3 semanas
para pacientes con SIDA a 2 semanas para el resto. Nos centraremos
mayoritariamente en aquellos fármacos e inhibidores que tienen función de antifolato
y poseen una estructura pirimidínica.
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Tabla 3.1
Nombre Estructura Efectos
secundarios
Trimetoprima
(Bactrim) OCH3
OCH3
H3CO
NH2
NH2 N
N
Fiebre,
nauseas,
hepatitis,
supresión de la
medula ósea e
hiperkalemia
Epiroprima
N
O
O
NH2
NH2 N
N
CH3
CH3
Supresión de la
medula ósea,
nauseas,
neuropatía
periférica, dolor
de cabeza
Piritrexim OCH3
OCH3CH3
NH2
NH2
N
N
N
Fiebre,
nauseas,
supresión de la
medula ósea
Pentamidina
Hipo o
hiperglucemia,
diabetes,
arritmias,
pancreatitis
hepatitis,
supresión de la
medula ósea…
NH
NH2
O O
NH
NH2
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3.2. Análisis de la pcDHFR y la hDHFR[7]
En este apartado vamos a pasar a analizar el DHFR tanto humana como la de
la PC. Las disparidades que encontremos en los sitios activos de una y otra pueden
dar la clave para que el nuevo inhibidor no sea tan invasivo en el organismo
humano. En la figura 3.1 se muestra como la pcDHFR interacciona con el
medicamento trimetoprima y en la 3.3con la NADPH.
En la figura 3.1 podemos ver como el aminoácido Glu32A ancla al fármaco
por medio de enlaces de hidrógeno que involucran al grupo amino y al hidrogeno de
la estructura pirimidínica. La Phe36A interactúa con el anillo aromático de la
estructura principal así como con el linker y con los sustituyentes. El aminoácido
ile33Ainteraccionapolarmente con los sustituyentes, en este caso con el grupo
metoxi. Los aminoácidos Ile123 e Ile10A forman enlaces de hidrogeno con los
hidrógenos del otro grupo amino. La pcDHFR posee 206 aminoácidos y comparte 70
con la hDHFR.
Por su parte, la hDHFR (Figura 3.2) en su interacción con el ácido fólico,
comparte los anclajesde Phe34A con la estuctura principal y con el linker, al
igualque la pDHFR. Existe, además (como también vimos en la figura
3.2),interacción de Glu32 con el grupo amino y con el sustituyente heteroatómico del
anillo, esta vez, pteridínico. Las mayores diferencias se encuentran en los anclajes
con el resto terminal, en este caso, resto glutámico.Los aminoacidos Gln35, Asn64A
y Arg70A forman enlaces de hidrogeno con los oxigenos de los sustituyentes
ácidos.
Figura 3.1
Figura 3.2
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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Figura 3.3
4. CLASIFICACIÓN DE ANTIFOLATOS.
Estructuralmente los antifolatos han sido clasificados en clásicos y no
clásicos. Los denominados antifolatos clásicos se parecen a la estructura del ácido
fólico porque incluyen un resto de anillo condensado, unido a un aminoácido por
medio de un linker que los enlaza. Por su parte, en los antifolatos no clásicos se
mantiene siempre el anillo aromático y no tienen por qué poseer linker o resto de
aminoácido.
4.1. Clasificación de Antifolatos para Pnemocystis Carinii [8]
De aquí en adelante al hablar de actividad nos referiremos a pIC50, es decir -
log de IC50 (mol/L)con respecto a la pcDHFR.
Comenzamos la clasificación con antifolatos del tipo tieno-pirimidina (Fig 4.1),
donde vemos una variación de actividades que oscila, para los diferentes
sustituyentes del resto fenilo, desde 5.85 para n=1 2,5-dimetoxi hasta 6,92 para
n=2y 2,5-dimetoxi (26). El hecho de cambiar la unión del resto aromático de la
posición 6 a la 5 produce una disminución de la actividad a 5,26. También existen
antifolatos de tipo triciclo (Figura 4.1) (27) donde las actividades oscilan entre 6.19 y
6.85.
Figura 4.1
(CH2)n
CH3
NH2
NH2
N
N
S
A
NH2
NH2
N
N
S
(26) (27)
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Uno de los grupos de los que más variedad de inhibidores podemos encontrar
son las quinazolinas, donde las actividades son bastante aceptables.
Mayoritariamente está formado por antifolatos de tipo clásico. En primer lugar
analizaremos los derivados sustituidos en 5,6 y 7 (Figura 4.2). En la tabla 4.1 vemos
como los haluros en posición R1, aumentan la activad, siendo el mayoritario el
Bromo. Los éteres tipo metoxi, así como los derivados fluoro-isopropilicos
disminuyen su actividad al aumentar la longitud de la cadena. Con respecto a los
haluros en R2, el Bromo una vez más alcanza una activad reseñable, en cambio el
flúor disminuye su actividad considerablemente.
Figura 4.2
Tabla 4.1
Compuesto R1 R2 R3 Actividad pc
1 CH3 H H 6,82
2 CF3 H H 5,09
3 Br H H 7,55
4 OCH3 H H 6,35
5 OCH2C2F5 H H 5,27
6 OCH3C3F7 H H 5,15
7 H F H 4,92
8 H OCH3 H 5,24
9 H H CH3 5,19
10 Cl Br H 7.85
11 H CH3 CH3 6,28
Con respecto a las quinazolinas de tipo clásico, 5-cloro (Figura 4.3), poseen
actividad más alta las que tienen en A los grupos metilamina, 2,5-dimetoxiy3,4,5-
trimetoxi. En este grupo, la actividad sigue siendo alta aunque se introduzca un
átomo de bromo en la posición 2. Sin embargo, el cambio del resto en posición 6 a la
posición5 del anillo provoca reducción de la actividad (Tabla 4.2).
R3
R2
R1NH2
NH2 N
N
(28)
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Figura 4.3
Tabla 4.2
Compuesto A Z Actividad pc
1 NHCH2 2,5-(MeO)2 8,28
2 NH(CH2)3 2,5-(MeO)2 5,59
3 NHCH2 2,5-(MeO)3 8,48
4 NH(CH2)2 2,5-(MeO)3 5,37
5 NH(CH2)3 2,5-(MeO)3 5,02
6 N(Me)CH2 2,5-(MeO)3 7,77
7 CH2N(Me) 3,4,5-(MeO)3 8,92
8 CH2NH 3,4,5-(MeO)3 8,48
9* CH2N(CH2) 3,4,5-(MeO)3 8,89
10 CH2NH 2-Br-3,4,5-(MeO)3 7,26
11+ CH2NH 2-Br-3,4,5-(MeO)3 4.70
* Cl → Me
+ Cl → A; A→H
Con respecto a los inhibidores con estructura de triazinas hay de 2 tipos: uno
donde el resto de anillo condensado es un grupo fenilo (30) y el segundo con un
grupo naftaleno (31),(figura 4.4). Las actividades mostradas no son excesivamente
altas, salvo la del compuesto 5 (tabla 4.3). La variación de la localización de los
grupos metoxi no afecta significativamente a la actividad. En cambio, la actividad se
ve aumentada con haluros, concretamente en las posiciones R1 y R3, quizás debido
a una mayor deslocalización de la carga.
NH2
NH2 Cl
A
N
NZ
(29)
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Figura 4.4
Tabla 4.3
Compuesto R1 R2 R3 R4 Actividad
1 OCH3 OCH3 OCH3 H 5,69
2 H OCH3 H OCH3 5,89
3 H Cl H H 6,36
4 Cl Cl H H 6,52
5 Cl H Cl H 7,08
Otro de los grandes grupos de inhibidores son los derivados de pteridinas
(Figura 4.5).Debido a la semejanza de la estructura base con la del ácido fólico, es
uno de los que posee miembros con la actividad más alta (Tabla 4.4). Las moléculas
que poseen la cadena más larga, ya sea unida al anillo de pteridina como al fenilo
muestran una mayor interacción con el enzima.
Figura 4.5
Tabla 4.4
Compuesto R Actividad
1 4-n-C4H9C6H4CH2 6,41
2 3-CF3C6H4CH2 5,59
3 C6H4CH2CH2CH2 6,96
4 C6H11CH2 6,59
5 1,2-Naphtho 5,74
NH2
NH2
N
N
N
CH3
CH3
R1
R2
R3
R4
R4
R3
R2
NH2
NH2
N
N
N
CH3
CH3
R1
(30) (31)
R
R
NH2
NH2
N
NN
N
(32)
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Dentro de este grupo, el inhibidor 2 presenta una actividad equivalente a la de
unos de los fármacos de uso actual, el trimetrexato (TMX). La presencia de azufre
aumenta bastante la actividad en comparación con la de oxígeno, probablemente
esto sea debido a la mayor deslocalización que se consigue con el primero.
Figura 4.6
Tabla 4.5
Compuesto X Actividad
1 CH2CH2 6,85
2 CH2 8,38
3 O 6,47
4 S 7,92
TMX - 8,38
En este último tipo de pteridinas, el grupo dibenzoazepina proporciona un
aumento de la de inhibición incluso superior a la comentada hasta ahora, siendo el
máximo de 10 en el caso del ácido metoxi-metil-benzoico. Este crecimiento de la
inhibición puede ser debido a la similitud de grupos funcionales con el propio ácido
fólico. Estos resultados hacen que se deba considerar esta estructura a la hora de
diseñar nuestros inhibidores.
Figura 4.7
XN
NH2
NH2
N
N
N
N
(33)
X
N
NH2
NH2
N
NN
N
(34)
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Tabla 4.6
Compuesto X Actividad
1 H 8,10
2 OH 8,51
3 OCH2CO2H 8,68
4 O(CH2)2CO2H 8,62
5 O(CH2)3CO2H 9,96
6 O(CH2)4CO2H 8,96
7 OCH2C6H4(4-CO2H) 10.00
Otro tipo de inhibidores, aunque de menor relevancia, es el que implica al
anillo de pirimidina unido a uno o varios anillos no necesariamente aromáticos
(Figura 4.8). La baja actividad que muestran estos derivados puede ser debida a la
falta de sustituyentes que le otorguen algún carácter para una mayor interacción con
la enzima (Tabla 4.6).
Figura 4.8
Tabla 4.6
Compuesto Actividad
1 6,21
2 4,93
3 5,11
4 4,75
En penúltimo lugar vamos a comentar las piridopirimidinas, ya sean con
nitrógeno del anillo piridínico en posición 4 (Figura 4.9) o 5 (Figura 4.10). Por término
medio la mayoría de las variaciones dadas poseen una actividad aceptable, sobre
todo las piridopirimidinas con el nitrógeno piridínico en posición 5. Vemos una vez
NH2
NH2 N
N
NH2
NH2 N
N
CH3
CH3
NH2
NH2 N
NCH3
NH2
NH2 N
N
CH3(35) (36) (37) (38)
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más que los sustituyentes halogenados tipo cloro (Tabla 4.7) aumentan la actividad
por encima de 8 en los casos donde Zes3. En las piridopirimidinas de tipo 8 (tabla
4.8), variando la posición de los sustituyentes metoxilo se puede llegar a valores de
actividad por encima de 7, como es el caso del Piritrexim (PTX) (compuesto 1) con el
grupo metilo en posición 7.
Figura 4.9
Tabla 4.7
Compuesto R Z Actividad
1 H 2,5-(MeO)2 6,85
2 H 3,4,5-(MeO)3 6,59
3 Me 3,4,5-(MeO)3 7,89
4 Me 4-Cl 8,21
5 Me 3-Cl 6,68
6 Me 3,4-(Cl)2 8,66
Figura 4.10
R
N
NH2
NH2
N
NN
Z
(39)
NH2
NH2
N
N
N
X
(40)
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Tabla 4.8
Compuesto X Actividad
PTX* 2,5-(MeO)2 8,89
1 2,5-(MeO)2 7,55
2 3,4-(MeO)2 7,62
3 3,5-(MeO)2 7,68
4 2-Cl 7,29
5 4-F 7,28
PTX* 7-Me
Por último, vamos a comentar uno de los grupos más importantes, los
inhibidores exclusivamente de tipo pirimidina (Figura 4.11). También es momento de
introducir un tipo de sustituyente que no habíamos visto hasta ahora, las cadenas de
tipo alquino. En la actualidad es una de las variantes con las que más se está
jugando a la hora de diseñar los nuevos antifolatos (Tabla 4.9). Para una mayor
similitud con el ácido fólico, se usan los sustituyente de tipo ácido que cuando se
encuentran en la posición más alejada, posición 3, muestran la actividad más
elevada (Tabla 4.9).
Figura 4.11
CH3O
NH2
NH2
N
N
OOH
(41)
X
CH3O
NH2
NH2
N
N
Z
(42)
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Tabla 4.9
Compuesto X Z Actividad
(41) 7,28
2.1 OCH2 3-CO2H 7,05
2.2 OCH2 4-CO2H 6,92
2.3 CHCHCH2O 2-CO2H 6,07
2.4 (CH2)3O 2-CO2H 6,11
2.5 (CH2)3O 3-CO2H 6,96
2.6 C≡C 3-CO2H 8,64
2.7 C≡C 4-CO2H 6,89
2.8 CH2CH2 4-CO2H 6,15
2.9* C≡C 4-CO2H 6,92
2.9* En el resto aromático unido a la pirimidina, el grupo metoxilo en posición 2 es sustituido por 3,4-(OMe)2
Figura 4.12
Tabla 4.10
Compuesto R Actividad
TMP 5,92
1 (CH2)5 5,72
2 (CH2)6 5,85
3 (CH2)7 6,25
4 (CH2)8 5,36
5 (CH2)9 5,29
Figura 4.13
R
CH3
O
ONH2
NH2 N
N
(
R
CH3O
NH2
NH2
N
N
(44)
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Tabla 4.11
Compuesto R Actividad
1 C≡C(CH2)2CO2H 7,89
2 C≡C(CH2)3CO2H 8,55
3 C≡C(CH2)4CO2H 7,06
4 (CH2)4CO2H 7,82
5 (CH2)5CO2H 7,82
4.2. Diseño de librería de fragmentos[9]
Ya que nuestro objetivo es la búsqueda y diseño de estructuras nuevas
basadas en las experiencias existentes, seguiremos una de las estrategias más
planteadas a la hora de plasmar, ver y escoger los distintos fragmentos que
formarán nuestra estructura. Con la creación de una “librería” tendremos a nuestra
disposición los distintos fragmentos clasificados según el criterio escogido. En
nuestro caso, tal como se muestra en la figura 4.12, hemos dividido en 6 grupos los
posibles fragmentos divididos 3 a 3.
En el primer grupo tenemos como “scaffolds” la estructura pirimidínica. Con
respecto a los linkers, se incluyen una cadena hetero alifática y como radical arilo no
sólo el ciclo de 6 átomos de carbono. El resto terminal a su vez se puede dividir en 2
grupos, los antifolatos de tipo clásico, que presentan un sustituyente tipo ácido, y los
de tipo no clásico, un ejemplo de sustituyente para antifolatos no clásico sería
dibenzoazepina.
En el segundo conjunto, los 3 grupos se componen por pequeños radicales u
átomos que le otorgan a la molécula cierto carácter con respecto a su interacción
con la enzima, pudiendo ser grupos donantes o atractores de electrones.
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Figura 4.12
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5. DESCRIPCIÓN DEL PROYECTO.
5.1. Hipótesis
Se plantea el diseño de nuevos inhibidores en base al estudio de las
interacciones de cada grupo funcional con el enzima DHFR, intentando una mayor
selectividad con las de pcDHFR y la mínima actividad biológica con hDHFR.
5.2. Objetivos del proyecto.
5.2.1. Objetivos generales
El objetivo principal consiste en la propuesta de síntesis de nuevos inhibidores
enzimáticos para la dihidrofolato reductasa.
5.2.2. Objetivos secundarios
Los objetivos secundarios son:
- Búsqueda de las condiciones óptimas para dichas síntesis.
- Evaluación de la actividad enzimática.
- Comprobación de la actividad antifúngica.
- Estudio de la selectividad con la pcDHFR con respecto de la humana con la
consiguiente disminución de la toxicología con respecto a los medicamentos
actuales. Según la modificación entre el fragmento del linker (ciclopenteno y el
resto de dibenzoazepina.
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5.3. Metodología, plan de trabajo y resultados previstos.
La parte sintética sería llevada a cabo en la Universidad de Jaén, para lo que
se dispone de laboratorio de investigación asignados al Departamento de Química
Inorgánica y Orgánica, que dispone del equipamiento necesario.
Para el análisis estructural se deberán utilizar los recursos existentes en el
Centro de Instrumentación Científico Técnico (CICT) para lo que como
investigadores de la Universidad de Jaén existe una cuota reducida por su uso.
En cuanto a los estudios de modelización molecular, serán realizados en
colaboración con un grupo de investigación de la Universidad de Barcelona dirigido
por Jaime Rubio Martínez orientado a análisis computacional, para lo que disponen
de un seminario de computación con software para la realización de cálculos
mecano cuánticos, docking y dinámica molecular.
Los análisis de evaluación enzimática se realizarían en el Instituto de
Biomedicina de Sevilla (IBIS) por el grupo de investigación dirigido por Enrique J.
Calderón Sandubete. Para lo que dispone del laboratorio farmacológico para realizar
los estudios de citotoxicidad, evaluación enzimática y actividad antifúngica.
5.3.1. Diseño y síntesis.
5.3.1.1. Moléculas propuestas.
Después de lo comentado arriba, creemos que las siguientes moléculas,
deberán presentar una actividad adecuada con respecto a pcDHFR, así como una
baja actividad con hDHFR. La molécula (I) (Figura 5.1) es bastante similar a las
vistas en la tabla 4.11, con la diferencia de que en nuestro caso existen dos grupos
electrón donantes como son el cloro en posición 4 y la amida en posición 6.
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Con respecto a las otras 3 (II, III, IV) las variaciones que proponemos son la
presencia de un linker de ciclopenteno, y la unión al resto terminal. Todas las
propuestas contienen un triple enlace junto con un grupo carbonilo, un éter y la
cadena simple.
Figura 5.1
5.3.1.2. Análisis retrosintético.
Para llevar a cabo la retrosíntesis de las cuatro moléculas comentadas, las
consideraremos en dos grupos: tipo 1 (I) y 2 (II, III, IV).
5.3.1.2.1. Derivado con un resto de 5-bencil pirimidina, tipo 1: molécula (I)
Para esta molécula planteamos una síntesis en línea ya que no será
necesaria la preparación paralela de distintos fragmentos.
Para la primera desconexión se podría optar entre los anillos de pirimidina y
bencilo o la del sustituyente del anillo aromático. Se optó por la del sustituyente ya
que el paso de unión entre el bencilo (CAS: 49617-83-6) y el heterociclo es más fácil
de realizar sin esa sustitución. Para ello podemos considerar un acoplamiento de
Sonogashira precedido de una sustitución nucleofílica.
ClNH2 N
N
NHAc OH
OO
Cl
OH
NH2
NN
N
OH
O
N
OCl
NHAc
NH2N
N Ph
NH2
N
N
N
(I) (II)
(III)
(IV)
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En este punto tenemos la pirimidina sustituida según los grupos funcionales
que nos interesan tras la halogenación y la acetilación. Ésta ha sido sintetizada a
partir de los fragmentos que se muestran en la figura 5.2 (CAS: 4000-16-2 y 79574-
98-4).
Figura 5.2
5.3.1.2.2. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-il) pirimidina, tipo 2:
moléculas (II, III y IV)
En este caso se trata de una síntesis convergente ya que habrá que preparar
varios fragmentos paralelamente para luego acoplarlos. Aunque haya disparidades
entre las 3 moléculas, todas se estructuran de igual manera. La primera desconexión
será la de la pirimidina con respecto al resto de la molécula por lo que será un
acoplamiento de Negishi.
O
OH
NHAc
NH2 N
N
Cl
/NHAc
NH2 N
N
Cl
IO
OHCH+
/
NHAc
NH2 N
N
Cl
+
I
Br
NH2
NH2 NH
N
O
/
/
NH2
NH
NH2
O
NO
CH3
Reacción de Sonogashira
Halogenación y acetilación
Formación de la Pirimidina
+
Sustituciónnucleofílica
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Con respecto a la desconexión de la dibenzoazepina con el ciclopenteno, en
la síntesis de IV, al ser la cadena de unión más simple, se podrá realizar entre el
grupo etinilciclopropeno y el nitrógeno de la azepina. En el caso de III se hizo de
modo que la formación del éter fuera más fácil, ya que la sustitución al ciclopenteno
hubiera sido complicada. En el caso II, se optó por la ruptura en el carbonilo, lo más
sencillo sería la formación por medio de un magnesiano.
Figura 5.3
En todos los casos sería necesario la formación del metilciclopenteno
correspondientemente formado a partir del (4-aminociclopent-2-en-1-il)metanol
(CAS: 136522-35-5) y de la dibenzoazepina (CAS: 265-96-2).
/
C l
R
NH 2N
N
+
RN
C l
R
NH 2N
N
(CH 2 )n'n
aBr(CH 2 )n'
RN
O H
C l
C l
ON+
+
CH
N
R
O H
O
NH
(CH 2 )n OH
(CH 2 )n Br
+
n' = 1 (II)
n' = 1 (III)
NH
C l
O H
+
n' = 0 (IV)
Acoplamiento de Negishi (II, III, IV)
a = CCCH 2 COa = OCCCH 2
a = CC
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5.3.2. Propuesta de Síntesis.
A diferencia del análisis retrosintético realizado, en este caso debemos
hacerlas una por una ya que no nos es posible englobarlas de forma genérica.
5.3.2.1. Derivado con un resto de 5-bencil pirimidina (molécula I)
En primer lugar procedemos a la formación de la pirimidina (47)
correspondiente [10]. Nos decantamos por el derivado diamino-hidroxi ya que está lo
suficientemente activado como para poder introducir el resto de
bromometilyodobenceno y la cloración en 6 es fácil. Debido a que algunos de los
pasos posteriores pueden ser problemáticos con el grupo carbonilo, decidimos clorar
en este punto (48) con cloruro de fosforilo [11].
Figura 5.4
ONH2
NH2
NH
NN
OEt
O
+ NH2NH2
NH
Cl
NH2
NH2 N
N
I
Ph Br +
I
Cl
NH2
NH2 N
N
+Ac
Ac
O
Dioxano
I
Cl
NHAc
NH2 N
N
CH
O OH
+
Cl
AcHN
NH2 N
N
O
OH
[10]
Na, EtOH
[11]
[13]
[14]
Et2NH, Pd(PPh3)4
(45) (46)
(47)
(48)(49)(50)
POCl3, DMF
[12]
NaHCO3, DMF
(51) (52)(53)
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Con respecto a la acetilación, se realiza por tratamiento del fragmento
pirimidínico con acético anhidro en presencia de dioxano [13].Se produce
selectivamente en el grupo amino en posición 4 al estar el de posición 2 más
desactivado por la presencia de los grupos electrón atrayentes.
Por último realizaremos un acoplamiento tipo Sonogashira [14] por medio de un
catalizador de paladio. En el artículo de R. Chinchilla y C. Nájera [15] se indica mayor
selectividad del átomo de yodo frente al de cloro en un anillo aromático. Por lo que a
priori no se debería dar reacción con el primero en la pirimidina (53).
5.3.2.2. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-ilmetil) pirimidina con unión
de but-3-inamida (molécula II)
Para esta segunda síntesis (Figura 5.5) nos interesa disponer de la amino-
dihidroxi pirimidina (56), de esta manera disponemos de un grupo hidroxilo [16]. Por
otro lado, partiremos de la dibenzoazepina comercial (57), y siguiendo el artículo de
G.Rao [17] adicionaremos el grupo cloro formilo (58) para la síntesis del fragmento
deseado (59).
Para el tercer fragmento, ciclopenteno, partiremos de 4-aminociclopent-2-en-
1-il metanol comercial (78), que tratado con ácido bromhídrico en nitrito sódico como
se indica en la referencia [18], y como veremos para la síntesis III (Figura 5.6), se
transforma en 4-bromo ciclopent-2-en-1-il metanol (62). (62) se hará reaccionar con
el alquino preparado (61) [19]. Sería conveniente proteger el grupo hidroxilo con
bencilo, previamente a este paso, ya que si no, el organometálico podría atacar ahí.
Tras ello y la formación de un nuevo magnesiano [20], se acoplará al fragmento de
dibenzoazepina (59) [21].
En este punto es necesaria la cloración del grupo hidroxilo [22] previamente
desprotegido. Para evitar problemas con el grupo carbonilo de la pirimidina (56) será
sustituido por cloro [23]. Después, necesitaremos bromar con NBS en C-5 [24] para
realizar el acoplamiento. Y por último colocaremos los (68) y (66). Se ha encontrado
que con la catálisis de níquel se puede formar el halogenuro de alquil-zinc que de
paso al acoplamiento de Negishi [25] para obtener nuestra molécula final (69).
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Figura 5.5
NH2 O
OH
NH
NNH2NH2
NH
+OEtOEt
OO
(16)
NH + (17)
CCl3 CCl3
OO
O
Cl
O
N
NaOMe, MeOH
PhMe
R BrO MgBr
Cl
Cl
CH
RO
Cl
+
THF
RO
MgCl + Cl
O
N
THF
RO
NO
ON
Br
NH2 O
OH
NH
N
+
H
ON
NH2
ClO
NN
NH2 Cl
OH
N
N
NH2 Cl
OH
N
NBr
Et2Zn, NiCl2
(19)
(20)
Mg, Et2O
(21)
(22)
PPh3Br2, Pyr,
CH2Cl2
(23)
POCl3, DMF
(24)
NBS, DMF
(25)
(54)(55)
(56)
(57)(58)
(59)
(60)(61)(62)
(63)(64)
(59)
(65)(66)
(56)(67)
(68)
(69)
[35]
KOH, Br2
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5.3.2.3. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-ilmetil) pirimidina con unión
de éter prop-2-in-1-il amina (molécula III)
Comenzaremos con la dibenzodiazepina (Figura 5.6) (70), la gran resonancia
que posee está molécula, orientará el oxígeno para la formación del carbonilo a la
posición 5 (71) [26]. Por otro lado, formaremos el organometálico [19] (72), acido 3-
propiónico (72). Sería conveniente la protección del ácido, antes o después de este
paso, para evitar problemas con la selectividad de aquí en adelante.
Primeramente insertamos el propino (74) a la dibenzoazepina sustituida (73) [27]. Nuestro objetivo será el de introducir un buen grupo saliente al carbono terminal
del triple enlace como puede ser el tosilato [28] (por medio de cloruro de tosilo) (77)
para formar el éter. Pero para ello es necesario formar previamente el magnesiano y
tratarlo con cloruro de trimetilsilil (76) [29].
Por otra parte, al igual que en la síntesis anterior, partiendo del 4-amino
ciclopent-2-en-1-il metanol (78) podemos intercambiar el grupo amino por bromo (79) [18]. En este punto, debemos proteger el grupo hidroxilo con bencilo, (ya que más
adelante se desprotegerá con dicloruro de etilo) porque después de insertar el
segundo grupo hidroxilo [30] el alcohol primario será mucho más reactivo que el
secundario (80), por lo que no reaccionaria según nuestro objetivo. Al hacer
reaccionar ambos fragmentos en tetrahidrofurano [31] nos dará como resultado el éter
esperado (81).
Tras preparar la pirimidina (85) de manera correcta [11][24], al igual que se hizo
en la síntesis 2 (Figura 5.5), haremos reaccionar ambas partes [25] para obtener (86).
Tras ello, solo nos quedará acetilar la amina en 4 [14] y desproteger el radical ácido
protegido al principio y tendremos nuestra molécula (87).
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Figura 5.6
+ SiMe3Cl
NH
ON +Cl
OR
O
NH
O
OR
+Br
CH
CH
N O
OR
MeMgBr, THF
SiMe3
N O
OR
CH3
O
O
S
N
O
OR
THF
+
NH2
OH
OH
OH
Br
OH
a1
a2 NaHCO3, H2O
HBr, NaNO2
O
N O
OR
OH
NH2 O
NH2
NH
N
NH2 Cl
NH2
N
NBr
+
O
N
O
OR
NH2
Cl
NH2
N
N
O
O
N
O
OH
NH2
Cl
NH
N
N
CH3
NH2 Cl
NH2
N
N
O
N O
OR
Br
PPh3Br2, Pyr,
CH2Cl2
Et2Zn, NiCl2
[26]
(K2SO3)NO, Na2HPO4
[19]
[27]
THF
[29]
[28]
TsCl, AlCl3, CH2Cl2
[31]
[22]
[11]
POCl3, NH3
(24)
NBS, DMF
[25]
[14] Dioxano
O Ac
Ac+
(70) (71) (72)
(73)(74)(75)
(76)
(77)
(78)
(79)
(80)
(81)
(82)
(83)(84)
(85)
(86)
(87)
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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5.3.2.4. Derivado con un resto de 5-(ciclopent-2-en-1-il) pirimidina con unión de
etinamina (molécula IV)
En esta última síntesis la mayoría de los pasos ya se han tratado en las
anteriores. Hemos optado por la dihidroxipirimidina (90) al igual que en la síntesis II,
ya que será necesaria una mayor activación. Su síntesis se llevará a cabo lo mismo
que en la figura 5.5[16]. Seguidamente será necesaria su cloración en condiciones
más extremas para hacerlo en 4 y 6 a la vez (91) [11].
La inserción del fenilo (93) la realizaremos por medio de un acoplamiento de
Sonogashira con catalizador de paladio soportado sobre sílica gel [32]. Para preparar
la pirimidina para el último paso de acoplamiento al igual que en las síntesis
anteriores, será bromado en C-5 por medio de NBS [24].
Por otro lado, partiendo de la ciclopent-2-en-1-ona (95) por medio de la
adición de trimetilsilil acetiluro de litio acetilaremos en C-3 del ciclopenteno [33], es
necesaria la adición de ácido sulfúrico para que se produzca la migración del
hidrogeno que da lugar al doble enlace en esa posición deseada. En este punto, al
igual que hicimos en la síntesis III[28], con la inserción de un buen grupo saliente, por
ejemplo tosilato, y con la dibenzoazepina (98) formaremos el fragmento (99) que
queremos acoplar al resto pirimidínico.
Ahora debemos sustituir el hidroxilo por bromo [34] con ácido bromhídrico, y al
igual que en las dos síntesis anteriores realizaremos el acoplamiento de Negishi [25],
para así obtener nuestra molécula (101).
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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Figura 5.7
Ph
OHOHB
NH2 O
O
NH
N
H
NH2NH2
NH
OEtOEt
OO
NH2 Cl
Cl
N
N
NH2 Cl
Ph
N
N
O
TMS
OH
CH3
O
O
S
OH
OHN
NH
BrN
Br
NH2 Cl
Ph
N
N
NH2 Cl
Ph
N
NN
NH2 Cl
Ph
N
NBr
+
POCl3
+
NBS, DMF
+
THF
+
Et2Zn, NiCl2
[16]
NaOMe, MeOH
[11]
(32)
K2CO3, Pd [24]
[28]
TsCl, AlCl3, CH2Cl2
[34]
HBr
[25]
(88)(89)
(90)
(91)(93)
(92)
(94)
(95) (96) (97)
(98)
(99)(100)(94)
(101)
[33]
1) TMSAcetilen, n-BuLi, THF
2) H2SO4
Memoria Trabajo Fin de Grado Juan Pedro Merino Rusillo
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5.4. Cronograma.
Nuestro proyecto se desarrollará en el intervalo de 2 años, por 2 personas a
tiempo completo para la parte de síntesis. El resto de procesos, como ya se ha dicho
se realizarán por entidades externas.
Tabla 6.1
Año 1 Año 2
Trimestre 1 2 3 4 1 2 3 4
Objetivos O1 O2 O5,O6,O7,
O8
O5
O9
O3 O4 O5,O6,O7,
O8
O9
O1: Síntesis molécula 1
O2: Síntesis molécula 2
O3: Síntesis molécula 3
O4: Síntesis molécula 4
O5: Modelización molecular
O6: Estudios de citotoxicidad
O7: Evaluación enzimática
O8: Evaluación antifúngica
O9: Divulgación
5.5. Impacto esperado de los resultados.
CONOCIMIENTO CIENTÍFICO: Conocimiento más detallado de interacciones
en el sitio activo de hDHFR y pcDHFR, y sus diferencias para el desarrollo de
inhibidores selectivos.
Resultados de aplicación directa en el SECTOR FARMACEÚTICO, en caso
de conseguir los objetivos propuestos. Desarrollos de nuevos tratamientos para
PCP, con la reducción de su toxicidad.
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5.6. Resumen del presupuesto desglosado para el desarrollo del proyecto.
Tabla 6.2
CONCEPTO
COSTES DE PERSONAL Concepto Justificación Coste imputable
EURO
Costes de
personal
Se requiere la dedicación de 2 personas a
tiempo completo durante el intervalo de 2
años para la preparación, aislamiento y
realización de ensayos pertinentes de los
productos obtenidos.
50000
COSTES DE EJECUCIÓN Concepto Justificación Coste imputable
EURO
Material
fungible
Disolventes y tubos de RMN, soportes y
disolventes para cromatografía, reactivos y
disolventes varios para la síntesis de los
productos.
10 000
Varios Gastos derivados de la utilización de
grandes equipos.
5 000
Ensayos
biológicos
Estudios de citotoxicidad, evaluación
enzimática y actividad antifúngica.
4 000
TOTAL 69000
6. RESUMEN.
En conclusión, el presente trabajo fin de grado trata sobre el desarrollo de una
propuesta de proyecto para el estudio de nuevos inhibidores de la dihidrofolato
reductasa, para lo que se ha realizado una búsqueda bibliográfica previa, con el
objetivo de obtener las conclusiones pertinentes sobre su funcionamiento y sitios
activos.
La creación de una biblioteca de fragmentos ha sido una vía útil para la propuesta de
moléculas con potencial capacidad inhibitoria. Una vez realizada la propuesta de
moléculas a sintetizar (en concreto cuatro moléculas), se ha procedido al diseño de
su síntesis, previo análisis retrosintético de las mismas. Por último, y teniendo en
cuenta que se trata de un proyecto, es necesario realizar una evaluación de los
costes (aspectos económicos) para llevar a cabo su ejecución, así como la
temporización de las diferentes etapas previstas.
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7. BIBLIOGRAFÍA.
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