tesis ingeniero quÍmico. - core · canarias del consejo superior de ... las civilizaciones...

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA

PERUANA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

“AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN ESTRUCTURAL DE ALCALOIDES

A PARTIR DE HOJAS Y TALLOS DE Tabernaemontana siphilitica

“Lobo Sanango” UTILIZADO COMO ANTIMALÁRICO EN LA REGIÓN

LORETO”

TESIS

Para Optar el Título de:

INGENIERO QUÍMICO.

Presentado por los Bachilleres:

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Erick Vidal Taricuarima

Asesores:

Ing. Lastenia Ruiz Mesía Dra.

Ing. Wilfredo Ruiz Mesía Dr.

IQUITOS - PERU

2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONÍA

PERUANA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

Tesis para optar el título profesional de “INGENIERO QUIMICO” aprobado por

unanimidad con calificación de Buena, en Sustentación Publica por el Jurado

Calificador nombrado por la Facultad de Ingeniería Química conformado por:

………………………………….

Ing. Maritza Grández Ruíz. Dra.

Presidenta.

…..…………………….……………. ...…………………………………

Ing. Maritza Echevarría Ordóñez.M.sc. Ing. Juan M. Rojas Amasifén. Dr.

Miembro Miembro

………………………………

Ing. Lastenía Ruíz Mesía. Dra.

Asesora

…………………….………….

Ing. Wilfredo Ruíz Mesía. Dr.

Asesor

ALFONSO

Typewriter

ALFONSO

Typewriter

CIP: 27655

ALFONSO

Typewriter

ALFONSO

Typewriter

ALFONSO

Typewriter

CIP: 50657

ALFONSO

Typewriter

ALFONSO

Typewriter

CIP: 21103

ALFONSO

Typewriter

CIP: 27677

ALFONSO

Typewriter

CIP: 60877

DEDICATORIA.

Porque:

Jamás nos dejó solos

En los momentos donde

Hubo aflicción, vimos que no nos

Olvidó, ¡gracias!, por darnos la

Vida y permitirnos conocer

Amigos sinceros y verdaderos.

A DIOS

Hivelli & Erick

A nuestros hijos: Joab, Tracy

y Caleb, que son nuestras

inspiraciones y fuerzas para seguir

luchando hasta lograr cumplir

nuestras metas.

A nuestros padres: Marlenia,

Reynaldo y Nilda por su amor y

apoyo incondicional, por estar

siempre a nuestro lado en todo

momento.

A LA FAMILIA

AGRADECIMIENTO.

Nuestro profundo agradecimiento a las instituciones y personas que hicieron posible

su desarrollo:

Al laboratorio de Investigación de Productos Naturales Antiparasitario de la

Amazonía (LIPNAA - UNAP) “Gabriel de la Fuente Martin”.

Al Proyecto“Búsqueda y obtención de compuestos con actividad antimalárica y

anthileishmanicida a partir de especies vegetales amazónicas.” por el apoyo

financiero para la ejecución de esta tesis.

De una manera muy especial nos referimos, A la Dra. Lastenia Ruiz Mesía, por

sembrar en nosotros el aprecio y el amor a esta ciencia, y por enseñarnos cualidades

para ser mejores profesionales en este mundo globalizado y competitivo. Gracias por

permitirnos formar parte de su equipo y por la oportunidad de hacer la tesis en

mención, nuestro agradecimiento es infinito que no basta con simples palabras, solo

nos queda decirle,..”No la defraudaremos”

Un profundo agradecimiento para el maestro y amigo; al Dr. Wilfredo Ruiz Mesia,

por todo su apoyo en la elaboración de esta tesis.

Un agradecimiento especial para nuestra amiga incondicional; la Ing. Leonor

Arévalo Encinas, por su importantísima e indispensable contribución a este trabajo,

por su vitalidad, simpatía, y su gran paciencia.

Al instituto de productos Naturales y Agrobiología de Canarias-España, en mención

del Dr. Matías Reina y Q.F. Liliana Ruiz por el apoyo en la espectroscopía de esta

tesis.

A todos los miembros del LIPNAA., Al Sr. Cesar Tuesta, Al Sr. Jaime del Águila, y a

la Sra. Rosita Vásquez.

Tesis financiada por el Proyecto:

“Búsqueda y obtención de compuestos con actividad

antimalárica y anthileishmanicida a partir de

especies vegetales amazónicas.” – UNAP.

INDICE GENERAL

RESÚMEN

INTRODUCCIÓN 01

CAPITULO I 1. Marco teórico

1.1. Especie en estudio 04

1.1.1. Aspectos Botánicos 04

1.1.2. Descripción Botánica 04

1.1.3. Nombres Comunes 05

1.1.4. Usos Comunes 05

1.1.5. Distribución del Género Tabernaemontana 05

1.2. Alcaloides

1.2.1. Definición 09

1.2.2. Clasificación de los Alcaloides 12

1.2.3. Alcaloides Indólicos 13

1.2.4. Distribución de los Alcaloides Indólicos 18

1.2.5. Biogénesis de los Alcaloides Indólicos 20

1.2.6. Farmacología 24

1.2.7. Propiedades físicas y Químicas 27

1.2.8. Extracción de Alcaloides 28

CAPITULO II

2. Materiales y Métodos

2.1. Material Botánico 30

2.2. Materiales de Laboratorio y otros 30

2.2.1. Materiales de vidrio 30

2.2.2. Adsorbentes 31

2.2.3. Solventes Orgánicos 31

2.2.4. Reactivos 31

2.3. Técnicas Instrumentales y Equipos 31

2.3.1. Resonancia Magnética Nuclear (RMN) 31

2.3.2. Espectrometría de Masas (EM) 32

2.3.3. Espectroscopia de Infrarrojo (IR) 32

2.4. Técnicas Cromatográficas 32

2.4.1. Cromatografía de Columnas (C.C.) 32

2.4.2. Cromatografía de Capa Fina (C.C.F.) 33

2.4.3. Cromatografía en Capa Fina Preparativa. (C.C.F.P.) 33

2.5. Procedimiento Experimental 33

2.5.1. Preparación de las Muestras 33

2.5.2. Extracción de Alcaloides de las Hojas y Tallos de la

Tabernaemontana Siphilitica 34

2.5.3. Fraccionamiento Cromatográfico del Extracto Alcaloidal ácido de

Las Hojas y Tallos de la Tabernaemontana siphilitica 36

2.5.3.1. Aislamiento y purificación de las fracciones alcaloidales Obtenidas

del extracto Alcaloidal acido de las hojas y tallos de

Tabernaemontana siphilitica 36

2.5.4. Fraccionamiento Cromatográfico del extracto Alcaloidal

Básico y residuo de hojas y tallos de Tabernaemontana

Siphilitica 38

2.5.4.1 Aislamiento y purificación de las Fracciones alcaloidales

Obtenidas del extracto Alcaloidal Básico y Residuo de las

hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica 39

2.5.5. Datos Físicos y Espectroscópicos de los Alcaloides aislados 40

2.5.5.1. Coronaridina 41

2.5.5.2. 19 S- Heyneanina 42

2.5.5.3. Coronaridina hidroxindolenina 43

2.5.5.4. 3-Oxocoronaridina 44

CAPITULO III

3. Discusiones y Resultados.

3.1. Resultados 47

3.2. Determinación Estructural de los Alcaloides Aislados 47

3.2.1. Alcaloide Coronaridina 47

3.2.2. Alcaloide 19 S- Heyneanina 50

3.2.3. Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina 53

3.2.4. Alcaloide 3- Oxocoronaridina 55

Conclusiones 59

Recomendaciones 60

Referencias Bibliográficas 61

Anexos 76

Certificado del Herbarium Amazonense 94

LISTA DE TABLAS, FIGURAS Y DIAGRAMAS.

1. Lista de Tablas.

Tabla N° 01. Distribución del género Tabernaemontana en el Perú 06

Tabla N° 02. Datos de RMN de 1H,

13C, HMQC, COSY, NOESY

de 19S- Heyneanina 52

Tabla N° 03. Datos de RMN de1H,

13C, HMQC, COSY, NOESY

de 3- OXO- Coronaridina 58

2. Lista de Figuras.

Figura N° 01. Estructura de Alcaloides Indolicos 14

Figura N° 02 Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano,

Corinanteano e Ibogano 15

Figura N° 03 Alcaloides Oxoindólicos 18

Figura N° 04 Biogénesis de los Alcaloides Tipo Iboga y Aspidosperma 21

Figura N° 05 Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos 21

Figura N° 06 Biogénesis de alcaloides tipo yohimbina,

Ajmalicina y Corinanteina 22

Figura N° 07 Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma 23

Figura N° 08 Biogénesis de los alcaloides tipo Piridocarbazol 24

Figura N° 09 Estructura de la Ellipticina 26

Figura N° 10 Diferentes Esqueletos Alcaloidales 28

Figura N° 11 Fraccionamiento de masas de Coronaridina 48

Figura N° 12 Alcaloide Coronaridina Publicado 49

Figura N° 13 Alcaloide Coronaridina Aislado en el LIPNAA-UNAP 49

Figura N° 14 Alcaloide Heyneanina Publicado 51

Figura N° 15 Alcaloide Heyneanina Aislado en el LIPNAA-UNAP 51

Figura N° 16 NOESY del Alcaloide 19S-Heyneanina 53

Figura N° 17 Fraccionamiento de masa de Coronaridina

Hidroxindolenina 54

Figura N° 18 Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina Publicado 55

Figura N°19 Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina Aislado en el

LIPNAA-UNAP 55

Figura N° 20 Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Publicado 57

Figura N° 21 Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Aislado en el LIPNAA-

UNAP 57

Figura N° 22 NOESY del Alcaloide 3-Oxocoronaridina 58

Figura N° 23 Espectro de Masa del alcaloide Coronaridina 77

Figura N° 24 Espectro de IR del Alcaloide Coronaridina 77

Figura N° 25 Espectro de RMN de1H del alcaloide Coronaridina 78

Figura N° 26 Espectro de Masa del alcaloide 19S-HEYNEANINA 79

Figura N° 27 Espectro de IR del alcaloide 19S-HEYNEANINA 79

Figura N° 28 Espectro de RMN de H

+ de alcaloide 19S-HEYNEANINA 80

Figura N° 29 Espectro de RMN de13

C del alcaloides 19S-HEYNEANINA 80

Figura N° 30 COSY del alcaloide 19S-HEYNEANINA 81

Figura N° 31 NOESY del alcaloide 19S-HEYNEANINA 82

Figura N° 32 HSQC de13

C del alcaloides 19S-HEYNEANINA 83

Figura N° 33 Espectro de Masa del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina 84

Figura N° 34 Espectro de IR del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina 84

Figura N° 35 Espectro de RMN de1H del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina 85

Figura N° 36 Espectro de RMN de13

C del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina 85

Figura N° 37 COSY del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina 86

Figura N° 38 NOESY del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina 87

Figura N° 39 HSQC del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina 88

Figura N° 40 Espectro de Masa del alcaloide 3-Oxocoronaridina 89

Figura Nº 41 Espectro de RMN de1H del alcaloide 3-Oxocoronaridina 89

Figura Nº 42 Espectro de RMN de13

C del alcaloide 3-Oxocoronaridina 90

Figura Nº 43 COSY del alcaloide 3-Oxocoronaridina 91

Figura Nº 44 NOESY del alcaloide 3-Oxocoronaridina 92

Figura Nº 45 HSQC del alcaloide 3-Oxocoronaridina 93

3. Lista de Diagramas.

Diagrama N° 01. Extracción de Alcaloides de las hojas y tallos de la

Tabernaemontana siphilitica 35

Diagrama N° 02. Fraccionamiento, Aislamiento y Purificación de

las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica

del extracto Alcaloidal acido 45

Diagrama N° 03. Fraccionamiento, Aislamiento y Purificación de

las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica

del extracto Alcaloidal Básico y Residuo 46

RESÚMEN

El presente trabajo de investigación tiene por objetivo, aislar e identificar los

alcaloides de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica (Apocinaceae),

especie vegetal que se utiliza tradicionalmente como antimalárico en la amazonia

peruana.

El estudio se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Investigación de

Productos Naturales Antiparasitarios de la Amazonia" Gabriel de la Fuente Martín"

LIPNAA-UNAP, en lo referente a la extracción, fraccionamiento cromatográfico,

purificación y aislamiento de los alcaloides y en el Instituto de Agrobiología de

Canarias del Consejo Superior de Investigación Científico de Tenerife (España) se

realizaron, la toma de los espectros de RMN, espectrometría de masas de alta y

baja resolución, los experimentos, bidimensionales de coherencia cuántica homo y

heteronucleares, los cuales permitieron determinar las estructuras químicas de los

alcaloides aislados.

Las hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica, se secaron a la temperatura de

20oC obteniéndose (1.27 Kg) de planta seca y molida, a partir del cual se obtuvo el

extracto Etanólico (161.9g) por maceración con etanol por un periodo de 32 días. El

extracto Etanólico (161.9g) se disolvió en H2SO4 0,5 N, se extrajo con CH2Cl2

obteniéndose 2.72g de extracto alcaloidal ácido, el extracto acuoso se basificó a

pH=9 con NH4OH después de extraer con CH2Cl2 y evaporar se obtuvo (552.1 mg).

Y (376 mg) de residuo Alcaloidal. El extracto alcaloidal acido se volvió a extraer a

pH= 9 y se obtuvo (60.9 mg). Por cromatografía de capa fina se unieron los

extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg. Utilizando técnicas cromatográficas

de columna, cromatografía de capa fina, cromatografía preparativa se aislaron cuatro

alcaloides. La estructura química se determino por la interpretación de sus datos

espectroscópicos (RMN 1H y

13C, COSY, NOESY y HSQC) y datos

espectrométricos y por comparación con los datos publicados en la bibliografía

química, los cuales fueron identificados como: CORONARIDINA, 19 S –

HEYNEANINA, CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA, 3-OXO-

CORONARIDINA.

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 1 Erick Vidal Taricuarima

INTRODUCCIÓN

Las civilizaciones antiguas consideraron muchas plantas por sus propiedades

curativas. Este conocimiento se fue transmitiendo a lo largo de los siglos, sin que

se supiera por qué o cómo actuaban, pero sí era indiscutible que las plantas podían

curar diversas enfermedades y constituían la mayor fuente de medicamentos para

el hombre y los animales. Hoy se sabe que las propiedades medicinales de las

plantas son responsabilidad de algunos grupos de sustancias de diversa

composición química conocidas como metabolitos secundarios.

Las Plantas medicinales, son todas aquellas plantas que contienen, en alguno de

sus órganos, principios activos, los cuales, administrados en dosis suficientes,

producen efectos curativos en las enfermedades de los hombres y de los animales

en general. Se calcula en unas 260.000 las especies de plantas que se conocen en

la actualidad, de las que el 10% se pueden considerar medicinales. Las plantas

poseen una gran cantidad de metabolitos primarios y secundarios que les permiten

crecer, multiplicarse, defenderse y sobrevivir.

Los alcaloides, son las más numerosas de los metabolitos secundarios de gran

diversidad estructural de carácter básico; en su mayoría de origen vegetal, algunos

pocos de origen animal que suelen tener actividad biológica incluso a dosis muy

bajas; La familia Apocinaceae se encuentra distribuida en todo el mundo, pero

principalmente en las áreas tropicales, comprende 250 a 550 géneros que agrupa

3700 a 5100 especies, ricas en alcaloides indólicos y muchas de ellas reportadas

como antimalárico por las diferentes etnias amazónicas (Vásquez Martínez.

1997).

La familia Apocynaceae en el Perú consta de 37 géneros y 158 especies (Brako &

Zarucchi, 1993; Ulloa et al., 2004), pueden ser bejucos, lianas, árboles y

arbustos. En este trabajo se reconoce 14 endemismos de 10 géneros.

Los alcaloides, se encuentran en las semillas, raíces, cortezas y hojas; al estado

libre o como glucósidos, o formando sales con ácidos orgánicos. Ninguna otra


clase de productos naturales posee tal enorme variedad de estructuras. La familia

Apocynaceae, constituyen una de las familias de plantas con flor más importantes

por su diversidad, distribución y utilidad, la misma ha sido poca estudiada a nivel

regional. Estas especies se caracterizan por sintetizar alcaloides del tipo

Indólicos, oxindólicos. (A. Situación Perú, 2003).

Los alcaloides se caracterizan por la presencia de nitrógeno básico, teniendo

propiedades de formar sales solubles en el agua con ácidos orgánicos e

inorgánicos, mientras que sus bases libres son solubles en solventes orgánicas. Se

encuentran en todos los órganos de la planta: semilla, raíces, cortezas, hojas,

flores. (Asociación latinoamericana. 2008).

Los antimaláricos conocidos actualmente, son producto de la investigación

extranjera, en países donde la malaria fue superada y sus líneas de investigación

se dirigen a otros campos, por ello en el Perú en especial Loreto (Iquitos) la

UNAP, ha priorizado líneas de investigación en la Búsqueda y Obtención de

nuevos compuestos con actividad antimalárica a partir de especies vegetales

amazónicas, esta investigación permite validar las plantas que el poblador

amazónico utiliza tradicionalmente para el tratamiento de la malaria. La selva

amazónica alberga las 2/3 partes de la biodiversidad del mundo; reportándose

170 especies de uso antimalárico. (Maco M. et al; Ruiz L, et al.2007).

Tabernaemontana, es un género muy extenso, que pertenece a la familia de las

Apocináceas y consta aproximadamente de 100 especies distribuidas por todo el

trópico, así como en algunas regiones subtropicales, del mundo. Las especies se

utilizan en la medicina tradicional y para otros fines, las formas y los usos

medicinales son muy variados.

El género Tabernaemontana, presenta muchas aplicaciones biológicas la

bibliografía científica reporta que se han encontrado extractos de plantas y

compuestos puros con actividad citotóxica y antitumoral , actividad frente a

diferentes bacterias: Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli,


Staphylococcus aureus meticilino resistentes, Streptococcus faecalis, Salmonella

enteritidis, Shigella flexneri, Staphylococcus epidermidis, Acynetobacter lwoffii,

actividad antimalárica, leishmanicida entre otras actividades biológicas(Geran.

1972), (V.S. Prakash. 2002), (Ramanitrahasimbola. et al., 2001).

Esta investigación, tiene como objetivo, la identificación de los alcaloides a partir

del extracto etanólico de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica. El

aislamiento y purificación de los alcaloides se realizó utilizando técnicas

cromatográficas de columna (C.C), Cromatográfica Preparativa(CP),

Cromatografía de capa Fina(CCF), cromatografía de exclusión molecular y la

elucidación estructural por medio de técnicas espectroscópicas, espectrométricas,

y por comparación de sus datos físicos con los reportados en la bibliografía

química.

CAPITULO I

1. MARCO TEÓRICO

1.1. ESPECIE EN ESTUDIO

La especie en estudio es Tabernaemontana siphilitica

(Apocinaceae) conocida en la región Amazónica como

“Lobo Sanango”. (Mejía y Rengifo)

1.1.1. ASPECTOS BOTÁNICOS.

Descripción de la especie:

Nombre Común : “Lobo Sanango”

Nombre Científico : Tabernaemontana siphilitica

Familia : Apocinaceae

Género : Tabernaemontana

Especie : Siphilitica

Reino : planta

División : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida

Orden : Gentianales

Autor Epíteto Específico : (L. f.) Leeuwenb

Determinador : Leeuwenberg, J. M.

Fecha determinación : 1992

1.1.2. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA

Árbol de hasta 8 metros de altura. Exudación de látex blanco abundante y

pegajoso. Hojas simples, opuestas, con margen entero, glabras, color verde

brillante. Flores agrupadas en inflorescencias terminales y axilares, con

corola verde y bordes blancos. Frutos folículos fusionados uno al frente

del otro, de color verde y amarillo al madurar, cada uno contiene una

semilla. Posee también potencial ornamental. Se distribuye por Colombia,

Facultad de Ingeniería Química-UNAP CIRNA-LIPNAA


Guyana, Surinam, Guyana Francesa, Ecuador, Venezuela, Brasil y Perú.

Crece en Loreto, San Martín, Huánuco, Junín, Madre de Dios y Ucayali.

(Duke 2009).

1.1.3. NOMBRES COMUNES

En la Amazonía Peruana esta especie es conocida como lobo sanango,

capeshini, uchu sanango, (Rengifo y Mejía), en los países vecinos como

Colombia también es conocido como Borrachero negro, borrachero

arbustivo. (www.plantas toxicas).

1.1.4. USOS COMUNES

Tabernaemontana siphilitica, es una especie vegetal muy utilizada por el

poblador amazónico para el tratamiento como antiinflamatorio, febrífugo,

analgésico, emético, sedante, sudorífico y tranquilizante. (Duke 2009). La

revisión bibliográfica del género Tabernaemontana nos permitió verificar

que esta especie, no reporta estudios químicos ni farmacológicos, por lo

que es necesario aislar e identificar sus componentes químicos.(IICA,

1999).

1.1.5. DISTRIBUCIÓN DEL GÉNERO TABERNAEMONTANA.

El género Tabernaemontana lleva el nombre de Jacob Theodor. Müller,

Tabernaemontana que pertenece a la familia de las Apocynaceae

(Leeuwenberg, 1991), es un gran género que presenta una gran variedad

de especies, con estructuras químicas complejas e interesantes. Hay

alrededor de 100 especies de Tabernaemontana, ampliamente distribuido

en los trópicos, 18 en África, 15 en Madagascar, 21 en Asia tropical, y

cerca de 50 en el neotrópico. Este género es una fuente muy rica de una

serie de alcaloides indólicos con esqueletos de carbono interesantes y

novedosas actividades biológicas (Van Beek. 1984,1988). En todas partes,

las especies se utilizan en la medicina tradicional y para otros fines, las

formas y los usos medicinales son muy variados y la decocción sirve para

el lavado de heridas y para baños de vapor para el tratamiento de sífilis.



En el Perú se encontraron 15 especies del género Tabernaemontana, 14

de ellos se encuentran en el Departamento de Loreto. Los cuales se indican

en la Tabla 01.

TABLA N° 01. Distribución del género Tabernaemontana en el Perú.

DISTRIBUCIÓN EN EL PERÚ

ESPECIE UBICACIÓN

Tabernaemontana Columbiensis Dpto. Huánuco y San Martin

Tabernaemontana Cuspidata Dpto. Loreto y Ucayali

Tabernaemontana Cymosa Dpto. Loreto y San Martin

Tabernaemontana Flavicans Dpto. Huánuco, Loreto, Madre de

Dios y San Martin

Tabernaemontana heterophyla Dpto. Loreto, Madre de Dios y San

Martin.

Tabernaemontana hirtula var.maynensis Dpto. Loreto

Tabernaemontana Luciliae Dpto. Huánuco, Loreto y San

Martin

Tabernaemontana Macrocalix Dpto. Amazonas y Loreto

Tabernaemontana Markgrafiana Dpto. Amazonas, Loreto y Ucayali

Tabernaemontana Sananho Dpto. Amazonas, Ayacucho,

Huánuco, Junín, Loreto, Madre de

Dios, Pasco, San Martin y Ucayali.

Tabernaemontana Siphilitica Dpto. Amazonas, Huánuco, Loreto,

Madre de Dios y San Martin.

Tabernaemontana Stenolaba Dpto. Loreto, Madre de Dios

Tabernaemontana Tessmannii Dpto. Loreto y San Martin.

Tabernaemontana Undulata Dpto. Amazonas, Huánuco, Junín,

Loreto, Pasco, San Martin y

Ucayali.

Tabernaemontana Vanheurckii Dpto. Cuzco, Huánuco, Loreto,

Madre de Dios, San Martin y

Ucayali.



Del estudio de los diferentes géneros de Tabernaemontana Se detectó

actividad frente a diferentes enfermedades como por ejemplo:

De Tabernaemontana Catharinensis. (Pereira 1999. Burkart A. 1979)

detectó actividad frente a Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, Staphylococcus aureus meticilino resistentes,

Streptococcus faecalis, Salmonella enteritidis, Shigella flexneri,

Staphylococcus epidermidis, Acynetobacter lwoffii.

Tabernaemontana fuchsiaefolia, actualmente se utiliza en la medicina

tradicional para el tratamiento de la malaria en Sao Paulo y Paraná

(Zocoler et al. 2005). Atribuyó la actividad biológica a los alcaloides

bisindolico, (Frederick et al. 2000). Voacamine es activa in vivo (43% de

reducción de la parasitemia a 10 mg / kg por vía oral mediante la prueba

de supresión de Peters) y presenta de cierta especificidad en la fase

trofozoítos y esquizontes. (Ramanitrahasimbola. Et. 2001).

Los principales problemas de este género se refieren a la identificación

taxonómica. En varios casos, los grupos de investigación han trabajado en

la misma planta sin darse cuenta, porque los nombres utilizados en la

identificación del material posteriormente han sido reconocidos como

pertenecientes a la misma especie, por ejemplo, Tabernaemontana Crussa

con 5 sinónimos y Tabernaemontana coffeoides con muchos sinónimos y

numerosos taxones.

Los resultados químicos deben ser capaces de dar información acerca de

las rutas biosintético implicadas en la producción de alcaloides indólicos,

así como la quimiotaxonomía del género. También pueden ser de ayuda

en la búsqueda de nuevos compuestos medicinales interesante o en la

validación del uso de una planta o extracto frente a diferentes dolencias o

enfermedades. En contraste con la enorme cantidad de investigación

Fitoquímica, hay poca información farmacológica. Una mejor cooperación

entre los fitoquímicos y farmacólogos podría llevar a conclusiones nuevas

y útiles. La etnobotánica da muchos ejemplos de usos similares de



diferentes especies del mundo, y aunque algunos de los usos son

cuestionables, es difícil creer que todo lo informado carezca de valor

científico, se espera que los estudios químicos y etnobotánicas

contribuyan a la identificación taxonómica de las especies de este género.

También se espera que los datos etnobotánicas proporcionen nuevas pistas

y estimulen más investigación, porque muchas especies aún no se han

investigado química y farmacológicamente; a fin de descubrir nuevas

moléculas con actividades biológicas interesantes.

El género Tabernaemontana se caracteriza por sintetizar alcaloides

indólicos y bisindólicos, así tenemos que de Tabernaemontana Accedens.

se aislaron los alcaloides: Accedine, N1-Demethyl-16-epi-accedine, N1-

Methyl-16-epi-affinine, Accedinine Accedinisine, Voacamidine

Voacamine. (Achenbach. 1975). De Tabernaemontana affinis. Se aislaron

los alcaloides: Serpentine, Yohimbine, Affinisine, Affinine, Vobasine,

Coronaridine, Coronaridine pseudoindoxyl, Olivacine. (Chaves.1960, F.

Abreu 1976, J. Weisbach 1963). De Tabernaemontana Alba. Se aislaron los

alcaloides: Tabersonine, Coronaridine. (0. Collera 1962, F. Abreu 1976). De

Tabernaemontana albiflora, Se aislaron los alcaloides: Coronaridine, 18-

hydroxycoronaridine, (20R)-18,19-dihydroxy-pseudovincadifformine,

Ibophyllidine, 19-hydroxyibophyllidine (C. Kan, 1981). De Tabernaemontana

amblyocarpa. Se aislaron los alcaloides: Akuammidine, Vallesamine, (+)-

Tubotaiwine, Isovoacangine, Voacristine, Isovoacristine. (I. Pérez. 1980). De

Tabernaemontana amygdalifolia. Se aislaron los alcaloides: 12-

Demethoxycylindrocarpidine Homocylindrocarpidine, 5 Oxocylindrocarpidine,

O-Demethylpalosine (H.Achenbach 1967 y I981). De Tabernaemontana

arbórea. Se aislaron los alcaloides: Tabersonine, Voacangine, Isovoacangine,

Voacamine, 19-epi-Voacorine. (Chaverri. 1980, D. Kingston. 1978 y 1980). De

Tabernaemontana attenuata. Se aislaron los alcaloides: 16-epi-

pleiocarpamine, (+)-Tubotaiwine, Conopharyngine, Conopharyngine

hydroxyindolenine, (6R)-3,6-oxidocoronaridine, (-)-Heyneanine, 19-epi-

Heyneanine, Coronaridine hydroxyindolenine, 11-Hydroxycoronaridine,



10-Hydroxyheyneanine, Ibophyllidine. (A. Amico 1977). De

Tabernaemontana brachyantha. Se aislaron los alcaloides: Normacusine B,

Anhydrovobasindiol, Voacorine, Conopharyngine. (M.B. Patel. 1973). De

Tabernaemontana bufalina. Se aislaron los alcaloides: Dregamine, Silicine,

Aparicine Pandoline, 20-epi-pandoline Pseudotabersonine, Pandine. (M.J.

Hoizey. 1995; M. Zeches. 1975). De Tabernaemontana capuronii. Se

aislaron los alcaloides: Capuronine; Capuronidine; 14,15-

Anhycrocapuronidine; 14,15-Anhydro-1,2-dihydrocapuronidine; (20R)-

capuvosidine, Capubosine, Dehydroxycapuvosine, N4-Demethylcapuvosine (I.

Chardon. 1978). De Tabernaemontana Divaricata. Se aislaron los

alcaloides: Dregamine, Tabernaemontanine, Vobasine Voaphylline,

Lochnericine Tabersonine. (B. Talapatra. 1975, M. Elkeiy. 1966). De

Tabernaemontana Elegans. Se aislaron los alcaloides: Voacamine,

Tabernaemontanine, Conoduramine, Tabernaelegantine A, Tabernaelegantine B,

Tabernaelegantine C, Tabernaelegantine D, Tabernaelegantanine A,

Tabernaelegantanine B, Tabernaelegantanine C, Tabernaelegantanine D (M.

Gorman. 1960, B. Talapatra. 1975, B. Gabetta. 1975, E. Bombardelli. 1976).

De Tabernaemontana Macrocalix. Se aislaron los alcaloides: Tabersonine,

Coronaridine. (J. Bruneton. 1979). De Tabernaemontana Sananho. Se

aislaron los alcaloides: Coronaridine, 3-Hydroxycoronaridine, (-)-Heyneanine,

(-)-Ibogamine. (K. Raj, 1974).

1.2. ALCALOIDES.

1.2.1. Definición

Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con carácter básico y

mayoritariamente de origen Vegetal. Tienen una estructura generalmente

compleja y ejercen acciones fisiológicas diversas incluso a dosis muy

bajas. Son tóxicos y capaces de precipitar con ciertos reactivos

característicos. Hay, sin embargo, determinadas sustancias que se

consideran alcaloides y que no cumplen las características generales de los

alcaloides. (Kuklinski. 2000).



Muchas plantas contienen compuestos con un profundo impacto

fisiológico con dosis muy pequeñas. Los agentes activos de estas

sustancias vegetales han sido aislados y se han descubierto que son

sustancias con numerosas aplicaciones. (Ajarem et. al.1990).

Los alcaloides se caracterizan por tener sabor amargo, generalmente

presentan propiedades básicas debidas al Nitrógeno de su estructura. Son

compuestos orgánicos, se forman a partir de aminoácidos. En la mayoría

de los alcaloides, el Nitrógeno pertenece a un ciclo. Como bases libres; son

solubles en disolventes orgánicos (polares y apolares) e insolubles en agua

y solubles en mezclas hidroalcoholicas. Y en forma de sal son solubles en

agua y mezclas hidroalcoholicas, pero insolubles en disolventes orgánicos

apolares. Su solubilidad depende del pH. Los alcaloides oxigenados son

sólidos cristalizables, incoloros o blancos y con un punto de fusión

característico. Se obtienen mediante extracción con disolventes. Los

alcaloides no oxigenados son líquidos volátiles de olor característico se

obtienen por destilación con arrastre de vapor. (Kuklinski. 2000).

Hasta la fecha se conocen alrededor de 26900 alcaloides aislados de

plantas, hongos, organismos marinos y mamíferos, de los cuáles un total

de 21120 son derivados de plantas. Se han encontrado 186 familias

compuestas por 7231 especies pertenecientes a 1730 géneros (14.2%) que

contienen alcaloides, 35 en las que se han detectado alcaloides pero aún no

se han aislado, quedando aún 153 familias (aproximadamente 674 géneros

y 5835 especies) por estudiar. (Cordell, G. A.et al. 2001).

Algunas familias poseen una marcada tendencia a elaborar alcaloides: esto

ocurre tanto en las Monocotiledóneas (Amarilidácea, Liliácea) como en las

Dicotiledóneas (Anonácea, Apocynaceae, Fumariaceae, Laurácea,

Loganiácea, Magnoliácea, Menispermácea, Papaverácea, Ranunculácea,

Rubiácea, Rutácea, Solanácea, etc.). En estas familias algunos géneros

contienen alcaloides, mientras que otros se encuentran desprovistos de



ellos. En pocos casos existen alcaloides en todos los géneros

(Papaverácea). (Jean Bruneton et. al. 2001).

Los alcaloides se localizan en determinadas regiones de los vegetales, en

forma de ácidos orgánicos; unos en las hojas (coca, tabaco); otros en las

frutas y semillas (nuez vómica), en la corteza de los árboles (quina), en las

raíces (altea), etc.

Durante mucho tiempo, los alcaloides han sido considerados como

productos del metabolismo únicamente vegetal. Realmente también

existen estructuras alcaloídicas en los animales. A veces se trata de

productos formados a partir de alcaloides contenidos en los vegetales

incluidos en la dieta alimenticia del animal: es el caso de la castoramina,

que proviene de la metabolización de los alcaloides de los nenúfares que

consume el castor, o bien el de los alcaloides pirrolizidinicos que se

encuentran en algunas mariposas. Otras veces los alcaloides aislados

parecen ser productos del metabolismo animal: este es el caso especial de

los anfibios urodelos (salamandras) o de los anuros (sapos). (Jean

Bruneton, 2001).

Los alcaloides poseen masas moleculares que varían entre 100 y 900. Las

bases no oxigenadas son líquidas a temperatura ambiente (nicotina,

esparteína, coniína), las que contienen oxígeno en su fórmula, sólidos

cristalizables, raramente coloreados (berberina), capaces de desviar la luz

polarizada, las bases cristalizadas dan puntos de fusión netos, sin

descomposición por debajo de 200°C, en su forma libre, los alcaloides

(bases) son insolubles o muy poco solubles en agua, solubles en

disolventes orgánicos apolares (éter, cloroformo, hexano) o poco polares

(acetato de etilo) y solubles en disolventes orgánicos polares (alcoholes de

elevada graduación).

La basicidad de los alcaloides les permite formar sales con ácidos

minerales (clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos,



sulfamatos, maleatos). Las sales de alcaloides son generalmente solubles

en agua y en alcoholes diluidos, salvo raras excepciones, son insolubles en

disolventes orgánicos. Las sales cristalizadas se conservan bastante bien y

constituyen habitualmente la forma comercial de estas moléculas. (Jean

Bruneton. et al.2001).

1.2.2. CLASIFICACIÓN DE LOS ALCALOIDES.

Para clasificar un compuesto como alcaloide es preciso tomar sus

cualidades químicas y farmacológicas.

La clasificación de los alcaloides, se dio generalmente por la similitud con

estructuras moleculares más simples, otras veces son designados según su

origen, género o especie de plantas del cual fueron aislados por primera

vez.

Dada la amplitud del tema, nos limitaremos a presentar ejemplos de los

alcaloides más comunes en cada uno de los grupos siguiente. (GROS, E.

1995).

Alcaloides Pirrolidínicos

Alcaloides Piridínicos y Piperidínicos

Alcaloides Isoquinolínicos y Fenilletilamínicos

Alcaloides Morfínicos

Alcaloides Quinolínicos

Alcaloides Indólicos

Alcaloides Imidazólicos

Alcaloides Quinazolínicos

Alcaloides Quinilizidínicos

Alcaloides Pirrolizidinicos

Alcaloides de la Erythrina

Alcaloides de la Amaryllidacea

Alcaloides de Lycopodio

Alcaloides Esteroidales

Alcaloides Diterpénicos



1.2.3 ALCALOIDES INDÓLICOS.

Abarcan una gran variedad y diversidad estructural que va desde simples

derivados de la triptamina, carbazoles, β-carbolinas, hasta esqueletos más

elaborados que involucran la condensación de triptamina común segundo

aminoácido, una molécula de isopreno, policétidos o terpeno.

De todos ellos, el grupo más importante y más extensamente estudiado son

los alcaloides indólicos monoterpénicos que derivan biogenéticamente de

un único precursor construido por condensación del aminoácido triptófano

con el monoterpenos ecologanina. (M.V. Kisakürec 1982). Kisakürec y

Hesse los clasifica en nueve grupos que derivan de los esqueletos

fundamentales I (Corinante), II (Aspidospermas) Y III (Ibogal) (Fig. 1).

Los grupos vincosano, vallesiacotamano, corinanteano, estrichnano y

aspidospermatano adoptan el esqueleto I, los grupos plumerano y eburnano

el esqueleto II y el ibogano y tacamano el III (Fig. 1).

NH

N

89

1

3

45

6

7

-Carbolina

NH8

91

2

3

45

6

7

Carbazol

NH

NH21

23

4

5

6

7

Triptamina

Esqueleto ICorinante

Esqueleto IIAspidosperma

Esqueleto IIIIboga



FIGURA 1. Estructura de Alcalóides Indólicos

Los alcaloides de los grupos plumerano, aspidospermatano, corinanteano e

ibogano, se dividen en subtipos, dependiendo de la variación estructural

del fragmento alicíclico o en unos pocos casos de la porción indólico, estos

subtipos se nombran de acuerdo al miembro más representativo del

mismo. (fig. 2).

NNH

H

TIPO VALLESIACOTAMANO

O

TIPO VINCOSANO

NHNH

H



FIGURA 2. Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano,

Corinanteano e Ibogano

TIPO CORINANTEANO

NNH

H

NH

N

OCH3

H3COOC

H

H

Subtipo Corinanteina

NH

N

OH3COOC

H

H H

Subtipo Ajmalicina

NH

N

CH2OH

H

H

Subtipo Sarpagina

NN

H

H3COOC

HH

Subtipo Pleiocarpamina

NH

N

O

CH3

H

CH2OH

H3COOC

Subtipo Vobasina

NN

CH3

H

OH

Subtipo Sarpagina

NN

H

H

COOCH3AcOH2C

Subtipo Akuammilina

NH

N

H

CH3H3COOC

H

O

Subtipo Akuammilina

NH

N

H

H

O

CH3

Subtipo Ervitsinia



FIGURA 2. (Continuación) Subtipo de Alcaloides Plumerano,

Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano

NH

N

H

TIPO ESTRICHNANO

NH

N

H

TIPO ASPIDOSPERMATANO

N

N

H3COOC COOCH3

H

H

Subtipo Precondiocarpina

NH

N

H

H3COOC CH2OH

Subtipo Stemmadenina

NH

N

H

H3COOC COOCH3

Subtipo Vallesamina

NH

N

TIPO PLUMERANO

NH

NO

Subtipo Voaphillina

NH

N

COOCH3

H

Subtipo Tabersonina



FIGURA 2 (Continuación) Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano,

Corinanteano e Ibogano.

N

TIPO EBURNANO

N

TIPO TACAMANO

NH

N

NH

N

TIPO IBOGANO

COOCH3

Subtipo Coronaridina

N

N

COOCH3

Subtipo Coronaridinahidroxindolenina

OH

NH

N

O

COOCH3

Subtipo Iboluteina

NH

NH3COOC

OH

O

NH

N

Subtipo Tabernoxidina Subtipo Cleavamina

NH

N

COOCH3

H H

Subtipo Pseudotabersonina

NH

O

NH

Subtipo Dichomina

NH

N

COOCH3

OH

H

H

Subtipo Pandina

NH

NH

H

H

COOCH3

Subtipo Ibophillidina



Hay que decir que esta clasificación no es única (Geoffrey A. Cordell,

1981) y aunque atractiva por su sencillez deja de ser exhaustiva, dejando

fuera a un numeroso grupo de estos compuestos, que involucran otros

reagrupamientos, y entre los que citaremos los oxoindoles, como la

gelsemina y la mitraphillina; los piridocarbazoles, como la ellipticina; los

del grupo secodina, en los que el esqueleto secologanina está abierto; y el

numeroso grupo de los bisindólicos, los cuales se clasifican según la

identidad de las unidades monómeras constituyentes.

Figura N° 03. Alcaloides Oxindólicos

1.2.4 DISTRIBUCIÓN DE LOS ALCALOIDES INDÓLICOS.

Dejando a un lado los alcaloides indólicos simples, los cuales pueden

encontrarse en al menos 35 familias de plantas (Philippe. 1985), los de

mayor complejidad. los alcaloides monoterpénicos, se encuentran

distribuidos casi en su totalidad entre las familias, Apocynaceae,

Loganiácea y Rubiáceas, aunque también han sido encontradas en las

familias Anonáceae, Euphorbiaceae, Sapotaceae, Alangiaceae e

Icacinaceae. (M.V. Kisakürec).

NH

O

O

NCH3

Gelsemina

NH

NH

H3COOC

OCH3

H

O

H

Mitraphillina

NH

N

CH3

CH3

Ellipticina

NH

N

H3COOC

Secodina



La mayoría de los botánicos dividen la familia Apocinaceae (la más

prolífica) en tres subfamilias: Plumerioideade, Cerberoideade y

Echitoídeade. Aunque de todas ellas se han aislado alcaloides, solo en la

subfamilia es además dividida en siete tribus de las que en solo cuatro,

Carisseae, Tabernaemontana, Alstonieae (Plumerieae) y Rauwolfíeae, los

alcaloides indólicos están presentes.

Los alcaloides representativos del esqueleto I (Corinante) son los más

ampliamente distribuidos habiéndose encontrado abundantemente en los

géneros Alstonia, Amsonia, Aspidospermas, Catarantus, Ochrosia,

Pleicoarpa, Rauwolfia, Tabernaemontana y Vinca (Apocinaceae), en el

género Estríchnos (Loganiaceae) y los géneros Chinchonas Corinante,

Mitragina y Uncaria (Rubíaceae). Los alcaloides representativos del

esqueleto II (Aspidospermas) están restringidos a los géneros de

Apocinaceae Alstonieae, Kopsia, Pleicoarpa, Stemmadenia,

Tabernaemontana y Vinca, y los del esqueleto III (Iboga) se encuentran en

los géneros Apocinaceae, Ervatamia, Tabernaemontana, Stemmadenia y

Voacanga.

Especial mención por su importancia merece el género Rauwolfia

(Apocinaceae) que incluye alrededor de 150 especies distribuidas a lo

largo de las zonas tropicales y subtropicales del mundo, encontrando su

hábitat típico en selvas y sabanas. Los sistemas anulares básicos

encontrados son comunes a la mayoría de las especies y están

representados por los compuestos yohimbina, Ajmalicina, Sarpagina y

Ajmalina. (Manske, 1965) (Fig. 2). Estos alcaloides son también

encontrados en otros géneros, la yohimbina es el constituyente principal de

la corteza del árbol africano Corinante yohimbe (Rubíaceae) y también se

ha encontrado en los géneros, Amsonia, Vallesia, Aspidosperma y Vinca

(Apocinaceae), Gelsenium y Estríennos (Loganiaceae), Corinante,

Pausinitalia (Rubíaceae) y Achorrea (Euphorbiaceae). La Ajmalicina se

aisló por primera vez de la Rauwolfia serpentina, pero está distribuida en



otros géneros como Vinca y Corinante. Los esqueletos tipo Sarpagina y

Ajmalina, representados por los alcaloides del mismo nombre, están

ampliamente distribuidos y han sido obtenidos, entre otros, de los géneros

Aspidosperma, Catarantus, Picralima, Rhazia y Estríennos.

1.2.5 BIOGÉNESIS DE LOS ALCALOIDES INDÓLICOS

Los alcaloides indólicos derivan biogenéticamente del triptófano. La

mayor parte de los alcaloides de este tipo poseen un grupo indol que se

presenta casi de forma invariable como triptamina. En los alcaloides

indólicos complejos, la unidad de triptófano o triptamina se condensa con

un fragmento alicíclico de 9 o 10 átomos de carbono al que Thomas,

Wenkert y otros, atribuyen un origen monoterpenoide (Cordell, 1974). (Fig.

4 y 5). El conjunto sufre consecutivas transformaciones hasta adoptar

alguno de los tres tipos de estructura que establecen la base para su

clasificación (Fig. 4). El descubrimiento de alcaloides indol glucosídicos

como la estrictosidina (Fig. 5), supuso un gran avance en la elucidación de

las rutas biogenéticas que conducen a estos alcaloides. La estrictosidina se

sintetiza fácilmente en el laboratorio a partir de cultivos celulares de

diversas especies de Apocinaceae, que catalizan la condensación de

secologanina y triptamina para dar estrictosidina. (Fig. 5). La

administración de estrictosidina (Veerporte, 1997) marcada isotópicamente

a plantas de Catarantusroseus, produjo una conversión eficaz y especifica

del mismo en alcaloides representativos de los tres principales grupos

estructurales. Por otro lado, la administración de loganina marcada (Fig.

4), monoterpeno natural que se produce junto con los alcaloides indólicos,

a plantas de Vinca rosea produjo alcaloides representativos de los tres

grupos fundamentales de unidad C-9 ó C-10 marcados en las posiciones

previstas. Estos experimentos, sitúan a la secologanina como el último

precursor no nitrogenado de los alcaloides indólicos y determinan con

exactitud la etapa de 'introducción del nitrógeno en el proceso biosintético.



HO

COOH

COOH

OHHO

OH

23

4

5

6

OH

23

45

6

2

4

5

63

NH

N

H3COOC

NH

OH

HH

H3COOC

CH3

N

N

COOCH3

COOCH3

OH

CH3

H3CO

Mevalonato Geraniol

Esqueleto AspidospermaEsqueleto CorinanteEsqueleto Iboga

Coronaridina Ajamalicina Vindolina

FIGURA 04. Biogénesis de los Alcaloides Tipo Iboga y Aspidosperma

FIGURA 05. Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos

NH

NH2

O

CHO

H

HOGlu

H3COOC

Triptamina

Secologanina

NH

NH

O

H

H

H3COOC

OGlu

O

H

H

H3COOC

OGlu

HO

Estrictosidina Loganina



En la Figura 6, se esquematizan las principales rutas biogenéticas

conducentes a los tres principales tipos de esqueletos, donde los alcaloides

estrictosidina, geisoschicina y stemmadenina ocupan un papel relevante.

FIGURA 6. Biogénesis de alcaloides tipo yohimbina, Ajmalicina y Corinanteina.

NH

NH

O

H

H

H3COOC

OGlu

Estrictosidina

HNH

NHCHO

CHO

H

H3COOC

HNH

N

CHO

H

H3COOC

H

NH

N

C

H

H3COOC

H

H

O

NH

N

H

H3COOC

H

OH

NH

N

H

H3COOC

H

OH

H

A B

NH

N

H

H3COOC

HB

OCH3

HNH

N

H

H3COOC

H

OH

NH

N

OH

H3COOC

H H

Yohimbina

NH

N

H

H3COOC

H

OH

A

Ajmalicina

Geisoschizina

Corinanteina



FIGURA 07. .Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma

NH

N

H3COOC CH2OH

NH

N

H3COOC CH2OH

NH

N

COOCH3

Stemmadenina

NH

NH

COOCH3

NH

N

COOCH3

NH

N

COOCH3

NH

N

COOCH3

NH

N

COOCH3

Tabersonina

(Tipo Aspidosperma)

Coronaridina

(Tipo Iboga)

Catarantina

(Tipo Iboga)



Aunque a primera vista los piridocarbazoles tales como la ellipticina

parecen estar fuera de las rutas biogenéticas generales, puede postularse su

biogénesis a partir del alcaloide Stemmadenia (Kansal. 1986) (Fig. 6).

FIGURA. 8 Biogénesis de los alcaloides tipo Piridocarbazol.

1.2.6 FARMACOLOGÍA

El género Tabernaemontana ha sido mencionado en la literatura

etnobotánica por su amplio uso en medicina tradicional. Su uso médico es

común a muchas de sus especies, y está basado en sus propiedades

antimicrobianas, frente a infecciones, heridas, inflamación de ojos, uñas y

garganta; contra la sífilis y el mal de Hansen; antiparasitaria, frente a la

disentería, diarrea y lombrices intestinales; y en el tratamiento de

ulceraciones en la piel. Algunas especies son usadas como analgésicos en

NH

N

H3COOC CH2OH

Stemmadenina

NH

N

H3COOC CH2OH

OX

NH

N

H3COOC CH2OH

NH

N CH3

H2ONH

N CH3

CH2

O

H

-CH2ONH

N CH3

NH

N

CH3

CH3

CH3

NH

N

CH3

CH3

Ellipticina



dolores de cabeza y muelas mientras que otras actúan sobre el sistema

nervioso central. Estas actividades son probablemente debidas a la

presencia de alcaloides, los cuales constituyen los principales metabolitos

secundarios de las plantas. Se ha descrito una amplia miscelánea de

actividades farmacológicas de diversos alcaloides de la Tabernaemontana,

muchos de ellos comunes a otros géneros. Un estudio de la actividad

farmacológica sobre 40 alcaloides obtenidos del género Tabernaemontana

(Palmisano. 1986), indican que sólo la camptothecina, su 9-metoxi

derivado, y la Vincamina, poseen actividad relevante, habiendo sido

evaluada su viabilidad clínica (Palmisano. 1986; Monroe. 1998).

Curiosamente estos alcaloides no son representativos del género, siendo

encontrados en gran variedad de plantas. Así, la camptothecina, aislada

originariamente del tronco del árbol chino Camptotheca acumminata,

llamó la atención por la presencia en su estructura de un anillo indólico

expandido, y por qué inhibía el crecimiento de un amplio rango de tumores

experimentales (carcinosarcoma Walker 256, linfoma L5178Y, tumor

celular de plasma YPC-1, etc...). Posteriores estudios indicaron que la

camptothecina actuaba inhibiendo la enzima topoisomerasa I, la cual está

implicada en varias funciones del ADN, incluyendo la síntesis de

macromoléculas. Además, se encontró que esta enzima tenía una actividad

exaltada en etapas avanzadas del cáncer de colon y otros tumores

malignos. Actualmente, dos derivados solubles en agua de la

camptothecina, son usados clínicamente en combinación con otras drogas

antitumorales como cisplatinas, etoposido y taxol en Francia y Japón,

mientras que otras están en fases avanzadas de evaluación clínica en

Europa.

Se han descrito también propiedades antibióticas en los alcaloides del

género Tabernaemontana, encontrándose la máxima actividad en los

alcaloides bisindólicos del tipo Iboga frente a las bacterias gram-positivas.

(Van Beek, 1984, 1985).



La ellipticina, cuya síntesis se ha logrado en sólo tres pasos, es un

alcaloide ópticamente inactivo aislado originariamente de las ramas de la

Ochrosiaacumminata (Apocinaceae).Subsecuentemente la ellipticina y

derivados se han aislado de otras especies de los géneros Aspidosperma,

Tabernaemontana y Estriednos. En 1967, un grupo de científicos

australianos mostró que la ellipticina y la 9-metoxiellipticina eran activas

frente a varios tumores. (Sarcoma-180, adenocarcinoma 755 y leucemia L-

1210). Otro de sus derivados, el elliptinium, (N -2-metil -9-

hidroxiellipticina), ha sido probado clínicamente contra diversos cánceres

(mama, nasofaríngeo, mal de Hodgkin, renal, hepático etc.). Los autores

concluyeron que tiene una modesta pero inconfundible actividad y que

necesita ser evaluada en combinación con otras drogas. Así, en un estudio

en el que su uso se combinó con mitomicina, vinblastina y/o etoposido

puso de manifiesto que esta mezcla de agentes es activa y bien tolerada en

pacientes con cáncer de mama avanzado. (Gribble. 1990) La forma en la

que interactúan in vivo los piridocarbazoles, tales como la ellipticina, es

todavía desconocido, aunque la investigación al respecto apunta a que

deben estar involucrados en más de un mecanismo de acción. (Kansal.

1986).

Figura N° 09. Estructura de la Ellipticina

NH

N

CH3

CH3

1

2

3

457

68

9

10 11

Ellipticina

NH

N

CH3

CH3

1

3

457

68

10 11

Ellipticina

HO CH3



1.2.7 PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS

Los alcaloides poseen pesos moleculares que varían entre 100 y 900.

Aunque la mayoría de las bases no oxigenadas son líquidas a temperatura

ambiente (nicotina, esparteína, coniína), las que contienen oxígeno en su

fórmula como ocurre en la casi totalidad de las estructura conocidas, son

normalmente sólidos cristalizables, raramente coloreados (berberina).

Casi siempre son capaces de desviar la luz polarizada, las bases

cristalizadas dan puntos de fusión netos, sin descomposición sobre todo

por debajo de 200°C. Por regla general, en su forma libre, los

alcaloides bases son insolubles o muy poco solubles en agua, solubles en

disolventes orgánicos apolares (éter, cloroformo, hexano) o poco polares

(acetato de etilo) y solubles en disolventes orgánicos polares (alcoholes de

elevada graduación).

La basicidad de los alcaloides es muy variable y esta propiedad se

encuentra estrechamente ligada a la disponibilidad del doblete libre de

nitrógeno. Los agrupamientos electro-atrayentes adyacentes al átomo de

nitrógeno disminuyen la basicidad, los grupos electro-donadores la

exaltan: colchicina y piperina son, debido a la existencia del carbonilo de

la amida, prácticamente neutros.

El sistema heterocíclico puede poseer por sí mismo una basicidad variable:

así en la piridina –con seis electrones - y también en la quinoleína e

isoquinoleína, el doblete de nitrógeno está disponible y su basicidad es

manifiesta. En el caso del pirrol o del indol, el doblete del nitrógeno

participa en la aromaticidad por lo que no son básicos (incluso tienen

cierto carácter ácido), también: la pirrolidina, insaturada, es una base

fuerte. La basicidad se encuentra así mismo influida por los impedimentos

estéricos (al menos en moléculas policíclicas complejas). Subrayemos

finalmente que la basicidad es un factor de inestabilidad en estas

moléculas, que al estado de base y en disolución, son sensibles al calor, a

la luz y al oxígeno.



La basicidad de los alcaloides les permite formar sales con ácidos

minerales (clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos,

sulfamatos, maleatos). Las sales de alcaloides son generalmente solubles

en agua y en alcoholes diluidos, salvo raras excepciones, son insolubles en

disolventes orgánicos. Las sales cristalizadas se conservan bastante bien y

constituyen habitualmente la forma comercial de estas moléculas.

(Bruneton. 2001).

Figura N° 10. Diferentes Esqueletos Alcaloidales

1.2.8 EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES.

La extracción de alcaloides se fundamenta, por regla general, en el hecho

de que se encuentran habitualmente en la planta al estado de sales y en su

basicidad, es decir, en la diferente solubilidad de las bases y de las sales en

agua por una parte y en disolventes orgánicos.

El material vegetal contiene a menudo cantidades apreciables de grasas

(especialmente en las semillas), así como ceras, terpenos, pigmentos y

otras sustancias lipófilas que pueden interferir en el proceso extractivo,

sobre todo induciendo la formación de emulsiones. Para evitar en todo o

en parte estos problemas tecnológicos, se debe proceder a una

N N N N N

H H HH

Pirrol Pirrolidina Piperidina Piridina Indol

NN

NO

O

O

Quinoleina Isoquinoleina Piperina



deslipidación previa de la materia molturada. El éter de petróleo o el

hexano se utilizan frecuentemente en esta operación: excepcionalmente los

alcaloides pueden extraerse con estos disolventes si se emplean en medio

neutro.

CAPITULO II

2. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1. Material Botánico. Se utilizó las hojas y tallos de la Tabernaemontana

siphilitica, las cuales fueron recolectadas en el rio Yarapa, Provincia de

Maynas, Distrito de Fernando Lores, al extremo Suroeste de la reserva

Pacaya-Samiria, comunidad Haldar, departamento de Loreto, Fue

identificado por un botánico del Herbarium Amazónico de la UNAP, la

exicata se encuentra depositada y codificada con el N° 025580 J. Ruiz.

2.2. Materiales de Laboratorio y otros.

2.2.1. Materiales de vidrio

Matraz

Vaso de precipitado 500ml.

Vaso de precipitado 50 ml.

Embudo

Envase (para macerar).

Balón (1000, 250, 100 ml).

Balón buchi

Rotavapor y balones boca

esmerilada para rota vapor.

Bomba de vacío

Viales (pequeño para colocar

los extractos).

Pipetas Pasteur

Baquetas

Gradilla

Tubos de ensayo

Probeta (1000,100,

10 y 5 ml)

Agua destilada

Peras de separación

Capilares

Papel filtro

Papel aluminio

Espátulas

Papel higiénico

Nueces para soporte

Soporte universal.



2.2.2. Adsorbentes

Cromatofolios de Oxido de Aluminio 60- F254. Merck.

Cromatofolios de Oxido de Silicio 60 – F254. Merck.

Silicagel y alúmina neutra para cromatografía de columna.

2.2.3. Solventes Orgánicos

Hexano (Hx)

Ciclo Hexano

Cloroformo (CHCl3)

Acetato de etilo (OAcet)

Di etilamina

Metanol (MeOH)

Etanol (EtOH)

2.2.4. Reactivos

Ácido cítrico (C5H8O7)

Hidróxido de sodio (NaOH)

Hidróxido de amonio (NH4OH)

Yoduro de potasio (KI)

Sulfato de sodio anhidro (Na2SO4 anhidro)

Agua destilada (H2O)

Reactivo de Dragendorff. Se disuelve 8.0 g. de Bi (NO3)3. 5 H2O en

20 ml de HNO3 y 27,2 g. de KI en 50 ml de agua destilada se mezclan

las 2 soluciones y se deja reposar por 24 horas. Se decanta la solución

y se enrasa a 100 ml.

2.3. TÉCNICAS INSTRUMENTALES Y EQUIPOS.

2.3.1. RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (RMN)

Los espectros de RMN 1H y 13C, han sido realizados en

espectrómetros Bruker, Avance 400 MHz y Bruker, AMX 500 MHz.



Los productos se disolvieron en CDCls y como referencia interna se

usó CHCl3.

Los experimentos de correlación homo y heteronuclear 1

H - COSY,

NOESY, HSQC y HMBC fueron realizados en el espectrómetro

Bruker AMX de 500 MHz, usando los programas suministros por la

firma de Bruker.

Los valores de los desplazamientos químicos (6) se expresaron en

ppm en relación con el disolvente empleado como referencia interna y

las constantes de acoplamiento (J) en Hz.

2.3.2. ESPECTROMETRÍA DE MASAS (EM).

Los espectros de masas de baja y alta resolución fueron realizados con

un espectrómetro Vg – Micromass modelo Zab 2F. La temperatura de

la fuente fue de 220°C y la energía de ionización de 70 eV. Para cada

producto se indica los picos más significativos y su intensidad

relativa.

2.3.3. ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO (IR)

Los espectros de IR se realizaron en un espectrofotómetro Perkin -

Elmer modelo 1600 / FTIR. El producto puro disuelto en CHCls seco

se aplicó en la superficie de una pastilla de NaCl (5mm de espesor),

evaporándose el disolvente a continuación. Los valores de frecuencia

(v) se expresaron en cm-1

2.4. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS.

2.4.1. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNAS (C.C).

Para las cromatografías en columna, se usaron como fase estacionaria

Alúmina básica Actividad I art 1076, alúmina 90 Actividad II y III art

1097 y Silicagel 60 art 1.07734. Como fase móvil se utilizó mezclas

de disolventes de hexano- hexano, hexano - acetato de etilo y acetato

de etilo - metanol en polaridad creciente.



2.4.2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF).

El seguimiento de las columnas cromatográficas se hizo por

cromatografía de capa fina (CCF), utilizando placas comerciales:

Cromatofolios de óxido de aluminio 60 F254 neutro, tipo E (MERCK),

Cromatofolios de óxido de aluminio básico Polygram Alox N/UV254

(NACGEREY-NAGEL), Cromatofolios de gel de sílice F 1500/LS

254 (MERCK) y Cromatofolios de Oxido de Silicio POLIGRAM SIL

G/U V254. MACHEREY - NAGEL. Como eluyente se usaron los

mismos solventes que para las columnas cromatográficas. Para la

visualización de los alcaloides se empleó el reactivo de Dragendorff.

2.4.3. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA PREPARATIVA (CCFP).

Para la separación de los productos se utilizaron los mismos

Cromatofolios que en cromatografía en capa fina 20 x 20cm, dichas

placas se usaron a escala preparativa, sembrándose en éste caso entre

10 y 25 mg. de producto por placa.

Como fase móvil se usó los mismos disolventes que en cromatografía

de columna y en algunos casos se eluyó con ciclohexano y

dietilamina.

2.5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

2.5.1. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS.

Las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica colectada, fue

finamente dividida, secada a temperatura de 20°C durante 15 días,

molida y pesada, obteniendo un peso de 1.27 Kg, la que se utilizó para

preparar el extracto.



2.5.2. EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES DE LAS HOJAS Y TALLOS

DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 1.27 kg de hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica seca y

molida se adiciono 7 litros de etanol y se dejó en maceración durante

72 horas, se filtró; este proceso se repitió 5 veces hasta agotamiento.

El filtrado se concentra a presión reducida en un rotavapor,

obteniéndose el extracto Etanólico (161.9 g).

El extracto Etanólico (161.9 g) se disolvió con H2SO4 0.5 N, Se

extrajo con CH2Cl2, obteniéndose 2.72 g de extracto alcaloidal acido.

El extracto acuosa se basificó a pH= 9, con solución de NH4OH,

después de extraer con CH2Cl2 repetidas veces y evaporar se obtuvo

552.1 mg de extracto alcaloidal básico y 376 mg de residuo

alcaloidal. El extracto alcaloidal acido se volvió a extraer a pH= 9 y

se obtuvo 60.9 mg. Por cromatografía de capa fina se unieron los

extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg.



DIAGRAMA N° 01. EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES DE LAS HOJAS Y

TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

Agitar 3 horas

Filtra y Extraer con CH2Cl

2

Solución acuosa se desecha

Basificar a pH 9, con NH4OH Agitar 3 horas Filtra y Extraer con CH2Cl2

Solución acuosa se desecha

Disolver en H2SO4 0.5N Agitar 3 horas Filtra y Extraer con CH2Cl2

Extracto Etanólico

161.9 g

Residuo

Ext. Alcaloidal Acido (2.72 g)

Solución acuosa

Ext. Alcaloidal Básico (552.1 mg)

Residuo 376 mg

Basificar a pH 9, con NH4OH Agitar 3 horas Filtra y Extraer con CH2Cl2

Ext. Alcaloidal básico (60.9 mg)

Hojas y Tallos secos de

Tabernaemontana siphilitica

1.27 Kg

Etanol (Temp. 20°C) Filtrar

Solución acuosa



2.5.3. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRÁFICO DEL EXTRACTO

ALCALOIDAL ÁCIDO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE LA

TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 2.72 g del extracto alcaloidal acido 1, se fraccionó en una columna

cromatográfica de diámetro interno de 4.5 cm, se utilizó como fase

estacionaria el adsorbente óxido de aluminio actividad II y III (Al2O3),

como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como: hexano

acetato de etilo, metanol de polaridad creciente. Se obtuvo 75

fracciones de 250 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en

rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones

obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la

lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos

permitió agrupar 2 fracciones: A 4-10 (848 mg), B 31-33 (121.6

mg).

2.5.3.1. AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LAS FRACCIONES

ALCALOIDALES OBTENIDAS DEL EXTRACTO ALCALOIDAL

ACIDO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE TABERNAEMONTANA

SIPHILITICA.

La fracción A 4-10 (848 mg), se fraccionó en una columna

cromatográfica de diámetro interno de 5 cm, se utilizó como fase

estacionaria el adsorbente óxido de aluminio básica actividad I (Al2O3),

como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como: hexano acetato

de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 74 fracciones de 250 ml, cada

una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El

análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de

capa fina y observada a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el

reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 3 fracciones: C 13-15

(83.5 mg), D 14-21 (36.5 mg), E 35-42 (121.6 mg), F 59-64 (33.7 mg)



La fracción C 13-15 (83.5 mg) después de realizar los estudios de:

EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se

identificó como: CORONARIDINA (codificado como C).

La fracción D 14-21 (36.5 mg), se sembró en 03 cromatofolios de

Óxido de Silicio – 60 a escala preparativa, se eluyó 3 veces en mezcla

de Hexano – Acetato de Etilo (90:10), a la luz de la lámpara del U.V.

Se observa dos alcaloides siendo uno de ellos mayoritario. Después de

separar los alcaloides del adsorbente se obtuvo: PTLC- 1 (17.9 mg),

PTLC- 2 (1.2 mg).

La fracción 14-21, PTLC 1 (17.9 mg), después de realizar los

estudios de: EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y

bidimensionales se identificó como: CORONARIDINA

HIDROXINDOLENINA (codificado como H).

La fracción E 35-42, (121.6 mg). Se fraccionó en una columna


estacionaria el adsorbente oxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm)

(SiO2), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 34



obtenidas en cromatografía de capa fina y observada a la luz de la


permitió agrupar 1 fracción: P 12-19 (9.2 mg).

La fracción P 12-19 (9.2 mg), Después de realizar los estudios de:

EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se

identificó como: 19-S-HEYNEANINA (codificado como S).

La fracción F 59-64 (33.7 mg), Se sembró en 03 cromatofolios de

Óxido de Silicio – 60 a escala preparativa, se eluyó 2 veces en mezcla

de Hexano – Acetato de Etilo (50:50), a la luz de la lámpara del U.V.



Se observa un alcaloide mayoritario. Después de separar el alcaloide

del adsorbente se obtuvo: PTLC- 1 (19.3 mg).

La fracción 59-64, PTLC- 1 (19.3 mg), Después de realizar los

estudios de: EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y

bidimensionales se identificó como: 3-OXOCORONARIDINA.

(Codificado como O).

La fracción B 31-33 (121.6 mg). Se fraccionó en una columna

cromatografica de diámetro interno de 2 cm, se utilizó como fase

estacionaria el adsorbente oxido de aluminio actividad II y III

(Al2O3), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:




obtenidas en cromatografía de capa fina y observada a la luz de la


permitió agrupar 2 fracciones: G 12-19 (9.5mg); H 31-35 (56.1 mg).

2.5.4. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRÁFICO DEL EXTRACTO

ALCALOIDAL BASICO, Y RESIDUO DE HOJAS Y TALLOS

DE TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 989 mg del extracto alcaloidal residuo 1, se fraccionó en una

columna Flash de diámetro interno de 9 cm, se utilizó como fase

estacionaria el adsorbente oxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm)


hexano, acetato de etilo, metanol de polaridad creciente. Se obtuvo 53

fracciones de 1L, cada una de estas fracciones se concentraron en






permitió agrupar 2 fracciones: G 2- 4 (34.7 mg), H 5-12 (66 mg),

2.5.4.1. AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LAS FRACCIONES

ALCALOIDALES OBTENIDAS DEL EXTRACTO ALCALOIDAL

BÁSICO Y RESIDUO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE

TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

La fracción G 2 - 4 (34.7 mg), se fraccionó en una columna

Cromatográfica de diámetro interno de 1.5 cm, se utilizó como fase

estacionaria el adsorbente oxido de aluminio actividad II y III

(Al2O3), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:



rotavapor hasta sequedad. El análisis Cromatográfico de las fracciones



permitió agrupar 2 fracciones: I 8-9 (12.2 mg), J 14-19 (0.2 mg).

no se trabajó por ser una mezcla compleja y poca cantidad

La fracción I 8-9 (12.2 mg, Después de realizar los estudios de: EM,

RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se

identificó como: 19- S HEYNEANINA. (Codificado como S).

La fracción H 5-12 (66 mg). Se fraccionó en una columna


estacionaria el adsorbente óxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm)




rotavapor hasta sequedad. El análisis Cromatográfico de las fracciones





permitió agrupar 3 fracciones: I 36-38 (1.3 mg), J 63-65 (21.6 mg),

La fracción 36-38 no se trabajó por ser una mezcla compleja y poca

cantidad.

La fracción L 63-65 (21.6 mg), Se purificó en una micro columna, se

utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de Aluminio

actividad II y III (Al2O3), como Fase móvil se utilizó mezclas de

solventes como: hexano, acetato de etilo (90:10). Se obtuvo 13

fracciones. El análisis Cromatográfico de las fracciones obtenidas en

cromatografía de capa fina y observados a la luz de la lámpara de

U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar

2 fracciones: M 5-7 (2.3 mg), N 20-26 (1.7 mg).

2.5.5 DATOS FISICOS Y ESPECTROSCÓPICOS DE LOS ALCALOIDES

AISLADOS

De los extractos alcaloidales se aislaron cuatro alcaloides:

Coronaridina, 19 S- Heyneanina, Coronaridina Hidroxindolenina,

3-Oxocoronaridina.

La estructura química de estos alcaloides se determinaron mediante

datos físicos: punto de fusión, y por sus datos espectroscópicos: U.V,

E.M, I.R, RMN, 1H y 13C.

La estructura de los alcaloides se determinaron haciendo uso de las

correlaciones Homo y Hetero nucleares: HSQC y HMBC; y las

correlaciones escalares y espaciales COSY y NOESY.



2.5.5.1. CORONARIDINA.

Sólido amorfo, 25

Dα - 31.5º(c,

0.314g/100mL, CHCl3).

IR (CHCl3) max. cm-1

: 3366, 2930, 1676, 1238, 751.

EM de baja resolución, m/z (int. relativa. %): 338 M+

(100), 323

(40), 309 (8), 279 (11), 253 (14), 214 (36), 215 (11), 208 (19), 207

(11), 195 (11), 194 (9),180 (12), 168 (17), 167 (19), 154 (35), 148

(12), 136 (94), 135 (26), 130 (19), 124 (44), 122 (32), 108 (10).

EM de alta resolución, m/z: [M]+ 338.2004 calculado para un

C21H26N2O2, 338.2053.

RMN de 1H (500 MHz, CD Cl3): δH8.04 ( 1H,sa, N-H), 2.97 (1H,m,

H-3R), 2.85( 1H,m, H-3S), 3.44 (1H, m, H-5R), 3.24 (1H, m, H-5S),

3.20 (1H, m, H-6R), 3.03 (1H,m, H-6S), 7.51 (1H,d, J= 7.6 Hz,H-

9),7.12 (1H,ddd, J=1.2, 7.7, 8.9 Hz, H-10), 7.18 (1H, DDD, J=1.2,

7.1,8.1 Hz, H-11),7.27(1H, da, J=7.8Hz, H-12), 1.96 (1H,m, H-14),

1.63 (1H,m, H-15R), 1.20 (1H,m, H-15S), 1.78 (1H, m, H-17R), 2.64

(1H, da, H-17S), 0.95 (1H,t, J=7.4, H-18), 1.49 (2H,m, H-19), 1.38

(1H,m, H-20), 3.62 (1H,sa, H=21), 3.75 (3H,S, COOCH3).

RMN13

C (400 MHz, CDCl3) :δC 136.0 (s, C-2), 52.1 (t, C-3), 53.4 (t,

C-5), 21.0 (t, C-6), 110.7 (s, -7), 127.2 (s, C-8), 119.0 (d, C-9), 119.6

(d, C-10), 122.7 (d, C-11), 110.8 (d, C-12), 136.0 (s, C-13), 27.4 (d,

C-14), 32.1 (t, C-15), 54.9 (s, C-16), 36.5 (t, C-17), 11.9 (q, C-18),

26.8 (d, C-19), 39.2 (d, C-20), 57.5 (d, C-21), 52.6(q, COOCH3),

176.2 (s, COOCH3).

N

N

H

COOCH3



2.5.5.2. 19 S- HEYNEANINA

Alcaloide aislado como sólido amorfo

(36.5mg): 25

Dα -25º(c,0.18 g/100mL,

CHCl3).

IR (CHCl3) máx. cm-1

: 3259, 1728,1658, 1462,1372, 1240,

1163,1068, 750.

EM de baja resolución, m/z (int. relativa. %): 354(100), 353 (20),

340(15), 339 (63), 337 (31), 336 (51), 310(16), 309(18), 277 (6),

249(6), 228(8), 224(10), 214(38),206(10),195(13), 180(13),

99(4),97(11), 96(20),94 (17) ,85(48), 83 (68), 81(11), 71(14),

69(20), 67(15),57(22), 55(23).


C21H26N2O3, 3541943.

RMN de 1H (500 MHz, CD Cl3) :δH7.82 (1H, sa, N-H), 3.03 (1H,

m, H-3R), 2.83(1H, d, J=9.2 Hz, H-3S), 3.50 (1H, m, H-5R), 3.17

(1H, m, H-5S), 3,19 (2H, m, H-6R), 7.71 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-9),

7,11 (1H, ddd, J =1.0, 7.9, 8.8 Hz, H-10), 7.15 (1H, ddd, J= 1.2, 7.2,

8.1, Hz, H-11), 7.27 (1H, d, J=8.0, Hz, H-12), 2.05 (1H, sa H-14),

1,92 (1H, m, H-15R), 1.56 (1H, m, H-15S), 2.01 (1H, da, J=13.3 H-

17R), 2.61 (1H, dt, J=2,0, 9,5, H-17S), 1.10 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-

18), 4.18 (1H, q, J = 5.6 Hz, H-19), 1.49 (1H, m, H-20), 3.90 (1H,

sa, H-21), 3.74 (3H, s, COOCH3).

RMN13

C (400 MHz, CD Cl3) :δC135.6 (s, C-2), 51.3 (t, C-3), 52.4

(t, C-5), 21.4 (t, C-6), 109.9 (s, -7), 128.5 (s, C-8), 118.5 (d, C-9),

119.6 (d, C-10), 122.4 (d, C-11), 110.5 (d, C-12), 135.5 (s, C-13),

26.8 (d, C-14), 22.9 (t, C-15), 54.0 (s, C-16), 37.0 (t, C-17), 20.5 (q,

C-18), 71.3 (d, C-19), 39.6 (d, C-20), 59.8 (d, C-21), 53.0 (q,

COOCH3), 174.8 (s, COOCH3).

N

N

H

COOCH3

OH



2.5.5.3. CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA


(17.9mg), 25

Dα -8º(c, 1.04 g/100mL,

CHCl3).

IR (CHCl3) máx. cm-1

: 3473, 1732,

1660, 1461, 1236, 1144, 1087, 982,754.

EM de baja resolución, m/z (int. Rel. %): 354(100), 334 (17), 338

(17), 337(52), 325 (6), 295 (10),230 (7), 223 (4), 208 (4), 188(16),

160 (13), 136 (9), 122 (14), 108 (10), 96(8).


C21H26N2O3, 3541943.

RMN de 1H (500 MHz, CD Cl3):δH 2.71 (2H,sa, H-3), 3.45 (1H, m,

H-5S¨), 2.91(1H, d, J=12.5Hz-H-5R), 1.93 (1H, da, J=14.4 Hz, H-

6R),1.77 (1H, m, H-6S), 7.47 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-9), 7,36 (1H, d,

J = 7.3 Hz, H-10), 7.32 (1H, d,7.3 Hz, H-11), 7.24 (1H, d,7.6Hz, H-

12), 1.89 (1H, sa, H-14), 1.80 (1H, m, H-15R), 1.12 (1H, m, H-15S),

2.69 (1H, m, H-17S), 2.44 (1H, da,J=12.7 Hz17R), 0.83 (3H, t, J =

7.2 Hz, H-18), 1.42 (2H, m, H-19), 1.37 (1H, m, H-20), 3.76 (1H, sa

H-21), 3.70 (3H, s,COOCH3).

RMN13

C (400 MHz, CDCl3) :δC189.3 (s, C-2), 48.8 (t, C-3), 49.1 (t,

C-5), 33.9 (t, C-6), 88.4 (s, -7), 142.7 (s, C-8), 120.9 (d, C-9),

121.5(d, C-10), 129.2 (d, C-11), 126.8 (d, C-12), 151.4 (s, C-13),

27.1 (d, C-14), 32.1 (t, C-15), 58.8 (s, C-16), 34.8 (t, C-17), 11.5 (q,

C-18), 26.6 (d, C-19), 37.6 (d, C-20), 58.5 (d, C-21), 53.2 (q,


N

N

COOCH3

HO



2.5.5.4. 3-OXOCORONARIDINA.


(9.0 mg), 25

Dα -12º(c, 0.38 g/100mL,

CHCl3).

EM de baja resolución, m/z (int. rel. %): 352 M+

(100), 351 ( 23),

350(41), 293 (8), 254 (9), 229 (23), 228 (26), 216(16), 214 (20), 197

(42), 195 (20), 180 (12), 168 (23), 150(10),143 (14), 138 (17), 124

(79), 84 (10).


C21H24N2O3, 3541943.

RMN de 1H (500 MHz, CD Cl3):δH 7.96 (1H,sa, N-H),4.50 (1H,m,

H-5R), 3.22 (1H, m, H-5S¨), 3.22 (2H, m H-6), 7.48 (1H, d, J = 7.4

Hz, H-9), 7,11 (1H, t, J = 7.9 Hz, H-10), 7.15 (1H, t,7.9 Hz, H-11),

7.24 (1H, d, 8.0 Hz, H-12), 2.63 (1H, m, H-14), 1.41 (1H, m, H-

15R), 1.99 (1H, m, H-15S), 2.63 (1H, d, J=1.6, 15.0H-17S), 2.33

(1H, dt,J=2.6, 13.0, Hz, H-17R), 0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz, H-18),

1.53(1H, m, H-19 A), 1.43 (1H, m, H-19B), 1.75 ( 1H,m, H-20),

4.55 (1H, s H-21), 3.65 (3H, s,COOCH3).

RMN13

C (400 MHz, CDCl3) :δC136.1(s, C-2) 173.4 (s, C-3), 42.7

(t, C5), 21.1 (t, C-6), 109.9 (s, -7), 128.3 (s, C-8), 118.4 (d, C-9),

119.6(d, C-10), 122.4 (d, C-11), 110.6 (d, C-12), 134.2 (s, C-13),

38.2 (d, C-14), 31.0 (t, C-15), 55.9 (s, C-16), 35.9 (t, C-17), 11.4 (q,

C-18), 27.6 (d, C-19), 35.5 (d, C-20), 56.1 (d, C-21), 53.0 (q,


N

N

H

COOCH3

O



DIAGRAMA N° 02. : FRACCIONAMIENTO, AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE

LAS HOJAS Y TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA

SIPHILITICA DEL EXTRACTO ALCALOIDAL ACIDO

EXTRACTO

ALCALOIDAL ÁCIDO

2.72gr

C.C. Al2O2 Actividad II y III Hx/OAcet/MeoH

4-10 848 mg

31-33 121.6 mg

C.C. Sílica gel Hx/OAcet/MeoH

14-21 36.5 mg

35-42 121.6 mg

59-64 33.7mg

13-15 83.5 mg

C

31-35 56.1

31-35 56.1 mg

C.C. Sílica gel Hx/OAcet/MeoH

LEYENDA

O: 3-OXO-CORONARIDINA

C: CORONARIDINA

H: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

S: 19 S- HEYNEANINA

PTLC-2 1.2 mg

PTLC-1 19.3 mg

O

PTLC-1 17.9 mg

H

12-19 9.5 mg

S

C. C. P. Sílica gel Hx/OAcet

C.C. silica gel Hx/OAcet /MeoH

C. C. P. Sílica gel Hx/OAcet



DIAGRAMA N° 03: FRACCIONAMIENTO, AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE

LAS HOJAS Y TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA

DEL EXT. ALCALOIDAL. BÁSICO Y RESIDUO.

C.C. Al2O2 Actividad II y III Hx/OAC

C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet

C.C. Al2O2 Actividad II y III Hx/OAC

EXTRACTO ALCALOIDAL BÁSICO Y RESIDUO

989 mg

2-4 34.7 mg

5-12 66 mg

14-19 0.2 mg

8-9 12.2 mg

S

36 -38 1.3 mg

5-7 2.3 mg

20-26 1.7 mg

63-65 21. 6 mg

C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet/MeoH

CAPITULO III

3.0. DISCUSIONES Y RESULTADOS

3.1. RESULTADOS

Del extracto alcaloidal básico (1.27g), se aislaron los alcaloides: Coronaridina,

19 S- Heyneanina, Coronaridina Hidroxindolenina, 3-Oxocoronaridina.

La estructura química de los alcaloides se determinaron mediante la

comparación, de los datos espectroscópicos como: 1H, EM, IR, RMN, RMN

13C,

Y por comparaciones con los datos publicados en la biografía y haciendo uso de

las correlaciones homo nucleares (protón-protón) COSY Y NOESY y

Heteronucleares: (Carbono-protón o protón-carbono).

3.2. DETERMINACIÓN ESTRUCTURAL DE LOS ALCALOIDES AISLADOS

3.2.1. ALCALOIDE CORONARIDINA

Base aislada como sólido amorfo. En el espectro de IR se observan absorciones a

3366 cm-1

que corresponden a un N-H ; 2930 (C-H); 1676 y 1238 (COOCH3);

751 (C-H, anillo aromático).

El espectro de masas dio unión molecular a m/z 338 (100%), y fragmentos a: m/z

323 que representa la pérdida de un grupo CH3, 279, perdida del grupo éster

(COOCH3), y otros fragmentos a m/z: 253 (14%), 214 (36%), 195 (11%), 154

(35%) 136 (95%) 124 (44%) y 122(32%) típicos de un alcaloide tipo iboga.

(Teris A. 1984, T.R. Govindachari. 1965)



Figura 11. Fraccionamiento de masas de Coronaridina.

N

N

H

COOCH3

m/e 338 (100%)

N

N

H COOCH3

CH2+

m/e 253 (14%)

N

CH2

N

CH2

+ +

m/e 136 (95%) m/e 124 (44%)

N

CH2

+

m/e 122 (33%)

NCOOCH3

H

CH2

CH2

+N

H

CH2

N

H

+

+

m/e 214 (36%)m/e 130 (19%)

m/e 154 (35%)

+

+

M+ -1H m/e 337 (28%)

M+ -CH3 m/e 323 (40%)

M+ -C2H5 m/e 309 (8%)

M+ -CO2CH3 m/e 279 (11%)

c

ab

ca

b



En el espectro de 1H y

13C se observan las señales a: 0.95 (1H, t, J=7.4 Hz) 11.9 q,

3.75 (3H, s) ,52.6q y 176.2 s, que corresponde a ún grupo etilo y un grupo

metoxicarbonilo ubicado en el C-16. La señala : 8.04 ppm (1H,sa) se asignó a un

N-H aromático. Las señales de los protones δ: 7.51 (1H,d, J= 7.6 Hz,H-9),7.12

(1H,ddd, J=1.2, 7.7, 8.9 Hz, H-10), 7.18 (1H, ddd, J=1.2, 7.1,8.1 Hz, H-11),7.27(1H,

da, J=7.8Hz, H-12) y 13

c a δ:119.0 d,119.6 d, 122.7 d, 110.8 d, indica la presencia

en la molécula de un anillo aromático sin sustituir

La identidad de nuestro compuesto quedó establecida principalmente por

comparación de sus datos de 13

C-RMN con los publicados para Coronaridina

(Perera. 1983, Hans Achenbach. 1994, Perveen. 1988).

Figura N° 12. Alcaloide Coronaridina Publicado

Figura N° 13. Alcaloide Coronaridina Aislado en el LIPNAA-UNAP

N

N

H

COOCH3

23

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

128.8119.0

121.8

110.3

135.6 136.5

110.3

22.253.1

51.5

55.1

36.7

52.4175.9

27.2

32.0

38.9

26.6

11.6

118.3

57.2

CORONARIDINA "Publicado"

21

N

N

H

COOCH3

23

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

127.2119.6

122.7

110.7

136.0 136.0

110.8

21.053.4

52.1

54.9

36.5

52.6176.2

27.4

32.1

39.2

26.8

11.9

119.0

57.5

21

CORONARIDINA "Aislado en el LIPNAA"



3.2.2. ALCOLOIDE 19 S - HEYNEANINA

Alcaloide aislado como resina, en el espectro de IR se observan absorciones

a 3252 y 1728 cm-1

que corresponden a un N-H y a un éster

respectivamente, su fórmula molecular C21H26N2O3, se confirmó por

espectrometría de masa de baja y alta resolución.

El espectro de masas registró el ión molecular am/z 354 (100%), así como

también fragmentos a m/z 353 (20%)[M+-1H],339 (63%) [M

+ -CH3], 337

(31%) [M+

- OH], 309 (18 %) [M+ - C2H5OH], 295 (7%) [M

+ - CO2CH3] y

otros fragmentos característicos de un alcaloide del tipo iboga.

Los espectros de RMN dieron señales a δ 3.75 (3H, s) y 53.0 q y 174.8 s

para un grupo metoxicarbonilo, el grupo metilo a 1.10 (3H, d, J = 6.4 Hz) y

20.5q, en el experimento COSY mostró acoplamiento escalar con otra señal

a d 4.16 (1H,q) y 71.3d, asignable a un alcohol secundario que indica la

funcionalización del grupo etilo esta señal se asignó al H-19.

La señal a δ: 1.49 (1H, m), 39.9d, se asignó al H-20 por su conectividad

espacial con los protones H-18, H-17S en el experimento NOESY, el protón

H-21 por su desplazamientos químicos a δ3.90 (1H, sa), 59.8d, y su

correlación espacial con los protones H-5S, H-6S, H-19, en el experimento

NOESY.

Las demás señales se asignaron por las correlaciones existentes de 1H,

13C,

los experimentos HSQC, COSY y NOESY y por comparación con los datos

espectroscópicos publicados en la bibliografía química. (Christiane Kan.

1996; Kamesh. 1980).



Figura N° 14. Alcaloide Heyneanina Publicado

Figura N° 15. Alcaloide Heyneanina Aislado en el

LIPNAA-UNAP

N

N

H

COOCH3

23

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

129.7120.4

123.3

110.9

136.6 136.9

111.5

22.153.1

52.2

37.7

53.4176.2

27.5

23.7

40.6

72.1

20.9

119.4

60.5

19s-HEYNEANINA "Publicado"

OH

21

N

N

H

COOCH3

23

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

128.5119.6

122.4

110.9

135.5 135.6

110.5

21.452.4

51.3

54.0

37.0

53.0174.8

26.8

22.9

39.6

71.3

20.5

118.5

59.8

OH

21

19s-HEYNEANINA "Aislado en el LIPNAA"



Tabla 2.Datos de RMN de 1H,

13C, HMQC, COSY, NOESY DE 19S- HEYNEANINA

(JH-H en Hz) (1) HSQC COSY NOESY 7.82 sa (N-H) H-12, H-17R 136.5 s (C-2)

H-3R 2.83m 51.3 t H-3S, H-15R H-14, H-15S

H-3S 3.03 m 51.3 t H-14 H-17R, H-6R

H-5S 3.17 m 52.4 t H-5R, H.6S H-21

H-5R 3.50 (m) 52.4 t H-5S, H-6R

H-6R 3.19 (m) 21.4 t H-5R, H-6S

H-6S 3.77 m 21.4 t H-5S, H-6R H-9

109.9 s (C-7)

124.5 s (C -8)

H- 9 7.71 d (8.1) 118.5 d H-6

H-10 7.11ddd (1.0, 7.9, 8.8) 119.6 d

H-11 7.15ddd (1.2, 7.2, 9.1 ) 122.4 d

H-12 7.27 d (8.0) 110.5 d

135.5 s (C-13)

H-14 2.05 (sa) 26.8 d H-3R, H-3S, H-15R H-15R, H-3R, H-3S, H-17S

H-15S 1.92 m 22.9 t H-15R, H-20 H-18, H-3R

H-15R 1.56 m 22.9 t H-3R, H-14, H-15S H-18, H-17S,

54.0 s (C-16)

H-17S 2.61dt (2.0, 9.5) 37.0 t H-17R H-15S, H-20

H-17R 2.01 da (13.3) 37.0 t H-17S H-3S, N-H H-18 1.10d (6.4) 20.5 q H-19 H-20, H-15R, H-15S

H-19 4.18 q (5.6) 71.3 t H-18, H-20 H-18, H-19, H-21

H-20 1.49(m) 39.6 d H-19 H-18, H-17S,H-19

H-21 3.90 (ss) 59.8 d H-5S, H-6S, H.19,H-20

COOCH3 3.74 (s) 53.0 q

COOCH3 174.8 s



Figura Nº 16: NOESY del Alcaloide 19S-Heyneanina

3.2.3 ALCOLOIDE CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA.

Alcaloide aislado como sólido amorfo, en el espectro de IR se observan

bandas características a 2956- 2859 cm-1

(vibraciones C-H ), 1731 cm-1

de

un grupo éster, 1660-1461 cm -1

(C=C extensión del anillo aromático),

754 cm-1

flexión del anillo del benceno. En el espectro de IR también se

observa la banda a 3437 cm-1

y el fragmento a m/e 337 (M+-17) que

confirma la presencia de un grupo hidroxilo en la molécula.

El espectro de masa mostró el ión molecular a m/z 354 (100%) M+, y el

pico característico a m/z 337 (65%) [M+ -OH], típico de una

Hidroxindolenina, 295 (10%) [M+- CO2Me], y otros fragmentos a m/z:

230 (7%), 188(16%), 173 (2%), 162 (4%) y 122 (14%). (T. R.

Govindachari. 1965) (figura 2). La ausencia de la señal para el N-H

aromático y las señales para carbono a 88.4 s y189.3 s, y la absorción a

3437 cm-1en el espectro de IR, confirmaron la estructura 7-

hidroxindolenina para el compuesto.



Figura 17: Fraccionamiento de masa de Coronaridina Hidroxindolenina

En el espectro de 1H, se observan señales comprendidas entre 7.24 -7.47 ppm que

corresponden a un grupo de señales en la zona aromática y que confirman que el

anillo indólico de la molécula no está sustituido. La presencia de la señal a δ: 3.70

(3H,s), 53.2 q y 173.8 s, indican la presencia de un grupo éster. Los protones

metilénicos, H-3, H-5, H-6, H-15, H-17, H-19, se asignaron teniendo en cuenta los

desplazamientos químicos, constantes de acoplamiento, las conectividades a un

enlace en el experimento HSQC, y por comparación con los datos publicados en la

bibliografía química (Hans. 1994; Christiane Kan. 1981).

N

N

COOCH3

HO M+ -1H m/e 353 (5%)

M+ -CH3 m/e 339 (17%)

M+ -OH m/e 337 (65%)

M+ -C2H5 m/e 325 (6%)

M+ -CO2CH3 m/e 295 (10%)

m/e 354 (100%)

N

CH2

+

N

H

OH

COOCH3

+

m/e 232 (7%) m/e 122 (14%)

N

OH

m/e 188 (16%)

N

CH2

N

OH

m/e 173 (2%)

H

+

H3COOC

m/e 162 (4%)

NN

H

H

OH

+

NN

H

H

OH

m/e 188 (16%)

m/e 160 (13%)

a

b

a b

+



Figura N°18. Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina Publicado

Figura N° 19. Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

Aislado en el LIPNAA-UNAP

3.2.4. ALCALOIDE 3-OXOCORONARIDINA

Alcaloide aislado como sólido amorfo. El espectro de masas de baja

resolución muestra un ion molecular a m/z 352 (100%), Calculado para un

C21 H24 N2 O3, 352.1787, así como fragmentos a m/z: 351 [M+- H] 293 [M

+-

CO2 CH3], 229 (23), 228 (26), 227 (9), 216 (16), 214 (20), 197(42),195 (20),

180 (30), 168(23), 151 (31), 143 (14), 124 (79).

N

N

COOCH3

23

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

142.4121.3

129.1

88.1

151.0 189.1

126.6

33.6

48.9

48.5

58.5

34.7

53.1173.5

26.8

31.8

37.4

26.3

11.4

120.6

58.2

HO

21

CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA "Publicado"

N

N

COOCH3

23

56

7

89

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

142.7121.5

129.2

88.4

151.4 189.3

126.8

33.9

49.1

48.8

58.8

34.8

53.2173.8

27.1

32.1

37.6

26.6

11.5

120.9

58.5

HO

21

CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA "Aislado en el LIPNAA"



En el espectro de RMN 13

C se observan 21 señales correspondientes a 21

carbonos de los cuales siete son metilenos, cinco metinos, dos metilos y

siete carbonos cuaternarios.

En el espectro de 1H, se observan señales muy parecidas al espectro de

Coronaridina, a excepción del protón H-3 que se encuentra sustituido por un

oxígeno, en el espectro de masas se observa 14 unidades más con respecto

al ión molecular de la Coronaridina, la señal a δ: 4.50 (1H,m) fue asignado al

H-5, adyacente a un nitrógeno, las señal a δ: 7.96 (1H, sa) se asignó a un N-

H aromático, la señal singlete a δ 3.65 (3H) y la señal triplete a δ:0.99 (3H)

fueron a signadas al metoxicarbonilo . (Hans. 1994; Kamesh. 1980) En

él experimento NOESY se observa conectividades espaciales entre el protón

a δ: 2.63dd (1,6, 15.0) con las señales a δ: 1.99 (m) y 1.75 (m), por lo

que esta señal se asignó al H-17 S y al protón a δ: 2.33 dt (2.6, 13.0) como

17 R. Del mismo modo la estereoquímica del protón a δ:1.99 (m) por su

conectividad en el experimento NOESY , con los protones a δ: 2.63dd (1,6,

15.0), 0.99 t (7.4), 1.75 (m) lo cual implica una configuración S para el H-

15 y una configuración 15 R para el protón a δ: 1.41 (m). (Tabla 03). La

señal δ: 4.55 (s) quedó establecida como H-21, por su conectividad con el

experimento HSQC con el carbono a 58.5 ppm y su conectividad en el

experimento NOESY con los protones H-5S, y H-19A. Las demás señales

fueron asignadas teniendo en cuenta las correlaciones escalares y espaciales

de los 1H y 13C y por comparación con los datos publicados en la

bibliografía. (Sarath. 1980).

La comparación de las actividades ópticas en este tipo de compuestos se

hace necesaria, toda vez que se han encontrado en la naturaleza compuestos

con la configuración enantiomérica tales como la catharantina (K. Bláha.

1972).

Los valores del de los cuatro compuestos aislados son similares a los

publicados en la bibliografía.



Figura N° 20 Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Publicado

Figura N° 21 Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Aislado en el LIPNAA-UNAP

N

N

H

COOCH3

2 3

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

127.6119.3

122.1

109.1

133.8

136.5110.4

20.942.6

172.8

55.4

35.6

52.9175.6

35.3

30.8

38.0

27.5

11.2

118.1

55.9

3-OXOCORONARIDINA "Publicado"

O

21

N

N

H

COOCH3

2 3

56

789

10

1112

13

14 15

16

1718

1920

122.8119.6

122.4

109.9

134.2

136.1110.6

21.442.7

173.4

55.9

35.9

53.0176.1

35.5

31.0

38.2

27.6

11.4

118.4

56.1

O

21

3-OXOCORONARIDINA "Aislado en el LIPNAA"



Tabla 3. Datos de RMN de1H, 13C, HMQC, COSY, NOESY DE 3- OXO- CORONARIDINA

(JH-H en Hz) (1) HSQC COSY NOESY N-H 7.96 (sa) H-17R, H-12 136.5 (C-2)

173.4 s(C-3)

H-5R 4.50 (m) 42.7 t H-5S, H-6R

H-5S 3.22 (m) 42.7 t H-5R, H- 6S H-21

H-6R 3.22 (m) 21.1 t H-5R, H-6S

H-6S 3.22 (m) 21.1t H-5S, H-6R H-9

109.9 s (C-7)

128.3 s (C -8)

H- 9 7.48 d (7.4) 118.4 d H-6S

H-10 7.11 t (7.9) 119.6 d

H-11 7.15 t (7.9) 122.4 d

H-12 7,24 d (8.0) 110.6 d

134.2 s (C-13)

H-14 2.63 (m) 38.2 d H-15R, H-15S H-15R, H-15S

H-15S 1.99 (m) 31.0 t H-14, H-15R, H-20 H-18, H-17S, H-20

H-15R 1.41 (m) 31.0 t H-15S, H-14 H-18, H-19B

55.9 s (C-16) H-17 S 2.63dd (1,6, 15.0) 35.9 t H-17R H-20, H-15S H-17R 2.33 dt (2.6, 13.0) 35.9 t H-17S H-14 H-18 0.99 t (7.4) 11.4 q H-19A, H-19B H-15S, H-19A, H-19B, H-20 H-19A 1.53 (m) 27.6 t H-18 H-21 H-19B 1.43 (m) 27.6 t H-18 H-15R, H-20 1.75 (m) 35.5 d H-15S H-15S- H-17S, H-18 H-21 4.55 (s) 56.1 d H-5S, H-6S, H.19A COOCH3 3.65 (s) 53.0 q COOCH3 176.1 s

Figura Nº 22: NOESY del Alcaloide 3-Oxo-coronaridina



3.3. CONCLUSIONES.

1. De Tabernaemontana siphilitica hojas y tallos se han aislado 06

alcaloides, se determinó la estructura química de cuatro alcaloides.

2. No se determinó la estructura química de dos alcaloides, porque estos

compuestos se descomponen con mucha facilidad al estar en contacto

con solventes clorados. (CHCl3, CH2Cl2, CDCl3, CD2Cl2).

3. Se determinó la estructura química de 04 alcaloides tipo ibogano, dos

subtipo Coronaridina identificados como: Coronaridina y 19S

Heyneanina y dos subtipo Coronaridina Hidroxindolenina:

Coronaridina Hidroxindolenina y 3- Oxocoronaridina.

4. El extracto Etanólico de hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica

presento una moderada actividad frente a Plasmodium falciparum con

un % de inhibición del parasito del 68%



3.4. RECOMENDACIONES

1. Realizar, la evaluación de la actividad Antimalárica de los alcaloides aislados, ya

que el extracto bruto presentó moderada actividad antimalárica.

2. Comparar los tipos de metabolitos secundarios que pueden presentar la, corteza y

raíz de la especie en estudio y otras especies de Tabernaemontana.

3. Investigar alcaloides y/o otros metabolitos en otras especies amazónicas, reportadas

como antimalárica, aislándolos, elucidando su estructura química y verificando su

actividad biológica.



3.5. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Received November 27, 2002 Bioassay-directed fract

129. V.S. Prakash Chaturvedula, Shannon Sprague, Jennifer K. Schilling,

and David G.I. Kinston Department of Chemistry, M/C 0212, Virginia

Polytechnic institute and State University, Blacksburg, Virginia

24061Received November 27, 2002.

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ANEXOS


Figura Nº 23. Espectro de Masa del alcaloide CORONARIDINA.

Figura N° 24. Espectro de IR del alcaloide CORONARIDINA.

N

N

H

COOCH3

2

3

56

78

9

10

11

1213

14

15

16

1718

19

20

21

N

N

H

COOCH3

2

3

56

78

9

10

11

1213

14

15

16

1718

19

20

21


Figura Nº 25. Espectro de RMN de1H del alcaloide CORONARIDINA

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0Chemical Shift (ppm)

0.9731

0.9916

1.3200

1.3267

1.3379

1.4101

1.4286

1.5213

1.8020

1.8066

1.9377

1.9463

1.9516

1.9801

1.9854

2.1066

2.6375

2.6428

2.6461

2.6706

2.6753

2.8567

2.8779

3.1023

3.2234

3.2274

3.2426

3.2539

3.2632

3.2724

3.2883

3.6472

3.7511

3.7630

3.7710

3.7869

7.1263

7.1435

7.1607

7.1634

7.1819

7.1852

7.2018

7.2044

7.2951

7.3150

7.5301

7.5493

8.0664

N

N

H

COOCH3

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

2021


Figura Nº 26. Espectro de Masa del alcaloides 19S-HEYNEANINA

Figura Nº27. Espectro de IR del alcaloide 19S-HEYNEANINA

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


0.8863

0.8995

1.1195

1.1328

1.2677

1.4959

1.5104

1.5602

1.5816

1.6383

1.9283

1.9459

2.0550

2.6015

2.6053

2.6091

2.6280

2.6324

2.6362

2.8247

2.8430

3.1443

3.1544

3.1651

3.1802

3.1852

3.1897

3.5055

3.7463

3.7500

3.9026

4.1844

7.1143

7.1162

7.1301

7.1666

7.1691

7.1830

7.2624

7.2700

7.2788

7.4768

7.4931

7.8317

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


Figura Nº 28. Espectro de RMN de

H

+ de alcaloide 19S-HEYNEANINA

Figura Nº 29. Espectro de RMN de

13C del alcaloides 19S-HEYNEANINA

176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56 48 40 32 24Chemical Shift (ppm)

20.3687

22.9049

26.7219

36.9595

39.5632

51.2922

52.3370

53.0027

59.7519

71.2282

76.7472

77.0000

77.2612

109.8194

110.4934

118.4645

119.5514

122.3826

128.4493

135.5440

174.8009

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


Figura Nº 30. COSY del alcaloide 19S-HEYNEANINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


Figura Nº 31. NOESY del alcaloide 19S-HEYNEANINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


Figura Nº 32. HSQC de13

C del alcaloides 19S-HEYNEANINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

24

32

40

48

56

64

72

80

88

96

104

112

120

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

1920

21N

N

H

COOCH3

OH


Figura Nº 33. Espectro de Masa del alcaloide CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

Figura Nº 34. Espectro de IR del alcaloide CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO


10.5 10.0 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5Chemical Shift (ppm)

0.7866

0.8005

0.8150

0.8339

1.0337

1.1837

1.2127

1.3520

1.3665

1.3936

1.5966

1.7082

1.8021

1.8519

1.9206

1.9515

2.4035

2.4312

2.6664

2.6872

2.8838

2.9078

3.4228

3.4663

3.6081

3.6321

3.6718

3.7373

7.1577

7.1722

7.1886

7.1905

7.2403

7.2617

7.2762

7.3827

7.3979

9.9868

Figura Nº 35. Espectro de RMN de1H del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

Figura Nº 36. Espectro de RMN de13

C del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

192 184 176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56 48 40 32 24 16 8Chemical Shift (ppm)

11.5382

26.5113

27.0168

29.6710

32.0472

33.8840

34.7603

37.5578

48.7054

49.0762

53.1796

58.4038

58.7492

76.7472

77.0000

77.2528

88.3583

120.8490

121.4220

126.7725

129.1655

142.6809

151.3260

173.7055

189.2684

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO


Figura Nº 37. COSY del alcaloide CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO


Figura Nº 38. NOESY del alcaloide CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO


Figura Nº 39. HSQC del alcaloide CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

16

24

32

40

48

56

64

72

80

88

96

104

112

120

128

ppm

2

3

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

COOCH3

HO


Figura Nº40. Espectro de Masa del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA

Figura Nº41. Espectro de RMN de

1H del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA


0.9809

0.9960

1.0105

1.2670

1.4133

1.4284

1.4404

1.4549

1.4700

1.5186

1.5331

1.5476

1.5602

1.7669

1.9812

2.0077

2.0140

2.3109

2.3380

2.6330

2.6368

2.6444

2.6715

2.6746

3.1865

3.2004

3.2174

3.2218

3.2294

3.2432

3.2464

3.2603

3.7381

3.7601

3.7671

4.4800

4.4914

4.5021

4.5153

4.5267

7.0979

7.0992

7.1130

7.1156

7.1559

7.1584

7.2460

7.2618

7.2700

7.4799

7.4957

7.9722

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O


Figura Nº 42. Espectro de RMN de13

C del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA

176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56 48 40 32 24 16Chemical Shift (ppm)

11.3374

21.0829

27.4301

27.6267

29.6839

31.0179

35.5115

35.9539

38.2287

42.7083

52.9874

55.5712

56.1680

76.6840

77.0000

77.3159

109.4592

110.5685

118.3902

119.6399

122.4133

127.8688

133.8509

135.7115

173.0505

175.7115

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O


Figura Nº 43. COSY del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

ppm

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O


Figura Nº 44. NOESY del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA

7 6 5 4 3 2 1ppm

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

8.0

ppm

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O


Figura Nº 45. HSQC del alcaloide 3-OXOCORONARIDINA.

7 6 5 4 3 2 1ppm

8

16

24

32

40

48

56

64

72

80

88

96

104

112

120

128

ppm

23

56

78

9

10

11

1213

1415

16

1718

19

20

21N

N

H

COOCH3

O

tesis ingeniero quÍmico. - core · canarias del consejo superior de ... las civilizaciones...

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