Tema propuesto: Identificación de genes potenciales relacionados con el eflujo de

membrana de Mycobacterium tuberculosis utilizando herramientas bioinformáticas

Título del Proyecto: Identificación de genes homólogos a EmrB (de Escherichia coli) como genes potenciales relacionados con el flujo de salida de Ácido Pirazinóico en Micobacterium

tuberculosis

Pirazinamida Nicotinamida

PZA

Introducción

Resistencia: mutaciones en PZasa Resistencia: sin mutaciones y con actividad intacta

PZA

Introducción

+ H2O + NH4+PZasa

Monica Pajuelo Travezaño:

Prodroga

Enzima PZAsa

Monica Pajuelo Travezaño:

Prodroga

Enzima PZAsa

Antecedentes

1. Mecanismo de acción de la PZA

Mutación en PZasa ¿Bombas de flujo de salida involucradas? M. smegmatis:

Tiene dos PZasas activas Frente a inhibidores de transportadores: reserpina,

valinomicina, las cepas se hacen sensibles

Antecedentes

2. Resistencia a la PZA

Objetivos

Identificar genes homólogos a EmrB de E. coli relacionados con el flujo de salida de ácidos orgánicos débiles o de drogas en M. tuberculosis

Verificar que los posibles genes contribuyan con el flujo de salida de POA en M. tuberculosis

Objetivos

Planteamiento del Experimento

Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli

Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli

Uso de COG

Búsqueda en TubercuList

Predicción de Segmentos Transmembrana

Predicción de Segmentos Transmembrana

Uso de TMpred

Resultados PreliminaresResultados Preliminares

Planteamiento del Experimento

Acumulación de POA

Acumulación de POA

Uso de sustrato radiactivo marcado con C14

Determinación de la sensibilidad a PZA/POA

Determinación de la sensibilidad a PZA/POA

Determinación de MIC

Knockout de genesKnockout de genesRecombinación genética homóloga

Determinación de la actividad de PZasa

Determinación de la actividad de PZasa

Método de Wayne

Planteamiento del Experimento